镉胁迫条件下对参环毛蚓体壁结构影响的研究

目的:研究不同浓度镉离子胁迫条件下对参环毛蚓体壁肌肉结构的影响,探索重金属镉在参环毛蚓体内的生物富集部位。方法:采用不同浓度镉离子胁迫参环毛蚓染毒,HE组织切片染色,光学显微镜下观察体壁肌肉结构的变化,以分析参环毛蚓富集重金属的方式。结果:内侧的斜纹肌损伤要明显比体壁外侧的环肌肉层要严重得多。结论:参环毛蚓体壁的损伤来源于其身体的内部,即对其构成损伤的物质来源于肠道的主动吸收,而不是通过其表皮的被动扩散吸收。     

参环毛蚓对土壤含水量及pH值因子的选择研究

目的 考察参环毛蚓对土壤含水量、pH值二因子的选择性,建立其生活所需要的土壤含水量、pH值单因子数学模型.方法 在养殖槽内设置不同土壤含水量、pH值区域,由参环毛蚓选择适宜的生活区域.结果 参环毛蚓生活适宜的土壤含水量为18.2%～24.6%,pH值为3.7～5.5.结论 参环毛蚓选择在湿度适中,偏酸性的土壤中生活;高湿及较干燥,强酸性和碱性的土壤不适宜其生活.     

参环毛蚓MT-2基因及启动子的克隆研究

目的揭示参环毛蚓MT-2基因的转录调控机制,为今后采用基因工程技术改良参环毛蚓重金属富集性状奠定基础。方法根据已知的MT-2c DNA序列,设计特异引物,通过PCR扩增参环毛蚓MT-2基因的编码区基因组序列,扩增产物经测序后自行比对分析。基于该序列设计3条特异引物,采用基因步移技术克隆其上游的启动子序列,同时运用Promoter Prediction在线软件分析预测其顺式元件。结果经PCR扩增、测序后获得2 826 bp MT-2基因编码区序列,将该序列与已知MT-2 c DNA序列(登录号为KC787373.1)进行比对,发现MT-2编码区由4个外显子和4个内含子组成。基因步移技术克隆得到1 534 bp的启动子序列,经Promoter Prediction在线软件分析,结果显示该序列不仅含有TATA-box、CAAT-box等核心启动子软件,还具有3个特异响应重金属参与调控MT-2表达的MRE元件。结论参环毛蚓的MT-2基因能被重金属诱导表达,MT-2基因转录水平的金属调控是通过MT-2基因启动子区的金属调控元件MRE来实现的。     

参环毛蚓与赤子爱胜蚓的对比研究

目的:赤子爱胜蚓的抗栓活性可靠,为评价参环毛蚓的溶栓的药用价值,进行了相关的对比研究。方法:通过纤维蛋白平板试验对比活性,通过电泳法对比酶谱。结果:2种蚯蚓活性相近,参环毛蚓及赤子爱胜蚓的许多酶谱的分子量都相近,分子量多在60000以下,主要集中在30000左右。结论:参环毛蚓与赤子爱胜蚓活性与酶谱相近,具有进一步开发价值。     

斑点免疫印迹法快速测定地龙炮制品中蚓激酶及其水解产物

目的测定参环毛蚓、秉氏环毛蚓、日本杜拉蚓和天锡杜拉蚓炮制品中蚓激酶及其水解产物,建立斑点免疫印迹法评价相应生药材药效成分明确的中药炮制品质量新方法。方法以兔抗蚓激酶单抗为一抗,应用斑点免疫印迹法对地龙炮制品中蚓激酶及其水解产物作定性检测,杂交信号应用Quantity One软件作定量分析。结果现行中药材参环毛蚓与山东产地方品种:秉氏环毛蚓、日本杜拉蚓、天锡杜拉蚓炮制品中蚓激酶及其水解产物的质量分数分别为125.23、118.34、81.05、72.13μg/g。结论秉氏环毛蚓炮制品中蚓激酶及其水解产物与现行地龙炮制品参环毛蚓无显著差异,理论上可作为广地龙的替代品。斑点免疫印迹法简便快捷,结果准确,无需大型设备,可用于地龙与类似中药材炮制品的品质评价。     

