多肽药物汇利心康对小鼠心肌肥大与肌球蛋白重链表达的影响

 目的 探讨Gq蛋白羧基端模拟肽盐酸GCIP-27（汇利心康,HLXK）对去甲肾上腺素诱导的小鼠心肌肥大和肌球蛋白重链表达的影响。方法 60只小鼠,随机分为对照组、模型组、氯沙坦组、HLXK（10、30、90 μg·kg-1）组,分别给予生理盐水、去甲肾上腺素1.5 mg·kg-1（ip,bid）、氯沙坦钾9 mg·kg-1（ig,qd）、HLXK（10、30、90 μg·kg-1;ip,bid）。连续给药20 d后,称量小鼠体重、心脏质量、左心室质量,计算心脏质量指数和左心室质量指数。采用免疫组化法测定肌球蛋白重链(myosin heavy chain,MHC)α、β在心肌组织中的表达情况。结果 去甲肾上腺素可明显诱导小鼠心肌重构。氯沙坦、HLXK（30、90 μg·kg-1;bid）能明显降低小鼠心脏质量指数和左心室质量指数,增加心肌组织中α-MHC的表达,降低β-MHC的表达。结论 汇利心康能够有效防止小鼠发生心肌肥大,纠正心肌肥大过程中的肌球蛋白重链表达失衡。     

丹酚酸B对异丙肾上腺素所致乳鼠心肌细胞肥大的保护作用

目的 探讨丹酚酸B对异丙肾上腺素诱发的原代乳鼠心肌细胞肥大的保护作用及其机制.方法 用异丙肾上腺素诱导制备原代乳鼠心肌细胞肥大模型.MTT法检测丹酚酸B对乳鼠心肌细胞活力的影响;RT-PCR技术检测心肌肥厚指标心钠肽(ANP)、脑钠肽(BNP)基因表达;分光光度法检测心肌细胞中超氧化物歧化酶(SOD)的活性和丙二醛(MDA)的量;Western blotting法测定心肌肥厚信号转导通路JAK、STAT蛋白的表达.结果 不同浓度的丹酚酸B对乳鼠心肌细胞的活力无明显影响.与模型组比较,丹酚酸B浓度为10、20 μmol/L时明显下调ANP、BNP基因表达(P＜0.05、0.01);显著增强SOD活性和降低MDA的量(P＜0.05、0.01);显著下调JAK1与STAT3蛋白的表达(P＜0.05、0.01).结论 丹酚酸B能有效抑制异丙肾上腺素诱发的原代乳鼠心肌细胞肥大,其机制可能与抗氧化应激以及抑制JAK1/STAT3信号通路有关.     

人参皂苷Rg1通过调控PGC-1α抑制异丙肾上腺素诱导大鼠心肌细胞肥大

目的:探讨人参皂苷Rg1(ginsenoside Rg1)对异丙肾上腺素(Isoprenaline,ISO)诱导大鼠心肌细胞肥大中能量代谢的作用及机制。方法:利用体外培养模型,用异丙肾上腺素(10μmol/L)诱导心肌细胞肥大,观察β受体阻滞剂普萘洛尔(2μmol/L)及不同计量人参皂苷Rg1(12.5、25、50μmol/L)对异丙肾上腺素诱导大鼠心肌细胞肥大的作用。用消化分离法及计算机图像分析系统测细胞体积;细胞荧光染色观察细胞形态大小;考马斯亮蓝(Bradford)法测心肌细胞总蛋白含量;酶联免疫吸附(ELISA)法检测细胞外液中游离脂肪酸(FFA)、单磷酸腺苷(AMP)、二磷酸腺苷(ADP)、三磷酸腺苷(ATP)的含量;反转录-PCR(RT-PCR)法检测心房钠尿肽(ANP)mRNA的表达;蛋白质印迹(Western blot)法检测心肌细胞过氧化物酶体增殖活化受体γ辅助活化因子1α(PGC-1α)、丙酮酸脱氢酶激酶4(PDK4)蛋白的表达水平。结果:与空白对照组相比,异丙肾上腺素模型组心肌细胞体积明显增大,蛋白含量增加,ANP mRNA表达增加,PGC-1α、PDK4蛋白表达减少,心肌组织游离脂肪酸(FFA)升高,ATP/ADP、ATP/AMP明显降低。与异丙肾上腺素组相比,人参皂苷Rg1(12.5、25、50μmol/L)均能够有效的改善异丙肾上腺素诱导的心肌细胞肥大,蛋白含量降低,ANP mRNA表达降低,PGC-1α、PDK4蛋白表达增高,细胞外液中FFA降低,ATP/ADP、ATP/AMP增加,且呈一定的剂量依赖性。结论:人参皂苷Rg1能改善异丙肾上腺素诱导的心肌细胞肥大,其机制可能是调控PGC-1α来提高异丙肾上腺素诱导的心肌细胞肥大能量代谢水平。     

