酸枣仁皂苷A抗过氧化氢诱导心肌细胞凋亡的作用及机制研究

目的:观察酸枣仁皂苷A对过氧化氢诱导心肌细胞凋亡的保护作用及其机制。方法:采用差速贴壁法体外分离培养新生乳鼠心肌细胞,以500μmol/L过氧化氢作用4h建立心肌细胞氧化损伤模型,以酸枣仁皂苷A(20mg/L)在造模前干预24h。四唑盐(MTT)比色法检测心肌细胞活力;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Caspase活性定量检测caspase-3及caspase-9的活性。结果:模型组经500μmol/L过氧化氢作用4h后,细胞活力显著下降,凋亡率显著增高。与模型组比较,酸枣仁皂苷A提高细胞活力及显著降低细胞凋亡率。模型组的caspase-3及caspase-9活性显著升高。与模型组比较,酸枣仁皂苷A组的caspase-3及caspase-9活性显著下降。结论:酸枣仁皂苷A可抑制过氧化氢诱导心肌细胞损伤,这可能与其抑制线粒体信号通路中caspase-3及caspase-9的活性有关。     

酸枣仁皂苷A预处理对过氧化氢诱导大鼠心肌细胞凋亡的作用

目的:研究酸枣仁皂苷A预处理对过氧化氢诱导心肌细胞凋亡、胞浆细胞色素C(CytC)表达及Caspase-3活性的影响。方法:采用差速贴壁法体外分离培养新生乳鼠心肌细胞,以500μmol/L过氧化氢作用4小时建立心肌细胞氧化损伤模型,以酸枣仁皂苷A(20 mg/L)在造模前干预24小时。倒置显微镜观察心肌细胞形态学变化;四唑盐(MTT)比色法检测心肌细胞活力;流式细胞仪检测细胞凋亡率;采用蛋白印迹法检测胞浆CytC表达,分光光度法检测caspase-3的活性。结果:模型组经500μmol/L过氧化氢作用4小时后,细胞核暗淡,伪足显著变细,细胞间连接明显减少,搏动节律明显减慢,细胞活力显著下降(P<0.01),细胞凋亡率显著增高(P<0.01)。与模型组比较,酸枣仁皂苷A能显著改善心肌细胞形态、提高细胞活力及显著降低细胞凋亡率(P<0.01)。模型组中胞浆CytC表达及caspase-3活性显著升高(P<0.01)。与模型组比较,酸枣仁皂苷A组的胞浆CytC表达及caspase-3活性显著下降(P<0.01)。结论:酸枣仁皂苷A可明显抑制过氧化氢诱导的心肌细胞凋亡,其机制可能与下调胞浆中CytC蛋白表达及caspase-3活性有关。     

竹节香附素A对人结肠癌细胞HCT-116增殖、凋亡、迁移和侵袭活性的影响

摘要：目的 研究竹节香附素A (Raddeanin A,RA) 对人结肠癌细胞HCT-116增殖、凋亡、迁移及侵袭的活性影响,并初步探讨其作用机制。 方法 采用不同浓度的RA（0.125~50 μmol·L-1）处理?HCT-116细胞24,48 h,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖能力。RA(1.0,2.0,4.0 μmol·L-1)干预后,采用Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡率;JC-1染色法检测线粒体膜电位变化;DCFH-DA法检测细胞内活性氧簇（ROS）水平;采用Western Blot法检测细胞中Cleaved caspase-3蛋白表达。选择低于凋亡浓度的RA （0.25,0.5,1.0 μmol·L-1）作用HCT-116细胞,采用细胞划痕实验和Transwell穿膜实验观察不同浓度RA 对结肠癌细胞HCT-116细胞迁移的影响;采用铺有matrigel胶的Transwell实验检测RA对HCT-116细胞侵袭能力的影响;采用RT-PCR法和Western Blot法检测RA作用后各组细胞中MMP-2、MMP-9基因及蛋白表达。 结果 RA干预24,48 h后的IC50值分别为5.967 μmol·L-1和4.797 μmol·L-1,且呈现浓度与时间依赖性。与空白对照组比较,RA 1.0,2.0,4.0?μmol·L-1浓度组凋亡、坏死的HCT-116细胞明显增多（P < 0.05,P < 0.01）;线粒体膜电位坍塌率分别为70.2%,74.4%和91.6%,差异有统计学意义（P < 0.01）;细胞内ROS含量显著增加（P < 0.01）,且呈现浓度依赖性;Cleaved caspase-3蛋白的表达水平随RA浓度的增加而显著提高（P < 0.01）。RA干预后与空白对照组比较,0.5,1.0 μmol·L-1浓度组的细胞愈合率显著降低（P < 0.01）;RA 0.25,0.5,1.0 μmol·L-1浓度组均能显著抑制HCT-116 细胞的迁徙能力（P < 0.01）,均能显著抑制HCT-116 细胞体外侵袭能力（P < 0.05,P < 0.01）。与空白对照组比较,RA 0.5,1.0 μmol·L-1浓度组MMP-2、MMP-9 mRNA相对表达水平显著降低（P < 0.05,P < 0.01）;RA 0.5,1.0?μmol·L-1浓度组MMP-2、MMP-9 蛋白相对表达水平显著降低（P < 0.01）。结论 RA既能够有效抑制人结肠癌HCT-116细胞增殖,又能诱导该细胞的凋亡,可能与诱导细胞内ROS产生,导致线粒体膜电位坍塌,激活caspase信号通路有关。低于凋亡浓度的RA （0.25,0.5,1.0 μmol·L-1）能明显抑制HCT-116细胞的迁移与侵袭活性,可能与通过下调HCT-116细胞MMP-2、MMP-9 mRNA及蛋白表达有关。     

