千金子及不同含油量千金子霜利尿作用研究

目的:观察千金子生品和不同含油量的千金子霜对小鼠炎性腹水病理模型的影响,探讨千金子制霜的目的和千金子霜合理的含油量标准。方法:腹腔注射0.6%的醋酸造成小鼠炎性腹水病理模型,观察各给药组2h、4h、6h和8h不同时段小鼠体重的变化。结果:千金子生品0.26g/kg和1.3g/kg在各时段利尿作用均不明显,与模型组比较无明显的统计学差异。含油量22.3%和25%的千金子霜高剂量组(0.65g/kg)体重减轻程度相对较大,各时段与模型组比较具有较显著地统计学差异(P<0.05)。含油量25%低剂量(0.13g/kg)组在8h时体重减轻与模型组比较也有显著性差异(P<0.05),而28.4%含油量的霜高、低剂量组体重减轻均不明显。结论:千金子制霜后减轻炎性水肿作用比生品明显增强,含油量22.3%～25%的千金子霜作用最为明显。     

千金子制霜前后对大鼠消化间期复合肌电及胃肠激素的影响

目的观察千金子制霜前后石油醚提取物对大鼠十二指肠消化间期复合肌电(IMC)活动及组织匀浆P物质(SP)和血管活性肠肽(VIP)含量的影响,探讨制霜缓解千金子毒性的机制。方法将24只SD大鼠随机分为空白组、千金子生品石油醚提取物组和千金子霜品石油醚提取物组,每组8只。各给药组给予相应剂量(10 g原药材/kg)药液灌胃,空白组给予等量生理盐水灌胃。采用BL-420F生物机能实验系统测定千金子制霜前后大鼠十二指肠IMC慢波频率、振幅及峰电位数目;ELISA检测大鼠十二指肠组织匀浆SP和VIP含量。结果与空白组比较,千金子制霜前后均能兴奋大鼠胃肠肌电活动,十二指肠组织匀浆SP和VIP含量明显降低(P0.01),制霜后各指标强度均小于生品(P0.01)。结论千金子可能通过影响大鼠SP、VIP的分泌,进而影响消化道平滑肌胃肠电变化,引起胃肠道平滑肌收缩/舒张失衡,肠黏膜免疫调节紊乱,而制霜后使其水平趋于正常,从而改善胃肠道动力及胃肠道刺激性。     

千金子制霜前后提取物对人胚肾细胞HEK293的体外毒性作用

目的 比较千金子制霜前后提取物对正常人胚肾细胞HEK293的影响,探究千金子制霜减毒的作用机制。方法 采用HEK293细胞为体外模型,随机分为对照组,千金子生品低、中、高质量浓度（100、200、400 μg·mL^–1）组和千金子霜品低、中、高质量浓度（100、200、400 μg·mL^–1）组。细胞体外培养后,分别给予等体积的无血清培养液和千金子生品、霜品提取物溶液,各组均设置3个复孔。采用CCK-8法评价细胞存活率,利用倒置显微镜观察细胞数量及形态变化;碘化丙啶（PI）染色法和Annexin V-FITC/PI双重染色法检测细胞周期和凋亡情况;试剂盒法检测细胞上清液中乳酸脱氢酶（LDH）、谷胱甘肽（GSH）、肌酐（Cr）和细胞裂解液中尿素氮（BUN）水平。结果 与对照组比较,千金子生品各质量浓度组HEK293细胞存活率降低,细胞形态异常,细胞数量减少,G₀/G₁、G₁/G₂期细胞比例明显降低,S期细胞比例明显增加,细胞凋亡率升高（P<0.01）,LDH、BUN、Cr水平升高（P<0.05,P<0.01）,GSH水平降低（P<0.01）;与千金子生品组比较,千金子霜品相应质量浓度可显著增加HEK293细胞存活率（P<0.01）,改善细胞形态,增加G₀/G₁期、G₁/G₂期细胞比例,降低S期细胞比例,同时能明显降低LDH、BUN、Cr水平（P<0.05,P<0.01）,提高GSH水平（P<0.01）。结论 千金子制霜后可能通过减轻细胞周期阻滞和细胞氧化损伤改善肾细胞功能、减少细胞凋亡,从而降低体外肾毒性。     

