健脾养血祛风方对角质形成细胞的作用及其对紧密连接的干预机制研究

目的探究健脾养血祛风方对角质形成细胞(KC)的作用及其对紧密连接(tight junctions,TJ)的影响。方法 CCK8检测健脾养血祛风方对人永生化角质形成细胞(HaCat)细胞活力的影响;Western blot检测不同浓度健脾养血祛风方对TJ相关蛋白occludin、claudin-1、JAM-A、Zo-1表达影响情况。ELISA检测IL-4、IL-10、INF-γ、IL-12水平。RT-qPCR检测Toll样受体4(TLR4)、MyD88、NF-κB的mRNA表达水平。结果在不影响细胞活力的前提下,健脾养血祛风方能明显增加occludin、claudin-1、JAM-A、Zo-1蛋白的表达,同时能显著抑制INF-γ、IL-12的释放,促进IL-4、IL-10的生成。此外,健脾养血祛风方还能显著抑制HaCat中TLR4、MyD88、NF-κB水平。结论健脾养血祛风方可调控HaCat中TJ相关蛋白表达,从而修复机械屏障。可能的机制是健脾养血祛风方抑制了TLR4/MyD88/NF-κB信号通路激活,进而改变了炎症因子表达。     

健脾养血解毒方通过调节Treg/Th17免疫平衡改善脾虚-银屑病复合模型小鼠银屑病样皮损

目的:建立脾虚银屑病样小鼠模型,观察健脾养血解毒方对其银屑病样皮损的干预作用,并探讨其作用机制。方法:首先采用苦寒泻下结合营养限制法建立脾虚小鼠模型,持续15 d后检测验证,将脾虚小鼠随机分为单纯脾虚组(脾虚-Ctr)、脾虚银屑病样组(脾虚-IMQ)、阳性对照组(脾虚-MTX)和健脾养血解毒方高、中、低剂量组(JPYXJD-H,M,L),采用咪喹莫特诱导-银屑病样模型。观察各组小鼠皮损面积和疾病严重程度(psoriasis area and severity index,PASI),每日拍照记录;治疗后第6天取材,计算脾脏及淋巴结指数;光镜下观察皮损组织形态学变化及表皮层厚度;免疫组织化学法检测皮损中PCNA和CD3的表达;流式细胞术检测小鼠淋巴结中Treg和Th17细胞数量; RT-PCR技术检测皮损中IL-17A、IL-23、FOXP3、ROR-γt等相关基因表达水平;采用Western Blotting法检测pSTAT3、PPAR-γ通路蛋白表达水平。结果:(1)与对照组小鼠相比,脾虚组表观指征异常明显,血清中D-木糖含量明显降低(P<0.05)。(2)与脾虚-Ctr组相比,脾虚-IMQ组小鼠皮损PASI评分及表皮厚度明显增加,皮损部位PCNA、CD3阳性个数显著增多,IL-17、IL-23、ROR-γt和IFN-γ等炎症因子的表达明显升高,pSTAT蛋白表达升高而PPAR-γ蛋白表达降低的趋势明显。JPYXJD-H、M、L组与其相比各项指标均有不同程度改善,其中以JPYXJD-L组最为显著。结论:健脾养血解毒方在传统理血解毒的基础上强调健脾治法,并依此增加健脾药的使用,从而发挥对脾虚证-银屑病复合模型小鼠皮损的干预作用,通过PPAR-γ/pSTAT3通路调节Treg/Th17之间的免疫平衡可能是其有效作用机制之一。     

