山竹果中α-葡萄糖苷酶和黄嘌呤氧化酶抑制剂的超滤质谱分析

目的采用高效液相色谱-电喷雾质谱联用技术(LC-ESI-MS)对山竹果乙醇提取物中的化学成分进行分析鉴定,筛选山竹果中α-葡萄糖苷酶及黄嘌呤氧化酶抑制剂。方法选用反相C18色谱柱,以0.02%醋酸溶液(A)和乙腈(B)作为液相色谱流动相,进行梯度洗脱,流动相梯度程序:0~2 min,15%B,2~40 min,13%~50%B;流速0.6 ml/min;利用电喷雾质谱(ESI-MS)负离子模式在线检测化学成分;以α-葡萄糖苷酶及黄嘌呤氧化酶作为生物靶分子,以超滤质谱技术筛选酶抑制剂。结果共鉴定出5个化学成分,分别为3-异倒捻子素、Mangostanol、8-desoxygartanin、Gartanin和α-倒捻子素。该5个化合物均可与黄嘌呤氧化酶亲和,除Gartanin外均可以与α-葡萄糖苷酶亲和。结论利用液质联用技术对山竹果中化学成分进行分析可以快速分析鉴定山竹果中的化合物并提供结构信息。利用超滤质谱技术筛选有效成分具有快速和灵敏等优势。     

红车轴中异黄酮类物质的分析鉴定及活性评价研究

目的采用高效液相色谱-电喷雾质谱联用技术(LC-ESI-MS)对红车轴乙醇提取物中的化学成分进行分析鉴定,筛选红车轴中α-葡萄糖苷酶及黄嘌呤氧化酶抑制剂。方法选用反相C18色谱柱,流动相A为0.05%磷酸水溶液,流动相B为乙腈,流动相梯度程序:0~20 min,10%~55%B;流速0.8ml/min;样品进样量为10μl;检测波长:260 nm,利用电喷雾质谱(ESI-MS)负离子模式在线检测化学成分;以α-葡萄糖苷酶及黄嘌呤氧化酶作为生物靶分子,以超滤质谱技术筛选酶抑制剂。结果共鉴定出5个化学成分,分别为大豆素(daidzein),樱黄素(prunetin),染料木素(genistein),得鸢尾素(irilone)和山槐素(maackiain)。该5个化合物均可与黄嘌呤氧化酶亲和,除Gartanin外均可以与α-葡萄糖苷酶亲和。结论利用液质联用技术对红车轴中化学成分进行分析可以快速分析鉴定红车轴中的化合物并提供结构信息。利用超滤质谱技术筛选有效成分具有快速和灵敏等优势。     

基于分子对接预测黄芩-黄连药对抑制α-葡萄糖苷酶的活性成分

目的采用分子对接技术研究黄芩-黄连药对潜在的α-葡萄糖苷酶抑制剂,为黄芩-黄连药对治疗2型糖尿病提供理论基础。方法运用SystemsDock WebSite平台,将中药系统药理学分析平台(TCMSP)中筛选出的黄芩、黄连的化学成分与α-葡萄糖苷酶进行分子对接,以pKd/pKi为评分标准,预测出黄芩-黄连药对潜在的α-葡萄糖苷酶抑制剂。结果 40个活性成分与α-葡萄糖苷酶分子对接后,其中8个活性成分与α-葡萄糖苷酶具有较强的结合活性,以槲皮酮、槲皮素、去甲汉黄芩素、黄芩素、黄烷酮、广玉兰内酯、二氢黄芩苷、红花定的结合活性较高。结论分子对接可虚拟预测出黄芩-黄连药对黄酮类化学成分具有较高的α-葡萄糖苷酶抑制活性,为后期化学结构改造、开发新药提供理论依据。     