纳米山药多糖结肠靶向胶囊对急性肝衰竭模型大鼠肠道菌群影响研究

目的评价研究纳米山药多糖对急性肝衰竭模型大鼠肠道菌群的影响。方法以硫代乙酰胺(TAA)腹腔注射造成大鼠肝衰竭并伴有肠道菌群失调模型,采用平板活菌计数法,检测造模前后大鼠的肠道菌落数量变化,判定模型是否成功,将大鼠随机分成正常对照组、纳米山药多糖组、丽珠肠乐组、自然恢复组。菌落计数法检测各组动物菌群数量,菌群易位,测定谷丙转氨酶(ALT)、总胆红素(TBIL)和肝脏指数。结果模型组与正常组比,双歧杆菌、乳酸杆菌数量下降,肠球菌、肠杆菌、类杆菌数量明显并出现菌群易位,肠道菌群失调模型建立。纳米山药多糖组与自然恢复组比可以显著抑制TAA引起的ALT、TBIL活性的升高,并降低大鼠肝脏指数,显著改善菌群失调和细菌易位情况。结论纳米山药多糖有改善急性肝衰竭模型大鼠菌群失调和细菌易位作用。     

毒性中药千金子制霜前后脂肪酸成分GC-MS分析

目的：研究千金子制霜前后脂肪酸成分变化。方法：按文献方法,将千金子和千金子霜脂肪油皂化-甲酯化后,采用GC-MS法进行了测定,色谱柱为HP-INNOWAX（60m×250μm×0.25μm）毛细管柱。结果：千金子和千金子霜中均检测出9种脂肪酸成分,以油酸相对含量最高,分别占脂肪酸总量的76.724%和78.719%。其次为棕榈酸和亚油酸,棕榈酸分别占8.606%和8.430%,亚油酸分别占8.256%和7.10%。结论：千金子与千金子霜中脂肪酸成分组成基本一致,脂肪酸成分含量略有差别。     

千金子制霜前后提取物通过调控脂筏介导Caco-2细胞中TLR4信号通路的作用机制研究

目的 探究千金子Euphorbiae Semen制霜前后提取物通过调控脂筏介导Caco-2细胞中Toll样受体4（Toll-like receptor 4,TLR4）信号通路的作用机制。方法 将Caco-2细胞分为千金子生品低、中、高剂量（50、200、800 μg/mL）组及千金子霜品低、中、高剂量（50、200、800 μg/mL）组和对照组,利用流式细胞术检测Caco-2细胞膜脂筏丰度;采用激光共聚焦实验检测Caco-2细胞中TLR4与脂筏的共定位;利用Western blotting检测Caco-2细胞中TLR4、核因子-κB p65（nuclear factor-κB p65,NF-κB p65）、p-NF-κB p65和NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NOD-like receptor family pyrin domain containing 3,NLRP3）的蛋白表达;ELISA检测Caco-2细胞上清液中白细胞介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）和肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）的含量;Caco-2细胞转染TLR4后检测IL-1β和TNF-α的含量变化。结果 与对照组比较,千金子生品提取物可以显著增加Caco-2细胞膜脂筏的丰度（P<0.01）,促进TLR4向脂筏的募集（P<0.01）,提高TLR4、NF-κB p65、p-NF-κB p65和NLRP3的蛋白表达以及诱导IL-1β和TNF-α的释放（P<0.05、0.01、0.001）。相同剂量下,与千金子生品提取物相比,千金子霜品提取物对Caco-2细胞膜脂筏丰度、TLR4向脂筏募集、TLR4介导的信号通路传导和促炎因子分泌的影响均明显减弱（P<0.05、0.01、0.001）。体外siTLR4转染试验结果进一步证实,Caco-2细胞转染TLR4后TNF-α和IL-1β的含量显著降低（P<0.05、0.01、0.001）。结论 千金子制霜减毒的作用机制可能与通过调控脂筏丰度干扰TLR4向脂筏募集,最终影响脂筏中包含的TLR4信号蛋白的传导有关。     