肠炎清口服液改善小鼠溃疡性结肠炎肠道黏膜通透性的作用机制

目的: 建立三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的小鼠溃疡性结肠炎模型,研究肠炎清口服液对溃疡性结肠炎小鼠肠黏膜通透性的影响及其可能的作用机制. 方法: 用TNBS对雄性BALB/c小鼠进行造模,将造模后的实验动物随机分成正常组,模型组,柳氮磺吡啶肠溶片组(SASP,0.5 g·kg^-1),肠炎清口服液低、中、高剂量组(0.176,0.352,0.528 g·kg^-1);采用ELISA法检测各组BALB/c小鼠血浆二胺氧化酶(DAO)活性;通过RT-qPCR及Western blot检测方法,观察各组小鼠结肠部位紧密连接相关蛋白水闸蛋白1(claudin-1)、闭锁小带蛋白1(ZO-1)、闭锁蛋白(occludin)的基因表达与蛋白表达. 结果: 肠炎清口服液各剂量组的小鼠血浆中DAO的活性显著低于模型组,差异具有统计学意义(P<0.05);ZO-1,occludin,claudin-1 mRNA在肠炎清口服液高、中、低剂量组小鼠体内表达水平均高于模型组小鼠,且差异具有显著性(P<0.05),且随着给药剂量的增大,claudin-1,ZO-1,occludin mRNA表达水平表现出一定的量效关系;Western blot结果显示,ZO-1及occludin蛋白在肠炎清口服液高、中、低剂量组的表达水平均高于模型组小鼠,且表达差异显著(P<0.05). 结论: 肠炎清口服液在小鼠溃疡性结肠炎中的作用机制与肠道黏膜通透性有密切关系;肠炎清口服液可能是通过调节紧密连接蛋白ZO-1,occludin,claudin-1的表达,从而改善小鼠肠道黏膜通透性.     

凉血解毒利湿方对小鼠银屑病样皮损中过氧化物酶体增殖激活受体的影响

目的探讨凉血解毒利湿方治疗银屑病的可能作用机制。方法 50只BALB/c小鼠随机分为空白对照组、模型组、甲氨蝶呤组及中药高、低剂量组。除空白对照组外,其余各组连续6日外涂5%咪喹莫特乳膏建立银屑病模型,除模型组外,中药高、低剂量组分别给予凉血解毒利湿方42、21 g/(kg·d)灌胃,甲氨蝶呤组给予甲氨蝶呤片1 mg/(kg·d)灌胃,模型组和空白对照组给予0.4 ml蒸馏水,每日1次,共6天。第7天观察小鼠皮损变化情况;HE染色观察皮损组织形态学变化,光镜下测量表皮厚度;免疫荧光法检测小鼠皮损中增殖细胞核抗原(PCNA)有丝分裂细胞核数、有丝分裂细胞率、外皮蛋白、过氧化物酶体增殖激活受体α(PPAR-α)、过氧化物酶体增殖激活受体γ(PPAR-γ)、过氧化物酶体增殖激活受体β/δ(PPAR-β/δ)表达情况;Real-Time PCR、Western blot法分别检测小鼠皮肤中PPAR-α、PPAR-γ、PPAR-β/δmRNA、蛋白表达。结果模型组小鼠皮损鳞屑叠起、红斑色深、浸润较厚;与模型组相比,各给药组皮损症状均有明显改善。与空白对照组比较,模型组小鼠表皮细胞层增厚,有丝分裂细胞核数量均明显增多,有丝分裂细胞率显著升高。与模型组比较,甲氨蝶呤组及中药高、低剂量组PPAR-α、PPAR-γ蛋白表达升高,PPAR-β/δ蛋白表达降低,甲氨蝶呤组PPAR-γ、PPAR-β/δmRNA及中药高、低剂量组PPAR-β/δmRNA均明显降低(P0.05或P0.01)。与中药高剂量组比较,中药低剂量组PPAR-β/δmRNA表达降低(P0.01)。结论凉血解毒利湿方可调控银屑病小鼠皮损中PPARs表达,从而抑制表皮细胞过度增殖和分化,可能是其治疗银屑病的作用机制之一。     

清肠化湿方对TNBS诱导大鼠UC模型紧密连接蛋白的影响

目的:观察三硝基苯磺酸(TNBS)法诱导大鼠溃疡性结肠炎模型结肠黏膜occludin、claudin-1蛋白的变化特点及清肠化湿方对occludin、claudin-1蛋白表达的影响。方法:采用TNBS诱导大鼠溃疡性结肠炎模型,并随机分为正常对照组、模型对照组、清肠化湿方组、SASP组,治疗10天后处死大鼠取新鲜结肠标本,观察黏膜大体形态及组织学改变,并采用Western blot法检测occludin、claudin-1蛋白表达水平。结果:模型对照组occludin、claudin-1蛋白表达均明显低于正常对照组,清肠化湿方组occludin、claudin-1的表达高于模型对照组,同时,清肠化湿方组大鼠结肠形态及组织学损伤评分均有降低。结论:清肠化湿方对UC模型大鼠具有治疗作用,增强occludin、claudin-1的表达,恢复正常的肠粘膜屏障功能可能是其作用机制之一。     

