四物汤对辐射致血虚证小鼠血清蛋白质表达的影响

目的 :用蛋白质组技术考察四物汤对血虚证小鼠血清蛋白的影响 ,在分子水平上探讨四物汤补血的作用机理。方法 :⁶⁰Coγ射线全身照射小鼠造成血虚证模型 ;二向电泳、图象分析、质谱鉴定等蛋白质组学技术测定四物汤对血虚证小鼠血清中有影响的蛋白。结果 :四物汤可使血虚证小鼠血清中 12个下调和 4个上调的蛋白质有所恢复 ,进一步质谱鉴定其中 4个蛋白质可能是DNA依赖蛋白激酶 (DNA -dependent protein kinase catalytic sub unit,P973 13 ) ,肌细胞增强蛋白 (dystrophin ,P11531) ,马达蛋白 (KIF13A ,Q9EQW7) ,肌动蛋白结合蛋白 (dys-tonin ,Q9QX20 )。它们的功能是参与DNA双链损伤的修复 ,与AP-1结合将 6-磷酸甘露糖受体从高尔基体转运到胞浆膜上 ,将细胞骨架铆定在胞浆膜上等。结论 :四物汤可能通过对血虚证小鼠血清中蛋白的影响而促进骨髓造血、减轻辐射引起的损伤。     

四物汤对放射线致血虚证小鼠骨髓蛋白质表达的影响

目的 :观察四物汤对血虚证小鼠骨髓蛋白质表达的影响 ,为阐明四物汤补血作用的分子机理提供理论和实验依据。方法 :采用 3.5Gy⁶⁰Coγ射线全身 1次性照射 ,制备小鼠血虚证模型。利用双向电泳、图像分析、胶内酶切、质谱鉴定等蛋白质组学技术 ,结合生物信息学 ,分离、分析、鉴定蛋白质。结果 :四物汤可以逆转放射线致血虚证小鼠骨髓 10个上调和 5个下调的蛋白质。其中 8个蛋白质可能分别是淋巴细胞特异性蛋白质 1、蛋白酶体26SATP酶亚组分 4、造血细胞蛋白质酪氨酸磷酸酶、H-ras、3-磷酸甘油醛脱氢酶、生长因子受体结合蛋白 14及Lgals12。结论 :四物汤能调节骨髓蛋白质表达 ,并可能由此促进造血细胞的生长和分化 ,发挥补血作用。     

四物汤对γ射线照射致血虚证小鼠造血细胞作用的研究

探讨四物汤预防和治疗血虚证的作用机理。用⁶⁰Coγ射线全身照射小鼠造成血虚证模型;荧光标记并用流式细胞仪测定CD34⁺细胞在骨髓有核细胞中的比例;细胞固定后PI染色测定细胞周期;Annexin V-FITC试剂盒和DNA凝胶电泳检测骨髓细胞的凋亡。结果:四物汤对小鼠骨髓造血干祖细胞、外周血细胞的恢复有明显促进作用;有保护骨髓和促进骨髓细胞由G₁期进入S期的效应;四物汤可减轻射线引起的细胞凋亡;促进骨髓造血干祖细胞的增殖,抑制骨髓造血干祖细胞的凋亡是四物汤预防和治疗血虚证的机制之一     

四物汤对环磷酰胺所致血虚证小鼠造血细胞作用的研究

探讨四物汤治疗环磷酰胺所致小鼠血虚证的作用机理。腹腔注射环磷酰胺制成小鼠血虚证模型;测定小鼠外周血象;骨髓细胞集落形成;CD34^ 细胞在骨髓有核细胞中的比例;小鼠胸腺指数。结果表明四物汤具有明显促进骨髓造血和增强免疫的作用,并可升高血虚证小鼠的外周血象。四物汤增强免疫、促进造血可能是四物汤治疗小鼠血虚证的机理之一。     