藏药“松蒂”（篦齿虎耳草）中黄酮类成分对L02 肝细胞氧化损伤的影响

目的观察藏药“松蒂”（篦齿虎耳草）中所含总黄酮及其中5 种黄酮类化合物对H2O2 诱导的人肝系 L02 细胞氧化损伤的影响。方法采用MTT 法检测细胞存活率，筛选H2O2 诱导损伤L02 细胞的浓度、时间， 并确定各干预组分的最佳给药浓度范围。将细胞分为正常对照组、H2O2 损伤模型组、阳性对照组（Trolox 组，50 μmol·L-1）、给药组［包括总黄酮组、金丝桃苷组、山柰酚-3-O-（6′′-乙酰基）-D-半乳糖苷组、2′， 4′，5，7-四羟基-5′-甲氧基黄酮组、槲皮素组、芦丁组］，给药组再分别设置低、中、高3 个剂量组。药物干 预后，采用MTT 法检测细胞存活率；采用速率法检测细胞上清液中丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基 转移酶（AST）含量；测定细胞培养液中超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、丙二 醛（MDA）含量及血红素加氧酶-1（HO-1）的活性。结果选择100 μmol·L-1 的H2O2 作用8 h为造模条件建立氧 化损伤L02 细胞模型。与模型组比较，篦齿虎耳草总黄酮（200、400、800 μg·mL-1）、金丝桃苷（50、100、 150 μg·mL-1）、槲皮素（50、100、150 μg·mL-1）和芦丁（50、100、150 μg·mL-1）预处理后，细胞存活率明显升 高（P＜0.05，P＜0.01），AST、ALT 水平明显降低（P＜0.05，P＜0.01），SOD、GSH-Px 及HO-1 活力明显升 高（P＜0.05，P＜0.01），MDA 含量明显降低（P＜0.05，P＜0.01），且在一定程度上呈剂量依赖性。结论篦齿 虎耳草总黄酮及金丝桃苷、槲皮素和芦丁对H2O2 致L02 肝细胞氧化损伤具有保护作用，金丝桃苷、槲皮素和 芦丁可能是篦齿虎耳草黄酮类成分保肝物质中的潜在活性化合物。     

毛蕊异黄酮对氧糖剥夺再灌注BV2 小胶质细胞极化的影响

探讨毛蕊异黄酮对氧糖剥夺再灌注BV2 小胶质细胞极化的影响。方法 将对数生长期BV2 细胞 随机分为6 组：正常组、模型组、尼莫地平组（5 μg·mL-1）、毛蕊异黄酮高剂量组（20 μg·mL-1）、毛蕊异黄酮中 剂量组（10 μg·mL-1）、毛蕊异黄酮低剂量组（5 μg·mL-1）。氧糖剥夺3 h 后,各给药组换成含药的完全培养基, 复氧6 h。采用CCK-8 法检测细胞活力;测定细胞上清液中的一氧化氮（NO）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白 细胞介素1β（IL-1β）、IL-10 含量;免疫荧光双染法检测BV2 细胞极化;Western Blot 法检测BV2 细胞的 iNOS、CD206 蛋白表达水平。结果 与正常组比较,模型组的BV2 细胞活力显著降低（P＜0.01）,NO、 TNF-α、IL-1β 水平明显升高（P＜0.05）,IL-10 水平明显降低（P＜0.05）;免疫荧光双染检测中M1 型小胶质细 胞标记物iNOS 表达显著增强（P＜0.01）;Western Blot 检测中iNOS 蛋白表达明显上调（P＜0.05）,M2 型细胞标 志物CD206 蛋白表达明显下调（P＜0.05）。与模型组比较,毛蕊异黄酮低、中、高剂量组及尼莫地平组的BV2 细胞活力显著提高（P＜0.01）,NO、TNF-α、IL-1β 水平明显降低（P＜0.05）,IL-10 水平明显升高（P＜0.05）; 免疫荧光双染检测中毛蕊异黄酮（10 μg·mL-1）组BV2 细胞的iNOS 表达显著减弱（P＜0.01）;Western Blot 检测 中毛蕊异黄酮（10 μg·mL-1）组BV2 细胞的iNOS 蛋白表达明显下调（P＜0.05）,CD206 蛋白表达明显上调（P＜ 0.05）。结论 毛蕊异黄酮能促进活化的BV2 小胶质细胞向M2 型极化,抑制其向M1 型极化,减少炎性介质 的产生,降低氧化损伤,对缺血后脑组织损伤具有保护作用。     