消银颗粒和开玄补肾方对咪喹莫特诱导的 银屑病样小鼠模型的影响

目的观察比较消银颗粒和开玄补肾方对银屑病小鼠模型的干预作用。方法将30只BALB/c雄性小鼠随机分为空白组、模型组、消银颗粒组、开玄补肾方组和甲氨蝶呤组。实验期间每天观察银屑病样小鼠皮损变化,对小鼠背部皮肤进行拍照,并进行银屑病皮损面积和严重程度指数(PASI)评分;造模后第7 d取小鼠背部皮肤组织,HE染色观察皮肤组织病理学改变并检测表皮厚度;免疫组化法检测皮损表皮中增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。结果根据模型组小鼠红斑、鳞屑、浸润评分及其肉眼观察,模型组小鼠皮损与银屑病样皮损类似,造模成功;在2～7 d时,开玄补肾组、消银颗粒组、甲氨蝶呤组各项PASI评分均低于模型组小鼠,在4～6 d时,PASI评分显著降低,差异有统计学意义(P 0. 05),其中消银颗粒组小鼠鳞屑评分与开玄补肾方组相比下降更明显(P 0. 05或P 0. 01),而开玄补肾方组小鼠皮损红斑评分与消银颗粒组小鼠相比下降更显著,差异有统计学意义(P 0. 05); HE和PCNA染色显示,消银颗粒组、开玄补肾方组和甲氨蝶呤组小鼠表皮厚度显著减少,炎症细胞浸润得到抑制,表皮着色细胞层数减少(P 0. 01),其中开玄补肾方组小鼠表皮厚度、表皮着色细胞层数与消银颗粒组相比减少趋势更加明显。结论消银颗粒和开玄补肾方可以减少小鼠银屑病样皮损、降低表皮厚度并抑制表皮细胞过度增殖,但开玄补肾方对于皮损浸润肥厚的血瘀型斑块状银屑病具有较好的改善作用,而消银颗粒对于鳞屑较多的风燥型银屑病具有较好的改善作用。     

隔药灸对TNF-αzjtnyx-e202101-NF-κB-MLCK介导克罗恩病肠上皮细胞紧密连接的影响

目的:探讨隔药灸对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)-核因子κB(NF-κB)-肌球蛋白轻链激酶(MLCK)介导克罗恩病(CD)肠上皮细胞紧密连接的影响.方法:将48只雄性SD大鼠随机分成正常组(NC)、模型组(MC)、隔药灸组(HPM)和美沙拉嗪组(MESA),每组12只.采用2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)制备CD模型,造模成功后HPM组采用隔药饼灸天枢和气海治疗,MESA组采用美沙拉嗪灌胃治疗.治疗结束后取各组结肠上皮组织分离、纯化和培养以建立体外肠上皮屏障模型,将100 ng/mL TNF-α分别与各组肠上皮细胞孵育培养24 h.应用跨上皮细胞电阻检测各组肠上皮屏障通透性;采用Western blot法检测TNF-α-NF-kB-MLCK介导的肠上皮细胞紧密连接的相关蛋白表达;应用免疫荧光法观察结肠上皮细胞紧密连接蛋白的表达与分布情况.结果:TNF-α诱导后,与MC+TNF-α组肠上皮细胞相比,HPM+TNF-α组及MESA+TNF-α组跨上皮电阻值显著升高(均P<0.001),结肠上皮NF-kBp65、MLCK、肌球蛋白轻链(MLC)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)及受体相互作用蛋白-1(RIP1)表达量显著降低(P<0.01或P<0.05),锌指蛋白A20(A20)表达量显著升高(P<0.01),occludin、claudin-1、紧密连接蛋白1(ZO-1)及F-actin表达量亦显著升高(均P<0.01);与MESA+TNF-α组相比,HPM+TNF-α组MLC,occludin,claudin-1,ZO-1及F-actin表达量显著升高(P<0.01或P<0.05).结论:隔药灸可能通过调控TNF-α-NF-kB-MLCK介导的CD肠上皮细胞紧密连接的异常,达到保护或修复CD大鼠肠上皮屏障损伤的效应.     