环磷酰胺所致血虚证小鼠骨髓CD34^＋细胞的变化

目的：研究环磷酰胺（CTX）诱发的血虚证小鼠骨髓中干祖细胞的数量和骨髓细胞周期的动态变化。方法：采用CTX大小两个剂量分别对两组小鼠进行腹腔注射制作小鼠血虚证模型,在不同时相点,双荧光标记测定CD34^ 细胞在骨髓有核细胞中的比例,骨髓细胞固定后PI染色测定细胞周期。结果：（1）注射CTX后CD34^ 细胞在骨髓有核细胞中的比例下降后迅速上升,然后又下降。（2）注射CTX后骨髓细胞增殖受抑,然后动员骨髓细胞增殖,但药后10d细胞增殖又受抑。与CD34^ 细胞在骨髓有核细胞中比例的变化规律有一致性。结论：CTX可以动员骨髓造血干祖细胞进入细胞周期而增殖,增加了骨髓中造血干祖细胞的数量,但此过程加速了干祖细胞池的耗竭,从而对骨髓造成更大损伤,这厅能是CTX诱发小鼠血虚证的机理之一。     

四物汤对放射线致血虚证小鼠骨髓Epo和G-CSF基因表达的影响

目的:考察四物汤对放射线致血虚证小鼠的生血作用及对骨髓Epo,G-CSF基因表达的影响,为阐明四物汤补血作用的分子机制提供依据。方法:采用3.5Gy⁶⁰Coγ射线全身1次性照射,制备小鼠血虚证模型;检测外周血象;骨髓集落培养观察并计数CFU-GM,BFU-E,CFU-E,CFUmix;RTPCR检测骨髓Epo和G-CSF基因表达。结果:四物汤显著升高放射线致血虚证小鼠外周血白细胞数量和骨髓CFUGM,BFUE,CFUE,CFUmix数量,上调骨髓Epo和GCSF基因表达。结论:四物汤促进骨髓细胞Epo和G-CSF基因的表达可能是其生血作用的机制之一。     

四物汤对综合放血法致小鼠血虚证造血功能的影响

目的:观察四物汤对综合放血法致小鼠血虚证造血功能的影响,为比较四物汤对不同血虚证模型补血作用提供实验依据。方法:每日按75g·kg^-1体重限食,隔日游泳20min及放血0.4mL共15d,建立小鼠血虚证模型。提前7d,四物汤小,中,大剂量组分别按每天5,10,20g·kg^-1给予四物汤至造模结束,通过血细胞计数仪及流式细胞仪等分析手段,检测外周血象、骨髓细胞周期、骨髓细胞凋亡和CD34⁺细胞数。结果:四物汤小,中,大剂量组可以使血虚证小鼠红细胞由第7天最低值4.6×10¹²·L^-1,分别显著升高到6.5,7.1,7.0×10¹²·L^-1;在第15天,使血虚证小鼠S期骨髓细胞数由11.53%,分别显著增加到14.34%,14.03%,13.58%。结论:四物汤可以在一定程度上逆转综合放血致小鼠的造血损伤。     

四物汤及其提取物对辐射致血虚证小鼠造血作用的研究

【目的】探讨四物汤及其提取物治疗辐射致血虚证小鼠的作用机制和有效物质基础。【方法】γ射线全身照射小鼠制成血虚证模型,观察四物汤对其外周血和造血祖细胞集落的影响,基因芯片检测有效单体芍药苷的分子作用机制。【结果】四物汤、正丁醇提取物、水溶提取物对血虚证小鼠外周的白细胞的恢复有明显促进作用;四物汤和芍药苷增强血虚证小鼠骨髓造血干祖细胞的集落形成能力;芍药苷可促进骨髓基质细胞分泌造血因子(G—CSF,GM—CSF,PDGF—α)等,抑制造血抑制因子(M—CIP)的分泌。【结论】四物汤补血的物质基础可能是芍药苷,促进骨髓基质细胞分泌G—CSF,GM—CSF,PDGF-α等造血因子可能是四物汤补血的作用机制之一。     

环磷酰胺所致血虚证小鼠骨髓CD34~ 细胞的变化

目的 :研究环磷酰胺 (CTX)诱发的血虚证小鼠骨髓中干祖细胞的数量和骨髓细胞周期的动态变化。方法 :采用CTX大小两个剂量分别对两组小鼠进行腹腔注射制作小鼠血虚证模型。在不同时相点 ,双荧光标记测定CD34 细胞在骨髓有核细胞中的比例 ,骨髓细胞固定后PI染色测定细胞周期。结果 :①注射CTX后CD34 细胞在骨髓有核细胞中的比例下降后迅速上升 ,然后又下降。②注射CTX后骨髓细胞增殖受抑 ,然后动员骨髓细胞增殖 ,但药后 10d细胞增殖又受抑。与CD34 细胞在骨髓有核细胞中比例的变化规律有一致性。结论 :CTX可以动员骨髓造血干祖细胞进入细胞周期而增殖 ,增加了骨髓中造血干祖细胞的数量 ,但此过程加速了干祖细胞池的耗竭 ,从而对骨髓造成更大损伤 ,这可能是CTX诱发小鼠血虚证的机理之一。     