超滤亲和液质联用技术筛选显齿蛇葡萄叶中酪氨酸酶抑制剂

目的 采用超滤亲和-液质联用技术（ultra-filtration affinity-liquid chromatography-mass spectrometry,UF-LC-MS）结合体外酶活性实验,筛选药茶两用植物显齿蛇葡萄Ampelopsis grossedentata叶（藤茶）中的酪氨酸酶抑制剂。方法 通过体外酶活实验发现藤茶具有很好的酪氨酸酶抑制活性,采用UF-LC-MS筛选并鉴定藤茶中1个主要组分对酪氨酸酶的活性具有抑制作用,并鉴定为二氢杨梅素。进一步通过体外荧光光谱、圆二色谱和分子对接技术研究了二氢杨梅素对酪氨酸酶的分子作用机制。结果 发现二氢杨梅素对酪氨酸酶具有较高的抑制作用,对单酚酶及双酚酶的半数抑制浓度（median inhibition concentration,IC₅₀）分别为37.73、18.87 μg/mL。分子模拟结果显示,二氢杨梅素可以进入酪氨酸酶的活性中心,与氨基酸残基形成4个氢键,改变酶活性中心的构象,从而导致酪氨酸酶催化活性下降。此外,二氢杨梅素能明显抑制B16黑色瘤细胞的增殖,并且显著降低黑色素合成。结论 为利用UF-LC-MS和分子对接技术筛选药用植物中酪氨酸酶抑制剂提供了参考,也为后续研究和开发藤茶及二氢杨梅素用于治疗皮肤色素沉着性疾病提供理论基础。     

五种中药对两种不同来源α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用比较

目的：比较大鼠小肠黏膜α-葡萄糖苷酶提取液和市售α-葡萄糖苷酶建立的α-葡萄糖苷酶抑制剂微量筛选模型;筛选对α-葡萄糖苷酶抑制作用较强的中药。方法：采用葡萄糖氧化酶法比较两种来源的α-葡萄糖苷酶活性,确立最优反应条件,并对五倍子等五种中药水煎液的α-葡萄糖苷酶抑制作用进行比较。结果：五种中药对两种不同来源的α-葡萄糖苷酶均有抑制作用,其中五倍子的作用最强。结论：一定浓度下,两种不同来源α-葡萄糖苷酶活性有一定差异,但对体外筛选α-葡萄糖苷酶抑制剂研究结果无显著的影响。     

应用α-葡萄糖苷酶抑制剂高通量筛选模型筛选降血糖中药

 目的建立筛选α-葡萄糖苷酶抑制剂的体外高通量筛选模型,并对30味常用清热解表中药进行筛选。方法应用大鼠小肠上段提取的α-葡萄糖苷酶,以蔗糖作为底物,通过测定反应体系中葡萄糖的生成量来检测α-葡萄糖苷酶的活性。通过优化酶促反应条件,建立检测α-葡萄糖苷酶活性的比色测定法及其抑制剂体外筛选的方法,并对30味中药共72个样品进行高通量筛选。结果阿卡波糖对α-葡萄糖苷酶的抑制活性与文献报道相近;筛选发现鸭跖草、山慈菇和桑叶等3味中药的不同极性提取物对α-葡萄糖苷酶有可重复的抑制作用。结论应用比色法建立的筛选模型可进行α-葡萄糖苷酶抑制剂的高通量筛选及中药相关活性物质的发现。     

α-葡萄糖苷酶纳米粒的制备及其性质研究

目的:为从中药提取物中高效的靶向分离、筛选具有α-葡萄糖苷酶抑制作用的活性成分。方法:采用共价结合法以壳聚糖复合纳米粒为载体,制备固定化α-葡萄糖苷酶靶向亲和材料,并采用阳性对照阿波糖验证该固定化酶对α-葡萄糖苷酶抑制剂的吸附性能。结果:固定化α-葡萄糖苷酶进行富集实验的最佳p H为6,最适温度为60℃,在有变性剂的条件下固定化酶的稳定性远远优于相应游离酶。结论:α-葡萄糖苷酶纳米粒可应用于中药复杂体系中α-葡萄糖苷酶抑制剂的筛选。     