千金子制霜新工艺的研究

目的:优选千金子最佳制霜工艺。方法:利用新研制的制霜设备,采用正交试验法,选择种仁前处理方式、加热温度和加热时间为三个因素,以千金子霜含油量及主要泻下成分续随二萜酯和千金二萜醇二乙酸苯甲酸酯含量为指标,综合评价其制霜工艺。结果:千金子最佳制霜工艺为:种仁微炒后粉碎成泥状(粒度为40～60目),于55℃加热30min,出油率控制在51%～53%(g/g),出霜率控制在45%～47%。结论:加热温度对千金子霜含油量及主要泻下成分含量有显著影响,种仁前处理方式和加热时间对千金子霜含油量及主要泻下成分影响不明显。     

炮制对千金子总溶出成分的影响

以总溶出成分为指标，考察了炮制对其含量的影响。结果表明，炮制后各样品的水浸出物（冷浸、热浸）、醇浸出物及醚浸出物均明显低于生品（Ｐ＜０．００１），三种制霜品间，热霜，蒸霜则显著低于冷霜（Ｐ＜０．００１），揭示千金子炮制后所含成分有一定损失。     

肠润方对功能性便秘患者肠道菌群调节作用的临床研究

目的:研究中药复方肠润方对功能性便秘(FC)患者肠道菌群的影响及临床疗效,从肠道微生态角度探讨运脾滋阴法治疗功能性便秘的可能作用机制。方法:选取FC患者40名以及体检科与FC组性别年龄相匹配的正常受试者20名,观察FC组患者疗效及治疗前后肠道菌群数量、pH值、杆球菌比例,并与正常受试者比较。结果:治疗4周后,FC组总体疗效达85%,肠道中乳酸杆菌、双歧杆菌及类杆菌含量增加,大肠杆菌、肠球菌等致病菌含量下降,杆菌与球菌数量比升高,肠道粪便pH值降低。结论:肠润方有效改善患者便秘症状,其作用机制可能与其提高肠道有益菌菌群数量、降低致病菌菌群数量,优化便秘患者肠道菌群结构及肠道内环境相关。     

千金子化学成分研究进展

综述千金子化学成分的研究进展,为充分利用千金子药物活性提供参考。查找在中国知网,维普,Pub Med等数据库1960年至2015年的相关文献,按照化学成分、药理作用、毒性、开发利用4个方面对千金子的研究现状归纳总结。化学成分方面,千金子主要含有二萜类、甾醇类、香豆素类、黄酮类、挥发油、脂肪油及其他类成分。药理活性方面,千金子提取物具有抗肿瘤、抗肺纤维化的作用、其生品具有促进肠蠕动的作用。毒性方面,千金子毒性作用强烈,毒性成分可能为千金子甾醇等一些脂溶性成分,千金子去油制霜后毒性明显降低。开发利用方面,国内使用千金子的复方制剂治疗白血病、肝炎、肝硬化等疾病,其化学成分大戟因子L5(euphobia factor L5)对S180腹水癌有显著抗癌作用。国外将千金子提取物中的ingenol-20-palmitate,sucrose 2',3,4,6,6'-pentaisovalerate及大戟因子L1(euphobia factor L1)在美白皮肤方面申报了专利。研究成果表明千金子中的化学成分丰富,药理作用显著,是极具开发前景的药材。但由于千金子具有毒性,且产生毒性机制还尚未明确,使其开发利用受到了限制。因此应加强千金子毒性成分、毒性作用部位和致毒机制的研究。     

金樱根、金樱茎多糖对小鼠肠道菌群失调的调整作用

目的:研究金樱根、金樱茎多糖对肠道菌群失调小鼠的调整作用。方法:用盐酸林可霉素15 g.kg-1ig,2次/d,连续3 d,建立小鼠肠道菌群失调模型,用含生药100 g.kg-1的金樱根、金樱茎多糖进行ig治疗,连续6 d,于第10天取新鲜粪便检测肠道正常菌群(肠杆菌、肠球菌、双歧杆菌和乳杆菌)的变化。CFU.g-1粪便=每一稀释度平均菌落数×稀释倍数/滴种体积(mL)。结果用1 g粪便中菌数的对数表示(lg10n.g-1)。同时设正常对照、阳性对照、模型对照及自然恢复组。结果:6 d治疗后,全樱根多糖组小鼠肠道主要菌群的数量基本恢复,其中肠球菌、肠杆菌、双歧杆菌优于自然恢复组(P<0.05);金樱茎多糖组仅乳杆菌数量高于模型组(P<0.01)。结论:金樱根、金樱茎多糖对正常小鼠肠道菌群失调有一定调整作用,且金樱根多糖效果优于金樱茎多糖。     

