野葛幼叶细胞悬浮培养生产葛根素等异黄酮类化合物的研究

目的 建立野葛幼叶细胞悬浮培养体系。方法 将由野葛幼叶外植体诱导的愈伤组织进行悬浮培养，研究了悬浮培养物生长的动态和葛根素及总异黄酮类化合物产量积累的动态。结果 细胞在培养的第1～5天为对数生长期，第8天时细胞干重达最大值。葛根素的合成与细胞生长呈紧密偶联型，在第8天时葛根素产量达最大值。总异黄酮类化合物的积累与葛根素积累存在一定差异，异黄酮类化合物的总产量在第10天最大值。结论 野葛幼叶细胞悬浮培养体系中总异黄酮类化合物的产量高于野生原植株，葛根素产量低于野生原植株。     

野葛主要成分积累动态变化研究

 目的通过对野葛块根产量和主要活性物质含量积累动态变化规律进行研究,以确定野葛的适宜采收期。方法用紫外法于250 nm处比色以测定总异黄酮含量和HPLC测定其葛根素含量。结果5年生野葛6月份采收,葛根素和异黄酮含量最高,分别为7.91%,8.73%;11月份二者含量次之,分别为5.90%,7.53%。而块根产量在11月份最高,且单株块根中葛根素和异黄酮总量最高,分别为29.81,38.05g。结论5年生野葛在11月采收具有最高的利用价值。     

氯化钠胁迫对野葛种苗生理特性的影响

目的探究NaCl胁迫对野葛种苗生理特性的影响。方法以野葛种苗为研究对象,测定其在不同浓度NaCl胁迫条件下多种生理指标情况。结果 (1)随着处理时间的延长,除对照组外,几种处理条件下野葛种苗的叶绿素含量均呈现出降低的趋势,NaCl浓度越高,叶绿素含量降低幅度越大;(2)对照组和低浓度NaCl处理组丙二醛(MDA)的积累量低,高浓度处理组则积累了较高含量的丙二醛(MDA);(3)低浓度的NaCl胁迫会刺激野葛种苗氧化酶类的产生用来保护其减少伤害,而高浓度的NaCl胁迫严重破坏了野葛种苗细胞的膜结构,导致野葛种苗里氧化酶类大量减少,活性降低;(4)低浓度的NaCl胁迫条件下,野葛种苗中可溶性蛋白的含量会升高,升高的可溶性蛋白可以增强野葛种苗对NaCl胁迫的抵抗能力,而高浓度NaCl胁迫则损坏了野葛种苗的膜脂和膜系统,影响野葛种苗的正常萌发和生长。结论开展NaCl胁迫对野葛种苗生理特性的研究有利于促进野葛种质资源的开发与利用。     

红三叶总异黄酮对人乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响

目的研究红三叶总异黄酮对人乳腺癌MCF-7细胞的生长抑制和凋亡的诱导作用。方法在体外细胞培养下,采用不同质量浓度红三叶异黄酮和5-Fu处理MCF-7细胞,MTT法测定红三叶总异黄酮抑制MCF-7细胞增殖的量-效关系;TUNEL法、流式细胞术分析其细胞凋亡率和周期分布。结果红三叶总异黄酮对MCF-7细胞增殖的抑制作用随药物质量浓度提高和作用时间延长而更加明显,而在低质量浓度时却出现轻微促细胞增殖现象。TUNEL法、流式细胞术分析结果表明,红三叶总异黄酮能诱导MCF-7细胞凋亡,阻滞细胞于G2/M期,降低细胞增殖指数,且这种作用也存在剂量-效应关系。结论红三叶总异黄酮可抑制MCF-7细胞增殖并诱导其凋亡,具有抗肿瘤作用。     

野葛花中鸢尾异黄酮的提取与鉴别

目的:从野葛花中提取分离鸢尾异黄酮并鉴别。方法:采用多种方法从等量野葛花中提取异黄酮及其糖苷混合物。再将异黄酮糖苷水解成苷元并与提取物中原有的异黄酮合并制得葛花总异黄酮。葛花总异黄酮经硅胶柱色谱分离后获得鸢尾异黄酮,并利用紫外、红外、质谱和核磁共振氢谱进行鉴定。结果:以甲醇为溶剂的索氏提取仪提取和热水浸提相结合的提取方法提取的葛花总异黄酮和鸢尾异黄酮产量均为最高,鸢尾异黄酮破坏较少。结论:甲醇中索氏提取仪提取和水浸提相结合的提取方法为葛花中鸢尾异黄酮最佳提取方法;经盐酸水解法制得的葛花总异黄酮中以鸢尾异黄酮含量最高。     

