参环毛蚓对重金属镉离子耐受能力的考察

目的考察参环毛蚓对重金属镉离子的耐受能力,为进一步探索参环毛蚓富集重金属机制提供实验依据。方法在菜园土壤基础上设置7个组别的不同浓度的重金属镉污染环境,观察人工饲养条件下参环毛蚓在不同浓度镉离子环境中的生存状态,并利用原子吸收分光光度法分别测定参环毛蚓不同部位的镉离子量。结果参环毛蚓在土壤镉离子量为40倍、50倍两组养殖7 d后死亡;30倍组在10 d以后也有两条死亡,其余各组生长情况良好;参环毛蚓体内镉离子浓度随土壤镉离子浓度递增而增加。参环毛蚓能够在土壤中镉离子浓度12 mg/kg以下生存良好,其体内脏器中镉浓度可高达70~90 mg/kg。该浓度是中国对外贸易经济合作部发布的《药用植物及制剂进出口绿色行业标准》中镉限量指标的233~300倍。结论参环毛蚓对重金属镉离子的耐受能力极强,这可能是其药材重金属超标的重要原因之一。     

参环毛蚓MT-2基因及启动子的克隆研究

目的揭示参环毛蚓MT-2基因的转录调控机制,为今后采用基因工程技术改良参环毛蚓重金属富集性状奠定基础。方法根据已知的MT-2c DNA序列,设计特异引物,通过PCR扩增参环毛蚓MT-2基因的编码区基因组序列,扩增产物经测序后自行比对分析。基于该序列设计3条特异引物,采用基因步移技术克隆其上游的启动子序列,同时运用Promoter Prediction在线软件分析预测其顺式元件。结果经PCR扩增、测序后获得2 826 bp MT-2基因编码区序列,将该序列与已知MT-2 c DNA序列(登录号为KC787373.1)进行比对,发现MT-2编码区由4个外显子和4个内含子组成。基因步移技术克隆得到1 534 bp的启动子序列,经Promoter Prediction在线软件分析,结果显示该序列不仅含有TATA-box、CAAT-box等核心启动子软件,还具有3个特异响应重金属参与调控MT-2表达的MRE元件。结论参环毛蚓的MT-2基因能被重金属诱导表达,MT-2基因转录水平的金属调控是通过MT-2基因启动子区的金属调控元件MRE来实现的。     

参环毛蚓对土壤含水量及pH值因子的选择研究

目的 考察参环毛蚓对土壤含水量、pH值二因子的选择性,建立其生活所需要的土壤含水量、pH值单因子数学模型.方法 在养殖槽内设置不同土壤含水量、pH值区域,由参环毛蚓选择适宜的生活区域.结果 参环毛蚓生活适宜的土壤含水量为18.2%～24.6%,pH值为3.7～5.5.结论 参环毛蚓选择在湿度适中,偏酸性的土壤中生活;高湿及较干燥,强酸性和碱性的土壤不适宜其生活.     

中药地龙的药源调查与商品鉴定

经对我国地龙药材的药源调查与商品鉴定,结果表明,地龙的原动物主要有１３种和变种。分别隶属于矩蚓蝌的３个属,其中９０％以上的商品地龙来源于药典收载品种参环毛蚓Ｐｈｅｒｅｔｉｍａ ａｓｐｅｒｇｉｌｌａｍ和威廉环毛蚓Ｐ．ｇｕｉｌｌｅｌｍｉ、栉盲环毛ｐｅｃｔｉｎｉｆｅｒａ及通俗环毛．ｖｕｌｇｏｒｉｓ其它品种如背暗异唇Ａｌｌｏｌｂｏｐｈｏｒａ ｃａｌｉｇｉｎｏｓａ ｔｒａｐｒｚｏｉｄｅｓ、湖北环毛蚓Ｐ、ｈｕ     

中药地龙的药源调查与商品鉴定

经对我国地龙药材的药源调查与商品鉴定,结果表明,地龙的原动物主要有13种和变种。分别隶属于钜蚓科和正蚓科的3个属。其中90％以上的商品地龙来源于药典收载品种参环毛蚓Pherctimaaspergillum（E．perrier）和威廉环毛蚓P．guillelmi（Michaelsen）、栉盲坏毛蚓P．pectinifera（Michaelsen）及通俗环毛蚓P.vulgaris（Chien）。其它品种如背暗异唇蚓Allolobophoracaliginosatrapezoides（Ant．Duges）、湖北环毛蚓P.hypeiessis（Michaelsen）、秉前环毛蚓P．praepinguis（Gates）等9种蚯蚓仅在少数地区使用。     

