不同药物对急性心功能不全大鼠模型作用比较

目的:建立稳定戊巴比妥钠致大鼠急性心功能不全模型并比较不同种类抗心功能不全药物的作用差异,籍此探讨该动物模型的适用性。方法:将雄性Wistar大鼠分为模型组、多巴酚丁胺组、去乙酰毛花苷组及黄芪注射液组,采用戊巴比妥钠股静脉给药方法建立大鼠急性心功能不全模型,即时用多巴酚丁胺(100μg·kg-1)、去乙酰毛花苷(0.1 mg·kg-1)或黄芪注射液(4 mL·kg-1)静脉给药干预,全过程中使用四道生理仪监测心电图、左心室内压等指标的变化,观察药物治疗效果1～2 h。结果:使用戊巴比妥钠建立的稳定大鼠急性心功能不全模型,左室内压峰值(LVSP)及左室压最大上升速率(dp.dt max-1)等各项指标降至初始值60%～70%并持续90 min以上。给予多巴酚丁胺治疗后2 min左右LVSP及dp.dtmax-1均明显回升至初始值90%以上(P<0.05),给予黄芪注射液治疗后20 min左右LVSP及dp.dtmax-1也明显回升至初始值90%左右(P<0.05),但使用去乙酰毛花苷注射液治疗后未观察到指标明显改善现象。结论:使用戊巴比妥钠可建立较为稳定大鼠急性心功能不全模型,此模型比较适用于多巴酚丁胺类药物及黄芪注射液的药理及药效研究,而不太适用于去乙酰毛花苷类药物的药效及深入机制研究。     

肥大细胞类过敏反应脱颗粒的实时动态检测方法

目的 建立实时、动态、直接的肥大细胞脱颗粒光学成像检测方法.方法 将囊泡表面特异性分子CD63与绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)的基因融合后,通过质粒转染入细胞中,建立稳定表达CD63-GFP蛋白的鼠肥大细胞株(RBL-2H3细胞).之后利用激光扫描共聚焦显微镜及全内反射显微镜分别观察细胞内囊泡在过敏原刺激下脱颗粒时的运动状况.结果 成功建立稳定表达CID63-GFP的RBL-2H3细胞株;在类过敏原的刺激下,用激光扫描共聚焦显微镜观察到了细胞脱颗粒过程中,细胞内囊泡向细胞外脱出的过程,同时,用全内反射显微镜观察到了细胞内囊泡与细胞膜融合的过程.结论 本研究在活细胞状态下,实时、直观、灵敏、快速地观察到肥大细胞脱颗粒的过程,直接评估过敏原刺激肥大细胞脱颗粒的特性,为类过敏反应的检测提供了新的检测手段.     

肿瘤细胞迁移过程的动态评估方法

目的建立肿瘤细胞迁移过程的多角度、实时动态、定量评估方法。方法建立细胞迁移观测模型,分别加入小檗碱及Rg3培养24h,用活细胞工作站随机选取8个不同观测点,连续观测24h。所取得的数据从迁移面积、距离、单个细胞迁移速度、单位面积细胞增殖数量等多角度进行分析。结果该方法可以长时间观察划痕内细胞的迁移过程;小檗碱高、中剂量组(25,12.5μmol·L-1)可抑制A549细胞的迁移过程(P<0.01),且迁移面积、距离、速度及细胞增殖数量4项指标的结果基本一致,人参皂苷Rg3(0.1mmol·L-1)可以在各时间点(6,12,24h)抑制细胞迁移速度(P<0.01),24h可抑制细胞迁移面积及距离(P<0.01),但可促进细胞增殖(P<0.01)。结论该方法灵敏、简便、快速,可广泛应用于细胞迁移过程的动态观察。     

小檗碱对人高转移肺癌细胞与脐静脉内皮细胞黏附的影响

目的： 探讨小檗碱对人高转移肺癌细胞株PG细胞与人脐静脉内皮细胞（HUVECs）黏附的影响及其机制。方法：用MTT法检测不同浓度（2.5-40 mg/L）的小檗碱对HUVECs增殖的影响,用2.5、5和10 mg/L小檗碱分别处理人高转移肺癌细胞株PG细胞6、12和24 h, 用虎红染色法测定小檗碱对PG细胞与HUVECs黏附能力的影响, 用荧光抗体染色法测定小檗碱对PG细胞表面黏附分子CD44s表达的影响, 用双光子各向异性度成像系统观察小檗碱对PG细胞膜流动性的影响。结果：（1）2.5、5和10 mg/L小檗碱作用HUVECs 6、12和24 h后对其生长无影响。（2）用不同浓度小檗碱处理PG细胞6、12和24 h后,与TNF-α刺激后的HUVECs相互作用后,能够显著抑制其黏附率,且呈浓度依赖性(P<0.05, P<0.01)。（3）各剂量组的小檗碱均能使PG细胞表面的CD44s分子表达增高（P<0.05或P<0.01）。（4）小檗碱作用PG细胞24 h后能够抑制PG细胞膜的流动性,且随药物浓度的升高这种抑制作用增强。结论：小檗碱对PG细胞与HUVECs的黏附具有抑制作用,可能与小檗碱增加PG细胞表面黏附分子表达、降低其细胞膜流动性有关。     

