电针联合丁苯酞对MCAO/R大鼠神经血管单元的保护效应

目的?观察电针联合丁苯酞对脑缺血再灌注损伤大鼠模型神经血管单元（NVU）的影响。方法?将成年SD大鼠随机分为正常组、模型组、丁苯酞组、电针组、电针联合丁苯酞组，每组12只。采用改良线栓法建立脑缺血再灌注损伤MCAO/R模型。造模后电针组和电针联合丁苯酞组大鼠选取双侧“内关”、双侧“三阴交”与“水沟”“百会”穴位进行电针干预，每日30 min，连续7日；丁苯酞组和电针联合丁苯酞组大鼠以5 mg/kg丁苯酞注射液腹腔注射，每日1次，连续7日。造模7日后各组大鼠进行神经功能评分；免疫组织化学法和Western Blot法检测缺血区脑组织血管内皮生长因子（VEGF）、胶 质纤维酸性蛋白（GFAP）、神经元核抗原（NeuN）蛋白的表达水平；实时荧光定量PCR法检测缺血区脑组织VEGF、GFAP、NeuN mRNA的表达水平。结果?与正常组比较，模型组大鼠脑组织缺血区VEGF、GFAP表达增多，NeuN表达减少（P<0.05）。与模型组比较，各干预组大鼠脑组织缺血区VEGF、GFAP、NeuN表达增多（P<0.05）。与电针或丁苯酞组比较，电针联合丁苯酞组大鼠脑组织缺血区VEGF、GFAP、NeuN表达增多（P<0.05）。实时荧光定量PCR检测结果与免疫组化法和Western Blot法结果趋于一致。结论?电针联合丁苯酞可上调VEGF、GFAP、NeuN的表达，对神经血管单元发挥保护作用，且针药结合效果优于单用电针或丁苯酞，表明电针联合丁苯酞对MCAO/R大鼠神经血管单元损伤有协同保护作用。     

Wnt/β-catenin信号通路介导红景天苷诱导间骨髓充质干细胞向神经细胞定向分化研究

目的探讨红景天苷诱导小鼠骨髓间充质干细胞(mesenchyma stem cells,MSCs)向神经元细胞定向分化的分子机制。方法以小鼠MSCs系D1细胞为研究对象,实验分为阴性对照组(完全培养液)、阳性对照组(含1 mmol/Lβ-巯基乙醇)、红景天苷组(20 mg/L红景天苷)和阻断组(20 ng/m L DKK1);1×104个/孔细胞接种于6孔板24 h后分组,荧光免疫化学方法观察阴性对照组、阳性对照组和红景天苷组中β-链蛋白(β-catenin)的表达;RT-PCR法检测阴性对照组、阳性对照组、红景天苷组中神经元特异性烯醇化酶(neuronspecific enolase,NSE)、抗微管蛋白(beta 3 classⅢtubulin,β-tubulinⅢ)、孤儿核受体相关因子1(nuclear receptor related factor1,Nurr1)、神经胶质原纤维酸性蛋白质(glial fibrillary acidic protein,GFAP)mRNA和阻断组Wnt3a、β-catenin、低密度脂蛋白受体相关蛋白6(low-density lipoprotein receptor-related protein6,LRP6)、轴蛋白(Axin)mRNA的表达;Western blot分析阴性对照组、阳性对照组和红景天苷组中β-catenin和NSE蛋白的表达。利用胞外Ca2+螯合剂乙二醇双四乙酸[EGTA(胞外Ca2+螯合剂)]、细胞膜Ca2+通道阻断剂硝苯地平(Nifedipine细胞膜Ca2+通道阻断剂)和LY294002(IP3Ks特异抑制剂)分别阻断细胞不同Ca2+信号阻断剂,RT-PCR检测红景天苷组和阻断组中Wnt3a、LRP-6、Axin、糖原合成酶激酶3(glycogen synthase kinase,GSK-3)和β-catenin mRNA的表达;Western blot法分析β-catenin蛋白的表达。结果与阳性对照组比较,红景天苷组β-catenin为强阳性表达,Wnt3a、β-catenin、LRP6、Axin mRNA表达明显上调(P<0.01);NSE、β-tubulinⅢ、Nurr1 mRNA和NSE蛋白表达上调(P<0.01);与阳性对照组和红景天苷组比较,阻断组β-catenin、NSE、Nurr1和β-tubulinⅢmRNA表达降低,β-catenin和NSE蛋白表达下调(P<0.01)。与红景天苷组比较,尼莫地平组、EGTA、LY294002组Wnt3a、LRP-6、β-catenin和Axin mRNA及蛋白表达降低,β-catenin蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01)。结论红景天苷通过Wnt/β-catenin和Ca2+信号通路影响MSCs向神经元细胞定向分化。     