艾灸对银屑病小鼠皮损表现和免疫炎性反应的影响

目的:观察艾灸对银屑病小鼠皮损改善作用和对免疫炎性反应的影响,探讨艾灸治疗银屑病的可能机制。方法:将32只雄性BALB/c小鼠随机分为正常组、模型组、艾灸组和西药组,每组8只。模型组、艾灸组和西药组采用背部涂抹5%咪喹莫特乳膏7 d诱导银屑病小鼠模型。造模同时,艾灸组予背部皮损悬灸治疗,每日1次,每次20 min;西药组予1 mg/kg甲氨蝶呤片溶液灌胃给药,每日1次,两组均连续干预7 d。观察各组小鼠每日皮损变化情况,并评定其银屑病皮损面积和疾病严重程度指数(PASI)评分;HE染色法观察小鼠皮损组织形态学变化;免疫组化法检测皮损增殖细胞核抗原(PCNA)、T淋巴细胞表面标志CD3阳性表达情况;ELISA法检测血清白介素(IL)-17A表达水平,实时荧光定量PCR法检测皮损组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-1β和IL-6 mRNA相对表达。结果:模型组小鼠背部鳞屑增多、肥厚,皮肤干燥,表皮红肿,浸润明显,PASI各项评分与总分均高于正常组(P<0.01);艾灸组小鼠PASI鳞屑、浸润评分和总分低于模型组(P<0.01),西药组小鼠PASI浸润评分和总分低于模型组(...     

菖葛益智方对血管性认知功能障碍大鼠脑组织微血管内皮细胞occludin和claudin-5表达的影响

目的:通过菖葛益智方对血管性认知功能障碍大鼠脑组织微血管内皮细胞occludin和claudin-5的表达影响,探讨菖葛益智方防治血管性认知障碍的分子机制。方法:采用双侧颈总动脉闭塞法,制备血管性认知障碍大鼠模型。所有大鼠共6组,正常对照组,模型组,假手术组,菖葛益智方大剂量组、菖葛益智方中剂量组、菖葛益智方小剂量组,每组10只。灌胃6周。检测大鼠脑组织微血管内皮细胞occludin和claudin-5的含量。结果:正常对照组occludin和claudin-5的表达丰富,模型组occludin和claudin-5表达明显减弱。菖葛益智方小剂量组与对照组相比,occludin、claudin-5表达没有明显改变;菖葛益智方大剂量组occludin、claudin-5的表达与对照组相比明显增加。结论:菖葛益智方可以促进occludin和claudin-5合成及表达,使血脑屏障的通透性得以降低。     