四物汤对γ射线照射致血虚证小鼠造血细胞作用的研究

探讨四物汤预防和治疗血虚证的作用,用60 Coγ射线身全照射小鼠造成血虚证模型;荧光标记并用流式细胞仪测定CD34＋细胞在骨髓有核细胞中的比例,细胞固定后PI染色测定细胞周期,Annexin V-FITC试剂盒和DNA凝胶电泳检测骨髓细胞的凋亡,结果：四物汤对小鼠骨髓造 血干祖细胞,外周血细胞的恢复有明显促进作用,有保护骨髓和促进骨髓细胞由G1期进入S期的效应,四物汤可减轻射线引起的细胞凋亡,促进骨髓造血干祖细胞的增殖,抑制骨髓造血干祖细胞的凋亡是四物汤预防和治疗血虚证的机制之一。     

四物汤对人骨髓基质细胞蛋白质表达的作用

目的：考察四物汤对骨髓基质细胞HFCL增殖及蛋白质表达的影响,探讨四物汤补血作用的分子机制。方法：分别用MTT法、流式细胞术和蛋白质组学方法测定四物汤对HFCL增殖、细胞周期及蛋白质表达的影响。结果：四物汤能促进HFCL的增殖,提高其增殖指数,并使HFCL的12种蛋白质表达上调,5种下调。结论：四物汤能促进HFCL增殖,作用于多个蛋白质靶点,间接发挥补血作用。     

四物汤对血虚证患者血清蛋白质的影响

目的:用蛋白质组学技术考察四物汤对血虚证患者血清蛋白的影响,在分子水平上探讨四物汤治疗血虚证的作用机制。方法:收集正常、血虚证患者和四物汤用药患者的血清,用二向电泳、图像分析、质谱鉴定等蛋白质组学技术测定四物汤对血虚证患者血清中有影响的蛋白质。结果:蛋白质组学研究发现,血虚证患者血清与正常相比有15个蛋白质的水平发生改变,其中有11个上调和4个下调,四物汤可使这些改变的蛋白质水平有所恢复。胶内酶切提取蛋白进行质谱鉴定,其中血虚证患者血清与正常相比升高的蛋白质有结合珠蛋白,聚集素,补体C4B,GTP结合蛋白2,与正常相比降低的蛋白质有转甲状腺素蛋白,血红蛋白β。血虚证患者服用四物汤后可降低结合珠蛋白,聚集素,补体C4B,GTP结合蛋白2,升高转甲状腺素蛋白,血红蛋白β。结论:四物汤可以通过增强免疫,减轻基因损伤,增加血红蛋白等途径治疗血虚证。     

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??OBJECTIVE To study the blood enriching effect and mechanism of Jiuweiejiao ointment on mouse model of blood deficiency syndrome.METHODS Blood deficiency syndrome model was established with cyclophosphamide(CTX) and acetylphenylhydrazine(APH). Total of 60 ICR mice were divided into normal group, model group, Siwu granule group, Jiuweiejiao ointment high-dose, medium-dose and low-dose group (15.6, 7.8, 3.9 g??kg^-1). Each group mouse were treated with the respective drug through intragastrical administration once a day for consecutive 14 d. The levels of red blood cells (RBC), leukocytes (WBC), hemoglobin (HGB) level in blood of mice were detected by blood analyzer; the histopathological changes of bone marrow were determined by HE staining; the levels of erythropoietin (EPO), interleukin-3 (IL-3), tumor necrosis factor-?? (TNF-??), granulocyte colony stimulating factor (G-CSF) and granulocyte-macrophage colony stimulating factor (GM-CSF) in serum were measured by enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) method; the expression level of EPO protein in kidney tissue, G-CSF and GM-CSF protein in bone marrow tissue were detected by Western-blot method.RESULTS Compared with model group, Jiuweiejiao ointment could significantly increase the levels of RBC, WBC and HGB in blood of mice, markedly improve bone marrow hyperplasia, reduce the non-hematopoietic tissue and adipocytes, obviously repaire the hematopoietic tissue structure; significantly decrease the level of TNF-?? and increase the level of EPO, IL-3, G-CSF and GM-CSF in serum. In addition, Jiuweiejiao ointment could also obviously increase the expression of EPO protein in kidney tissue and G-CSF, GM-CSF protein in bone marrow tissue compared with that in model group.CONCLUSION Jiuweiejiao ointment has obvious blood enriching effects, which may be related with promoting the secretion of hematopoietic growth factors and reducing the inhibition of hematopoietic function by negative hematopoietic factor.     