三七总皂苷通过TLR4/NF-кB信号通路抑制异丙肾上腺素诱导的心肌细胞肥大

目的 :探讨三七总皂苷(PNS)在异丙肾上腺素(ISO)诱导心肌细胞肥大中的保护作用及其机制。方法:离体培养SD乳鼠心肌细胞,用10μmol/L异丙肾上腺素诱导心肌细胞肥大,观察5μmol/L BAY11-7082(核因子-кB特异性抑制剂)及不同剂量三七总皂苷(12.5 mg/L,25 mg/L,50 mg/L)对肥大心肌细胞的影响。采用计算机图像分析系统测量细胞体积;考马斯亮蓝法测心肌细胞总蛋白含量;酶联免疫吸附法检测细胞外液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量;反转录-PCR法检测ANP mRNA的表达;蛋白质印迹法检测心肌细胞TLR4和IκBα蛋白的表达。结果:与正常对照组相比,异丙肾上腺素模型组心肌细胞体积、总蛋白含量、ANP mRNA的表达、炎症因子TNF-α的含量及TLR4蛋白的表达均明显增高,而IκBα蛋白表达明显降低。三七总皂苷和BAY11-7082均能有效抑制异丙肾上腺素诱导的肥大反应及炎症反应,表现为细胞体积、总蛋白含量、ANP mRNA表达、细胞外液中TNF-α含量、TLR4蛋白表达均明显降低,IκBα蛋白含量显著增高。结论 :三七总皂苷对异丙肾上腺素诱导乳鼠心肌细胞肥大具有保护作用,其机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路,减少炎症反应有关。     

黄芩苷对转化生长因子β1 诱导的A549 细胞自噬作用的影响

目的探讨黄芩苷对转化生长因子β1（TGF-β1）诱导的A549 细胞自噬作用的影响。方法采用不同浓 度TGF-β1（2.5、5、10 ng·mL-1）诱导A549 细胞48 h后,检测其Collagen I基因与自噬相关基因表达水平,以 确定模型复制的最佳条件。在高、中、低剂量（200、100、50 μg·mL-1）黄芩苷对TGF-β1 诱导的A549 细胞模 型干预后,采用RT-qPCR 法检测细胞的肺纤维化标志基因CollagenⅠ及自噬相关基因（ATG3、ATG5、ATG7、 ATG12）的表达;Western Blot 法检测自噬调节标志蛋白p62、LC3B Ⅱ/Ⅰ的表达;通过转染Ad-mCherry-GFPLC3B 双荧光标记腺病毒检测细胞中自噬流的情况。结果使用10 ng·mL-1 TGF-β1 诱导A549 细胞48 h 后, CollagenⅠ基因表达显著上调,ATG3、ATG5、ATG7、ATG12 基因表达明显下调,差异均有统计学意义（P＜ 0.05,P＜0.01）。经黄芩苷干预后,与模型组相比,黄芩苷高剂量组（200 μg·mL-1）A549 细胞的CollagenⅠ基因 表达显著下调（P＜0.01）,ATG3、ATG5、ATG7、ATG12 基因表达明显上调（P＜0.05）;黄芩苷各给药组A549 细胞的p62 蛋白表达显著下调（P＜0.05,P＜0.01）,LC3B Ⅱ/Ⅰ蛋白表达显著上调（P＜0.05,P＜0.01）;黄芩 苷高剂量组的细胞自噬能力明显激活。结论黄芩苷可能在减少TGF-β1 诱导的A549 细胞外基质沉积的同 时,能够增强细胞的自噬水平,可能是治疗肺纤维化的有效成分。     

丹参酮ⅡA通过CaN信号通路对异丙肾上腺素诱导的心肌细胞肥大的保护作用

目的:利用异丙肾上腺素(Iso)诱导的肥大心肌细胞模型,从钙调神经磷酸酶(Calcineurin,Ca N)信号通路角度探讨丹参酮IIA(Tan IIA)对乳鼠心肌细胞的保护作用及其可能机制。方法:利用原代培养新生乳鼠心肌细胞,以10 mol/L异丙肾上腺素诱导心肌细胞肥大,观察环孢菌素-A(Cs A)、丹参酮IIA 0.1,1,10 mol/L剂量组对肥大心肌细胞的影响。采用考马斯亮蓝试剂盒检测心肌细胞中总蛋白含量;罗丹明-鬼笔环肽染色观察细胞面积;Till阳离子测定系统及Fura-2/AM荧光探针观察细胞内[Ca2+]i瞬间变化;Wertern blot检测心肌细胞Ca N和活化T细胞核因子(nuclear factor 3 of activated T cells,NAFT3)表达。结果:与正常对照组细胞比较,异丙肾上腺素模型组总蛋白含量、细胞体积、细胞面积、钙离子瞬间变化幅度、钙离子频率、Ca N和NAFT3表达分别增加97.90%、56.27%、49.75%、60.60%、56.88%、209.52%和200.00%。丹参酮IIA有效抑制异丙肾上腺素诱导的心肌细胞肥大,丹参酮IIA 10 mol/L组可抑制异丙肾上腺素诱导的心肌肥大,使模型组细胞体积减小49.25%、面积减小32.14%、总蛋白含量降低35.61%、钙离子瞬间变化幅度和频率分别降低34.71%和36.68%,Ca N和NAFT3的表达分别降低50.77%和39.13%。结论:丹参酮IIA可抑制异丙肾上腺素诱导的心肌细胞肥大,其机制可能与抑制Ca2+-Ca N-NFAT3信号通路有关。     