蒙药土茯苓-7汤对小鼠银屑病样皮损的干预作用及相关因子表达的影响

目的:研究蒙药土茯苓-7汤对咪喹莫特诱导的银屑病样皮损的干预作用及皮损组织的增殖细胞核抗原(PCNA)、血管内皮生长因子(VEGF)、CD3~+、CD8~+等因子的表达的影响。方法:取BALB/C雄性小鼠,随机分成正常组、模型组、阳性对照组(消银颗粒1. 5 g/kg)、土茯苓-7汤0. 71、1. 42、2. 13 g/kg组。各组灌胃相应药物或生理盐水,每天一次,第6日药后采用药物诱导的方法激发小鼠皮肤出现银屑病样变化,再连续给药6日,处死小鼠,观察小鼠皮肤病损的(PASI)情况,光镜下观察皮损组织形态学变化,采用免疫组化法检测皮损组织的增殖细胞核抗原(PCNA)、血管内皮生长因子(VEGF)、CD3~+、CD8~+蛋白的表达。结果:模型组背部皮肤出现红斑、表皮肥厚、鳞屑成层等现象,PCNA、CD3~+、CD8~+、VEGF蛋白表达明显上调,蒙药土茯苓-7汤各剂量组银屑病样皮损减轻,PASI评分降低,角化不全现象得到改善,表皮厚度明显薄于模型组,其中2. 13 g/kg组改善最明显。与模型组比较,PCNA、CD3~+、CD8~+、VEGF蛋白表达结果显示蒙药土茯苓-7汤组均明显下调,具剂量依赖性。结论:蒙药土茯苓-7汤对咪喹模特诱导的小鼠银屑病样皮损具有明显的抑制作用。其作用机制为通过降低PCNA、VEGF、CD3~+、CD8~+蛋白的表达,抑制T淋巴细胞分化,缓解角质形成细胞的角化不全,角化过度,表皮异常增生等病理改变,抑制银屑病样皮损的发生。     

养血化瘀消癥汤对大鼠子宫内膜异位病灶的抑制作用和机制

目的:研究养血化瘀消癥汤对大鼠子宫内膜异位病灶的抑制作用及作用机制。方法:取雌性SD大鼠,除正常组10只大鼠外,采用自体移植法建立子宫内膜异位症大鼠模型,造模成功的大鼠随机分为模型组,养血化瘀消癥汤高、中、低剂量组(12,8,4 g·kg^-1)和孕三烯酮组(0.05 g·kg^-1),每组10只。分别ig给药28 d后,采集病灶组织标本,观察养血化瘀消癥汤对大鼠子宫内膜异位组织体积的抑制作用;RT-qPCR和Western blot检测各组大鼠异位组织血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和血管内皮生长因子受体-1(VEGFR-1)的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠子宫内膜异位组织VEGF,VEGFR-1 mRNA及蛋白表达明显升高(P<0.05);与模型组比较,药物组大鼠的子宫内膜异位组织较模型组明显抑制,各给药组大鼠的子宫内膜异位组织VEGF和VEGFR-1 mRNA及蛋白表达表达均明显低于模型组(P<0.05)。结论:养血化瘀消癥汤能明显抑制模型大鼠子宫内膜异位组织的发展,这种抑制作用可能与其抑制VEGF/VEGFR信号通路调控病灶血管生成有关。     

解毒祛瘀方对MCF-7人乳腺癌细胞侵袭能力的影响及机制探讨

目的:研究解毒祛瘀方对人乳腺癌细胞侵袭能力的影响及机制。方法:以人乳腺癌MCF-7细胞为研究对象,预培养后分为空白组,解毒祛瘀方低、中、高剂量组(0.625,1.25,2.50 g·L-1),阳性药组(5-氟尿嘧啶,10 mg·L-1),分别用0.625,1.25,2.50 g·L-1的解毒祛瘀方及5-氟尿嘧啶处理人乳腺癌MCF-7细胞24 h后,MTT法检测细胞黏附率,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,RT-PCR法检测肿瘤细胞CD44,E-钙黏蛋白及N-钙黏蛋白基因的表达,Western blot法检测肿瘤细胞CD44,E-钙黏蛋白,N-钙黏蛋白,磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)及磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)蛋白的表达。结果:与空白组比较,解毒祛瘀方低、中、高剂量组可明显抑制人乳腺癌MCF-7细胞的黏附和侵袭能力;且使CD44及E-钙黏蛋白基因及蛋白表达上调,N-钙黏蛋白表达下调,并可以抑制PI3K/Akt及MEK/ERK信号通路的激活(P0.05,P0.01)。结论:解毒祛瘀方可抑制人乳腺癌MCF-7细胞体外侵袭能力,其机制可能与抑制相关异质黏附蛋白的表达、抑制上皮间质转化及调节肿瘤相关信号通路有关。     