参环毛蚓与赤子爱胜蚓的对比研究

目的:赤子爱胜蚓的抗栓活性可靠,为评价参环毛蚓的溶栓的药用价值,进行了相关的对比研究。方法:通过纤维蛋白平板试验对比活性,通过电泳法对比酶谱。结果:2种蚯蚓活性相近,参环毛蚓及赤子爱胜蚓的许多酶谱的分子量都相近,分子量多在60000以下,主要集中在30000左右。结论:参环毛蚓与赤子爱胜蚓活性与酶谱相近,具有进一步开发价值。     

中药地龙中参环毛蚓环介导等温扩增快速检测方法

[目的]建立中药材地龙中参环毛蚓的环介导等温扩增(LAMP)检测技术,实现对参环毛蚓的快速检测。[方法]采集不同产地地龙,提取总DNA后将所提取的总DNA进行线粒体细胞色素氧化酶Ⅰ亚基(COI)基因片段扩增、测序、比对,判断各产地地龙物种。用设计的LAMP引物组进行地龙LAMP实验,反应结束后向扩增产物中加入核酸染料SYBR GreenⅠ,分别在自然光、紫外光下直接通过肉眼来观察颜色变化及利用琼脂糖凝胶电泳来检测其引物的特异性。[结果]利用新设计的LAMP引物对参环毛蚓实现了特异性扩增,且检出限达40 fg/μL,具有极高的灵敏度。[结论]利用LAMP技术可实现参环毛蚓的现场快速检测。     

沪地龙的原动物鉴定

对“沪地龙”原动物的分类学鉴定结果表明,其来源于钜蚓科动物通俗环毛蚓Pheretimavulgaris、威廉环毛蚓P.guillelmi或栉盲环毛蚓P.pectinifera的干燥体。此项结果已被中国药典(1995年版)一部收载。     

斑点免疫印迹法快速测定地龙炮制品中蚓激酶及其水解产物

目的测定参环毛蚓、秉氏环毛蚓、日本杜拉蚓和天锡杜拉蚓炮制品中蚓激酶及其水解产物,建立斑点免疫印迹法评价相应生药材药效成分明确的中药炮制品质量新方法。方法以兔抗蚓激酶单抗为一抗,应用斑点免疫印迹法对地龙炮制品中蚓激酶及其水解产物作定性检测,杂交信号应用Quantity One软件作定量分析。结果现行中药材参环毛蚓与山东产地方品种:秉氏环毛蚓、日本杜拉蚓、天锡杜拉蚓炮制品中蚓激酶及其水解产物的质量分数分别为125.23、118.34、81.05、72.13μg/g。结论秉氏环毛蚓炮制品中蚓激酶及其水解产物与现行地龙炮制品参环毛蚓无显著差异,理论上可作为广地龙的替代品。斑点免疫印迹法简便快捷,结果准确,无需大型设备,可用于地龙与类似中药材炮制品的品质评价。     

基于DNA测序技术的市售地龙类药材基原调查与考证研究

目的:进行地龙商品基原调查和本草考证,澄清商品地龙品种情况,提高中药质量。方法:通过随机采集安国、亳州等7大主流药材市场的地龙商品药材,进行DNA提取和COI片段PCR扩增与核酸测序,与建立的地龙参考核酸数据库进行比对;对主流本草进行调查和梳理。结果:我国商品地龙主要来源于34个物种,22%的基原物种为参环毛蚓(参状远盲蚓Amynthas aspergillum),22%为通俗环毛蚓(通俗腔蚓Metaphire vulgaris),稀见栉盲环毛蚓和威廉环毛蚓(1%),55%的市售地龙均非2015年版《中华人民共和国药典》规定基原,而以保宁腔蚓M.magna为主;各市场主流商品地龙品种具有很大区别,具有显著的地域性特征;本草考证结果表明,历代本草中地龙基原并非一种,而是以具有"白颈"特征的环毛类蚯蚓入药,且历代本草、标准中多有变迁。结论:应建立合理、有效的地龙基原与质量控制方法。     

