金铁锁种质资源的遗传多样性分析

目的研究中国西南特有濒危药用植物金铁锁的遗传多样性。方法应用AFLP分子标记技术对具有代表性的7个金铁锁居群,共137个个体进行分析。结果在金铁锁的物种水平上,Nei’s基因多样性指数(He)、Shan-non’s信息指数(I)、多态位点百分率(PPB)分别为0.2434±0.1791、0.3735±0.2485、82.30%;在其居群水平上分别为0.0918±0.1610、0.1402±0.2362、30.48%。居群间Nei遗传分化指数(Gst):0.6244;Shannon’s多样性基因遗传分化系数(Ist):0.6246。聚类表明:地理距离相对远的丽江居群与个旧居群遗传距离最近;昆明居群与其他居群遗传距离较远。统计获得9条可区分各地方居群的特征指纹带。结论金铁锁种内的遗传多样性水平丰富,而居群内遗传多样性水平较低,居群间遗传分化显著;各居群间亲缘关系与地理距离无明显相关性;其种内特征带与各居群特征带结合,可以为AFLP分子标记技术用于其种质资源的鉴定、遗传育种提供重要的依据。     

基于β-AS基因多态性的金铁锁核心种质构建

金铁锁是"云南白药"的重要组分,为我国西南地区的特有二级濒危保护植物。其野生资源已不能满足医药生产的需求,亟需通过对其种质资源进行研究,构建金铁锁核心种质。为金铁锁种质改良、分子育种等奠定基础。该研究采用了关键酶基因(β-AS)作为核基因标记对金铁锁进行了谱系地理学研究。研究结果显示,在所有居群中,总共检测到36个单倍型,单倍型多样性(Hd=0.905)较高,居群间存在一定的遗传分化(GST=0.280)。AMOVA结果显示,金铁锁居群内遗传多样性较低(22.57%),居群间的遗传变异占77.43%。单倍型分布结合网状进化分析结果显示,Hap1为普通单倍型,且位于网状图的中心位置,可判断为祖先单倍型。Hap2,Hap4,Hap15,Hap16共享单倍型,剩余的为居群特有单倍型。在此基础上,为了最大限度的保存金铁锁的遗传多样性,依据药用植物核心种质构建的标准提出了金铁锁核心种质的构建策略。     

金铁锁不同居群药材质量评价研究

目的：对珍稀濒危植物金铁锁不同野生居群药材样品进行质量评价,为其人工引种、良种选育及规范化种植提供科学依据。方法：用水分测定法、灰分测定法、浸出物测定法对16份不同居群的金铁锁药材质量进行了评价研究。结果：不同居群药材样品的水分、总灰分、浸出物含量有显著的差别。其中,象山居群药材的水分和总灰分含量最低,浸出物含量最高;六德居群药材的总灰分含量最高,浸出物含量最低;顺州居群药材的水分含量最高。结论：不同野生居群药材质量有差别,发现稀缺药用植物金铁锁优势居群为其人工培植和可持续利用提供科学依据。     

金铁锁不同居群rDNA ITS序列分析

目的分析金铁锁不同居群的核糖体ITS碱基序列,为鉴别不同产地金铁锁提供分子依据.方法使用1对引物18P1和26P2进行ITS基因的PCR扩增并测序.结果12个居群金铁锁的ITS1片段长度为225~229 bp,ITS2片段长度为166~170 bp,5.8S片段长度为261~264 bp.云南昆明、丽江、个旧、鹤庆和四川盐源5个居群的ITS序列碱基完全一致,云南宣威、会泽、中甸、保山、四川木里、西藏林芝等7个居群的ITS序列则有不同的变化,碱基变异数目(包括5.8 S编码区)为1~4个.结论经过比较分析,rDNA ITS区碱基序列在分布于云南中部、四川西南端等居群与云南西部、西北端、西藏东南部、四川西南部居群具有各自相应的指纹特征,可以作为相应居群的鉴别依据.     

金铁锁生物学特性及保护研究

目的：研究分析金铁锁濒危机制,提出保护措施,为保护资源提供依据。方法：采用野外实地调查方法,研究金铁锁自然分布、生境条件、生物学特性和生长适应性等。结果：金铁锁耐贫瘠、干旱、寒冷、忌雨水过多。由于生境破坏,种群数量大量减少。结论：为保护资源,金铁锁开发利用应走种植和深精加工道路。     

濒危药用植物金铁锁的资源调查研究

通过对濒危药用植物金铁锁的资源现状进行调查研究,为金铁锁资源的开发和可持续性利用提供了科学依据。通过走访与野外样方相结合的调查方法及蕴藏量估算法对云南、四川、贵州16个分布区的金铁锁野生资源进行了调查,发现金铁锁野生生境大多遭到破坏,药材蕴藏量有限,资源逐渐减少,发展其人工种植是解决问题的唯一途径。     