苦瓜皂苷L 对异丙肾上腺素诱导的大鼠H9c2 心肌细胞肥大的作用研究

目的探究苦瓜皂苷L 对异丙肾上腺素诱导的大鼠H9c2 心肌细胞肥大的保护作用及机制。方法（1）体外 培养大鼠H9c2 心肌细胞,采用MTT 法评价不同浓度的异丙肾上腺素（0.625、1.25、2.5、5、10 μmol·L-1）和不 同浓度的苦瓜皂苷L（1.625、3.125、6.25、12.5、25.0 μg·mL-1）对心肌细胞活力的影响。（2） 采用异丙肾上腺素 诱导心肌细胞肥大模型。实验分为正常组、模型组、苦瓜皂苷L 干预组和苦瓜皂苷L 单独组。分别通过细胞 拍照结合ImageJ 软件测量、荧光定量PCR 法考察苦瓜皂苷L 12.5 μg·mL-1 对异丙肾上腺素诱导的心肌细胞表 面积和心肌肥大相关胚胎基因ANP、β-MHC 及α-SKA 表达的影响。在此基础上,选择参与甘油磷脂代谢的 酶VI 组磷脂酶A2（PLA2G6）、二酰甘油激酶ζ（DGKZ）、甘油磷酸胆碱磷酸二酯酶1（GPCPD1）为指标,评价苦 瓜皂苷L 对异丙肾上腺素诱导的心肌细胞上述3 种酶基因表达的影响;进一步以PLA2G6 和DGKZ 蛋白为指 标,采用Western Blot 法考察苦瓜皂苷L 对异丙肾上腺素诱导的心肌细胞PLA2G6 和DGKZ 蛋白表达的影 响。结果（1）与正常组比较,异丙肾上腺素（0.625~10 μmol·L-1）和苦瓜皂苷L（1.625~25 μg·mL-1）对心肌细胞 活力没有明显影响（P＞0.05）。本研究选用异丙肾上腺素10 μmol·L-1 和苦瓜皂苷L 12.5 μg·mL-1 进行实验。 （2）与正常组比较,模型组心肌细胞表面积增加（P＜0.05）,心肌肥大相关胚胎基因ANP、β-MHC、α-SKA 表 达上调（P＜0.05）,PLA2G6、DGKZ、GPCPD1 mRNA 表达上调（P＜0.05）,PLA2G6 和DGKZ 蛋白表达增加 （P＜0.05）;与模型组比较,苦瓜皂苷L 干预组能够降低心肌细胞表面积（P＜0.05）,下调心肌肥大相关胚胎基 因ANP、β-MHC、α-SKA 表达（P＜0.05）, 下调PLA2G6、DGKZ、GPCPD1 mRNA 表达（P＜0.05）, 降低 PLA2G6 和DGKZ 蛋白表达（P＜0.05）。结论苦瓜皂苷L 可缓解异丙肾上腺素诱导的心肌细胞肥大,可能与 其抑制甘油磷脂代谢酶PLA2G6 和DGKZ 的表达有关。     

