天山雪莲细胞培养技术、化学成分和药理作用研究进展

天山雪莲是我国传统中药材,对于风寒湿痹痛、类风湿性关节炎及小腹冷痛、月经不调有良好的疗效。然而,该药材生境特异,自然繁殖率低,生长慢,长期掠夺性采挖使其野生资源濒临灭绝。应用植物细胞培养技术,通过培养愈伤组织、悬浮细胞和毛状根可获得天山雪莲细胞,是天山雪莲药材的一个新来源。培养技术方面,作者重点综述了反应器类型、培养体系、生物合成前体、诱导子类型以及光谱特性等对雪莲细胞悬浮培养的影响。天山雪莲细胞的化学成分主要有苯丙素类、黄酮类、木脂素类和甾体类等,其中以苯丙素类物质种类最为丰富。药理方面,天山雪莲细胞具有抗炎镇痛、活血化瘀、免疫调节、增加骨密度、降血脂、抗缺氧、抗运动性疲劳、抗辐射、抗肥胖、抗氧化以及治疗再生障碍性贫血等多方面的作用。该研究对天山雪莲细胞的培养技术、化学成分和药理作用进行了综述,为其深入研究和开发利用提供依据。     

不同理化因素对天山雪莲组培苗生长及总黄酮量的影响

目的研究不同理化因素对天山雪莲组培苗生长和总黄酮生物合成的影响。方法测定不同理化因素影响下天山雪莲组培苗干质量和总黄酮量。结果利于天山雪莲生长及黄酮积累的培养条件:MS培养基附加6-BA 0.5 mg/L,NAA 0.05mg/L,氮源浓度40 mmol/L,NH4+-NO3比例为15︰25,碳源蔗糖质量浓度40 g/L,pH值5.0～6.0,光照强度2 500 lx,温度25℃。结论各项最佳培养条件的组合总体上可以促进天山雪莲生长和总黄酮生物合成,氮源、碳源和温度对天山雪莲生长及总黄酮量的影响最为明显。     

天山雪莲愈伤组织培养与次生代谢物形成的研究

目的:研究不同培养条件对天山雪莲愈伤组织生长及总黄酮产生的影响,探讨组织培养生产总黄酮的可能性.方法:通过脱分化培养获得天山雪莲愈伤组织,并对该组织含有的总黄酮进行测定.结果:在MS NAA 6-BA培养基上培养10～15d,能获得紫红色愈伤组织,且总黄酮含量较高;温度梯度、NH4NO3浓度、培养基和培养时间对愈伤组织的生长和总黄酮产生均有显著影响.结果:天山雪莲愈伤组织培养条件对总黄酮产生有影响.     

天山雪莲愈伤组织培养与次生代谢物形成的研究

目的：研究不同培养条件对天山雪莲愈伤组织生长及总黄酮产生的影响，探讨组织培养生产总黄酮的可能性。方法：通过脱分化培养获得天山雪莲愈伤组织，并对该组织含有的总黄酮进行测定。结果：在MS＋NAA＋6-BA培养基上培养10～15d，能获得紫红色愈伤组织，且总黄酮含量较高；温度梯度、NH4NO3浓度、培养基和培养时间对愈伤组织的生长和总黄酮产生均有显著影响。结果：天山雪莲愈伤组织培养条件对总黄酮产生有影响。     

天山雪莲的化学成分研究

菊科风毛菊属植物天山雪莲花Saussurea involucrata Kar．et Kir．分布于我国新疆天山和昆仑山一带，生长在雪线以上。其干燥地上部分为新疆雪莲药材，有温肾助阳、祛风胜湿、通经活血等功效，用于治疗风寒湿痹痛、类风湿性关节炎，小腹冷痛，月经不调。关于天山雪莲的化学成分和药理活性已经有一些研究报道，以前的研究结果表明主要有效成分是黄酮类、生物碱和倍半萜类化合物。     