人参皂苷Rg1对异丙肾上腺素致乳鼠心肌细胞肥大及过氧化物酶体增殖活化受体γ辅助活化因子1α的影响

目的:探讨人参皂苷Rg1对异丙肾上腺素致乳鼠心肌细胞肥大的抑制作用及过氧化物酶体增殖活化受体γ辅助活化因子1α(PGC-1α)的影响。方法:原代培养SD乳鼠心肌细胞,用异丙肾上腺素(10μmol/L)诱导心肌细胞肥大,观察核因子-кB(NF-кB)特异性抑制剂BAY11-7082(5μmol/L)及不同浓度人参皂苷Rg1(12.5、25、50μmol/L)对肥大心肌细胞的影响。消化分离法及计算机图像分析系统检测细胞体积;考马斯亮蓝法检测细胞中蛋白的量;RT-PCR法检测心肌细胞心房钠尿肽(ANP)mRNA的表达;Western blotting法检测心肌细胞p65、PGC-1α蛋白的表达;酶联免疫吸附测定(Elisa)法检测细胞外液中三磷酸腺苷(ATP)、单磷酸腺苷(AMP)及游离脂肪酸(FFA)的含量。结果:与正常对照组相比,模型组心肌细胞体积明显增大,总蛋白的量增加,ANP mRNA、p65蛋白表达上调,PGC-1α蛋白表达下调,心肌细胞中FFA含量及ATP/AMP比值减少。人参皂苷Rg1(25、50μmol/L)、BAY11-7082(5μmol/L)均能有效抑制异丙肾上腺素诱导的心肌细胞肥大,使心肌细胞体积减小,总蛋白的量降低,ANP mRNA、p65蛋白表达下调,PGC-1α蛋白表达上调,且上述作用呈一定的剂量相关性。结论:人参皂苷Rg1对异丙肾上腺素诱导乳鼠心肌细胞肥大有保护作用,改善肥大心肌细胞的能量代谢表达水平,其机制可能与抑制NF-кB/PGC-1α信号通路有关。     

刺梨果多糖对肺腺癌A549 细胞增殖、凋亡的作用及机制研究

探讨刺梨果多糖对肺腺癌A549 细胞增殖、凋亡的作用及机制。方法 在0、2、4、6、8、 10 g·L-1 刺梨果多糖干预A549 细胞24、48、72 h 后,采用CCK-8 法检测A549 细胞增殖情况。在0、2、6、 10 g·L-1 刺梨果多糖干预A549 细胞24、48 h 后,采用细胞划痕实验测定A549 细胞的迁移情况;Transwell 实 验测定A549 细胞侵袭情况。在0、2、6、10 g·L-1 刺梨果多糖干预A549 细胞48 h 后,采用流式细胞术（PI 单 染法）测定A549 细胞周期;流式细胞术（Annexin V-FITC/PI 双染法）测定A549 细胞的凋亡情况;Real-Time PCR 法测定A549 细胞的周期、凋亡相关基因表达水平;Western Blot 法测定A549 细胞的周期、凋亡相关蛋白 表达水平。结果 （1）干预24、48、72 h 后,与对照组（0 g·L-1）比较,刺梨果多糖2、4、6、8、10 g·L-1 组的 A549 细胞生长受到显著抑制,细胞的存活率显著降低（P＜0.05,P＜0.01）,刺梨果多糖干预48 h 的IC50 值为 6.109 g·L-1,后续实验采用2、6、10 g·L-1 浓度作为刺梨果多糖低、中、高剂量。（2）干预48 h 后,与对照组比 较,刺梨果多糖2、6、10 g·L-1 组的A549 细胞迁移距离显著增加（P＜0.05,P＜0.01）,细胞侵袭数量显著减少 （P＜0.05,P＜0.01）;刺梨果多糖6、10 g·L-1 组的G0/G1 期、G2/M 期细胞比例均显著升高（P＜0.05,P＜0.01）, S 期的细胞比例显著降低（P＜0.01）;刺梨果多糖2、6、10 g·L-1组A549 细胞的G0/G1、G2/M 期相关调控因子 CDK-4、CDK-6、CyclinD1、CDK-1、CyclinB1 mRNA 及蛋白表达水平均显著下调（P＜0.05,P＜0.01）;A549 细胞的凋亡率均显著升高（P＜0.01）;凋亡相关基因Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9 mRNA 表达显著上调 （P＜0.05,P＜0.01）;促凋亡Bax、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9 蛋白表达显著上调（P＜0.05,P＜0.01）, 抗凋亡Bcl-2 蛋白表达显著下调（P＜0.05,P＜0.01）。结论 刺梨果多糖能够抑制A549 细胞的增殖、迁移和 侵袭,阻滞细胞周期于G0/G1 和G2/M 期,并通过线粒体通路和死亡受体通路诱导A549 细胞凋亡。     