保元解毒汤改善Apcmin/+恶病质模型肌肉萎缩的机制分析

目的:研究保元解毒汤对Apc~(min/+)恶病质小鼠血清中白细胞介素-6(IL-6)含量及腓肠肌中肌肉萎缩盒F蛋白1(Atrogin-1),肌肉特异性环指蛋白-1(MuRF-1),线粒体解偶联蛋白-2(UCP-2),解偶联蛋白-3(UCP-3)表达的影响,探讨其改善恶病质模型小鼠肌肉萎缩的作用机制。方法:14周龄Apc~(min/+)恶病质小鼠模型,随机分为模型组,保元解毒汤组(23 g·kg-1),甲地孕酮组(0. 024 g·kg-1),C57BL/6J小鼠为正常组,每组10只,连续灌胃给药12周,测定腓肠肌质量及肌纤维横径,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测Apc~(min/+)恶病质小鼠血清中IL-6含量;蛋白免疫印迹法(Western blot),实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测小鼠腓肠肌中Atrogin-1,MuRF-1,UCP-2,UCP-3蛋白及mRNA表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠腓肠肌质量、纤维横径明显减小(P 0. 05),血清IL-6含量显著升高,小鼠腓肠肌中Atrogin-1,MuRF-1,UCP-2,UCP-3 mRNA及蛋白表达明显升高(P 0. 05);与模型组比较,给药组小鼠腓肠肌质量、腓肠肌纤维横径显著增加,血清中IL-6含量明显降低,腓肠肌中Atrogin-1,MuRF-1,UCP-2,UCP-3 mRNA及蛋白表达明显降低(P 0. 05)。结论:保元解毒汤可改善Apc~(min/+)恶病质小鼠模型肌肉萎缩,其机制可能与降低血清中IL-6含量,下调Atrogin-1,MuRF-1表达,降低线体体UCP-2,UCP-3 mRNA表达相关。     

兰茵凤扬化浊解毒方对溃疡性结肠炎大鼠免疫调控机制的影响

目的:观察兰茵凤扬化浊解毒方对溃疡性结肠炎(UC)大鼠CD4-T淋巴细胞(CD4+)/CD29-T淋巴细胞(CD29+)、白细胞介素-8(IL-8)及白细胞介素-10(IL-10)表达的影响,以探讨其作用机制。方法:将60只雄性Wistar大鼠随机分为5组,每组12只,分别为正常组、模型组、兰茵凤扬化浊解毒方高剂量组、低剂量组(20.0,5.0 g·kg-1)、柳氮磺胺吡啶对照组(SPAP 0.3 g·kg-1组)。采用2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇法诱导溃疡性结肠炎模型,造模成功后分别ig给予相应的药物,连续14 d,观察各组大鼠一般情况以及疾病活动指数(DAI)评分、组织病理学、CD4+CD29+,IL-8,IL-10变化情况。结果:DAI评分:与正常组比较,其余各组均升高;与模型组比较,兰茵凤扬高、低剂量组均减低,结果均有统计学意义(P<0.05)。CD4+,CD29+:与模型组相比,对照组、中药高、低剂量组均降低,结果有统计学意义(P<0.05)。IL-8:与模型组相比,对照组、中药高、低剂量组均减低(P<0.05),而中药低剂量组与对照组比较无差异。IL-10:与模型组相比,中药高、低剂量组、对照组均升高(P<0.05)。结论:兰茵凤扬化浊解毒方可上调抑炎症因子、下调促炎症因子和抑制CD4+/CD29+的表达。     