RP-HPLC测定不同产地不同采集期天山雪莲中绿原酸和芦丁

天山雪莲为菊科植物雪莲Saussureainvolucrata(Kar.et Kir.)Sch.-Bip.的干燥地上部分,系维吾尔族习用药材。维吾尔语名称为“塔格来丽斯”,汉语名称为雪莲或雪莲花,在我国仅分布于新疆维吾尔自治区天山、阿尔泰山,海拔2100～4100m雪先富金石滩石缝中,国外俄罗斯、蒙古、哈萨克斯坦及吉尔吉斯坦也有分布[1～3]。由于雪莲采挖严重,数量日益稀少,已列入国家三级保护植物目录[4]。天山雪莲能补肾活血,强筋骨,温肾助阳,祛风胜湿,用于风湿性关节炎、肺寒咳嗽、月经不调、小腹冷痛等病症的治疗[3～6]。天山雪莲主要含芦丁等黄酮类、紫丁香苷等木…     

天山雪莲培养物对小鼠免疫功能的影响

目的：探讨天山雪莲培养物的免疫作用。方法：小鼠灌胃给予天山雪莲培养物,剂量分别为75、150、300mg/kg,连续给药7天,观察天山雪莲培养物对小鼠碳粒廓清、对DNCB致小鼠迟发型超敏反应和对小鼠溶血素形成的影响。结果：与空白给药组相比,天山雪莲培养物（150mg/kg）对非特异性免疫功能有一定抑制作用;300mg/kg的天山雪莲培养物对小鼠迟发超敏反应有抑制作用,对绵羊红细胞所致小鼠特灵性抗体生成有增强作用。结论：天山雪莲培养物具有调节免疫功能作用。     

天山雪莲对乳腺癌的潜在治疗作用及基于网络药理学的机制探讨

女性乳腺癌作为全球最常见癌症,其发病主要受体内雌激素的影响。天山雪莲作为妇科常用中药,对雌激素所致的疾病具有一定调节作用,然而目前尚未有研究报道天山雪莲对乳腺癌的治疗作用。因此,该研究基于体外实验结合网络药理学探讨天山雪莲对乳腺癌的潜在治疗作用。研究测定了天山雪莲水提物对MDA-MB-231乳腺癌细胞增殖及迁移的抑制活性,结果显示天山雪莲水提物可显著抑制乳腺癌细胞的增殖(IC_(50)=6.47 mg·mL~(-1)),对乳腺癌细胞的迁移也具有抑制作用。研究通过TCMD数据库获得天山雪莲化学成分39个,利用反向找靶技术筛选获取天山雪莲的潜在作用靶点160个,借助OMIM数据库收集乳腺癌疾病靶点1 001个,对两者取交集获得天山雪莲治疗乳腺癌潜在靶点45个;将交集靶点导入STRING数据库中获得交集靶点互作关系并运用Cytoscape构建交集靶点蛋白互作网络;对蛋白互作网络进行拓扑、GO、KEGG分析,获得天山雪莲治疗乳腺癌关键作用靶点8个、关键通路101条、生物过程85条。结果表明,天山雪莲可能通过调控细胞周期,抑制癌细胞增殖、迁移、黏附,以及调节雌激素受体发挥抗乳腺癌的作用。该研究利用体外实验及网络药理学探究了天山雪莲对乳腺癌的潜在治疗作用机制,为天山雪莲的进一步开发提供新的方向。     