藏荆芥乙醇提取物抗炎作用及机制研究

目的研究藏荆芥乙醇提取物对脂多糖（LPS）诱导的体内外炎症模型的作用及其作用机制。方法将小 鼠随机分为空白对照组、脂多糖模型组、阳性药地塞米松（0.000 5 g·kg-1）组及藏荆芥乙醇提取物低、中、高剂 量组（0.500、1.000、2.000 g·kg-1）,每组10 只。通过腹腔注射脂多糖（0.001 g·kg-1）建立小鼠急性腹膜炎模型, 采用酶联免疫法（ELISA）检测各组小鼠腹腔灌洗液中炎症因子水平。另外,通过脂多糖诱导小鼠巨噬细胞 RAW264.7 建立细胞炎症模型,将RAW264.7 细胞分为空白对照组、脂多糖模型组及不同浓度藏荆芥乙醇提取 物组（25、50、100、200、400 μg·mL-1）,检测细胞存活率以筛选给药浓度;ELISA 法检测藏荆芥乙醇提取物 对促炎因子一氧化氮（NO）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素（IL）-6、IL-1β 的抑制作用;蛋白电泳法检 测促炎介质诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和环氧化酶-2（COX-2）的表达水平,并采用蛋白电泳法和免疫荧光法 检测细胞中NF-κB 通路相关蛋白（p65、p-IκBα、IκBα）的表达水平。结果体内实验中,与脂多糖模型组 比,藏荆芥乙醇提取物中、高剂量组均不同程度降低了小鼠腹腔中TNF-α、IL-6、IL-1β 的表达水平（P＜ 0.05,P＜0.01）。在体外实验中,根据实验结果,与空白对照组比,400 μg·mL-1 的藏荆芥乙醇提取物表现出明 显的细胞毒性（P＜0.01）,而25~200 μg·mL-1 的藏荆芥乙醇提取物对细胞存活率无明显影响（P＞0.05）,用于进 一步实验;与脂多糖模型组比,藏荆芥组NO、TNF-α、IL-6、IL-1β 水平明显降低（P＜0.05,P＜0.01）。蛋白 电泳结果显示,与脂多糖模型组比,不同浓度（150、200 μg·mL-1）的藏荆芥组明显抑制p65、p-IκBα 的表达, 逆转了IκBα 的表达下降,且差异有统计学意义（P＜0.05,P＜0.01）。免疫荧光结果显示,与脂多糖模型组 比,藏荆芥乙醇提取物明显抑制了细胞核中的p65 的表达。结论藏荆芥提取物具有明显的抗炎活性,其作用 机制可能通过抑制NF-κB 通路活化而改善体内、外炎症。     

肾康灵对系膜细胞炎症因子的影响

目的 观察氧化低密度脂蛋白（Oxidized Low-Density Lipoprotein,ox-LDL）对系膜细胞（Mesangial Cells,MCs）分泌炎症介质功能的影 响,并从细胞分子生物学水平阐明肾康灵的作用机理。方法 采用肾康灵含药血清干预增殖系膜细胞的方法,按照随机数字表法分为7组,即正常对照组：DMEM-F12培养液; ox-LDL组：DMEM-F12培养液+ox-LDL（100 μg·mL-1）;ox-LDL+趋化因子受体（CXCR6）组：DMEM-F12培养液+ox-LDL（100 μg·mL-1）+CXCR6;肾康灵低浓度组：DMEM- F12培养液+ox-LDL（100 μg·mL-1）+肾康灵低浓度含药血清;⑤肾康灵高浓度组：DMEM-F12培养液+ox-LDL（100 μg·mL-1）+肾康灵高浓度含药血清;阿托伐他汀低浓度 组：DMEM-F12培养液+ox-LDL（100 μg·mL-1）+阿托伐他汀（50 μmol·L-1）;阿托伐他汀高浓度组：DMEM-F12培养液+ox-LDL（100 μg·mL-1））+阿托伐他汀（100 μ mol·L-1）。以上各组标本培养24 h后收集各组细胞及上清液。每组实验细胞重复培养6次。分别利用ELISA法、RT- RCR 法和Western blot 法检测趋化因子配体16（CXCL16 ）、清道夫受体-B（CD36）、干扰素-γ（IFN-γ）、白细胞介素-6（IL- 6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）基因水平和蛋白含量。结果 利用ox-LDL（100 μg·mL-1））诱 导大鼠系膜细胞增殖并加入CXCR6受体后,CXCL16、CD36、IFN-γ、IL6、TNF-α的基因表达均显著升高（P＜ 0.01）,肾康灵含药血清呈浓度依赖性降低其表达水平,肾康 灵高浓度组降低最显著（P＜ 0.01）。结论 ox-LDL诱导系膜细胞增殖时通过CXCR6介导,可促进CXCL16、CD36、IFN-γ、IL6、TNF-α等炎症介质的释放,肾康灵可通过抑 制炎症介质的释放,保护系膜细胞的功能。     