7种贵州民族药材提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用

目的:研究7种贵州民族药材(三角风、野苦瓜、三颗针、天花粉、野葛根、小玉竹、猕猴桃根)的提取物对α-葡萄糖苷酶活性的影响,筛选对α-葡萄糖苷酶抑制作用较强的民族药材。方法:采用水提醇沉法对7种民族药材进行提取,然后采用体外α-葡萄糖苷酶抑制剂筛选模型对7种民族药材提取物的α-葡萄糖苷酶抑制活性进行筛选,并与阳性对照药阿卡波糖进行比较,进而对活性较强的猕猴桃根的有效部位进行筛选。结果:7种民族药材提取物中,猕猴桃根提取物对α-葡萄糖苷酶具有较强的抑制作用,其IC50为1.55μg/mL,强于阳性药阿卡波糖(IC50=175.97μg/mL);进一步对猕猴桃根的有效部位进行了筛选,发现其正丁醇部位的活性较强,其IC50为1.94μg/mL。结论:猕猴桃根对α-葡萄糖苷酶具有较强的抑制作用,可进一步采用活性追踪的方法分离其活性成分。贵州民族药材猕猴桃根对于糖尿病的治疗具有进一步研究和开发的潜在价值。     

明月草水提液抑制DPP-4及α-葡萄糖苷酶活性的实验研究

目的:通过观察明月草水提液对DPP-4、α-葡萄糖苷酶的抑制作用,为该药防治糖尿病提供实验依据。方法:以DPP-4酶、缓冲液、底物建立DPP-4抑制剂的体外筛选体系,对明月草水提液进行抑制实验,采用发色底物法测定吸光度(OD),计算DPP-4抑制率及IC50值。以蔗糖为底物建立α-葡萄糖苷酶活性抑制模型,采用葡萄糖氧化酶法测定明月草水提液对α-葡萄糖苷酶的抑制作用,计算其抑制率和IC50值。结果:明月草具有轻度DPP-4抑制作用,其IC50值为1199.97mg/L。明月草具有α-葡萄糖苷酶抑制作用,其IC50值为64.12mg/L。结论:明月草水提液可一定程度地抑制DPP-4及α-葡萄糖苷酶活性。     

中药牛蒡子中的α-葡萄糖苷酶抑制剂研究

目的研究中药牛蒡子中的α-葡萄糖苷酶抑制剂。方法以对α-葡萄糖苷酶的抑制活性为考察指标,结合植物化学的分离、纯化手段,追踪牛蒡子中的α-葡萄糖苷酶抑制剂,并通过波谱解析对所得活性化合物进行结构鉴定。α-葡萄糖苷酶抑制活性实验在以4-硝基酚-α-D-吡喃葡萄糖苷(PNPG)为底物的酶抑制剂筛选模型上进行,筛选出α-葡萄糖苷酶抑制活性较强的化合物后,通过考察它们对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病模型小鼠糖耐量的影响,最终确定牛蒡子中的α-葡萄糖苷酶抑制剂。结果从牛蒡子中α-葡萄糖苷酶抑制活性较强的部位分离得到13个化合物,其中4个咖啡酰奎宁酸类化合物和牛蒡苷元的α-葡萄糖苷酶抑制活性较为明确。经糖尿病模型小鼠的口服糖耐量(OGTT)实验验证后,3-O-咖啡酰奎宁酸、3,4-O-二咖啡酰奎宁酸、5-O-咖啡酰奎宁酸和牛蒡苷元与模型组比较,均能显著提高糖耐量(P 0.05),而3-O-咖啡酰奎宁酸的作用甚至强于阳性对照药(P 0.05)。结论咖啡酰奎宁酸类化合物是牛蒡子中主要的α-葡萄糖苷酶抑制剂。     

天然药物中乙酰胆碱酯酶抑制剂的快速发现

目的建立从天然药物中快速发现乙酰胆碱酯酶抑制剂的有效方法,为中药及其活性成分治疗阿尔茨海默病提供支持。方法通过Ellman比色法,对多种药用植物乙醇提取物的抗乙酰胆碱酯酶活性进行评价,筛选出活性较好的提取物样品,应用亲和超滤超高效液相色谱-四级杆-飞行时间串联质谱(UPLC-Q-TOF/MS)联用技术分离鉴定其中的活性成分。结果元胡、黄柏、钩藤、血三七具有较强的乙酰胆碱酯酶抑制活性。经过快速筛选,发现3-二氢异卡丹宾或者3-二氢卡丹宾、钩藤碱、异钩藤碱、柯诺辛或异柯诺辛可能为钩藤中的活性化合物。结论采用亲和超滤UPLC-Q-TOF/MS联用技术从天然药物中快速筛选出乙酰胆碱酯酶抑制剂,方法可行、快速,能够为治疗阿尔茨海默病的新药开发提供先导化合物。     