野葛毛状根的诱导及离体培养

目的; 野葛毛状根的诱导和无激素离体培养。 方法：用含超强毒性基因的发根农杆菌R1601与野葛离体叶片共培养。 结果：经感染的野葛叶片表面直接形成大量生长快、分枝多、负向地性的毛状根,毛状根离体培养具有抗卡那霉素特性和激素自给特征。 结论：建立了发根农杆菌诱导野葛毛状根的方法和野葛毛状根的离体培养系统。     

草酸促进人参愈伤组织细胞生长和人参多糖与皂苷积累的研究

目的 研究草酸在光照和不同温度条件下对人参愈伤组织细胞生长及次生代谢物质积累的影响.方法 利用人参悬浮细胞培养体系,通过改变培养条件和在培养基中添加草酸,通过一定时间的培养后检测细胞增长和次生代谢成分的积累.结果 光照和培养温度对草酸的诱导效果有很大影响,其中在12 h/d的光照下, 0.01～1 mmol·L-1的草酸对细胞生长和皂苷积累都有促进作用,而10 mmol·L-1的草酸对多糖积累有促进作用;在4个温度(22,24,26和28℃)水平下,随着培养温度的升高,添加草酸对细胞生长的抑制作用增强,但有利于多糖和皂苷的积累.结论 在使用草酸作为诱导子时,选择合适的培养温度和光照条件有利于培养细胞的生长和次生代谢物质积累.     

长春花突变细胞生理特征的研究

目的研究以秋水仙碱处理的长春花突变细胞在继代培养过程中的生长规律、吲哚生物碱积累的规律及营养成分的适宜浓度等方面的特征,期望得到适于工业化细胞培养的理想材料。方法将突变细胞培养于MS固体培养基上,定期称取其鲜质量,用有机溶剂萃取吲哚生物碱,应用RP-HPLC法检测药用成分阿玛碱和长春质碱。结果突变细胞培养至第30代时,生长速度和吲哚总碱积累得最快,培养至第45代时,两者均明显下降。而药用成分的量于第20代达到最高;在培养基中添加适量的色氨酸能提高药用成分的量;培养基中Ca2 和Zn2 的质量浓度分别为1760和12.6mg/L时,明显促进了药用成分的积累。结论长春花突变细胞可能是一种适于工业化细胞培养的理想材料。     

野葛葛根素积累动态的研究

目的：研究野葛块根中葛根素积累的动态规律,为确定野葛药材的最佳采收期以及野葛藤蔓的综合利用提供理论依据。方法：采用HPLC测定不同生长年限、不同采收时期的野葛块根及藤蔓葛根素含量。结果：野葛块根中葛根素动态积累有一定规律,葛根素含量以4～5年生块根最高,6年生块根含量降低;每年的11～12月块根中葛根素含量达到全年最高值;当年生藤蔓含葛根素约1．4％。结论：野葛的最佳采收期为11月下旬至翌年3月中旬,采挖4年生块根为宜;此时藤蔓葛根素含量不低,值得作为提取葛根素的另一重要原料综合利用。     

二级细胞悬浮培养法生产紫草素实验研究

运用二级细胞悬浮培养法进行了新疆紫草的细胞培养生产紫草素的实验，通过测定，紫草宁的平均产率为0．053g／g干重细胞。     

内生真菌诱导子对茅苍术细胞生长及苍术素积累的影响

目的:研究内生真菌诱导子对茅苍术细胞生长以及苍术素积累的影响.方法:采用细胞悬浮培养方法研究内生真菌诱导子不同浓度、不同加入时间对茅苍术细胞生长、苍术素合成以及相关酶活性的影响.结果:低浓度诱导子对细胞生长没有明显的影响,但高浓度诱导子显著抑制细胞生长,当诱导子质量浓度达到100 mg·L-1时,细胞生长抑制率达到46.7%;此外,从茅苍术内生真菌中筛选获得6株具有较强诱导作用的内生真菌,其中Rhizoctonia SP1诱导子的作用较强,20～60 mg·L-1 Rhizoctonia SP1诱导子显著促进苍术素的生物合成.在细胞培养至12 d时,添加40 mg·L-1 Rhizoctonia SP1诱导子,苍术素的含量在第21天达到最大值28.06μg·L-1,比对照提高了48.3%;且细胞多酚氧化酶(PPO)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)的活性出现了显著提高.结论:内生真菌诱导子能有效提高茅苍术细胞悬浮培养体系中苍术素的产量.     