中药地龙中参环毛蚓环介导等温扩增快速检测方法

[目的]建立中药材地龙中参环毛蚓的环介导等温扩增(LAMP)检测技术,实现对参环毛蚓的快速检测。[方法]采集不同产地地龙,提取总DNA后将所提取的总DNA进行线粒体细胞色素氧化酶Ⅰ亚基(COI)基因片段扩增、测序、比对,判断各产地地龙物种。用设计的LAMP引物组进行地龙LAMP实验,反应结束后向扩增产物中加入核酸染料SYBR GreenⅠ,分别在自然光、紫外光下直接通过肉眼来观察颜色变化及利用琼脂糖凝胶电泳来检测其引物的特异性。[结果]利用新设计的LAMP引物对参环毛蚓实现了特异性扩增,且检出限达40 fg/μL,具有极高的灵敏度。[结论]利用LAMP技术可实现参环毛蚓的现场快速检测。     

地龙含杂的一个纠正措施

地龙为钜蚓科动物参环毛蚓、通俗环毛蚓、威廉环毛蚓或栉盲环毛蚓的干燥体。前一种习称“广地龙”,后3种习称“沪地龙”。按《中国药典》1995年版,捕捉后应及时剖开腹部,除去内脏及泥沙,洗净,晒干或低温干燥。由于近年来价格较高,药农在捕到后,为增加经济效益,有意不把部分虫体腹部剖开,除去内脏及泥沙(非药用部分)。最近笔者对我市医院购进的地龙(经笔者鉴定为钜蚓科动物参环毛蚓,即“广地龙”)随意称取10 0 g ,按要求去除内脏....     

中药地龙的药源调查与商品鉴定

经对我国地龙药材的药源调查与商品鉴定,结果表明,地龙的原动物主要有13种和变种。分别隶属于钜蚓科和正蚓科的3个属。其中90％以上的商品地龙来源于药典收载品种参环毛蚓Pherctimaaspergillum（E．perrier）和威廉环毛蚓P．guillelmi（Michaelsen）、栉盲坏毛蚓P．pectinifera（Michaelsen）及通俗环毛蚓P.vulgaris（Chien）。其它品种如背暗异唇蚓Allolobophoracaliginosatrapezoides（Ant．Duges）、湖北环毛蚓P.hypeiessis（Michaelsen）、秉前环毛蚓P．praepinguis（Gates）等9种蚯蚓仅在少数地区使用。     

新疆不同产地红花中重金属及农药残留量分析

目的通过分析测定新疆不同地产红花中重金属及农药残留量的含量,为红花质量标准研究提供数据参考。方法砷、汞、镉、铅、铜测定参照国家标准进行,六六六及DDT测定参照《中国药典》进行,并运用SPASS 20.0中的聚类分析法对测定结果进行分析。结果红花中砷的含量为0.01~2.05 mg/kg,汞的含量为0.008~0.071 mg/kg,镉含量为0.004~0.060 mg/kg,铅含量为0.020~0.65 mg/kg,铜含量为9.73~18.9 mg/kg,六六六和DDT均未检出。聚类分析结果表明和田于田县红花为一类;伊犁、塔城地区红花为一类;昌吉地区红花为一类。结论和田地区奥依托格拉克乡和托格日尕孜乡红花中砷含量2.0 mg/kg,其余产地的红花中重金属5项、农药残留均达到标准。不同产地来源的红花中重金属含量有差别,可以根据这种差别进行红花产地的归属判别。     

参橘止咳滴丸微生物限度检查法的建立和最大耐受量实验

目的:建立参橘止咳滴丸微生物限度检查方法,并测定其最大耐受量。方法:测定参橘止咳滴丸对5种验证菌株的回收率,并对控制菌的检查法进行验证;同时,小鼠灌胃给予参橘止咳滴丸120 g/(kg·d)(相当于人临床用量的2 290.08倍),观察14天,记录有无死亡发生,确定小鼠对参橘止咳滴丸的最大耐受量。结果:回收率试验结果表明,参橘止咳滴丸供试品试验菌的回收率试验均高于70%,证明无抑菌现象;一次性给予高剂量参橘止咳滴丸,经过14天的连续观察,小鼠无死亡且一般状态良好。结论:参橘止咳滴丸可按常规方法进行微生物限度检查,且具有较高的安全性。     