白藜芦醇对异丙肾上腺素诱导心肌细胞肥大的抑制作用

目的:探讨白藜芦醇对异丙肾上腺素(ISO)诱导的乳鼠心肌细胞肥大的作用及其可能机制。方法:异丙肾上腺素10μmol/L诱导心肌细胞肥大,实验分为:正常组、异丙肾上腺素组、白藜芦醇25μmol/L组、白藜芦醇50μmol/L组、N-[2-[N-(4-氯肉桂)-N-甲基氨基]苯基]-N-(2-羟乙基)-4-甲氧苯磺酰胺磷酸酯盐(KN93)0.2μmol/L组。Lowry法测心肌细胞蛋白含量;鬼笔环肽染色测细胞大小;RT-PCR测细胞内ANP mRNA表达;Fura-2/AM为荧光探针,观察胞内[Ca2+]i瞬间变化,电泳法测定钙调蛋白激酶(Ca MKⅡ)蛋白表达。结果:异丙肾上腺素使心肌细胞蛋白含量增加,细胞体积增大,ANP mRNA表达增加,[Ca2+]i瞬变增加,Ca MKⅡ蛋白表达增高。与异丙肾上腺素组相比,白藜芦醇50μmol/L和KN93 0.2μmol/L组蛋白含量降低,细胞体积减少,ANP mRNA表达降低,[Ca2+]i瞬变降低,Ca MKⅡ蛋白表达降低。结论:白藜芦醇可通过降低胞内[Ca2+]i瞬变和Ca MKⅡ表达抑制异丙肾上腺素诱导的乳鼠心肌细胞肥大。     

真武汤含药血清对异丙肾上腺素致心肌细胞凋亡Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的:观察真武汤含药血清对异丙肾上腺素致大鼠心肌细胞凋亡及相关蛋白Bcl-2、Bax表达的影响,探讨真武汤对心肌细胞损伤的保护作用机制。方法:采用MTT法分别观察于3 h、6 h、12 h三个时间点异丙肾上腺素对心肌细胞活性的影响,测定细胞存活率,选择建立体外心肌细胞损伤模型所需异丙肾上腺素的最佳时间及剂量。筛选真武汤含药血清的最佳浓度。实验分为空白组、模型组[异丙肾上腺素(10-6mol/L)]、西药组[异丙肾上腺素+卡托普利(10-6mol/L)]、真武汤组(异丙肾上腺素+10%含药血清)。硫代巴比妥酸(TBA)法测定细胞丙二醛(maleic dialdehyde,MDA)的含量来衡量心肌细胞的损伤程度。免疫荧光检测线粒体膜电位。应用TUNEL法检测心肌细胞凋亡率。Western blotting方法测定培养心肌细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果:1、异丙肾上腺素对心肌细胞的生长有抑制作用;2、异丙肾上腺素10μmol/L作用6 h后,细胞存活率降低较明显;3、TBA法检测MDA含量:与异丙肾上腺素作用相比,真武汤使心肌细胞内MDA含量减少,使心肌细胞受损伤的程度降低;4、免疫荧光检测线粒体膜电位:模型组与空白组比较线粒体膜电位明显变化,而真武汤与西药组较模型组线粒体荧光表达有所下降;5、TUNEL分析心肌细胞凋亡率:异丙肾上腺素组心肌细胞凋亡率明显升高,与空白组相比有显著性差异(P0.05);卡托普利组及真武汤10%含药血清组心肌细胞凋亡率与异丙肾上腺素组相比明显降低,有显著性差异(P0.05);6、Western Blotting检测结果:异丙肾上腺素组心肌细胞Bcl-2蛋白表达降低、Bax蛋白表达增加,与空白对照组比较有显著性差异(P0.01);真武汤10%含药血清组和西药组与模型组相比较,Bcl-2蛋白表达增加、Bax蛋白表达降低(P0.05)。结论:真武汤能有效降低异丙肾上腺素引起的心肌细胞损伤,抑制异丙肾上腺素诱导的心肌细胞凋亡,其机制可能与其能够保护心肌细胞内线粒体,调节Bcl-2和Bax蛋白表达有关。     