天山雪莲的开发与应用

本文总结了近年来天山雪莲在人工种植研究、天山雪莲培养物研发、药物制剂开发及临床应用方面的研究成果,为新疆特色药材天山雪莲的产业化研究提供参考。     

天山雪莲鲨烯合酶SiSQS1和SiSQS2调控β-谷甾醇合成机制研究

目的通过比较天山雪莲Saussurea involucrata细胞中鲨烯合酶Si SQS1和Si SQS2的位点变异、蛋白原核表达及表达水平差异以及下游产物β-谷甾醇量的高低,探索天山雪莲细胞Si SQS1和Si SQS2催化β-谷甾醇合成的机制。方法从天山雪莲细胞中克隆出β-谷甾醇生物合成途径上关键酶Si SQS1与Si SQS2基因,并对其进行生物信息学分析;分别对Si SQS1和Si SQS2进行原核表达与条件优化,比较二者在天山雪莲细胞中的蛋白原核表达差异;采用RT-PCR技术对二者在天山雪莲三色系细胞中的表达水平进行比较,采用GC-MS对雪莲三色系细胞中β-谷甾醇进行定量分析,并对β-谷甾醇量与Si SQS1、Si SQS2表达水平做相关性分析。结果 Si SQS1和Si SQS2在242E/D存在残基变异,原核表达及条件优化实验表明二者都有目的蛋白条带出现,但二者之间的原核表达最适体系不同;化学定量与基因表达水平的相关性分析表明β-谷甾醇量与Si SQS1、Si SQS2基因表达水平呈正相关,相关系数分别为0.92和0.89。结论 Si SQS1与Si SQS2二者242E/D残基变异可能影响Si SQS蛋白的表达,二者在催化活性以及对β-谷甾醇积累调控作用上可能存在一定的功能差异,为研究鲨烯合酶SQS调控天山雪莲细胞β-谷甾醇积累的机制提供了技术支持和奠定了理论基础。     

神奇珍稀的雪莲花

人们知道天山雪莲,多是从电视剧中看到的,常见剧中某侠客,身受重伤,非天山雪莲莫能治。于是,小师妹只身亲赴天山,历尽千辛万苦采得了雪莲,病人服后,沉疾霍然而愈。传说和艺术加工,仅供参考而己,有关天山雪莲的记载,早在唐代已识之,唐代边塞诗人岑参,在读佛经时方知有“优钵罗花”,然而苦难见其“芳容”。     

HPLC测定不同产地天山雪莲药材中紫丁香苷的含量

天山雪莲为菊科植物雪莲Saussurea involucrate（Kar．etKir．）Sch．Bip．的干燥地上部分，系维吾尔族习用药材。收载于《中国药典》2005年版一部，能补肾活血，强筋骨，温肾助阳，祛风胜湿，用于治疗风湿性关节炎，肺寒咳嗽，月经不调，小腹冷痛等症状。天山雪莲化学成分有芦丁等黄铜类、紫丁香苷等木脂素类、大苞雪莲内酯，大苞雪莲碱等生物碱类、多糖类等。采用高效液相色谱法测定雪莲注射液中紫丁香苷含量，以紫丁香苷为参照物研究雪莲和雪莲注射液指纹图谱及不同种雪莲中紫丁香苷含量测定的报道已见，     

藏药雪莲花与天山雪莲抗炎活性的比较

比较西藏雪莲花、天山雪莲经超临界CO2萃取所得浸膏对实验性致炎小鼠的抗炎活性,结果表明：西藏雪莲浸膏的抗炎活性优于天山雪莲浸膏。     

新疆每年限定雪莲流通量为50万盒

据新华社电为保护日渐稀少的国家二级濒危植物雪莲,新疆草原监理部门近日出台新规定,每年限定雪莲流通量为50万盒(每盒1至2株)。乌鲁木齐市草原监理所所长冯立涛说,近年来,由于非法采集和销售活动加剧,每年约有500万株雪莲流入市场,致使大面积草场遭到破坏。 从16日起,新疆草原监理部门派出执法人员,正式进驻出售雪莲等野生植物的集散地,开展集中整治违法收购、加工和经营雪莲的行为。 新疆雪莲生长于天山雪线附近,目前,在海拔3000米的雪线以下已基本看不到雪莲的踪迹。新疆每年限定雪莲流通量为50万盒     

天山雪莲提取物磷脂复合物溶解度及稳定性的考察

目的通过溶解度比较考察天山雪莲提取物磷脂复合物稳定性。方法分别测定天山雪莲提取物和天山雪莲提取物磷脂复合物在水和不同p H的缓冲溶液中平衡溶解度,不同p H的饱和正辛醇/水中表观油水分配系数,和强光照射、高温、高湿环境下,考察天山雪莲提取物磷脂复合物的质量及其有效成分(绿原酸和芦丁)的质量分数变化。结果磷脂复合物可明显提高天山雪莲提取物中活性成分(绿原酸和芦丁)平衡溶解度和表观油水分配系数,而且具有一定的抗光照性,但高温下,磷脂复合物稳定性较差,易吸湿。结论本研究将天山雪莲提取物磷脂复合物能不同程度改善天山雪莲提取物中活性成分的水溶性和脂溶性,同时以固体形式保存其稳定性较好。     