药用植物来源的α-葡萄糖苷酶抑制剂研究进展

α-葡萄糖苷酶抑制剂能够降低餐后高血糖,对糖尿病及糖尿病并发症的预防和治疗有很好的效果。随着拜糖平等α-葡萄糖苷酶抑制剂类药物的上市,国内外学者非常关注从药用植物中筛选天然的α-葡萄糖苷酶抑制剂,以期找到新的、安全、有效的此类药物。作者通过查阅近30年的相关研究文献,综述了药用植物中α-葡萄糖苷酶抑制剂及其体内外抑制作用评价的研究进展,总结出含有α-葡萄糖苷酶抑制剂的药用植物种类。     

具有α-葡萄糖苷酶抑制作用的天然黄酮类化合物研究进展

α-葡萄糖苷酶抑制剂通过抑制α-葡萄糖苷酶的活性,延缓肠道碳水化合物吸收,降低餐后血糖,对糖尿病及糖尿病并发症的预防和治疗有很好的效果。随着拜糖平等α-葡萄糖苷酶抑制剂类药物的上市,国内外学者非常关注天然来源α-葡萄糖苷酶抑制剂的筛选。总结国内外植物来源的具有α-葡萄糖苷酶抑制剂作用的黄酮类化合物156种,为进一步寻找新的、安全、有效的α-葡萄糖苷酶抑制剂类药物提供依据。     

胡芦巴生品、酒制品抑制α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶活性的有效部位筛选及其酶动力学分析

目的:比较胡芦巴生品和酒制品对α-葡萄糖苷酶,α-淀粉酶抑制活性作用的差别,筛选抑制活性的有效部位,并研究其酶反应动力学。方法:利用萃取法获得胡芦巴生品和酒制品80%甲醇提取物的石油醚层、乙酸乙酯层、正丁醇层、水层4个不同极性部位,采用体外α-葡萄糖苷酶抑制模型和α-淀粉酶抑制模型,测定生胡芦巴和酒胡芦巴4个不同极性部位对α-葡萄糖苷酶,α-淀粉酶活性的抑制作用。通过酶促动力学与Lineweaver-Burk曲线推断各有效部位对α-葡萄糖苷酶及α-淀粉酶抑制类型。结果:生胡芦巴和酒胡芦巴只有水层对α-葡萄糖苷酶有抑制作用,酒制品对α-葡萄糖苷酶的抑制作用优于生品,生胡芦巴和酒胡芦巴水层萃取物对α-葡萄糖苷酶作用为非竞争可逆。生胡芦巴和酒胡芦巴的乙酸乙酯层和正丁醇层对α-淀粉酶有抑制作用,酒制品的抑制作用优于生品,且均为非竞争可逆。结论:胡芦巴经酒制后可在一定程度上增加对α-葡萄糖苷酶及α-淀粉酶活性的抑制作用,酒胡芦巴水层萃取物有开发成α-葡萄糖苷酶抑制剂的价值,酒胡芦巴的乙酸乙酯和正丁醇提取物具有开发成α-淀粉酶抑制剂的价值。     

亲和超滤-液质联用技术在药用植物活性成分筛选中的应用研究进展

药用植物历史悠久,为人类的防病和治病发挥了重要作用,但其生物活性成分与特定的生物靶点之间的相互作用仍然不清楚。传统的化学成分分离结合活性评价模式费时费力,且不能够真实体现活性物质天然构象和受体之间的相互结合作用,已不能满足现代药物研发的迫切需要。亲和超滤-液质联用技术可以弥补传统活性物质发现的诸多缺点,是一种新的快速药物筛选分析方法,可用于天然产物中活性小分子化合物的靶向筛选;然而,该技术在筛选天然活性成分时也存在一定的缺陷。笔者拟对亲和超滤-液质联用技术在药用植物活性成分筛选中的原理、特点及应用进行系统的文献综述和分析,并对其开发前景进行了展望,为快速靶向筛选药用植物中活性成分提供一定的科学依据。     