补阳还五汤抗动脉粥样硬化作用与紧密连接蛋白的关系

目的: 探讨补阳还五汤对同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)致动脉粥样硬化(AS) 的保护作用与紧密连接蛋白表达的关系. 方法: 将40只雄性载脂蛋白E基因敲除(ApoE^-/-)小鼠随机分为模型组、补阳还五汤低、中、高剂量组,Rho激酶抑制剂Y-27632组.以正常雄性C57BL/6J小鼠设正常组,每组8只动物.模型组和治疗组均采用0.1 g·kg^-1·d^-1的Hcy造模,造模同时,治疗组分别补阳还五汤(5,10,20 g·kg^-1·d^-1)组,Y-27632 50 mg·kg^-1组,ig.8周后采用Western-blot检测主动脉组织claudin蛋白的表达变化和反转录PCR(RT-PCR)检测连接蛋白包括咬合蛋白(occludin)、闭合蛋白(claudin)、带状闭合蛋白(zonula occludens, ZO)、连接黏附分子(junction adhesion molecule, JAM)的mRNA的表达变化. 结果: 与正常组对比,Western-blot检测模型组AS病变明显,模型组与正常组比claudin蛋白表达明显减少,RT-PCR检测模型组与空白组相比,claudin,JAM,Zo,Occludin的mRNA的表达明显降低,不同剂量的补阳还五汤改善AS病变的同时上调血管组织中Claudin,JAM,Zo,Occludin的表达水平. 结论: 补阳还五汤能显著的增加血管组织中Claudin,occludin,JAM,Zo表达量,说明补阳还五汤抗hcy所致的AS与增强血管组织中紧密连接蛋白有关.     

丹白涂膜剂对黄褐斑大鼠模型抗氧化作用及SCF/C-kit蛋白表达的影响

[目的]观察丹白涂膜剂对肌肉注射黄体酮及紫外(UV)照射导致黄褐斑大鼠模型的皮肤抗氧化作用及对SCF/C-kit蛋白表达的影响。[方法]将大鼠随机分成对照组、模型组、氢醌组、丹白涂膜剂组共4组。用肌肉注射黄体酮及辅助UV照射法建立黄褐斑大鼠模型。测定各组皮肤组织中谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、酪氨酸酶(TYR)、总抗氧化能力(T-AOC),以及丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)及大鼠皮肤病理学检查。用CCK-8试剂盒观察0、5、10、20、40、80 mg/mL浓度丹白提取物对Ha Cat细胞、黑素细胞的抑制情况,选取最佳抑制浓度,将HaCat细胞分为1640培养基组、30 m J/cm~2 UVB照射组、20 mg/mL丹白提取物组、30 mJ/cm~2 UVB照射+20 mg/mL丹白提取物组,黑素细胞分为MeIM-2培养基组、30 mJ/cm~2 UVB照射组、40 mg/mL丹白提取物组、30 mJ/cm~2 UVB照射+40 mg/mL丹白提取物组;Western blot法检测各组Ha Cat细胞SCF蛋白表达水平,各组黑素细胞的C-kit受体蛋白表达水平。[结果]丹白涂膜剂能够显著增加黄褐斑模型大鼠皮肤中GSH-Px、SOD活性、T-AOC能力,降低MDA,抑制TYR增加;丹白提取物对HaCat细胞、黑素细胞的抑制情况呈剂量依赖性最大抑制效应分别为20 mg/mL(P0.01)和40 mg/mL(P0.01);丹白提取物能够下调UVB对HaCat细胞SCF蛋白和黑素细胞C-kit受体的促表达作用。[结论]丹白涂膜剂对黄褐斑大鼠模型皮肤具有抗氧化作用,能够抑制与黄褐斑相关的蛋白SCF/C-kit蛋白表达。     

消岩汤剂拆方配伍对A549肺腺癌细胞体外生长抑制作用研究

[目的]探讨消岩汤及各拆方组对人肺腺癌A549细胞的体外生长的作用机制,探究消岩汤剂中最有效的作用成分和浓度。[方法]消岩汤全方和根据功效拆分的清热解毒组、活血化瘀组、益气扶正组,以CCK-8检测A549肺腺癌细胞的细胞增殖活性。[结果]各组均有明显的抑制细胞活性作用,抑制强度依次为:全方组、清热解毒组、活血化瘀组、益气扶正组。[结论]消岩汤及其拆方组在体外实验中均能抑制A549肺腺癌细胞细胞生长,消岩汤全方组当浓度达到50 g/L时达到最大抑制率为85.60%。清热解毒组药物在抗肿瘤作用方面,与全方接近,提示清热解毒组中药为体外实验中全方抗肿瘤作用最有效组分。     

