HPLC测定独活寄生汤水提物中芍药苷、盐酸川芎嗪、蛇床子素的含量

目的建立独活寄生汤水提物中芍药苷、盐酸川芎嗪、蛇床子素的HPLC分析方法。方法色谱柱:UltimateTM XB-C18（250 mm×4.6 mm,5μm）;流动相:A（水）∶B（甲醇）=010 min,60∶40;1012 min,20∶80;1222 min,20∶8;流速:1.0 m L/min;进样体积:10μL;紫外检测器波长:230 nm;柱温:30℃。结果 HPLC检测独活寄生汤水提物中芍药苷、盐酸川芎嗪及蛇床子素的含量分别为0.100 7%、0.003 1%、0.015 6%。结论 HPLC分析方法可用于独活寄生汤水提物中芍药苷、盐酸川芎嗪、蛇床子素的含量测定,为独活寄生汤水提物质量控制提供参考。     

独活寄生汤水提物对软骨细胞G1期调控因子mRNA表达的影响

目的: 探讨独活寄生汤水提物对软骨细胞G₁期的影响。 方法: 取4周龄雄性SD大鼠,建立软骨细胞体外培养体系,第3代软骨细胞进行干预,采用MTT法检测不同浓度的独活寄生汤水提物对软骨细胞活性的影响;RT-PCR检测空白组、独活寄生汤水提物低、中、高剂量组(100,200,400 mg·L^-1)软骨细胞Cyclin D1,CDK4,CDK6及P21 mRNA的表达。 结果: MTT法检测显示,在一定的药物质量浓度范围内(50~800 mg·L^-1),软骨细胞活性显著上升(P<0.01);干预24 h后,Cyclin D1,CDK4及CDK6 mRNA表达量各剂量组明显增加(P<0.05),200 mg·L^-1表达量最大(P<0.01);P21 mRNA表达量降低,且200 mg·L^-1抑制作用最明显(P<0.01)。 结论: 独活寄生汤水提物通过影响软骨细胞G₁期调控因子mRNA的表达,促进软骨细胞的增殖。     

独活寄生汤拆方水提物对软骨细胞活性的影响

目的观察独活寄生汤拆方水提物对软骨细胞活性的影响。方法将独活寄生汤分为祛风湿止痹痛、益肝肾、补气血3个拆方的水提物,浓度为0、100、200、400、800μg/mL作用于体外培养软骨细胞48 h,用MTT法检测其对软骨细胞活性的影响。结果祛风湿止痹痛方、益肝肾方水提物200μg/mL干预后,软骨细胞活性高于对照组(P<0.05);补气血方水提物400μg/mL干预后,软骨细胞活性高于对照组(P<0.05)。结论独活寄生汤拆方的水提物有不同程度的促进软骨细胞增殖作用,以祛风湿止痹痛方的作用最明显。     

透骨消痛胶囊含药血清对软骨细胞Cyclin D1 mRNA表达的影响

目的:观察透骨消痛胶囊含药血清对软骨细胞CyclinD1 mRNA表达的影响,探讨透骨消痛胶囊治疗骨性关节炎的可能作用机制.方法:采用抽签法将16只12周龄雄性新西兰大白兔随机分为空白组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,每组4只.低剂量组按5 mL·kg-体质量以5 mg·mL-1透骨消痛胶囊溶液灌胃,中剂量组按5 mL·kg-体质量以10 mg·mL-1透骨消痛胶囊溶液灌胃,高剂量组按5 mL·kg-1体质量以20 mg·mL-1透骨消痛胶囊溶液灌胃,空白组按5 mL·kg-1体质量以生理盐水灌胃.每天灌胃2次,连续7d,最后1d连续2次灌胃,中间间隔2h.末次灌胃后3h提取各组实验兔含药血清低温保存备用.将6只4周龄雄性新西兰兔处死,取其膝关节软骨,置入盛有Ⅱ型胶原酶的培养皿中进行消化,建立软骨细胞体外培养体系,并采用甲苯胺蓝染色法鉴定细胞功能.将体外培养的第3代软骨细胞随机分为空白组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,并分别加入含空白血清、低剂量中药血清、中剂量中药血清、高剂量中药血清的DMEM培养液中继续培养72 h后,采用MTT法检测软骨细胞的增殖情况,采用RT - PCR法检测CyclinD1 mRNA的表达,并在透射电子显微镜下观察细胞形态.结果:Ⅱ型胶原酶消化法成功建立了软骨细胞的体外培养体系,甲苯胺蓝染色可见软骨细胞内呈紫红色异染颗粒.干预72 h后,各组软骨细胞光密度值比较,差异有统计学意义(F=6.209,P=0.004);中剂量组、高剂量组软骨细胞光密度值高于空白组(P=0.005,P=0.002);中剂量组、高剂量组软骨细胞光密度值高于低剂量组(P =0.034,P=0.011).各组软骨细胞CyclinD1 mRNA表达量比较,差异有统计学意义(F=8.262,P=0.001);中剂量组、高剂量组软骨细胞CyclinD1 mRNA表达量高于空白组(P=0.002,P=0.001);中剂量组、高剂量组软骨细胞CyclinD1 mRNA表达量高于低剂量组(P =0.012,P=0.004);中剂量组、高剂量组可见较多处于分裂期的细胞.结论:透骨消痛胶囊的含药血清能促进软骨细胞G1期正性调节因子CyclinD1 mRNA的表达,从而促进软骨细胞增殖,这可能是透骨消痛胶囊在临床上治疗骨性关节炎具有较好疗效的部分机理,而有关透骨消痛胶囊治疗骨性关节炎的具体作用机制还需作更进一步的深入研究,以便为临床应用提供理论依据.