黄芪甲苷促进乳鼠心肌细胞自噬及抑制缺血诱导的心肌细胞凋亡作用研究

目的 观察黄芪甲苷(AS)对缺血模型诱导的乳鼠心肌细胞自噬的影响,探讨黄芪甲苷的心肌保护作用及机制。方法 建立乳鼠心肌缺血的细胞损伤模型,采用分子生物学及免疫细胞化学法观察心肌细胞在缺血模型及黄芪甲苷处理后的自噬与细胞损伤变化。结果 心肌细胞的自体吞噬程序会被缺血刺激激活,缺血可致心肌细胞死亡。黄芪甲苷可明显恢复缺血处理诱导的心肌细胞损伤,10,20 μmol·L-1的黄芪甲苷分别使细胞活性恢复至80 %及85 %(均P＜0.05),使凋亡细胞数目降低至正常对照组的2.6倍及1.8倍(均P＜0.05),且呈现出剂量依赖效应。同时,黄芪甲苷可促进自噬蛋白(LC3)的表达;10,20 μmol·L-1的黄芪甲苷分别使细胞LC3升高至正常对照组的1.5倍及1.7倍(均P＜0.05)。结论 黄芪甲苷可恢复缺血降低的心肌细胞活性,降低缺血诱导的心肌细胞凋亡,其机制可能与促进缺血诱导的心肌细胞自噬相关。     

APOE-TREM2 介导的蛇床子素对阿尔兹海默病体外细胞模型的抗炎机制研究

目的探究载脂蛋白E（APOE）-髓细胞触发受体2（TREM2）信号通路介导的蛇床子素（Osthole）对阿尔兹 海默病体外细胞模型的抗炎作用机制。方法将小鼠小胶质细胞（BV2 细胞）分为：空白组、溶剂组（0.1% DMSO）、模型组（Aβ1-42,10 μmol·L-1）、阳性药组（地塞米松,2.5 μmol·L-1）及蛇床子素高、中、低剂量组 （25、5、1 μmol·L-1）。给药组分别给予药物预保护4 h 后,再给予Aβ1-42 诱导损伤24 h,建立阿尔茨海默病 BV2 细胞模型。采用CCK-8 法检测细胞存活率;ELISA 法检测细胞炎性因子白细胞介素（IL）1β、肿瘤坏死因 子（TNF）α 的表达;免疫荧光法检测细胞促炎表型M1 型标志物CD16/32 的表达;倒置显微镜观察BV2 细胞培 养上清对SH-SY5Y 细胞形态的影响;流式细胞术检测BV2 细胞培养上清对SH-SY5Y 细胞凋亡的影响;采用 Western Blot、qPCR 法检测细胞中APOE、TREM2 蛋白及基因的表达情况。结果与空白组比较,模型组BV2 细胞存活率明显降低（P＜0.001）,TNF-α、IL-1β 分泌量明显增加（P＜0.001）,CD16/32 荧光明显增强, SH-SY5Y 细胞损伤明显,SH-SY5Y 细胞凋亡率明显升高（P＜0.001）,APOE、TREM2 蛋白及mRNA 表达显著 上调（P＜0.01,P＜0.001）。与模型组相比,蛇床子素组的BV2 细胞存活率明显升高（P＜0.01,P＜0.001）, TNF-α、IL-1β 分泌量明显减少（P＜0.01,P＜0.001）,CD16/32 荧光明显减弱,SH-SY5Y 细胞形态有所改善 且凋亡率明显降低（P＜0.05,P＜0.01,P＜0.001）,APOE、TREM2 蛋白及基因表达明显下调（P＜0.05,P＜ 0.01,P＜0.001）。结论蛇床子素对Aβ1-42 诱导的BV2 细胞的炎性反应有较好的治疗作用,其机制可能与下 调APOE、TREM2 蛋白及基因表达有关。     