几种因素对悬浮培养人参细胞生长和皂苷积累的影响

为了完善人参细胞悬浮培养体系,论文研究了人参细胞悬浮培养的动态,探明了培养瓶瓶盖透气滤膜的有无,摇床转速和接种量对人参细胞生长和皂苷积累的影响。结果表明人参细胞悬浮培养过程中,细胞生物量和皂苷产量在培养20 d时达到最大值,因此,可将培养期定为20 d。培养瓶盖上有透气滤膜时有利于人参细胞生长和皂苷合成;悬浮培养时摇床转速影响细胞生长但对皂苷合成无影响,转数为120 r·min^-1时,皂苷生产量最高。每个培养瓶接种6 g鲜重的细胞时,细胞生长和皂苷积累明显好于其他接种量,总皂苷质量分数达12.8 mg·g^-1DW,生产量达146.6 mg·L^-1。     

Lignans from cell suspension cultures of Phyllanthus niruri, an Indonesian medicinal plant

Cell suspension cultures of Phyllanthus niruri were used to study the lignan profiles and biosynthesis. Suspension cultures yielded two lignans: the new cubebin dimethyl ether (1) and urinatetralin (2), a new lignan from P. niruri, but reported earlier from P. urinaria. This is the first report of cell suspension cultures of P. niruri that successfully produce lignans. Feeding 0.5 mM ferulic acid or 0.5 mM caffeic acid, being early precursors of lignan biosynthesis, resulted in an increase up to 0.7 mg g(-1) DW of 1 (control value 0.1 mg g(-1) DW) and up to 0.3 mg g(-1) DW of 2 (control value 0.2 mg g(-1) DW). Comparison of the lignan profiles of cell suspensions, callus cultures, aerial plant parts, roots, and seeds showed significant differences.     

3种重金属对欧洲花楸悬浮细胞生物量的影响

目的： 以欧洲花楸悬浮培养细胞（SASC）为材料,研究非生物诱导子-重金属对SASC生物量的影响。方法： 配制不同浓度的氯化镧、硝酸铜、硝酸铅溶液对SASC进行处理,用电子天平进行SASC生物量测定。结果： 低浓度氯化镧刺激细胞生长而高浓度则抑制细胞生长,对细胞生长的影响表现为Hormesis现象,最适刺激质量浓度为0.01 mg·L^-1;低浓度硝酸铜抑制细胞生长,高浓度刺激细胞生长,0.05 mg·L^-1 硝酸铜处理后细胞生物量最低;基本所有浓度的硝酸铅都表现为刺激细胞生长,最适刺激质量浓度为0.5 mg·L^-1。结论： 重金属诱导子影响了SASC的生物量,且其作用程度和方式与氯化镧、硝酸铜、硝酸铅3种诱导子种类及浓度相关。     

水杨酸对白桦悬浮细胞中齐墩果酸积累及防御酶活性的影响

目的研究水杨酸(SA)对白桦悬浮细胞生长、齐墩果酸积累及防御酶活性的影响。方法在白桦悬浮培养第7、10、13、15天,分别添加不同质量浓度(10、25、50、100、250 mg/L)的SA,进行细胞生长、齐墩果酸量及抗逆酶活性分析。结果添加低质量浓度SA(10～25 mg/L)对细胞活力和生长量影响不大,高质量浓度的SA(100～250 mg/L)处理可显著抑制细胞活力和生长,但可促进齐墩果酸的积累,在第7天添加250 mg/L SA后齐墩果酸量最高,达1.71 mg/g(干质量),是对照的3.1倍;而第7天添加50 mg/L SA后齐墩果酸的产量为0.473 mg,比对照提高了42.04%。悬浮培养第7天添加50 mg/L SA,过氧化氢酶(CAT)和超氧化物歧化酶(SOD)两种酶活性分别在0～24 h和0～48 h比对照显著提高,而PAL活性在SA处理12 h后始终高于对照。结论适宜浓度的SA可刺激白桦细胞防御酶活性提高,并促进白桦悬浮细胞中齐墩果酸的积累。     

洛伐他丁、氯胺和茉莉酸甲酯处理对茜草悬浮培养细胞中紫色素和大叶茜草素积累的作用(英文)

目的:使用茜草细胞悬浮培养体系研究茜草中萘醌类成分生合成途径原料IPP的来源,以及茉莉酸甲酯、氯胺和洛伐他丁对蒽醌和萘醌的积累情况。方法:建立茜草细胞悬浮培养体系,分别在培养基中添加茉莉酸甲酯、氯胺和洛伐他丁。每3天取样一次。使用高效液相色谱法测定紫色素和大叶茜草素含量并计算出产量。结果:洛伐他丁处理组中紫色素和大叶茜草素产量均有显著增加。氯胺处理组中紫色素和大叶茜草素产量明显下降。茉莉酸甲酯处理组中紫色素产量增加,同时大叶茜草素产量降低。结论:在茜草细胞中萘醌类成分的IPP可能是通过MEP途径合成的;要解释茉莉酸甲酯对蒽醌和萘醌积累的不同作用,基因表达水平方面的研究尤其是对1,4-二羟基-2-萘甲酸异戊烯基化的基因表达研究应该受到更多关注。     