电针对颈椎病模型大鼠椎间盘细胞β-catenin和Axin蛋白表达的影响

目的电针对颈椎病模型大鼠椎间盘细胞Axin、P-β-catenin蛋白的影响。方法将28只SD大鼠分成空白对照组(空白组)、模型对照组(模型组)、模型电针治疗组(模针组)、模型美洛昔康片对照治疗组(美洛昔康组),每组7只大鼠,予相应处理。采用免疫组化检测β-catenin蛋白和Western blot检测Axin蛋白的表达情况。结果电针能降低椎间盘凋亡细胞的阳性表达,与模型组相比有显著差异。电针能显著提高Wnt和β-catenin蛋白的表达水平。结论电针能抑制颈椎病模型大鼠的凋亡细胞,其取效途径与电针激活wnt-β-catnin信号通路有密切关系。     

补肾舒脊颗粒含药血清对人骨髓间充质干细胞Wnt5a、β-catenin mRNA及蛋白表达的影响

目的探讨补肾舒脊颗粒延缓异位骨化的可能作用机制。方法体外培养人骨髓间充质干细胞(BMSCs)分为空白组、模型组、对照组及中药高、中、低剂量组。空白组加入基础培养基(3.8 ml)+5%正常大鼠血清(0.2 ml);模型组加入诱导培养基(4.8 ml)+5%正常大鼠血清(0.2 ml);西药组加入诱导培养基(3.8 ml)+5%洛索洛芬钠含药血清(0.2 ml);中药高、中、低剂量组分别加入诱导培养基(3.8 ml)+5%补肾舒脊颗粒含药血清(0.2 ml)。28天后通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹试验(Western blot)检测Wnt5a mRNA、β-catenin mRNA及蛋白表达。结果与空白组比较,模型组Wnt5a、β-catenin蛋白及mRNA表达均升高(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,对照组和中药各剂量组Wnt5a、β-catenin蛋白及mRNA表达均降低(P<0.05或P<0.01);与对照组比较,中药高剂量组Wnt5a mRNA、β-catenin mRNA表达降低,中药中剂量组Wnt5a、β-catenin蛋白表达降低(P<0.05或P<0.01);与中药低、中剂量组比较,中药高剂量组Wnt5a mRNA、β-catenin mRNA表达降低(P<0.05或P<0.01)。与中药低剂量组比较,中药中剂量组Wnt5a蛋白表达降低,中药高剂量组β-catenin蛋白表达升高(P<0.05)。结论补肾舒脊颗粒可能通过Wnt/β-catenin信号通路抑制Wnt5a mRNA、β-catenin mRNA及蛋白的表达,从而起到延缓强直性脊柱炎异位骨化的作用。     

电针干预对脑梗死大鼠脑组织Wnt信号通路的影响

目的:观察电针干预对脑梗死(CI)大鼠脑组织Wnt信号蛋白中7a(Wnt7a)、淋巴增强因子1(LEF1)、糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)、Wnt信号通路内源性抑制剂Dickkopf-1(DKK1)mRNA及蛋白表达的影响,探讨电针治疗CI的作用机制。方法:将280只健康雄性Wistar大鼠随机分为电针组、模型组、假手术组和空白组,前3组每组90只,并按照术后1 h、3 h、6 h、9 h、12 h、24 h、3 d、7 d、12 d分为9个时相组,每组10只,空白组10只。采用改良的Longa法建立永久性大脑中动脉闭塞(MCAO)大鼠模型。电针组予电针刺激"水沟"穴,疏密波,2 Hz/15 Hz,2 mA,留针20 min,1、3、6、9、12、24 h时相组大鼠电针治疗1次,其余时相每日电针1次。采用神经损伤严重程度(NSS)评分于术前、术后及取材前对各组大鼠进行评价。采用实时荧光定量PCR法及Western blot法检测各组大鼠右侧缺血区脑组织Wnt7a、LEF1、GSK-3β及DKK1 mRNA和蛋白表达水平。结果:MCAO后,模型组及电针组大鼠NSS评分随缺血时间延长呈逐渐下降趋势;取材前,与假手术组比较,模型组大鼠各时相NSS评分明显升高(P0.01);与模型组比较,电针组大鼠NSS评分在3、7、12 d时明显降低(P0.05,P0.01)。与假手术组比较,模型组大鼠缺血区脑组织Wnt7a和LEF1 mRNA表达水平在3 h～12 d时均明显升高(P0.01,P0.05),GSK-3β和DKK1 mRNA表达水平分别在9～24 h和24 h～3 d时明显降低(P0.05,P0.01);模型组Wnt7a和LEF1蛋白表达水平在6 h～12 d均明显升高(P0.05,P0.01),GSK-3β和DKK1蛋白表达水平分别在24 h～3 d和3 d时明显降低(P0.01,P0.05)。与模型组比较,电针组大鼠缺血区脑组织Wnt7a和LEF1 mRNA表达水平分别在12 h～3 d和24 h～12 d时明显升高(P0.01,P0.05),GSK-3β和DKK1 mRNA表达水平分别在9 h、3～12 d和12 h～3 d时明显降低(P0.01,P0.05);电针组Wnt7a和LEF1蛋白表达水平分别在24 h～12 d和3～12 d明显升高(P0.05,P0.01),GSK-3β和DKK1蛋白表达水平分别在12 h、7～12 d和24 h～12 d明显降低(P0.05,P0.01)。结论:电针干预能明显改善MCAO大鼠的神经功能损伤症状,可能与上调Wnt7a、LEF1及下调GSK-3β、DKK1的表达,进一步激活Wnt信号通路有关。     