基于体内自组装胶束思维分析千金子脂肪油对4种千金子素的增溶作用

目的：通过模拟人体肠道环境,研究千金子脂肪油与肠液中胆盐所形成混合胶束对千金子素L₁,L₂,L₃,L₈的增溶作用。方法：制备不同千金子脂肪油加入量的混合胶束,采用透射电子显微镜观察胶束的形态,运用粒度仪测定其粒径和Zeta电位,利用HPLC考察混合胶束对4种千金子素溶解度的影响,同时考察放置时间对混合胶束稳定性的影响。结果：体外模拟形成的千金子脂肪油/胆盐混合胶束呈球形且粒径均一,Zeta电位绝对值均<20 mV;固定脱氧胆酸钠质量浓度为4.96 g·L^-1,4种千金子素在千金子脂肪油质量浓度为0.1~4 g·L^-1时的溶解度均显著大于不含千金子脂肪油时的溶解度,混合胶束中4种千金子素的溶解度为其在不含脂肪油胶束体系溶解度的1.3~4倍;该混合胶束可稳定存在36 h。结论：千金子脂肪油与脱氧胆酸钠所形成的混合胶束对千金子素L₁,L₂,L₃,L₈有显著的增溶作用,可为从药剂学角度阐释千金子去油制霜的减毒机制提供参考。     

大鼠肠道菌群对三七总皂苷体外降解的研究

目的探究雌、雄大鼠肠道菌群对三七总皂苷中3种皂苷(三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1)的体外降解作用。方法将三七总皂苷分别与雌、雄大鼠肠道菌群孵育液在厌氧条件下共同培养24 h,测定不同时间点孵育液中3种皂苷的量。结果雌、雄大鼠肠道菌群对人参皂苷Rb1均有降解作用,雄鼠的降解较雌鼠稍快。雌、雄鼠肠道菌群对三七皂苷R1和人参皂苷Rg1均无明显降解作用。结论在离体条件下,三七总皂苷中人参皂苷Rb1会被肠道菌群降解,而三七皂苷R1和人参皂苷Rg1则较为稳定。     

黄连提取物与肠道菌群的相互作用研究

目的研究人体肠道菌群对黄连提取物主要活性成分的代谢及黄连提取物对人体肠道菌群生长的影响。方法采用UPLC-Q-TOF/MS技术分析肠道菌群对黄连提取物转化后的代谢物;并应用浊度法测定不同质量浓度黄连提取物对4类肠道细菌(乳酸菌、双歧杆菌、肠杆菌和肠球菌)生长的影响。结果肠道菌群对黄连提取物生物碱类成分主要进行氢化和去甲氧基作用,其中小檗碱和黄连碱被代谢为氢化产物,巴马汀被转化为去甲氧基产物;黄连提取物显著抑制病原菌(肠杆菌、肠球菌)的生长,显著促进益生菌(乳酸菌、双歧杆菌)的生长。结论肠道菌群对黄连提取物生物碱类成分具有多种代谢作用,且黄连提取物具有改善肠道微生态的功能。     