激光扫描共聚焦显微镜技术及其在生物医学领域中的应用

本文概述了激光扫描共聚焦显微镜技术在生物医学领域中的应用、与其他手段联用的拓展潜能,同时指出其存在的光漂白、光毒性等缺点,展望了激光扫描共聚焦显微镜的应用前景.     

荧光标记及检测技术在中药大分子活性示踪中的应用

综述了近年来中药大分子荧光标记的方法及应用,探讨了生物光子学检测技术在中药大分子活性示踪中的潜在应用前景,对阐明中药大分子的作用机制、实现对混合未知多组分中药大分子的荧光标记提出新思路,具有重要的意义。     

基于MDCK细胞单层的药物早期肾毒性检测初探

目的: 初步探索基于犬肾小管上皮细胞(Madin-Darby canine kidney, MDCK)细胞单层的药物早期肾毒性检测方法。方法: 将MDCK细胞培养于微孔滤膜上,待其形成完整的细胞单层。通过MTT试验分别选择对MDCK细胞没有明显抑制及具有明显抑制的不同质量浓度作用于细胞单层,24 h后进行荧光素钠透过性试验以及细胞单层两侧分泌的碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)、γ-谷氨酰转肽酶(γ-glutamyl transpeptidase, γ-GT)和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)活性检测,同时用扫描电镜观察细胞单层结构。结果: 选择3.13,6.25,12.5 mg·L^-1 3种质量浓度的马兜铃酸(aristolochic acid,AA)进行毒性检测,其对MDCK细胞生长的抑制率分别为-0.93%,0.93%和24.30%。AA 3.13 mg·L^-1没有对细胞单层的完整性造成破坏,荧光素钠不能透过细胞单层,而AA 6.25,12.5 mg·L^-1在与细胞作用30 min后,能明显增加荧光素钠的透过(P<0.05,P<0.1),其中12.5 mg·L^-1造成的荧光素钠透过率增加更多。各组细胞单层两侧ALP,γ-GT的分泌没有明显改变,但12.5 mg·L^-1能使LDH的分泌显著增加(P<0.05)。扫描电镜观察显示,AA 6.25,12.5 mg·L^-1组细胞单层结构被破坏,表面出现大量小球状物体,细胞单层破损而变得不完整,有不同程度的微孔滤膜露出。结论: 基于MDCK细胞单层,在AA对细胞生长没有明显抑制的浓度(6.25 mg·L^-1),可以检测到药物对细胞的毒性损伤,提示建立在微孔滤膜上的MDCK细胞单层体系可以用于药物肾毒性的早期检测。     

针药结合增效机制研究的新思路探讨

临床实践证明,包括穴位注射在内的针灸与药物的结合应用可以产生更好的疗效。而针药结合增效作用的机制迄今不甚清楚。本文结合既往的研究,提出针灸可能通过影响药物在体内的吸收、分布和代谢过程等,从而改变血药浓度、靶器官药物浓度或药物的生物利用度,也可通过影响靶器官细胞上特异性受体及其信号转导路径而改变细胞对药物的反应性或敏感性,最终提高药物的疗效。上述思路将可能为针药结合增效机制的研究提供新的线索。     

激光扫描共聚焦显微镜技术及其在生物医学领域中的应用

本文概述了激光扫描共聚焦显微镜技术在生物医学领域中的应用、与其他手段联用的拓展潜能,同时指出其存在的光漂白、光毒性等缺点,展望了激光扫描共聚焦显微镜的应用前景.     

四物汤对放射线致血虚证小鼠骨髓Epo和G-CSF基因表达的影响

目的:考察四物汤对放射线致血虚证小鼠的生血作用及对骨髓Epo,G-CSF基因表达的影响,为阐明四物汤补血作用的分子机制提供依据。方法:采用3.5Gy⁶⁰Coγ射线全身1次性照射,制备小鼠血虚证模型;检测外周血象;骨髓集落培养观察并计数CFU-GM,BFU-E,CFU-E,CFUmix;RTPCR检测骨髓Epo和G-CSF基因表达。结果:四物汤显著升高放射线致血虚证小鼠外周血白细胞数量和骨髓CFUGM,BFUE,CFUE,CFUmix数量,上调骨髓Epo和GCSF基因表达。结论:四物汤促进骨髓细胞Epo和G-CSF基因的表达可能是其生血作用的机制之一。