Wnt/β-catenin信号通路介导红景天苷诱导骨髓间充质干细胞向神经细胞定向分化研究

目的探讨红景天苷诱导小鼠骨髓间充质干细胞（mesenchyma stem cells,MSCs）向神经元细胞定向分化的分子机制。方法以小鼠MSCs系D1细胞为研究对象,实验分为阴性对照组（完全培养液）、阳性对照组（含1 mmol/L β-巯基乙醇）、红景天苷组（20 mg/L红景天苷）和阻断组（20 ng/mL DKK1）;1×104个/孔细胞接种于6孔板24 h后分组,荧光免疫化学方法观察阴性对照组、阳性对照组和红景天苷组中β-链蛋白（β-catenin）的表达;RT-PCR法检测阴性对照组、阳性对照组、红景天苷组中神经元特异性烯醇化酶（neuron-specific enolase,NSE）、抗微管蛋白（beta 3 class Ⅲ tubulin,β-tubulin Ⅲ）、孤儿核受体相关因子1 （nuclear receptor related factor1,Nurr1）、神经胶质原纤维酸性蛋白质（glial fibrillary acidic protein,GFAP）mRNA和阻断组Wnt3a、β-catenin、低密度脂蛋白受体相关蛋白6（low-density lipoprotein receptor-related protein6,LRP6）、轴蛋白（Axin）mRNA的表达;Western blot分析阴性对照组、阳性对照组和红景天苷组中β-catenin和NSE蛋白的表达。利用胞外Ca2+螯合剂乙二醇双四乙酸［EGTA（胞外Ca2+螯合剂）］、细胞膜Ca2+通道阻断剂硝苯地平（Nifedipine细胞膜Ca2+通道阻断剂）和LY294002（IP3Ks特异抑制剂）分别阻断细胞不同Ca2+信号阻断剂,RT-PCR检测红景天苷组和阻断组中Wnt3a、LRP-6、Axin、糖原合成酶激酶3 （glycogen synthase kinase,GSK-3）和β-catenin mRNA的表达;Western blot法分析β-catenin蛋白的表达。结果与阳性对照组比较,红景天苷组β-catenin为强阳性表达,Wnt3a、β-catenin、LRP6、Axin mRNA表达明显上调（P<0.01）;NSE、β-tubulin Ⅲ、Nurr1 mRNA和NSE蛋白表达上调（P<0.01）;与阳性对照组和红景天苷组比较,阻断组β-catenin、NSE、Nurr1和β-tubulin Ⅲ mRNA表达降低,β-catenin和NSE蛋白表达下调（P<0.01）。与红景天苷组比较,尼莫地平组、EGTA、LY294002 组Wnt3a、LRP-6、β-catenin和Axin mRNA及蛋白表达降低,β-catenin蛋白表达降低（P<0.05, P<0.01）。结论红景天苷通过Wnt/β-catenin和Ca2+信号通路影响MSCs向神经元细胞定向分化。     