地龙的多重位点特异性PCR鉴别

目的:近年来,中药材地龙的商品价格不断上涨,市场的混伪品随之增加。其主要鉴别特征在药材中大部分丢失,难以区分。因此,急需建立一种准确、稳定的中药材地龙基原鉴别方法。方法:根据地龙及其混伪品的COI基因序列差异找到变异位点,从而设计参环毛蚓、通俗环毛蚓、威廉环毛蚓及栉盲环毛蚓的特异性鉴别引物,优化反应体系并进行耐受性和适用性的考察和验证。在此基础上将特异性引物组合,构建多重聚合酶链式反应(PCR)体系,从而建立了一种高效准确、操作简便、专属性强、重复性好的中药材地龙及其常见混伪品的多重位点PCR鉴别方法。结果:在该方法下广地龙基原参环毛蚓可得到366 bp片段,沪地龙基原通俗环毛蚓和威廉环毛蚓可得到487 bp片段,栉盲环毛蚓可得到475 bp片段,其他混伪品均无条带。将之组合形成的多重PCR可在一次鉴定操作中根据条带位置同时鉴别沪地龙和广地龙。结论:该文所建立的多重位点特异性PCR鉴别方法可准确鉴别中药材地龙真伪。     

地龙含杂的一个纠正措施

地龙为钜蚓科动物参环毛蚓、通俗环毛蚓、威廉环毛蚓或栉盲环毛蚓的干燥体。前一种习称“广地龙”,后3种习称“沪地龙”。按《中国药典》1995年版,捕捉后应及时剖开腹部,除去内脏及泥沙,洗净,晒干或低温干燥。由于近年来价格较高,药农在捕到后,为增加经济效益,有意不把部分虫体腹部剖开,除去内脏及泥沙(非药用部分)。最近笔者对我市医院购进的地龙(经笔者鉴定为钜蚓科动物参环毛蚓,即“广地龙”)随意称取10 0 g ,按要求去除内脏....     

广地龙对重金属富集特性的初步研究

目的:探讨三种重金属镉(Cd)、汞(Hg)、铅(Pb)在广地龙体内的富集特性。方法:应用半静态条件下的双箱动力学模型,将不同浓度重金属饲养过的广地龙经浓硝酸-过氧化氢低温消解处理后测定重金属含量。结果:地龙在Pb高、中、低浓度的富集速率分别为k1=1.232,K2=1.325,K3=1.058;对Cd的高、中、低浓度富集速率分别为k1=0.1792,K2=0.1753,K3=0.1382;对Hg的富集呈现出波动性。结论:广地龙从土壤中富集Pb的能力明显高于Cd,且随着时间的推移而增大;对Hg的富集作用是先快速吸收,积累到一定浓度时,再快速排出,而后再度吸收。     

地龙的药理研究

地龙(又名蚯蚓)为钜蚓科动物参环毛蚓Pheretima aspergillum、通俗环毛蚓Pheretima vulgaris Chen、威廉环毛蚓Pheretima guillelmi(Michaelsen)或栉肓环毛蚓Pheretima pectinifera Michaelsen及正蚓科动物背暗异唇蚓Allolobophora caliginosa trapezoids(Ant.Duges)等的干燥全体,是重要的动物药材之一,其性咸寒,具有清热定惊、通络平喘、利尿等功效.现代研究表明,地龙有溶栓、抗肿瘤、降压等药理活性,其药用价值备受重视.近年来国内外学者对地龙的临床应用、药理作用,尤其是生物工程技术方面的研究空前热门,而制剂及其质量控制、剂型发展等方面的综合分析较少,故笔者对此作一综述,为地龙制剂的开发和质量控制提供依据.     

人工养殖参环毛蚓的试验研究

本试验按条重大小把参环毛蚓随机分组,在相同的生活条件下,进行了不同饲料配方、不同水质、不同饲养方式、不同季节、不同饲养密度的对比试验。     

地龙的研究概况

地龙为钜蚓科动物参环毛蚓Pheretima aspergillum（E.Perrier）、通俗环毛蚓Pheretima vulgaris Chen、威廉环毛蚓Pheretima guillelmi（Michaelsen）或栉肓环毛蚓Pheretima pec-tinifera Michaelsen的干燥体,前一种习称＂广地龙＂,后三种习称＂泸地龙＂,广地龙春季至秋季捕捉,泸地龙夏季捕捉,及时剖开腹部,除去内脏和泥沙,洗净,晒干或低温干燥;性寒,味辛、苦,清热利湿,祛风止痒;用于小便涩痛,阴痒带下,风疹,湿疹,皮肤瘙痒[1]。     