天山雪莲细胞培养物化学成分研究

 目的研究天山雪莲细胞培养物的化学成分。方法对天山雪莲细胞培养物乙醇提取物的各个萃取部位进行反复柱色谱,根据光谱数据和理化性质确定化合物结构。结果从天山雪莲细胞培养物中分离得到5个化合物,分别为β-谷甾醇(1)、胡萝卜苷(2)、3-羟基丁酸八聚体(3)、琥珀酸(4)、紫丁香苷(5)。结论化合物1～5均为首次在天山雪莲细胞培养物中分离得到。     

天山雪莲透皮微乳制备处方优化

目的:优化天山雪莲水包油型微乳处方.方法:以芦丁及绿原酸为指标,采用HPLC测定天山雪莲提取物在各溶媒中的溶解度,初步确定处方组成,绘制伪三元相图对处方进行优化,测定优化处方的黏度、平均粒径、粒径分布等理化性质.结果:Km =1∶2时,伪三元相图形成的微乳区域最大,微乳最佳处方为RH40-1,2-丙二醇-油酸的比例4∶2∶1,微乳平均粒径及黏度符合透皮微乳的要求,在高温、强光下无分层,无絮凝或药物析出.结论:天山雪莲微乳增加了天山雪莲提取物的溶解度,具有粒径小、稳定性好、黏度适宜的特点.     

天山雪莲培养物的毒性实验研究

急性毒性实验:一次性灌胃天山雪莲培养物后,小鼠最大耐受量相当于311.52g/kg生药量。大鼠长期毒性实验结果表明天山雪莲培养物没有明显毒性。给药组与对照组结果均无明显差异(P≥0.05)。结果提示天山雪莲培养物在本实验条件下对小鼠和大鼠均无明显的毒性反应。     

基于系统药理学对天山雪莲活性成分的预测

目的:通过系统药理学方法预测天山雪莲的活性成分,并验证预测结果。方法:在中药系统药理学分析平台(traditional Chinese medicine systems pharmacology,TCMSP)数据库收集天山雪莲中的成分,利用类药性(druglikeness,DL)筛选出活性化合物;构建化合物-靶点、靶点-疾病分类、癌症-靶点关系图,预测天山雪莲治疗疾病的机制;磺酰罗丹明B(sulforhodamine B,SRB)比色法测定不同浓度天山雪莲注射液对非小细胞肺癌A549的抑制率,酶联免疫吸附测定法(enzymelinked immuno sorbent assay,ELISA)检测不同药物浓度处理的A549中前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)的含量。结果:筛选出24种活性化合物;随药物浓度增加对A549的抑制率随之升高,抑制率在质量浓度为110 mg·L-1时最高为86.22%;不同质量浓度药物干预后,A549细胞中PGE2分泌量较无药物干预组均有不同程度的降低(P0.05)。结论:采用系统药理学方法预测了天山雪莲作用机制,通过实验验证此预测方法比较可靠,为天山雪莲药理作用的研究提供了新的研究方法。     

天山雪莲培养物对辐射损伤的保护功能研究

目的:考查天山雪莲培养物对小鼠辐射损伤的保护作用。方法:经口给予小鼠不同剂量的以天山雪莲培养物为主要成分的雪神胶囊30d后,对各组小鼠以60Co-γ射线一次性照射,比较照射后小鼠外周血白细胞数、骨髓细胞微核率、血中超氧化物歧化酶活性及体重等指标与对照组的差异。结果:与对照组比较1,·2 g/kg BW组(即48mg/kg BW天山雪莲培养物)能够极显著提高辐射后第3天辐射损害模型小鼠外周血白细胞数(P<0·01),显著提高辐照后第14天辐射损害模型小鼠外周血白细胞数(P<0·05),显著降低辐射损害模型小鼠骨髓细胞微核率(P<0·05),显著提高辐射损害模型小鼠血中超氧化物歧化酶活性(P<0·05)。结论:天山雪莲培养物对辐射损伤具有较好的保护功能,且对试验小鼠体重增长无不良影响。