头穴围刺结合运动疗法对脑梗死大鼠血管新生机制的影响

目的:观察头穴围刺结合运动疗法对脑梗死大鼠血管新生的影响。方法:采用健康雄性wistar大鼠75只随机分为假手术组、模型组、头穴围刺组、运动组、围刺+运动组,每组15只。参照Zea-Longa报道的线栓法,制备大脑中动脉梗死(MCAO)脑缺血再灌注模型,采用对应的方法进行干预,干预14天后进行行为学评估;每组随机选取5只大鼠用TTC染色法测定脑梗死面积比;RT-PCR法检测β-catenin mRNA、GSK-3βmRNA表达水平,western-blot检测血管内皮细胞VEGF水平。结果:14天后围刺+运动组mNSS评分、脑梗死面积比优于模型组、头穴围刺组和运动组(P<0.01)。围刺+运动组与其它各组相比可明显上调β-catenin蛋白表达、下调GSK-3β水平、增加VEGF表达(P<0.01)。结论:头穴围刺结合运动疗法可促进脑梗死大鼠的血管新生。     

电针对局灶性脑缺血再灌注大鼠神经血管单元的保护作用

目的:观察电针对大脑中动脉缺血再灌注(MCAO/R)模型大鼠神经行为学及脑组织血管内皮生长因子(VEGF)、神经生长相关蛋白-43(GAP-43)、突触囊泡蛋白(SYN)、髓鞘碱性蛋白(MBP)、勿动蛋白A(Nogo-A)表达的影响,探讨电针对MCAO/R模型大鼠神经血管单元的保护作用及其机制。方法:雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和电针组,每组20只。采用线栓法制作大鼠MCAO/R模型。电针刺激在造模成功90min后进行,针刺双侧"内关"水沟"三阴交"及"百会"穴,留针30min,每天针刺1次,共14d。各组大鼠在7、14d两个时间点各取10只进行神经功能评估并行免疫组化SP法检测缺血脑组织VEGF、GAP-43、SYN、MBP、Nogo-A的表达。结果:模型组出现明显神经功能缺损症状,14d电针组大鼠神经功能恢复明显优于模型组(P<0.05)。与假手术组比较,模型组7、14d缺血组织VEGF、GAP-43、Nogo-A的表达增多,SYN在两个时间点的表达均减少(P<0.01,P<0.05);与模型组比较,电针组7、14d缺血组织VEGF、GAP-43、SYN、MBP阳性表达均增多(P<0.01,P<0.05),Nogo-A的表达减少(P<0.01)。结论:①电针能有效改善局灶性脑缺血再灌注大鼠的神经功能;②电针能通过上调各时间点局灶性脑缺血再灌注大鼠脑组织内VEGF、GAP-43、SYN、MBP的表达,下调Nogo-A的表达,促进血管、神经元、神经胶质细胞的恢复,从而保护脑缺血再灌注大鼠的神经血管单元。     

电针“水沟”“百会”穴对脑缺血再灌注损伤大鼠海马神经元自噬的影响

目的:探讨电针“水沟”“百会”穴对脑缺血再灌注(I/R)损伤大鼠海马神经元自噬的影响。方法:SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组,每组16只。采用一侧大脑中动脉栓塞(MCAO)的方法复制I/R损伤大鼠模型。电针组予“水沟”“百会”电针治疗,20 min/次,1次/d,共5 d。以Longa神经功能评分法评价神经功能;TTC染色法测定大鼠脑梗死体积百分比;ELISA法检测脑脊液白细胞介素(IL)-6、IL-18、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;荧光定量PCR和Western blot法分别检测缺血区海马组织自噬相关蛋白腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、Beclin-1、VPS34、LC3B mRNA和蛋白的表达。结果:与假手术组比较,模型组神经功能评分明显升高(P<0.01),大鼠脑梗死体积百分比明显增大(P<0.01),脑脊液IL-6、IL-18、TNF-α含量明显升高(P<0.01,P<0.05),海马组织AMPK、Beclin-1、VPS34蛋白和mRNA表达水平,以及LC3B mRNA表达水平和LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值均升高(P<0.01...     