Anticancer activity of rice callus suspension culture

A multitude of natural products from plant extracts have been tested for their ability to inhibit the progression of several diseases including cancer. A novel approach of evaluating plant (rice) callus suspension cultures for anticancer activity is reported. The ability of different dilutions of rice callus suspension cultures to inhibit growth of two human cancer cell lines was tested employing varying cell numbers and different incubation times. A crystal violet assay was performed to assess cell viability of the cancer cell lines. Furthermore, microscopic analysis was carried out to determine the effect of the rice callus culture on the morphology of the cancer cells. Rice callus suspension cultures significantly inhibited the growth of human cancer and renal cell lines at densities of 5000 and 10000 cells/mL when incubated for 72 and 96 h. Rice callus suspension culture was more efficient than paclitaxel (Taxol®) and etoposide in selectively killing human colon and renal cancer cell lines compared with a control cell line (human lung fibroblasts). The use of plant callus suspension cultures is a novel approach for inhibiting the growth of cancer cells, which will lead to the development of new agents for selectively killing cancer cells. Copyright © 2011 John Wiley & Sons, Ltd.     

吴茱萸碱对涎腺腺样囊性癌SACC-M细胞生长的调控影响

目的:研究茱萸碱对涎腺腺样囊性癌SACC-M细胞生长的调控影响,为临床治疗涎腺腺样囊性癌提供理论依据。方法:选择口腔颌面外科手术治疗的20例涎腺腺样囊性癌患者的癌组织细胞ACC-M,置于含有RPMI1640、小牛血清、青霉素及链霉素的培养基中,恒温37℃下传代培养。再使用MTT比色实验将对数生长期的细胞悬浮液种于孔板内培养24h后,按浓度由小到大5种不同浓度比例加入吴茱萸碱溶液,另外设1组空白对照,1组调零组,进行培养后分别加入MTT、二甲基亚砜溶液用酶标法测定各组吸光度值并计算细胞生长的抑制率,显微镜下观察细胞生长状况,用流式细胞仪检测细胞凋亡状况。结果:MTT比色试验结果显示,吴茱萸碱对SACC-M细胞的生长具有明显的抑制效果,它的抑制率随时间的延长而增长,在药物作用后的24、48、72h的抑制率分别为35%,65%,85%,经过对细胞的抑制作用与药物浓度做二变量相关性分析可知二者呈正相关性(r=1.194,r0.01)。显微镜下观察可见对照组细胞生长迅速,实验组生长缓慢;流式细胞仪下可见实验组大量细胞死亡,对照组凋亡率低。结论:吴茱萸碱对涎腺腺样囊性癌细胞具有生长抑制作用,它可以控制SACC-M细胞的增殖与凋亡,且具有随浓度升高药效增强的趋势,可以将此运用于SACC的治疗。     

干旱胁迫对管花肉苁蓉组织培养体系中苯乙醇苷类成分含量的影响

目的建立管花肉苁蓉Cistanche tubulosa组织培养体系,并考察干旱胁迫对其中苯乙醇苷类成分含量的影响。方法通过液质联用技术分析管花肉苁蓉愈伤组织与悬浮培养体系中的主要化学成分,绘制其生长曲线,并通过渗透压调节剂(NaCl、甘露醇和PEG6000)模拟干旱胁迫环境,考察组织培养体系中松果菊苷和毛蕊花糖苷含量的变化。结果管花肉苁蓉愈伤组织与悬浮培养细胞均能生成松果菊苷和毛蕊花糖苷;绘制管花肉苁蓉愈伤组织生长曲线,确定30d为最佳继代时间;NaCl和甘露醇所诱导的干旱胁迫不利于愈伤组织细胞的生长及其苯乙醇苷类成分的积累,而6%PEG6000能显著促进悬浮细胞中苯乙醇苷类化合物的生成,诱导15d后,松果菊苷和毛蕊花糖苷的生物量分别为(1.07±0.10)g/L和(0.12±0.01)g/L,分别可达细胞干质量的20.94%和2.27%,为对照组的1.29倍和1.19倍。结论 PEG6000介导的干旱胁迫对管花肉苁蓉悬浮细胞中松果菊苷和毛蕊花糖苷的积累有明显促进作用。