11味中药提取物中α-葡萄糖苷酶抑制剂的筛选

目的 观察11味中药对α-葡萄糖苷酶的抑制活性,筛选出抑制作用较强的中药.方法 以麦芽糖为底物,采用α-葡萄糖苷酶活性测定方法,观察这11味中药醇提液对α-葡萄糖苷酶的抑制作用.结果 11味中药均对α-葡萄糖苷酶有一定的抑制作用,其中山茱萸、桑白皮、葛根3味中药对α-葡萄糖苷酶有较强的抑制作用,当浓度为1000mg/ml时,抑制率分别为84.3％,97.1％,72.7％.结论 山茱萸、桑白皮和葛根3味中药体外对α-葡萄糖苷酶有较强的抑制作用.     

糖尿病常用中药中常见成分的α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶活性抑制作用

目的：从临床常用的治疗糖尿病中药中寻找α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶活性抑制剂,为中药治疗糖尿病提供物质基础。方法：收集存在于常用治疗糖尿病中药中的常见成分,体外检测它们对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶活性抑制活性抑制作用。结果：有24个成分有显著抑制α-葡萄糖苷酶活性（IC50〈100μg·mL^-1）,20个化合物对α-淀粉酶有显著抑制活性,其中10个成分对两种酶均有很强的抑制作用。结论：常用的治疗糖尿病中药中的常见成分高达40%以上对α-葡萄糖苷酶和/或α-淀粉酶有抑制作用,为含有这些成分的中药治疗糖尿病提供部分酶学依据。     

菊苣小分子化合物对黄嘌呤氧化酶抑制作用的分子对接研究

黄嘌呤氧化酶是治疗高尿酸血症药物的关键靶点,中药菊苣提取物具黄嘌呤氧化酶抑制作用,但作用机制仍未探明。该文通过检索相关文献及数据库收集菊苣已知小分子化合物建立配体库,从PDB数据库下载黄嘌呤氧化酶X-ray晶体三维结构文件,采用Autodock 4.2分子对接软件虚拟筛选出菊苣中的黄嘌呤氧化酶抑制剂。通过与原配体TEI(非布司他)相比较,筛选出70 个与靶蛋白有较好结合作用的化合物。对接结果有助于阐释降尿酸作用机制,为菊苣治疗高尿酸血症作用机制研究提供一定的参考。     

蕨麻提取物对α-葡萄糖苷酶活性的影响

目的从蕨麻中提取α-葡萄糖苷酶抑制剂。方法采用水提和水提醇沉方法得到蕨麻水提物、浸膏、粗多糖。按pNPG法测定蕨麻提取物对α-葡萄糖苷酶的纯酶和正常ICR小鼠离体小肠α-葡萄糖苷酶活性影响。结果各蕨麻提取物对α-葡萄糖苷酶的纯酶均有非常明显的抑制作用,其水提物、浸膏对离体小肠α-葡萄糖苷酶也有抑制作用,呈量效关系。结论蕨麻提取物有α-葡萄糖苷酶抑制剂样作用,有效部位可能为浸膏。     

苹果属植物叶中α-葡萄糖苷酶抑制剂的初步研究

目的:初步评价苹果叶提取物及主要化合物对α-葡萄糖苷酶的抑制活性。方法:采用经典α-葡萄糖苷酶活性测定方法,对苹果属不同种(品种)、不同产地来源的20种共40份苹果叶提取物与3种主要化合物进行了α-葡萄糖苷酶抑制活性筛选,并与阳性对照药阿卡波糖进行比较。结果:在样品浓度为2 mg·mL~(-1)的浓度体系下,所测样品对α-葡萄糖苷酶均有不同程度的抑制作用,其中23份提取物和2个化合物(根皮素和槲皮素)的IC_(50)值低于阿卡波糖的IC_(50)值,且绝大多数提取物的IC_(50)值低于其所含的化合物IC_(50)值。结论:根皮素、槲皮素和根皮苷等成分是苹果属植物叶提取物抑制α-葡萄糖苷酶的活性物质基础,且可能还含有其它协同作用的成分存在,值得深入研究;不同种(品种)、不同产地来源的苹果属植物叶片提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制活性存在一定的差异,多数提取物显示了较强的活性。本实验为苹果属植物叶片资源的可持续利用和开发提供一定的科学依据。