艾灸足三里穴对功能性消化不良模型大鼠肠神经胶质细胞的影响

目的探讨艾灸足三里穴对功能性消化不良模型大鼠肠神经胶质细胞的影响。方法将50只大鼠随机分为正常组(10只)及造模组(40只),将造模成功的30只大鼠再随机分为模型组、艾灸组及束缚组,每组10只。造模结束后,艾灸组大鼠用自制鼠衣束缚后艾灸足三里穴,束缚组只进行束缚。干预结束后取大鼠胃窦组织,用HE染色观察大鼠胃窦组织病理形态变化,免疫荧光染色观察S100β、GFAP蛋白表达量,PCR观察大鼠胃窦组织s100β、GFAP mRNA水平。结果大鼠腹部解剖显示:各组大鼠胃组织未发现器质性改变。s100β、GFAP蛋白免疫荧光染色阳性为红色荧光,半定量分析结果显示,模型组胃窦组织s100β、GFAP蛋白相对表达量显著高于正常组(P<0.01);与模型组比较,艾灸组大鼠胃窦组织中s100β、GFAP蛋白相对表达量明显降低(P<0.01);束缚组与模型组之间没有统计学差异;与束缚组相比,艾灸组大鼠胃窦组织中s100β、GFAP蛋白相对表达量明显降低(P<0.01)。与正常组相比,模型组大鼠胃窦组织S100βmRNA、GFAP mRNA表达明显升高(P<0.01);与模型组相比,艾灸组大鼠胃窦组织S100βmRNA、GFAP mRNA表达明显降低(P<0.01),而束缚组与模型组差异无统计学意义;与束缚组相比,艾灸组S100βmRNA、GFAP mRNA表达明显下降(均P<0.01)。结论在功能性消化不良模型大鼠中,存在着EGCs的异常增生及活化,而艾灸足三里穴可以通过调节EGCs的异常增生及活化来改善功能消化不良相关症状。     

电针对脑梗死大鼠神经功能及胶质纤维酸性蛋白表达的影响

目的观察电针对高血压基础上形成脑梗死大鼠的不同时间点神经功能评分及灶周胶质纤维酸性蛋白（GFAP）表达的影响,证实电针对星形胶质细胞（AST）变化的影响是其促进脑梗死功能恢复的机制之一。方法双肾双夹法制备RHRSP模型,双侧肾动脉狭窄术后12周,取血压≥l80mmHg大鼠,电凝法制备大脑中动脉闭塞（MCAO）模型,随机分为MCAO假手术组、MCAO组（模型组）、穴位治疗组、非穴位治疗组,后两组行电针刺激。MCAO后各组分别于1d、3d、7d、14d、21d进行神经功能缺损评分,HE染色观察病理形态变化,GFAP免疫荧光染色观察电针对局灶性脑梗死缺血灶周围GFAP的表达。结果假手术组大鼠在各时间点神经功能缺损评分均为0分;各时间点模型组神经功能评分均高于穴位治疗组,1d时两组差异无统计学意义,3d、7d、14d、21d,两组差异有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）。3d时模型组大鼠神经缺损症状最重,而电针组随着时间的延长其神经功能缺损评分在逐渐降低。在各时间点模型组与非穴位组无明显差异。HE染色可见穴位治疗组ASI及组织肿胀较模型组明显减轻。在五个时间点模型组和电针组GFAP表达都明显增高,与假手术组比较（P〈0.01）,电针组GFAP表达均明显低于同时段模型组（P〈0.05）。各时间点模型组GFAP表达与非穴位组比较无显著性差异。结论穴位电针治疗能下调脑缺血后GFAP表达,进而改善神经功能。     

亚硝胺致食管癌前病变时Wnt通路抑制因子的变化及膈下逐瘀汤的影响

目的：探讨甲基苄基亚硝胺（MBNA）诱发食管癌前病变Wnt通路抑制因子的变化及膈下逐瘀汤的影响。 方法：Wistar大鼠按3.5 mg·kg^-1体重剂量皮下注射MBNA溶液,每周2次,造模首日起以膈下逐瘀汤16,8 g·kg^-1剂量灌胃给药,于造模第10周处死各组大鼠,观察食管黏膜病理变化,荧光定量PCR检测sFRP1,sFRP4,Axin1,Axin2,GSK-3β mRNA转录水平,Western blot检测β-catenin蛋白水平。 结果：MBNA诱导下,模型组大鼠食管黏膜病理学检查呈轻度不典型增生,膈下逐瘀汤高、低剂量组与模型组比较病理形态学与组织学均未有明显改善;模型组大鼠食管组织sFRP1,sFRP4,Axin1,Axin2基因转录水平较对照组降低（P<0.05或P<0.01）,β-catenin蛋白水平较对照组升高（P<0.01）,膈下逐瘀汤低剂量组sFRP4,Axin1,Axin2基因转录水平较模型组升高（P<0.05或P<0.01）,β-catenin蛋白水平较模型组降低（P<0.01）。 结论：上调β-catenin蛋白水平、下调Wnt通路抑制因子转录水平从而增强Wnt通路活性是MBNA致大鼠食管癌前病变的可能分子机制之一,膈下逐瘀汤虽可下调β-catenin蛋白水平、上调Wnt通路抑制因子转录水平,但不足以阻断MBNA诱发的食管癌前病变。     