濒危药用植物金铁锁的传粉生物学研究

目的:揭示金铁锁开花规律与传粉特征,确定其繁育系统类型,为金铁锁引种繁育和濒危原因探寻提供基础依据。方法:开花动态的观察、杂交指数估算法、繁育系统检测法、种子萌发率和访花昆虫及其访花行为的观察。结果:杂交指数检测与繁育系统检测结果一致,金铁锁的繁育系统为同株自花传粉、同株异花传粉、异株异花传粉。金铁锁的花在结构上具有与异花授粉相适应的结构和机制,也有虫媒花的特征。金铁锁的盛花期在雨季,其访花昆虫在雨季少见或不传粉,从而直接影响了结实率。结论:金铁锁为混合交配繁育系统,为虫媒异交植物,同时可以自花授粉,其繁殖方式为近交繁殖。     

濒危药用植物金铁锁花粉活力快速测定研究

目的濒危药用植物金铁锁花粉活力检测。方法采用I2-KI染色法、醋酸洋红染色法、过氧化物酶沉淀法和TTC染色法。结果 I2-KI法不能染不上色,不适合检测金铁锁花粉活力。醋酸洋红染色法、过氧化物酶沉淀法和TTC法可用于现采金铁锁花粉活力的测定,过氧化物酶沉淀法不能用于贮藏金铁锁花粉活力的测定。无论是现采的花粉还是贮藏花粉,最好的方法是醋酸洋红染色法。结论为金铁锁的优良种质资源保存提供了理论依据。     

云贵地区金铁锁EST-SSR遗传多样性分析

目的分析云贵地区金铁锁Psammosilene tunicoides遗传多样性和变异情况。方法采用转录组测序技术开发金铁锁的EST-SSR引物,并利用筛选出的分子标记对金铁锁进行多态性分析。结果共获得了17 530条含SSR位点的EST序列;筛选出了14对具有较高多态性的EST-SSR引物,对云贵地区的17份金铁锁进行多样性分析,发现其在位点水平上多态性信息含量(PIC)范围为0.350 0~0.795 0,具有较高的多态性;在群体水平上明显偏低,多态位点百分率(PPB)为64.29%~100%,Nei’s基因多样性指数的范围为0.188 2~0.477 7,平均0.323 2;云贵地区金铁锁群体内基因流(Nm)较小(Nm均值为0.302 0),群体间存在较大的遗传分化(Fst均值为0.452 9)。结论转录组测序丰富了金铁锁EST数据库;云贵地区金铁锁的遗传多样性可能与其繁殖方式、分布区较长的进化历史有关,群体间遗传分化大可能是地理阻隔截断了不同群体间的基因交流。     

基于ITS2序列鉴定苗药金铁锁及其混伪品

目的：本研究利用ITS2序列对苗药金铁锁及其混伪品进行鉴定研究,从而确保药材质量,保障临床用药安全。方法：提取金铁锁药材及其混伪品基因组DNA,PCR扩增并双向测序获得ITS2序列。所有序列经过CodonCode Aligner V3.7.1拼接后,采用MEGA5.1软件进行序列比对,计算种内和种间Kimura2-Parameter（K2P）遗传距离,并构建系统发育树。采用相似性搜索法、最近距离法、邻接（NJ）树法对ITS2序列鉴定能力进行评估。结果：金铁锁药材的ITS2序列长度为229 bp,其ITS2序列种内最大K2P遗传距离小于与混伪品的最小种间K2P遗传距离;应用相似性搜索法表明ITS2序列能够准确鉴定金铁锁药材及其混伪品;基于ITS2序列构建NJ树,金铁锁及其混伪品均表现出良好单系性,均能明显区分。结论：ITS2序列能够稳定、准确地鉴定金铁锁药材及其混伪品,DNA 条形码技术可为金铁锁药材及其混伪品的鉴定提供新的方法。     

金铁锁寡糖的分离纯化和初步结构研究

目的研究金铁锁中寡糖的成分及其结构。方法金铁锁药材采用水提醇沉法经三氯乙酸去蛋白,得到金铁锁粗糖（PTP）;PTP依次经DEAE Sepharose F．F．、Sephacryl S-300和Sephadex G25柱层析,最终得到PTP1—1—1;对PTP1-1-1分别用HPLC、GC—MS、甲基化和高碘酸氧化分析进行相关结构研究。结果HPLC检查PTP1—1—1为单一寡糖;GC-MS糖组成分析和HPLC分子量测定结果推测PTP1—1—1是由1个葡萄糖和6个半乳糖组成的寡糖;甲基化分析、高碘酸氧化分析显示该糖链的连接方式为1,4和1,6连接。结论金铁锁寡糖PTP1-1—1的分离纯化和结构研究丰富了该植物的研究内容。     