外源土壤Cd胁迫对三七富集及其药效成分的影响

目的推算三七GAP种植土壤Cd的安全限量浓度。方法采用当地土壤添加不同浓度的CdCl2溶液进行三七盆栽实验,考察重金属Cd在三七各组织器官中的富集规律及其对主要药效成分合成的影响,推得保证三七品质及服用安全性的三七GAP种植土壤Cd安全浓度限值。结果随着土壤Cd浓度的增加,三七根,茎,叶,花中Cd量均有明显增加,其变化规律符合对数曲线。三七不同组织富集Cd能力顺序为茎>根>花>叶,其中茎对Cd的吸收最强,富集系数最高。三七主要药效成分在土壤Cd的量小于30 mg/kg时,三七皂苷R1,人参皂苷Rb1,人参皂苷Rg1以及总皂苷均未表现出显著性变化,当土壤Cd的量等于30 mg/kg,主要药效成分量明显降低。结论由中药中重金属Cd的行业限量标准(0.3 mg/kg),根据土壤-三七Cd浓度拟合曲线计算出土壤Cd浓度安全限量为0.6 mg/kg。     

地龙的多重位点特异性PCR鉴别

目的:近年来,中药材地龙的商品价格不断上涨,市场的混伪品随之增加。其主要鉴别特征在药材中大部分丢失,难以区分。因此,急需建立一种准确、稳定的中药材地龙基原鉴别方法。方法:根据地龙及其混伪品的COI基因序列差异找到变异位点,从而设计参环毛蚓、通俗环毛蚓、威廉环毛蚓及栉盲环毛蚓的特异性鉴别引物,优化反应体系并进行耐受性和适用性的考察和验证。在此基础上将特异性引物组合,构建多重聚合酶链式反应(PCR)体系,从而建立了一种高效准确、操作简便、专属性强、重复性好的中药材地龙及其常见混伪品的多重位点PCR鉴别方法。结果:在该方法下广地龙基原参环毛蚓可得到366 bp片段,沪地龙基原通俗环毛蚓和威廉环毛蚓可得到487 bp片段,栉盲环毛蚓可得到475 bp片段,其他混伪品均无条带。将之组合形成的多重PCR可在一次鉴定操作中根据条带位置同时鉴别沪地龙和广地龙。结论:该文所建立的多重位点特异性PCR鉴别方法可准确鉴别中药材地龙真伪。     

瑶药杀松涯重金属及有机氯农药残留量分析

目的分析测定瑶药杀松涯重金属及有机氯农药残留量,为其用药安全性提供试验依据。方法采用电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)测定样品中铅、砷、镉、汞、铜的含量;采用气相色谱法测定样品中总六六六、总滴滴涕和五氯硝基苯的含量。结果样品中铅、砷、镉、汞、铜含量范围分别为1.53~6.33 mg/kg、0.21~3.35 mg/kg、0.11~0.30 mg/kg、0~0.05 mg/kg、1.52~14.28 mg/kg;总六六六、总滴滴涕和五氯硝基苯的含量范围分别为0~1.159 8 mg/kg、0.002 1~0.047 1 mg/kg、0.002 8~0.090 0 mg/kg。其中,1批次样品的砷和1批次样品的铅超标,2批次样品的总六六六超标。结论大部分样品重金属和农药残留量在安全范围内,但个别样品在重金属和农药残留方面尚存在一定的安全隐患,应引起重视,以保证用药的安全性。     

不同产地白花蛇舌草含镉量的差异性及镉元素从药材到配方颗粒的转移状况考察

目的 考察白花蛇舌草不同产地的含镉量差异,揭示镉元素从药材到配方颗粒的转移规律.方法 采用《中国药典》中的重金属及有害元素检测方法(ICP-OES),完成22批药材及11批配方颗粒中镉的测定.结果 江苏产白花蛇舌草平均含镉量为0.48 mg/kg,安徽产为2.25 mg/kg,江西产为3.28 mg/kg,河南产为2.41 mg/kg;镉元素从药材到配方颗粒的平均转移率是7.69％.结论 江苏产白花蛇舌草含镉量最低,镉在配方颗粒的生产过程中溶出较少,转移率较低.     