电针“百会”“人中”对脑缺血再灌注损伤模型大鼠脑脊液炎症因子及皮质缺血区脑组织GSDMD表达的影响

目的探讨电针"百会""人中"穴治疗脑缺血再灌注损伤(CIRI)的疗效及可能作用机制。方法36只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和电针组,每组12只。除假手术组外其余大鼠采用大脑中动脉线栓阻断法制备CIRI大鼠模型。造模24 h后对电针组大鼠行电针干预,穴取"百会""人中",频率15 Hz、强度为1 mA的连续波,每天1次,每次20 min,共5天。用Longa法评定各组大鼠神经功能损伤程度;TTC染色法测定大鼠脑梗死体积,HE染色观察脑组织病理形态改变;ELISA法检测脑脊液白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6 (IL-6)、白细胞介素18 (IL-18)水平;逆转录聚合酶链反应和Western blotting法分别检测皮质缺血区脑组织Gasdermin D (GSDMD) mRNA和Gasdermin D蛋白的氮端(GSDMD-N)蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠神经功能评分明显上升、脑梗死体积明显增加,脑脊液IL-1β、IL-6和IL-18含量明显增加,皮质缺血区脑组织GSDMD mRNA及GSDMD-N蛋白表达水平明显增高(P<0.05或P<0.01);HE染色结果显示,模型组大鼠脑组织神经元排列紊乱,部分神经细胞消失,胞核固缩,结构不完整。与模型组比较,电针组大鼠神经功能评分下降、脑梗死体积减小,脑脊液IL-6和IL-18含量明显减少,GSDMD mRNA及GSDMD-N蛋白表达水平降低(P<0.05或P<0.01);大鼠大脑皮质神经元变性及神经细胞数量丢失程度均较模型组有所减轻。结论电针"百会""人中"穴能使CIRI模型大鼠脑梗死体积减小,改善大鼠神经功能,其机制可能与下调脑脊液炎症因子和皮质缺血区脑组织细胞焦亡底物蛋白GSDMD表达有关。     

电针激活SIRT1介导Wnt/β-catenin通路调控脂质生成改善肥胖的机制研究

目的:探讨电针通过激活沉默信息调节因子1(SIRT1)介导Wnt/β-catenin通路调控脂质生成改善肥胖的机制。方法:从75只Wistar雄性大鼠中随机挑选10只为正常组,采用标准饮食喂养;剩余大鼠采用高脂饮食构建肥胖大鼠模型,共喂养8周。将造模成功的40只大鼠随机分为模型组、电针组、电针联合抑制剂组、激活剂组,每组10只。电针组电针"关元""中脘""足三里""丰隆",连续波,频率2 Hz,电流强度约1 m A,每次留针20 min;电针联合抑制剂组尾静脉注射Sirtinol溶液,并予电针同步干预;激活剂组予白藜芦醇溶液灌胃,均隔日1次,每周3次,连续干预8周。记录各组大鼠干预前后体质量、Lee's指数,检测各组大鼠干预后血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、游离脂肪酸(FFA)水平,比较各组大鼠干预后白色脂肪组织(WAT)质量、脂肪细胞面积,并采用Westernblot法检测各组大鼠干预后WAT中SIRT1、糖原合成酶激酶-3β(GSK3β)、β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)蛋白表达。结果:干预后,与模型组比较,电针组、激活剂组大鼠体质量减轻、Lee's指数下降(P0.01,P0.05),电针联合抑制剂组大鼠体质量减轻(P0.05)。与正常组比较,模型组大鼠血清TC、TG、FFA含量及WAT质量均升高(P0.01),脂肪细胞面积增大(P0.01);与模型组比较,电针组、激活剂组、电针联合抑制剂组大鼠血清TC、TG(除外电针联合抑制剂组)、FFA含量及WAT质量均降低(P0.01,P0.05),脂肪细胞面积减小(P0.01,P0.05);与电针组比较,电针联合抑制剂组大鼠脂肪细胞面积增大(P0.05)。与正常组比较,模型组WAT中SIRT1、β-catenin、cyclin D1蛋白表达减少(P0.01),GSK3β、PPARγ蛋白表达增多(P0.01)。与模型组比较,电针组和激活剂组WAT中SIRT1、β-catenin、cyclin D1蛋白表达增多(P0.05,P0.01),GSK3β和PPARγ蛋白表达减少(P0.01,P0.05);电针联合抑制剂组GSK3β蛋白减少、β-catenin蛋白增多(P0.05)。结论:电针可明显改善肥胖模型大鼠体质量、Lee's指数、血脂代谢,降低WAT质量以及脂肪细胞大小,其机制可能与上调WAT中SIRT1蛋白表达,激活Wnt/β-catenin信号通路,抑制下游成脂基因PPARγ的表达,从而影响脂质生成有关。     