基于nano LC-LTQ-Orbitrap-MS/MS的香附四物汤干预原发性痛经模型小鼠卵巢组织差异表达蛋白筛选

采用nano LC-LTQ-Orbitrap-MS/MS蛋白质组学方法筛选鉴定香附四物汤干预原发性痛经模型小鼠卵巢组织中的差异表达蛋白,推测香附四物汤治疗原发性痛经的机制。采用雌激素和缩宫素联合造成原发性痛经模型,给药组连续灌胃给予香附四物汤3 d,于末次给药后1 h,取卵巢,经蛋白提取、变性、还原、烷基化、脱盐、酶解后,进行nano LC分离并在线连接电喷雾串联Orbitrap质谱分析,利用Thermo Proteome discoverer 1.4进行数据处理,筛选并鉴定差异表达蛋白,对差异表达蛋白进行生物信息学分析。随后采用Western blot法,将重要差异蛋白进行验证。正常组、模型组、给药组3组共有的差异蛋白106个,参与细胞过程的蛋白所占比例较大,其所参与的黏着连接、黏着斑等信号通路对细胞内各种信号通路均有调节作用。验证的ADRM1蛋白在模型组中,较正常组表达上调;给药后,较模型组表达下调。通过有效的比较分析,得到一些香附四物汤干预原发性痛经的差异表达蛋白,其中ADRM1蛋白有可能是香附四物汤作用的靶点。     

复方活血汤对免疫诱导再生障碍性贫血小鼠骨髓微环境的作用研究

目的 :探讨临床上治疗再生障碍性贫血 (再障 )加用活血化瘀药物提高疗效的机制。方法 :建立免疫介导的再障小鼠模型 ,胃饲 1 0 0 %复方活血汤注射液每次 0 2ml,每天 2次 ,第 1 0天观察骨髓组织学、体外成纤维细胞集落形成单位 (CFU -F)、培养基质细胞层的粘附能力 ,骨髓氧分压 (PO2 )。结果 :复方活血汤组小鼠白细胞计数 ,骨髓有核细胞计数 ,骨髓造血组织容量、CFU -F计数 ,均较再障组有明显升高 (P <0 0 1 ) ;且基质细胞粘附功能、骨髓PO2 已恢复至正常。结论 :复方活血汤可促进再障小鼠骨髓微环境的修复及供氧 ,从而促进骨髓造血。     

桃红四物汤Ⅱ号抑制小鼠B16黑色素瘤生长及VEGF,KDR/FLK-1表达

目的:观察桃红四物汤Ⅱ号对小鼠B16黑色素瘤生长、血管内皮生长因子(VEGF)和血管内皮生长因子受体-2(KDR/FLK-1)表达及肿瘤微血管密度(MVD)值的影响。方法:采用C57BL/6J小鼠皮下接种B16黑色素瘤细胞建立模型,分别给予2.5,5,10 g.kg^-1桃红四物汤Ⅱ号水煎剂、环磷酰胺0.05 g.kg^-1及联合用药桃红四物汤Ⅱ号10 g.kg^-1+环磷酰胺0.025 mg.kg^-1,检测各组肿瘤体积、重量、VEGF和KDR/FLK-1表达及肿瘤MVD值。结果:桃红四物汤Ⅱ号5,10 g.kg^-1及联合用药组肿瘤体积、重量、VEGF和KDR/FLK-1表达及肿瘤MVD值均较生理盐水组明显降低(P<0.01)。结论:桃红四物汤Ⅱ号能抑制小鼠B16黑色素瘤的生长,其抗肿瘤机制可能与抗血管生成作用有关。