基于DNA测序技术的市售地龙类药材基原调查与考证研究

目的:进行地龙商品基原调查和本草考证,澄清商品地龙品种情况,提高中药质量。方法:通过随机采集安国、亳州等7大主流药材市场的地龙商品药材,进行DNA提取和COI片段PCR扩增与核酸测序,与建立的地龙参考核酸数据库进行比对;对主流本草进行调查和梳理。结果:我国商品地龙主要来源于34个物种,22%的基原物种为参环毛蚓(参状远盲蚓Amynthas aspergillum),22%为通俗环毛蚓(通俗腔蚓Metaphire vulgaris),稀见栉盲环毛蚓和威廉环毛蚓(1%),55%的市售地龙均非2015年版《中华人民共和国药典》规定基原,而以保宁腔蚓M.magna为主;各市场主流商品地龙品种具有很大区别,具有显著的地域性特征;本草考证结果表明,历代本草中地龙基原并非一种,而是以具有"白颈"特征的环毛类蚯蚓入药,且历代本草、标准中多有变迁。结论:应建立合理、有效的地龙基原与质量控制方法。     

地龙的研究概况

地龙为钜蚓科动物参环毛蚓Pheretima aspergillum（E.Perrier）、通俗环毛蚓Pheretima vulgaris Chen、威廉环毛蚓Pheretima guillelmi（Michaelsen）或栉肓环毛蚓Pheretima pec-tinifera Michaelsen的干燥体,前一种习称＂广地龙＂,后三种习称＂泸地龙＂,广地龙春季至秋季捕捉,泸地龙夏季捕捉,及时剖开腹部,除去内脏和泥沙,洗净,晒干或低温干燥;性寒,味辛、苦,清热利湿,祛风止痒;用于小便涩痛,阴痒带下,风疹,湿疹,皮肤瘙痒[1]。     

11种湘产中药材中3种重金属快速检测方法的建立

目的建立11种湘产中药材中3种重金属的快速检测方法。方法铅、镉、铜在一定条件下分别与螯合剂二甲酚橙、镉试剂、铜试剂发生显色反应,对其含有量进行检测。结果铅、镉、铜离子显色反应色阶范围分别为0.2~10.0、0.1~5.0、0.5~10 mg/L。结论该方法简单、快速、选择性强、检测成本低,可为中药材中重金属现场快速检测提供参考。     

参百润肺胶囊急性毒性实验研究

目的：探讨参百润肺胶囊对小鼠的急性毒性反应。方法：实验前禁食不禁水12 h,参百润肺胶囊组按小鼠可灌服的最大体积（0.04 mL/g）灌服最大可灌服浓度的参百润肺胶囊混悬液（0.5 g/mL）;生理盐水组小鼠灌服最大体积（0.04 mL/g）的生理盐水。灌胃,3次/d,每次间隔8 h,然后给动物以正常饮食,连续观察14 d。结果：小鼠未出现死亡。结论：小鼠每日积累最大耐受量为60 g原生药/kg,该量已为临床用量的460倍以上,可以认为临床用药安全。     

重庆市中药材重金属富集特性研究

目的:比较重金属含量在中药材种类、部位和生长时间的差异,阐释中药材重金属含量与土壤重金属含量的关系。方法:采集重庆市中药材产区52样点,622个样品,采用ICP等离子体法测定土壤和药材中重金属铜、铅、镉、汞、砷含量。结果:研究区土壤的铜、铅、镉、汞、砷含量差异较大,重金属富集作用整体表现为镉铜汞砷铅,种植1~4年中药材的镉、汞、砷富集能力高于种植5~7年的,铜、铅的富集能力在不同生长年限差异不显著。结论:重金属转移能力与重金属种类、药材品种有关。     

人工养殖参环毛蚓的试验研究

本试验按条重大小把参环毛蚓随机分组,在相同的生活条件下,进行了不同饲料配方、不同水质、不同饲养方式、不同季节、不同饲养密度的对比试验。