刺老苞根皮含药血清对原代成骨细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响

该文研究了不同浓度刺老苞根皮含药血清对原代成骨细胞Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin,Wnt-1,Frizzed-2,TCF和Axin表达的影响。经SPF级健康雌性SD大鼠(80只)给予蒸馏水、刺老苞根皮水煎剂高、中、低3种剂量,连续灌胃7d,制备刺老苞根皮含药血清。体外培养原代成骨细胞(OB)并鉴定,取第3代成骨细胞,培养48 h后用各组含药血清干预培养10 d,采用茜素红染色钙化结节并计数;干预培养48 h后收集细胞,分别采用Real-time PCR(RT-PCR)和Western blot法测定β-catenin,Wnt-1,Frizzed-2,TCF和Axin的表达情况。结果显示,经鉴定体外培养细胞为原代成骨细胞;在干预培养后,与模型组相比,各剂量组可促进原代成骨细胞的矿化能力,且上调β-catenin,Wnt-1,Frizzed-2,TCF mRNA和蛋白的表达,下调Axin mRNA和蛋白的表达。结果发现刺老苞根皮含药血清可通过调节原代成骨细胞Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin,Wnt-1,Frizzed-2,TCF和Axin表达,增强成骨细胞的分化和增殖。     

基于Wnt/β-catenin信号通路探讨加味二仙颗粒治疗KOA的作用

目的:基于Wnt/β-catenin信号通路探讨加味二仙颗粒治疗绝经期膝骨关节炎的作用。方法:将SD雌性大鼠分为假手术组、模型组、西乐葆组、加味二仙颗粒高、中、低剂量组,采用双侧卵巢切除8周后膝关节腔注射木瓜蛋白酶结合L-半胱氨酸复制大鼠绝经后KOA模型。造模后每天灌胃给药1次,4周后检测大鼠血清雌二醇(E2)水平和相关基因蛋白的表达并观察膝关节组织病理变化。结果:与假手术组相比,模型组大鼠血清E2水平显著下降(P<0.01),关节软骨Wnt-4及β-catenin mRNA表达显著升高、GSK-3βmRNA表达显著降低(P<0.05),膝关节软骨表面粗糙,软骨层明显变薄;与模型组对比,加味二仙颗粒组大鼠E2水平有明显提高(P<0.01),膝关节软骨Wnt-4及β-catenin mRNA表达显著降低(P<0.05),Ⅱ型胶原密度升高,MMP-13密度降低,膝关节软骨表面回复平整,软骨细胞数量较多且密集规整。结论:加味二仙颗粒能够提高体内E2水平,通过调节Wnt/β-catenin信号通路影响软骨细胞影外基质降解和软骨细胞凋亡,从而保护膝关节软骨,发挥治疗绝经期膝骨关节炎的作用。     

益气活血方对慢性心力衰竭大鼠心室重构的干预作用及其机制

目的:观察益气活血方对慢性心力衰竭模型大鼠心脏结构变化的影响,并从线粒体动力学和分泌型糖蛋白(Wnt)/β-链蛋白(β-catenin)通路探讨其作用机制。方法:40只雄性SD大鼠随机选取10只为假手术组,其余行左冠状动脉前降支结扎术构建慢性心力衰竭(CHF)大鼠模型,造模完成后随机分为模型组、卡托普利组和益气活血组,每组10只。给药组分别予以卡托普利片13.5 mg·kg^-1·d^-1,益气活血颗粒20 g·kg^-1·d^-1灌胃给药,干预8周后取心脏组织,称取体质量与心脏质量结合超声心动图检测心脏结构变化情况,行马松(Masson)染色测定心肌间质胶原容积分数,应用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测心肌线粒体融合蛋白视神经萎缩相关蛋白1(Opa1),分裂蛋白线粒体动力相关蛋白1(Drp1)的表达水平,应用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测Wnt/β-catenin通路相关因子低密度脂蛋白受体相关蛋白6(LRP6),糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β),β-catenin mRNA的表达。结果:与假手术组比较,模型组左心室壁明显增厚(P<0.05),心腔明显扩大、心肌间质胶原含量升高(P<0.01);Opal表达水平降低,Drp1表达水平升高(P<0.01),LRP6,GSK-3β,β-catenin的mRNA表达量升高(P<0.01)。与模型组比较,益气活血组可减轻室壁增厚和心腔扩大(P<0.05,P<0.01),降低心肌间质胶原含量(P<0.05);上调Opa1的低表达、下调Drpl的高表达、下调LRP6,GSK-3β,β-catenin的高表达(P<0.01),作用效果优于或不劣于卡托普利组。结论:益气活血方可有效减轻慢性心力衰竭大鼠心室重构、改善线粒体能量代谢,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin的相关因子的表达相关。     