益气化瘀解毒汤结合微观辨证用药治疗慢性萎缩性胃炎

目的:观察益气化瘀解毒方结合胃镜下微观辨证用药治疗慢性萎缩性胃炎的临床疗效,并探讨其作用机制。方法:将120例经胃镜检查并病理活检确诊为慢性萎缩性胃炎的患者,随机分为治疗组和对照组,各60例。对照组口服胃复春片,4片/次,3次/d;治疗组采用益气化瘀解毒方治疗,在此基础上根据胃镜下微观征象辨证加味用药,1剂/d。16周为1个疗程,观察治疗前后两组患者临床症状总积分、主要中医症状疗效、胃黏膜病理组织学及胃镜下微观征象的变化。结果:治疗组与对照组临床疗效总有效率分别为83.3%,70%,内镜总有效率分别为73.3%,60%,治疗后治疗组的症状总积分和主要中医症状积分改善优于对照组(P0.05)。与对照组比较,治疗组能显著改善胃黏膜组织病理学及内镜下微观征象,且有较好的抗幽门螺杆菌作用(P0.05)。结论:结合胃镜下微观辨证治疗慢性萎缩性胃炎的疗效确切,值得在临床上推广应用。     

健脾养血祛风汤治疗血虚风燥型特应性皮炎患者临床疗效及对患者皮肤屏障功能的影响

目的:探讨健脾养血祛风汤治疗血虚风燥型特应性皮炎(atopic dermatitis,AD)患者临床疗效及对皮肤屏障功能的影响。方法:以云南省中医医院在2016年3月至2017年5月收治的132例AD患者为研究对象,遵循成组序贯设计法分为治疗组与对照组(各66例)。两组患者同时给予外用白凡士林,在此基础上,对照组患者口服氯雷他定片,治疗组给予健脾养血祛风汤,两组均进行4周治疗,结束后对两组患者疗效,Th1/Th2细胞因子与免疫球蛋白E(immunoglobulin E,Ig E),皮肤屏障功能,特应性皮炎积分(scoring atopic dermatitis index,SCORAD)与瘙痒视觉模拟评分(visual analogue scale,VAS)进行比较。结果:治疗组患者总有效率为95.45%,对照组为84.85%,治疗组高于对照组(P0.05);与本组治疗前比较,治疗后两组AD患者血清中白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)与Ig E水平明显降低,白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)明显升高,且治疗组明显优于对照组(P0.05);与本组治疗前比较,治疗后两组AD患者经皮水分丢失(transepidermal waterloss,TEWL)水平明显降低,皮脂含量与角质层含水量明显升高,且治疗组明显优于对照组(P0.05);通过治疗,两组AD患者特应性皮炎SCORAD评分与瘙痒VAS均明显降低,且治疗组明显低于对照组(P0.05)。结论:健脾养血祛风汤对血虚风燥型AD具有积极的治疗效果,可以明显调节血虚风燥型AD患者Th1/Th2细胞因子平衡,改善皮肤屏障功能,降低皮损与瘙痒程度。     

益气活血解毒方对小鼠卵巢癌ID-8细胞株增殖及血管生成过程的影响

目的:研究益气活血解毒方抑制鼠卵巢上皮癌ID-8细胞株增殖的作用,并观察本方对于脐静脉内皮细胞(HUVECs)形成血管过程的作用,为本方发挥疗效提供实验依据。方法:采用细胞增殖与检测方法(cell counting kit-8,CCK-8)检测本方对于ID-8细胞增殖的抑制作用;将含中药血清、磁珠分选的调节性T细胞(regulatory T cells,Tregs)与抗血管内皮生长因子(VEGF)抗体分组共培养,观察血管生成情况差异。结果:与空白组比较,10%,20%含药血清均能够抑制卵巢上皮癌ID-8细胞株的增殖,此抑制作用在培养96 h时最明显;在72,96 h时,20%含药血清组的抑制率明显高于10%含药血清组(P0.05,P0.01)。与Tregs(-)各组相比,Tregs(+)各组HUVECs细胞呈现明显的血管网状结构,中药含药血清组血管成网不明显,VEGF抗体联合含药血清组血管成网情况最差。结论:益气活血解毒方对小鼠卵巢上皮癌ID-8细胞株的增殖过程有显著的抑制作用,同时能够干预血管的形成,这也许与本方影响Tregs促进肿瘤新生血管的作用相关。