益母草碱对肥大心肌细胞p38MAPK及下游基因表达的影响研究

目的:探讨益母草碱对肥大心肌细胞p38MAPK及下游基因表达的影响。方法:以血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导肥大心肌细胞,在此基础上给予p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)抑制剂(SB203580,10μmol/L)及低、中、高浓度益母草碱(5、10、20μmol/L)干预。分别以[~3H]亮氨酸掺入量、酶联免疫吸附测定(ELISA)和硝酸还原酶法检测心肌细胞蛋白质合成速率以及细胞上清B型利钠肽(BNP)、内皮素-1(ET-1)、AngII和一氧化氮(NO)含量;Real-time PCR法检测心肌细胞ET-1、p38MAPK、肌细胞增强因子2(MEF2)、β-肌球蛋白重链(β-MHC)、α-肌球蛋白重链(α-MHC) mRNA的表达水平。结果:与模型组比较,高剂量益母草碱组心肌细胞蛋白质合成速率、BNP、ET-1及AngII含量明显降低(P0.05),同时ET-1、p38MAPK、 MEF2、β-MHC mRNA表达水平明显下调(P0.05),而NO含量和α-MHC mRNA表达水平明显上调(P0.05)。结论:高剂量益母草碱(20μmol/L)可能通过调节p38MAPK及下游基因表达逆转心肌细胞肥大。     

甘草提取物及其主要成分对Caco-2细胞膜上P-gp功能和表达的影响

 目的 初步考察甘草提取物及其主要成分（甘草甜素、甘草次酸和甘草苷）对Caco-2细胞膜上P-糖蛋白（P-gp）功能和表达的影响，以备进一步探讨甘草新的解毒机制。方法 利用流式细胞术检测Caco-2细胞内罗丹明123（Rho-123）的荧光强度和细胞膜上P-gp的表达，以考察P-gp外排功能和表达水平的变化。结果 经过60 min的干预，甘草提取物(1， 10， 100 μg·mL-1)、甘草甜素(1， 10， 100 μg·mL-1)和甘草苷(1， 10， 100 μg·mL-1)Caco-2细胞内Rho-123的荧光强度较阴性对照组分别降低了34.66%、28.90%、24.56%、27.89%、26.29%、37.33%、19.51%、21.86%和19.03%（P＜0.05）。经过72 h的干预，甘草提取物中质量浓度(10 μg·mL-1)组，甘草甜素低、中、高质量浓度(1， 10， 100 μg·mL-1)组，甘草次酸中、高质量浓度(1， 10 μg·mL-1)组Caco-2细胞膜上P-gp表达的阳性率较阴性组分别增加了31.18%、61.67%、70.32%、77.43%、37.58%和49.14%（P＜0.05）。结论 甘草提取物、甘草甜素和甘草苷可能增强Caco-2细胞膜上P-gp的功能，而中质量浓度的甘草提取物，低、中、高质量浓度的甘草甜素和中、高质量浓度的甘草次酸则可能上调P-gp的表达。甘草甜素既能增强Caco-2细胞膜上P-gp的功能，又能上调其表达，可能是甘草影响P-gp的有效成分。     

淫羊藿苷对异丙肾上腺素诱导的肥大HL-1心肌细胞维生素D受体mRNA表达的影响

目的探讨淫羊藿苷对异丙肾上腺素诱导的小鼠肥大HL-1心肌细胞维生素D受体mRNA相对表达量的影响。方法以2×10~4·ml~(-1)密度接种细胞,用异丙肾上腺素诱导小鼠HL-1心肌细胞损伤,实验分为正常组、模型组、淫羊藿苷低剂量组、淫羊藿苷中剂量组、淫羊藿苷高剂量组、维生素D组。MTT法检测各组HL-1心肌细胞存活率。RealTime PCR法检测各组HL-1心肌细胞维生素D受体mRNA相对表达量。结果 MTT法显示不同剂量的淫羊藿苷均可提高小鼠肥大HL-1心肌细胞的存活率,且淫羊藿苷的浓度在10μmol·L-1时,细胞存活率最高。Real-Time PCR检测结果显示,与模型组比较,不同剂量的淫羊藿苷均可明显下调(P0.05)异丙肾上腺素诱导的小鼠肥大HL-1心肌细胞维生素D受体mRNA相对表达量。结论淫羊藿苷对小鼠肥大HL-1心肌细胞具有保护作用,其机制可能通过维生素D轴调节VDR mRNA表达水平有关。     