壮骨止痛方对体外培养成骨细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的观察壮骨止痛方对体外培养成骨细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法取新生SD大鼠颅骨进行成骨细胞原代培养,传代后随机分为4组:假手术组、模型组、对照组、中药组。培养3代后进行鉴定,加入相应含药血清干预48 h。测定各组成骨细胞Wnt3a、β-catenin、LRP5、GSK3βmRNA及蛋白的表达情况。结果与假手术组比较,模型组β-catenin、LRP5蛋白及mRNA降低(P0.05),GSK3β蛋白及mRNA升高(P0.05)。与模型组比较,对照组和中药组β-catenin、LRP5蛋白及mRNA表达升高(P0.05),GSK3β蛋白表达降低(P0.05),中药组GSK3βmRNA表达降低(P0.05)。与对照组比较,中药组β-catenin蛋白及mRNA表达升高(P0.05),GSK3βmRNA表达降低(P0.05)。结论壮骨止痛方可通过上调Wnt3a、β-catenin、LRP5蛋白的表达,下调GSK3β的表达调控Wnt/β-catenin信号通路。     

补肾活血汤通过抑制Wntβ-catenin信号通路对激素性股骨头坏死大鼠疗效及血管形态、VEGF的影响

目的:探究补肾活血汤通过抑制Wntβ-catenin信号通路对激素性股骨头坏死大鼠疗效及血管形态、血管内皮生长因子受体(VEGF)的影响。方法:SD大鼠随机分为假手术(sham)组、模型组和干预组。通过臀肌下注射醋酸泼尼松龙建立模型组模型。干预组在建模后使用补肾活血汤灌胃。HE染色被用于检测股骨头组织学情况。CT扫描股骨头血管情况。Western Blot检测股骨头组织中Wnt、β-catenin、VEGF蛋白水平。结果:建模后骨小梁稀疏变细,并出现明显的断裂和缺损,骨细胞数目少;干预组骨小梁缺损显著轻于模型组。模型组骨小梁面积显著降低而空骨陷窝率显著增加(P0.01),干预组的骨小梁面积显著高于模型组而空骨陷窝率显著低于模型组(P0.01)。Sham组大鼠股骨头血管呈现网状,分布较为均匀,结构清晰;模型组大鼠股骨头内血管明显减少,微结构不清晰;干预组股骨头内血管呈现网状,部分呈网状。模型组血管体积分数和血管厚度显著低于sham组(P0.01),干预组血管体积分数和血管厚度显著高于模型组(P0.01)。模型组的Wnt、β-catenin、VEGF蛋白水平显著低于Sham组(P0.01),干预组的Wnt、β-catenin、VEGF蛋白水平显著高于模型组(P0.01)。结论:补肾活血汤具有上调Wntβ-catenin信号通路以及VEGF表达的作用,进而促进骨骼组织血管的生成,治疗模型组。     

电针与手针对脑梗死大鼠脑星形胶质细胞影响的比较研究

目的:观察电针与手针对脑梗死大鼠神经运动功能恢复及梗死区周边星形胶质细胞(AS)活化程度的影响,比较不同针刺方式效应、作用机制的差异。方法:选取72只雄性SD大鼠,随机分为假手术组、模型组、电针组、手针组,每组按造模成功后3 d、7 d、14 d 3个时间点分为12个亚组(n=6)。采用改良线栓法复制大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,以bederson评分评定脑梗死大鼠神经功能缺损情况,免疫组化方法检测GFAP表达及脑星形胶质细胞的活性。结果:模型组各时间点神经功能缺损评分均较电针组、手针组高(P<0.01,0.05);而电针组和手针组比较未见显著性差异(P>0.05)。免疫组化结果:SD大鼠脑梗死后GFAP表达上调,电针组、手针组各个时间点GFAP阳性细胞表达高于模型组(P<0.01,0.05);同时,第3 d、7 d时电针组与手针组大鼠GAFP阳性细胞数无统计学差异(P>0.05),而14 d时手针组GFAP表达高于电针组(P<0.01)。结论:电针与手针在脑梗死后均可不同程度上调GFAP表达及调整AS活化程度以促进影响神经功能恢复,但电针组作用效果可能更佳。