没食子酸丙酯对H2O2诱导SH-SY5Y细胞氧化损伤的影响及其作用机制

目的 探讨没食子酸丙酯（propyl gallate,PG,赤芍801）对H2O2诱导人神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y）氧化损伤的影响及其作用机制。方法 将SH-SY5Y细胞均分为对照组、H2O2模型组、PG1组、PG2组和PG3组,对照组常规加入DMEM/F12培养液培养;H2O2模型组加入H2O2 200 μmol·L-1;PG1组加入PG 20 μmol·L-1+H2O2 200 μmol·L-1;PG2组加入PG 40 μmol·L-1+H2O2 200 μmol·L-1;PG3组加入PG 80 μmol·L-1+H2O2 200 μmol·L-1。比较5组SH-SY5Y细胞的增殖活性,细胞培养物上清中8-OHdG,细胞内ROS、LDH释放量,Hoechst 33258染色结果、细胞周期变化情况及Caspase-3酶活性。结果 H2O2模型组细胞存活率显著低于对照组,细胞培养物上清中8-OHdG水平显著高于对照组,ROS水平显著高于对照组,LDH释放量显著高于对照组,具有非常显著性差异（P＜0.01）;PG1组、PG2组和PG3组细胞存活率均显著高于H2O2模型组,细胞培养物上清中8-OHdG水平均显著低于H2O2模型组,ROS水平均显著低于H2O2模型组,LDH释放量均显著低于H2O2模型组,差异具有统计学意义（P＜0.05）;PG可显著改善SH-SY5Y细胞凋亡情况,且具有剂量依赖关系;H2O2模型组G0/G1期百分率显著高于对照组,S期、G2/M期和PI均显著低于对照组,差异具有统计学意义（P＜0.05）;PG2组、PG3组G0/G1期百分率显著低于H2O2模型组,S期、G2/M期和PI均显著高于H2O2模型组,差异具有统计学意义（P＜0.05）;H2O2模型组Caspase-3酶活性显著高于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）;PG2组和PG3组Caspase-3酶活性显著低于H2O2模型组,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 PG在一定剂量范围内对H2O2诱导的SH-SYSY神经细胞损伤具有明显的保护作用,其保护效应可能与清除ROS,减轻DNA氧化损伤,抑制线粒体通路介导的细胞凋亡有关。     

蒺藜皂苷对缺血心肌细胞内核转录因子-κB的作用

目的 研究蒺藜皂苷对培养大鼠乳鼠心肌细胞H2O2损伤时心肌细胞内蛋白激酶C(PKCε)、细胞外信号调节激酶(ERK1/2)及核转录因子-κB(NF-κB)水平的影响.方法 利用培养的Wistar大鼠乳鼠心肌细胞,采用H2O2建立心肌细胞损伤模型,应用PKCε抑制剂Chelerythrine干预后,观察细胞形态学改变,应用流式细胞仪定性检测细胞凋亡率,Western blotting定量检测各组PKCε、ERK1/2及NF-κB水平.结果 蒺藜皂苷明显保护受损心肌细胞,降低细胞凋亡率,并且能够升高PKCε、ERK1/2及NF-κB水平;应用Chelerythrine可部分阻断蒺藜皂苷的上述作用.结论 蒺藜皂苷对H2O2损伤大鼠心肌细胞具有保护作用,其保护作用机制与PKCε、ERK1/2及NF-κB激活有关.     

三七总皂苷对AngⅡ诱导心肌细胞凋亡的影响

目的:研究三七总皂苷对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导培养心肌细胞凋亡的影响。方法:原代培养乳鼠心肌细胞,通过MTT法观察三七总皂苷对培养心肌细胞活力的影响;AO荧光染色观察细胞核形态改变,流式细胞术检测细胞凋亡,Fluo3荧光探针标记测定钙离子荧光强度。结果:AngⅡ(10^-7mol·L^-1)孵育48h后心肌细胞凋亡明显多于对照组;三七总皂苷(25,50,100mg·L^-1)组心肌细胞活力显著高于AngⅡ组;三七总皂苷(50mg·L^-1)组AngⅡ诱导的心肌细胞凋亡率明显低于AngⅡ组;三七总皂苷(50mg·L^-1)组心肌细胞内钙超载明显轻于AngⅡ组。结论:三七总皂苷对AngⅡ诱导的细胞凋亡具有明显的抑制作用,其机制可能与抑制心肌细胞内钙超载有关。     

南方红豆杉多糖对宫颈癌细胞增殖及凋亡的影响

〔摘 要〕 目的：探究南方红豆杉多糖对宫颈癌 HeLa 细胞株增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法：经体外培养并取 对数生长期人宫颈癌 HeLa 细胞，分别予以不同浓度红豆杉多糖（30、60、90、120 μmol·L-1），将其设为四组，并设对照 组加入等量 0.9 % 氯化钠溶液。应用 MTT 法检测细胞增殖情况，流式法检测细胞凋亡情况，Western blot 法检测 Survivin、 Caspase–3、Bcl–2、P53 蛋 白 表 达 情 况。 结果： 与 对 照 组 相 比，30 μmol·L-1 组、60 μmol·L-1 组、90 μmol·L-1 组、 120 μmol·L-1 组的宫颈癌 HeLa 细胞增殖抑制率、细胞凋亡率显著升高，差异具有统计学意义（P ＜ 0.05）。P53 蛋白表达 量明显升高，Survivin、Bcl–2、Caspase–3 蛋白表水平显著降低，差异具有统计学意义（P ＜ 0.05）。结论：南方红豆杉多糖 可抑制宫颈癌 HeLa 细胞增殖，促进细胞凋亡，其作用机制可能与下调 Survivin、Bcl–2、Caspase–3 表达，上调 P53 表达有关。