吡非尼酮抑制内皮素-1诱导下的乳鼠心肌细胞肥大及其作用机制研究

目的 采用内皮素-1（ET-1）诱导的心肌细胞肥大模型,研究吡啶酮类小分子化合物吡非尼酮（pirfenidone）对心肌肥大标志物如心房钠尿肽（ANP）、B型利钠肽（BNP）、β肌球蛋白重链（β MHC）等的影响,并探讨其作用的分子机制.方法 构建ET-1 诱导离体心肌细胞肥大模型,采用Real-time PCR 法检测吡非尼酮对ANP、BNP、β-MHC 等蛋白表达水平的影响;用实时荧光定量PCR（Real-time PCR）法检测吡非尼酮对ANP、BNP、β-MHC 等mRNA 表达水平,以及转化生长因子β（TGF-β）/SMAD 信号通路分子TGF-β1 及SMAD2、SMAD3 在心肌细胞中的mRNA 表达水平的影响.结果 吡非尼酮能够显著抑制ET-1 诱导下ANP、BNP、β-MHC 蛋白及mRNA 水平的表达,以及TGF-β1 、SMAD2、SMAD3 在心肌细胞中的mRNA 表达.结论 吡非尼酮对ET-1 诱导的心肌细胞肥大具有抑制作用,这一作用可能是通过抑制TGF β/SMAD 信号通路相关分子实现的.     

黄芪甲苷通过CaMKⅡ信号通路对异丙肾上腺素诱导的心肌细胞肥大的保护作用

目的:从钙调素蛋白依赖激酶Ⅱ(Ca MKⅡ)信号通路的角度探讨黄芪甲苷(AsⅣ)对异丙肾上腺素(Iso)诱导乳鼠心肌细胞肥大的保护作用及其可能机制。方法:原代培养新生乳鼠心肌细胞,10 mol/L异丙肾上腺素诱导心肌细胞肥大,观察KN93(Ca MKⅡ抑制剂)、黄芪甲苷3,10,30 mol/L剂量组对肥大细胞的影响。采用消化分离法及计算机图像分析系统检测心肌细胞体积;考马斯亮蓝试剂盒检测心肌细胞中总蛋白含量;罗丹明-鬼笔环肽染色观察细胞骨架;反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测心房利钠肽(ANP)mRNA表达;Wertern blot检测心肌细胞Ca MKⅡ表达。结果:与正常对照组细胞比较,异丙肾上腺素模型组细胞体积、总蛋白含量、ANPmRNA和Ca MKⅡ表达分别增加98.14%、52.63%、87.37%和55.22%。黄芪甲苷可有效抑制异丙肾上腺素诱导的心肌细胞肥大,黄芪甲苷30 mol/L组可抑制异丙肾上腺素诱导的心肌肥大,使模型组细胞体积减小49.67%、总蛋白含量降低33.87%、ANPmRNA表达降低40.00%,Ca MKⅡ的表达降低31.73%。结论:黄芪甲苷可抑制异丙肾上腺素诱导的心肌细胞肥大,其机制可能与抑制Ca MKⅡ信号通路有关。     

NF-κB通路在人参皂苷Rg1抑制异丙肾上腺素诱导心肌肥厚中的作用

目的:探讨人参皂苷Rg1对异丙肾上腺素(ISO)诱导大鼠心肌肥厚的保护作用。方法:以异丙肾上腺素5 mg/(kg·d)腹腔注射制备大鼠心肌肥厚模型,实验分为:①正常组;②异丙肾上腺素组;③异丙肾上腺素+人参皂苷Rg1(1 mg/kg);④异丙肾上腺素+人参皂苷Rg1(2 mg/kg);⑤异丙肾上腺素+人参皂苷Rg1(4 mg/kg);⑥异丙肾上腺素+普萘洛尔组。给药组连续灌胃3周,并于灌胃1天后腹腔注射异丙肾上腺素2周,给药3周后,分别检测各组大鼠全心质量指数、左心室质量指数;取左心室组织进行HE染色,测量左心室心肌细胞横径;ELISA检测血清中TNF-α,IL-6水平;Western blot测定心肌组织中p65,IκBα表达。结果:同正常对照组相比,异丙肾上腺素组大鼠表现为全心质量指数和左心室质量指数显著增加,左心室心肌细胞横径增加,TNF-α,IL-6含量明显增加,p65表达增高而IκBα表达降低。与异丙肾上腺素组相比,人参皂苷Rg1(2、4 mg/kg)组全心质量指数和左心室质量指数和左心室心肌细胞横径不同程度降低,血清TNF-α,IL-6含量减少;p65表达降低而IκBα表达增高。结论:人参皂苷Rg1对异丙肾上腺素诱导的心肌肥厚有保护作用,这种保护作用可能与人参皂苷Rg1降低炎症反应,抑制NF-κB通路有关。