刺老苞根皮醇提物对原代成骨细胞增殖、分化和矿化的影响

目的:研究4种不同浓度刺老苞根皮醇提物对原代成骨细胞的增殖、分化及矿化的影响。方法:通过消化10只雄性新生SD乳鼠(SPF级)的颅盖骨,获得原代前成骨细胞体外培养、传代,10 mmol/Lβ-甘油磷酸钠和50μg/mL抗坏血酸诱导,碱性磷酸酶(ALP)染色和矿化结节染色鉴定原代成骨细胞,分别用低、中、高浓度(1、10、100μg/mL)刺老苞根皮醇提物(4种)对成骨细胞进行干预,培养4 d和14 d后分别进行ALP活性测定和茜素红染色面积测定。结果:与对照组比较4种刺老苞根皮醇提物均能提高成骨细胞生存率,增强ALP活性,增加矿化结节面积。结论:4种刺老苞根皮醇提物可通过促进成骨细胞增殖和分化,加快骨基质矿化过程。     

龙牙楤木皂苷Ⅳ对原代成骨细胞分化和矿化的影响

目的 研究龙牙楤木皂苷Ⅳ（Tarasaponin Ⅳ）对原代成骨细胞的分化及矿化的影响。方法 通过消化SD乳鼠颅盖骨,获得原代前成骨细胞,体外诱导培养并鉴定;采用MTT比色法检测Tarasaponin Ⅳ（10、20、30、40、50、60、70、80、90、100 μg/mL）作用于前成骨细胞的适宜质量浓度范围;用低、中、高浓度（0.5、5、50 μg/mL） Tarasaponin Ⅳ对成骨细胞进行干预,培养4 d后,试剂盒法进行细胞上清中碱性磷酸酶（ALP）活性测定;培养14 d后,按茜素红S染色试剂说明对细胞进行钙化结节染色。结果 与对照组比较,Tarasaponin Ⅳ各浓度组均能明显提高前成骨细胞活性（P<0.05、0.01）,0~60 μg/mL内细胞生存率呈递增趋势。与对照组比较,Tarasaponin Ⅳ低、中、高浓度组细胞上清ALP活性均显著下降（P<0.01）,中、高浓度组细胞矿化结节数目显著增多（P<0.01）,且均呈剂量相关性。结论 Tarasaponin Ⅳ可以促进前成骨细胞生长,增强成骨细胞矿化过程。     

刺老苞根皮水提物对成骨细胞TGF-β/BMPs信号通路的影响

目的 研究刺老苞根皮水提物对成骨细胞TGF-β/BMPs信号通路的影响。方法 建立大鼠骨折模型,随机分为模型组,刺老苞根皮水提物低、中、高剂量（3.6、1.8、0.9 g/kg）组,ig给药7 d后腹主动脉取血,分离血清;培养大鼠原代成骨细胞,经碱性磷酸酶染色、茜素红染色鉴定合格后,分别以对应组别的动物血清连续培养48 h,采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）和Western blotting技术分别检测各组细胞中骨形态发生蛋白质-2（BMP-2）、转化生长因子-β（TGF-β）、Smad家族相关蛋白1、2（Smad-1、Smad-2）mRNA和蛋白表达。结果 与模型组比较,刺老苞根皮水提物不同浓度的含药血清组BMP-2、TGF-β、Smad-1 mRNA表达均显著升高（P<0.05、0.01）,中、高剂量含药血清组Smad-2 mRNA表达显著升高（P<0.05）;低、中、高剂量含药血清组的BMP-2、TGF-β、Smad-1、Smad-2蛋白表达均显著升高（P<0.05）。结论 刺老苞根皮水提物通过上调TGF-β/BMPs信号传导通路中的BMP-2、TGF-β、Smad-1、Smad-2表达,促进成骨细胞增殖。     

刺老苞根皮含药血清对原代成骨细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响

该文研究了不同浓度刺老苞根皮含药血清对原代成骨细胞Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin,Wnt-1,Frizzed-2,TCF和Axin表达的影响。经SPF级健康雌性SD大鼠(80只)给予蒸馏水、刺老苞根皮水煎剂高、中、低3种剂量,连续灌胃7d,制备刺老苞根皮含药血清。体外培养原代成骨细胞(OB)并鉴定,取第3代成骨细胞,培养48 h后用各组含药血清干预培养10 d,采用茜素红染色钙化结节并计数;干预培养48 h后收集细胞,分别采用Real-time PCR(RT-PCR)和Western blot法测定β-catenin,Wnt-1,Frizzed-2,TCF和Axin的表达情况。结果显示,经鉴定体外培养细胞为原代成骨细胞;在干预培养后,与模型组相比,各剂量组可促进原代成骨细胞的矿化能力,且上调β-catenin,Wnt-1,Frizzed-2,TCF mRNA和蛋白的表达,下调Axin mRNA和蛋白的表达。结果发现刺老苞根皮含药血清可通过调节原代成骨细胞Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin,Wnt-1,Frizzed-2,TCF和Axin表达,增强成骨细胞的分化和增殖。     

Micro-CT和骨力学测试观察刺老苞根皮对骨折大鼠的作用

目的应用骨力学和Micro-CT技术,探讨刺老苞根皮对3月龄大鼠胫骨骨折显微结构和骨力学的影响。方法 60只SPF级3月龄SD雌性大鼠,在胫骨上打孔造模后,随机分为正常模型组、刺老苞根皮低剂量组[0.9 g/(kg·d)]、刺老苞根皮中剂量组[1.8 g/(kg·d)]、刺老苞根皮高剂量组[3.6 g/(kg·d)],每天一次,连续给药4 w。分别在给药14、21、28 d后,取右侧胫骨进行骨力学检测,取左侧胫骨进行Micro-CT扫描及三维重建。结果与模型组相比,从14 d到28 d,刺老苞根皮中剂量组、刺老苞根皮高剂量组骨的结构力学参数(弹性挠度、弹性载荷、最大挠度、最大载荷)和生物力学参数(最大应力、最大应变、弹性应力、弹性应变)明显提高(P0.05);BV/TV、Tb.Th、Tb.V在21、28 d时刺老苞根皮中剂量组、刺老苞根皮高剂量组明显升高(P0.05或P0.01);Tb.Sp、SMI在21、28 d时,刺老苞根皮中剂量组、刺老苞根皮高剂量组明显低于模型组,差异有统计学意义(P0.05或P0.01)。结论刺老苞根皮可通过改善骨折部位骨微小结构,提高骨密度,促进骨组织结构完整性,从而提升骨的抗冲击和变形能力,使其韧性和可塑性增强,骨组织强度增加,提高胫骨骨力学性能,促进大鼠骨折修复。