金铁锁体外抗氧化活性研究

目的:研究金铁锁体外抗氧化活性.方法:采用清除采用清除二苯代苦味酰基( DPPH)自由基、清除[2,2'-连氨-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二氨盐](ABTS)自由基及铁离子还原/抗氧化能力(FRAP)测定法,对金铁锁体外抗氧化活性进行评价,并阳性对照没食子酸丙酯(PG)、丁基羟基茴香醚(BHA)和二丁基羟基甲苯(BHT)比较.结果:金铁锁3个提取物体外抗氧化活性均弱于阳性对照PG,BHA,BHA.在3个提取物中,金铁锁乙酸乙酯提取物清除ABTS自由基(IC50=40.54mg·L-1)及还原Fe3+的能力[TEAC=(696.9±2.42) μmol·g-1]较强;正丁醇清除ABTS自由基(IC50=83.38 mg· L-1)及还原Fe3+的能力[TEAC =(166.1±1.06) μmol· g-1]次之,石油醚提取物最弱.结论:金铁锁乙酸乙酯部位体外抗氧化活性较强.     

金铁锁中一个新的三萜皂苷

目的：研究金铁锁根的化学成分。方法：采用硅胶柱色谱、凝胶柱色谱和反相色谱分离纯化，利用ESI—MS，EI-MS，NMR确定化合物结构。结果：分离并鉴定了3个化合物，分别为3-O-β-D—galactopyranosyl-（1→2）-[β-D—xylopyranosyl-（1—3）]-β-D-6-O—methylglucuronopyranosyl—gypsogenin（1），2α—hydroxy—ursolic acid（2），tormentic acid（3）。结论：化合物1为新化合物，化合物2、3均为首次从该属植物中分离得到。     

金铁锁不同居群培养物生长量比较

从金铁锁Psamm osilence tunicoidesW.C.W u et C.Y.W u 8个不同居群的组培物生长量比较,初步筛选出云南丽江云杉坪和昆明小墨雨两居群比其他居群有优势,可考虑作为优良种源。     

金铁锁根的化学成分研究

目的：研究金铁锁根的化学成分。方法：采用硅胶柱色谱、凝胶柱色谱分离纯化,利用ESI-MS,EI-MS,NMR技术确定化合物的结构。结果：分离并鉴定了7个化合物,分别为goyaprosaponin(1),大豆脑苷Ⅰ(soya-cerebrosideⅠ,2),鸢尾苷(tectoridin,3),α-菠甾醇(α-spinasterol,4),正二十五烷酸(5),β-谷甾醇(6),胡萝卜苷(7)。结论：化合物2～7均为首次从该属植物中分离得到。     

金铁锁根中的3个环二肽

目的 :对金铁锁中的环肽成分进行系列研究。方法 :利用柱层析进行化合物的分离 ,用波谱法鉴定其结构。结果 :从其丙酮溶解部分分离得到 3个环二肽 ,其结构分别为环 (脯-缬 ) (1 )、环 (脯-丙 ) (2 )和环 (脯-脯 ) (3)。结论 :化合物 1和 2为新的天然产物 ,化合物 3为首次从金铁锁中得到。     

苗药土人参的资源分布状况及混淆品

目的：调查研究苗药土人参的资源分布及其混淆品使用情况。方法：采用实地调研、文献查阅的方法， 对土人参的资源分布及混淆品的使用情况进行研究。结果：较为全面的对土人参在全国的植物资源分布进行整理，调查的31个省市自治区中，有10个省份对土人参进行了相关的文献记载，不同地区的土人参的药用情况存在差异。调研发现紫 茉莉、商陆、土党参、金铁锁为土人参药材的市售常见混淆品。结论：对土人参的资源分布、混淆品应用情况进行总结， 为苗药土人参的开发应用和临床使用提供理论依据。     

影响金铁锁毛状根生长及皂苷积累的因素

目的优化金铁锁毛状根液体培养基、碳源、激素和培养条件,促进毛状根生长及皂苷的积累。方法将毛状根置于添加了碳源和植物生长调节剂的液体培养基中培养,观察其形态、色泽变化,测定其生物量和皂苷含量。结果金铁锁毛状根在含有30 g.L-1蔗糖的12MS中生长最快;6-BA、2,4-D均能促进皂苷的合成,但对毛状根的生长有抑制作用;添加少量的NAA、IAA、IBA都能促进毛状根的生长和皂苷产量的提高,当分别添加0.5 mg.L-1NAA、IAA、IBA时,皂苷产量较对照品提高53.42%,25.55%,79.60%。结论通过液体培养基、碳源、激素等因素的改变,可以提高金铁锁毛状根的生长速度和皂苷的含量。     

光白英果实的生药学研究

目的 为进一步研究开发利用该植物资源提供依据.方法 应用性状鉴别、显微鉴别、化学成分预试、薄层色谱鉴别、紫外光谱扫描进行研究.结果 详细描述了该生药的性状及显微特征;薄层板上斑点明显;化学成分预试初步检出其含有皂苷类、生物碱类等化学成分.结论 为该药鉴别以及进一步开发利用提供了科学依据.