PCR-DGGE技术研究淡豆豉炮制过程中微生物菌群的动态变化

目的采用PCR-变性梯度凝胶电泳(denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE)技术研究淡豆豉Sojae Semen Praeparatum炮制过程中微生物菌群的动态变化,为揭示其炮制机制奠定基础。方法运用PCR-DGGE技术研究淡豆豉炮制不同时间的样本中细菌、真菌菌群种类和数量的动态变化,通过非加权组平均法(unweighted pair-group method with arithmetic means,UPGMA)聚类分析各炮制时间点的菌系差异。结果发酵至"黄衣上遍"过程中细菌种类丰富,真菌以曲霉菌为主;再闷过程中细菌以乳杆菌为主,真菌以隐球菌为主。发酵第1天恶臭假单胞菌、枯草芽孢杆菌占优势;发酵第3天嗜麦芽寡养单胞菌、鞘氨醇杆菌属和米曲霉为优势菌种;发酵第6天解淀粉芽孢杆菌、曲霉菌和丝孢酵母为优势菌种;再闷第3天以枯草芽孢杆菌、丝孢酵母和黑曲霉占优势;再闷第9天以枯草芽孢杆菌、那须乳杆菌、弧形乳杆菌和隐球菌为优势菌株;再闷第15天以枯草芽孢杆菌、弧形乳杆菌、隐球菌、丝孢酵母属和2株不可培养真菌为优势菌。整个炮制过程中,产酸克雷伯氏菌、枯草芽孢杆菌、弧形乳杆菌作为优势菌种始终参与。"黄衣上遍"阶段与再闷阶段的微生物群落结构差异大。发酵第3天与第6天的细菌、真菌群落结构相似度最高,分别达76.4%和66.1%;而发酵第3、6天与再闷第9天的细菌群落结构相似度均最低,仅为24.5%,发酵第3天与再闷第15天真菌群落结构相似度最低,仅11.2%。结论炮制过程中微生物群落结构的动态变化和独特的微生物种类可能决定了淡豆豉特有的性味、功能,同时也从微生物学角度印证了再闷的重要性。     

市售中药材冬葵子和苘麻子ITS2条形码鉴定

目的利用ITS2条形码序列对市售中药材冬葵子、苘麻子进行分子鉴定,以保证药材使用的正确性和临床药效。方法收集冬葵子、苘麻子及其3种混伪品样品共87份。对实验样品进行ITS2基因片段扩增并双向测序,利用HMMer注释方法获得ITS2序列,再经Codon Code Aligner 6.0.2拼接,使用MEGA6.0进行种内、种间变异分析,遗传距离计算并构建NJ系统发育树;将所得序列转换成二维码图片,扫描识读后通过中药材DNA条形码数据库进行验证。结果冬葵子和苘麻子外观形态相似;冬葵子ITS2序列长度232 bp;GC量为67.6%;苘麻子ITS2序列长度231 bp,GC量为54.1%,二者均无种内变异。冬葵子和苘麻子ITS2序列比对后长度为233 bp,共存在50个变异位点。鉴定结果显示,收集的56份冬葵子药材中26份均为苘麻子,剩余30份为正品。冬葵子和苘麻子与其他3个混伪品的K2P遗传距离为0.224~0.868,平均距离为0.630,种间遗传距离远大于种内遗传距离。基于ITS2序列构建系统发育树可见冬葵子、苘麻子及其3个混伪品各自单独聚成一支,ITS2序列能够明显将其区分;此外,使用二维DNA条形码扫描可准确验证5个物种。结论 ITS2序列能够成功鉴定冬葵子、苘麻子及其常见混伪品,为种子类药材鉴别提供了新工具;二维码技术与DNA条形码技术的结合可以为药材的基原物种提供准确唯一的二维DNA条形码信息,可更好实现药材市场的信息化监管。     

肉桂精油对大鼠肠道梭菌属IV簇菌群和拟杆菌群的影响

目的 研究肉桂精油对正常大鼠肠道梭菌属IV簇菌群和拟杆菌属两类主要菌群的影响。方法 SD大鼠每天给予肉桂精油0.384 3 g/kg,连续给药30 d,取结肠和直肠内容物,针对肠道菌群的16S rRNA,采用末端限制性片段多态性技术（TRFLP）分析肠道梭菌属IV簇细菌和拟杆菌属细菌的数量、多样性及其分布。结果 肉桂精油给药后,肠道梭菌IV簇细菌和拟杆菌的数量、多样性及分布均发生显著变化,尤其是肠道梭菌IV簇细菌的变化更大。肉桂精油对结肠和直肠中两类菌的影响存在差异。结论 肉桂精油对肠道梭菌IV簇和拟杆菌属两类主要菌群的影响可能是肉桂对肥胖和糖尿病的作用机制之一。     