通俗环毛蚓抗血栓活性蛋白成分的快速富集及活性考察

目的 以地龙品种中的通俗环毛蚓为研究对象,对其蛋白总提物进行纯化富集以获得抗血栓活性蛋白成分（PvQ）,对PvQ进行抗血栓活性研究,以期为地龙的抗血栓物质基础研究提供参考。方法 采用AKTA-Pure型蛋白纯化系统,以体外活性为导向,富集通俗环毛蚓PvQ;采用纤维蛋白平板法、纤维蛋白原-凝血酶时间法（Fibg-TT法）对PvQ的纤溶及抗凝活性进行测定;利用体外血栓溶解试验评价PvQ对体外血栓的溶解能力,同时,考察了不同温度及pH对PvQ活性的影响。结果 成功富集得到通俗环毛蚓PvQ,活性测定表明其具有显著的纤溶及抗凝活性。体外血栓试验结果显示,37 ℃孵育5 h后PvQ可水解超过80%的血栓块。此外,温度和pH对于PvQ活性影响显著,在≥60 ℃或酸性条件（pH<7）下PvQ活性显著降低或失活,而在≤50 ℃和碱性条件下PvQ活性则不受影响或受较少影响。结论 建立了可行的通俗环毛蚓PvQ制备方法,PvQ可同时作用于纤维蛋白和纤维蛋白原,从而发挥双重纤溶作用,表现出良好的纤溶及抗凝活性,为其用于治疗血栓性疾病提供了科学阐释,并可为地龙抗血栓蛋白类产品的开发提供参考。     

罗汉果加工的新变温曲线试验

地龙系环节动物门钜蚓科动物参环毛蚓或缟蚯蚓的干燥全体,前者习称“广地龙”,后者习称“沪地龙”。依1995年版《中国药典》,捕捉后应及时剖开腹部,除去内脏及泥沙,洗净,晒干或低温干燥。由于近年来价格较高,药农在捕到后为增加其经济利益有意不把部分虫体腹部剖开,除去其内脏及泥沙(非药用部分)。最近笔者对我院购进的地龙(经笔者鉴定为钜蚓科动物参环毛蚓即“广地龙”)随意称取1000g,按要求去其内脏及泥沙后得纯地龙762g,泥沙....     

广地龙古今入药品种对比研究

目的:对中药广地龙进行品种考证,并对市售广地龙商品进行品种鉴别,借此判断广地龙古今入药品种的异同。方法:通过查阅本草文献,并整理历版中国药典及地方中药材标准,分析广地龙药材品种的收载情况。采用性状鉴别结合分子鉴定的方法对市售广地龙进行品种鉴别。结果:本草中所记载的"白颈蚯蚓"与现今国家与地方标准收载的钜蚓科环毛蚓属参环毛蚓等多种蚯蚓特征基本一致。目前市售广地龙药材伪品较多,大腔蚓和暗孔远盲蚓为最常见的2种伪品。结论:该研究可为广地龙药材的开发与临床用药提供参考。     

三七对镉胁迫的生理响应及富集特性研究

以二年生三七为试验材料,水培条件下研究了镉胁迫(0,2.5,5,10 μmol·L^-1)对三七抗氧化酶系统和光合参数的影响及三七对镉的吸收分配规律。结果表明:2.5 μmol·L^-1镉处理可诱导SOD,POD,APX等酶活性的升高,10 μmol·L^-1镉处理则对SOD,POD,APX,CAT均产生抑制作用;镉处理对三七各部位CAT活性均具有抑制作用;三七净光合速率,蒸腾速率,气孔导度均随镉处理浓度的升高而降低,胞间CO₂浓度则呈先下降后上升的趋势;三七各器官镉含量表现为须根 >剪口 >主根 >叶片 >茎;叶,茎,剪口,须根,主根镉富集系数均随镉处理浓度的升高而降低;各器官中镉含量与迁移系数均随镉处理浓度的升高而上升。综上所述,镉胁迫可对三七抗氧化酶系统和光合系统产生影响,三七对镉具有富集作用,应合理选择三七种植基地以减少对镉的吸收,合理选取三七入药部位,以降低镉摄入风险。