基于肠道内环境调整的火麻仁润下作用的现代研究

目的通过研究火麻仁水提液对便秘模型大鼠肠道菌群结构、短链脂肪酸(SCFAs)水平以及结肠炎症的病理变化,探讨火麻仁润肠通便作用的现代科学内涵。方法 SPF级Wistar大鼠48只,雌雄各半,随机分为对照组、模型组、火麻仁水提液组、阳性对照(优乐多益生元)组,给药处理28 d。采用复方地芬诺酯制备便秘致肠道菌群紊乱的大鼠模型。采用细菌平板计数法检测新鲜粪便中细菌变化,PCR-DGGE检测盲肠内菌群结构变化;气相色谱法测定盲肠中SCFAs水平;对结肠进行HE病理染色观察并评分。结果与对照组相比,模型组大鼠新鲜粪便中大肠杆菌及双歧杆菌有增多趋势,乳酸杆菌减少(P0.01);盲肠内细菌厚壁菌门与拟杆菌门比值升高,丁酸梭菌属、乳酸杆菌属减少;肠道内乙酸、丁酸水平显著升高(P0.05、0.01);结肠病理评分显著升高(P0.01)。与模型组相比,火麻仁水提液调整盲肠中厚壁菌门与拟杆菌门比值,升高乳酸杆菌、丁酸梭菌、Blautia、颤杆菌等水平,降低梭菌属IV群等水平;降低乙酸、丁酸水平(P0.05);降低结肠病理评分,改善病理损伤(P0.05)。结论火麻仁水提液能够缓解模型大鼠的便秘状态并修复结肠炎性损伤,其作用途径与调整肠道微生态有关,即促进失调的肠道菌群恢复平衡,同时通过影响肠道内SCFAs水平而改变肠道内的酸性环境。     

金边蚂蟥抗痛风作用研究

目的研究金边蚂蟥Poecilobdella manillensis抗痛风作用及安全性。方法小鼠ip次黄嘌呤复制高尿酸血症模型,观察金边蚂蟥对高尿酸血症小鼠及正常小鼠血清尿酸水平的影响;大鼠足跖sc微晶型尿酸钠结晶(MSU),复制痛风性炎症模型,观察金边蚂蟥对痛风性炎症的影响;热板法、扭体法观察金边蚂蟥的镇痛作用;并测定金边蚂蟥对小鼠的急性毒性。结果与模型组相比,金边蚂蟥1.50 g/kg组可以显著降低高尿酸血症小鼠的血液尿酸水平,金边蚂蟥3.00、1.50 g/kg组显著降低正常小鼠血液尿酸水平(P<0.01);金边蚂蟥0.75 g/kg组可显著抑制MSU引起大鼠足跖肿胀(P<0.05、0.01);金边蚂蟥3.00、0.75 g/kg组可显著减少由醋酸引起的小鼠扭体反应次数(P<0.05、0.01);小鼠ig金边蚂蟥的急性毒性试验未观察到明显毒性反应,最大耐受量为生药23.09 g/kg。结论金边蚂蟥具有良好的抗痛风作用。     

酸碱药对甘草-马钱子配伍汤液沉积相态释放特性研究

目的 探讨甘草-马钱子配伍汤液沉积相态的释放行为,为甘草-马钱子配伍减毒提供科学参考。方法 建立沉积相态释放测定HPLC法,通过体外释放实验,追踪沉积相态在蒸馏水、人工胃液、人工肠液等不同介质中主成分的释放行为,并对其释放结果进行拟合研究分析。结果 甘草酸、马钱子碱以及士的宁在人工肠液中的释放量较大,且马钱子碱>甘草酸>士的宁。马钱子碱和甘草酸均与一级动力学模型拟合结果最佳,士的宁与Higuchi模型拟合结果最佳。结论 甘草-马钱子沉积相态主要毒效成分呈现出难溶性骨架材料缓释制剂的释放特性,毒(效)成分士的宁可能以沉积共聚体形式存在,在体释放呈缓释行为而减毒;同时,甘草酸的释放对减毒增效起到协同作用。