白花丹参及其提取物中总丹酚酸含量测定方法研究

目的：建立并测定白花丹参及其提取物中总丹酚酸的含量。方法：采用亚硝酸钠-硝酸铝配位显色法,以供试品溶液和对照品溶液紫外-可见吸收图谱一致性为依据,比较丹酚酸B、丹参素钠和原儿茶醛作对照品的合理性;对亚硝酸钠-硝酸铝配位显色法中各显色剂加入量、加入显色剂后放置时间进行了考察,进行方法学考察。结果：丹酚酸B更适合作对照品,最佳显色条件为：精密加入1%NaNO₂ 2.5 mL,暗处放置10 min,再精密加入20%Al（NO₃）₃ 0.25 mL,暗处放置10 min,再精密加入1 mol·L^-1 NaOH 4 mL,暗处放置15 min。丹酚酸B在0.028~0.309 mg线性关系良好（r=0.999 9）,白花丹参和提取物的回收率分别为96.29%,99.53%。5个批次白花丹参总丹酚酸的含量在5.65%~6.19%,提取物中总丹酚酸的含量在61.03%~61.96%。结论：建立了亚硝酸钠-硝酸铝配位显色法测定白花丹参及其提取物中总丹酚酸含量的方法。     

地榆药材中总皂苷及地榆皂苷- I的含量测定

目的 建立地榆药材总皂苷及地榆皂苷-I含量的测定方法,并对不同批次地榆药材中总皂苷和地榆皂苷-I的含量进行测定。方法 采用优化条件的紫外-可见分光光度法建立了地榆药材中总皂苷的含量测定方法,采用HPLC-ELSD法测定地榆药材中地榆皂苷-I的含量。结果 优选出总皂苷含量测定的显色体系为香草醛-冰醋酸-高氯酸,反应条件为15 %香草醛,1.0 mL高氯酸,80 ℃反应15 min,经测定,地榆药材中总皂苷含量为7.25 %~8.41 %;HPLC-ELSD法测得地榆药材中地榆皂苷-I的含量为5.21 %~6.18 %。结论 香草醛-冰醋酸-高氯酸法以及HPLC-ELSD法快速、简便、准确、重现性良好,分别适用于测定地榆药材中总皂苷和地榆皂苷-I的含量。     

超高效液相色谱法同时测定川木香中紫丁香苷、木香烃内酯和去氢木香内酯含量

[目的] 采用微波提取,超高效液相色谱（UPLC）分析,建立同时对川木香中紫丁香苷、木香烃内酯、去氢木香内酯进行含量测定的方法。[方法] 以紫丁香苷、木香烃内酯、去氢木香内酯的提取率为评价指标,优化川木香的最佳微波提取条件,并采用UPLC对22批不同批次的川木香进行含量测定。[结果] 微波提取川木香的最佳条件为：提取溶剂为甲醇,微波功率400W,提取时间2min,液料比为80∶1（mL/g）,在此条件下川木香中3种目标化合物的提取率均比超声提取法提取率高;采用UPLC建立的同时测定川木香中紫丁香苷、木香烃内酯、去氢木香内酯含量的方法线性关系良好,精密度、重复性、稳定性的RSD均小于3%,加样回收率介于范围101.79%~102.23%;含量测定结果表明,不同批次的川木香药材中各成分的含量差异较大,表明市场上的川木香药材质量有较大差异。[结论] 实验建立的方法稳定、快速、高效、重现性好,可用于川木香药材的质量评价。     

薯莨中鞣质类成分的含量测定

目的：测定黎川岩泉自然保护区中薯莨的总鞣质和缩合鞣质含量。方法：采用《中国药典》（2010年版）比色法测定总鞣质,采用香草醛硫酸法测定缩合鞣质。结果：薯莨中总鞣质与缩合鞣质平均质量分数分别为（501．81±8．62）mg·g^-1,（421．78±11．65）mg·g^-1。结论：薯莨鞣质含量高,鞣质类型主要为缩合鞣质,具有良好的开发前景。     

响应面法优化秦岭龙胆有效成分的提取工艺

目的：优选鸡血藤总黄酮的聚酰胺树脂纯化工艺。方法：采用UV测定总黄酮含量,检测波长278 nm。选择聚酰胺柱层析法,以总黄酮含量和转移率为指标,通过单因素试验考察上样液质量浓度、吸附流速、洗脱剂用量等对鸡血藤总黄酮纯化工艺的影响。结果：最佳纯化工艺为上样量9.076 mg·g^-1,上样液质量浓度1.261 g·L^-1,吸附、洗脱速度2 BV·h^-1,加水5 BV和20%乙醇3 BV洗脱除杂,加70%乙醇4 BV洗脱,收集第2~4 BV洗脱液;总黄酮纯度达81.5%,转移率77.5%。结论：该纯化工艺稳定可行且重复性好,可有效富集鸡血藤总黄酮部位。     

铁皮石斛中总酚的含量测定

目的： 建立铁皮石斛总酚含量的快速测定方法。方法： 以阿魏酸为对照品,采用福林酚比色法测定铁皮石斛中总酚含量。通过单因素试验筛选检测波长、显色时间和温度等显色条件;以总酚含量为指标,通过L₉（3⁴）正交试验考察乙醇体积分数、料液比、提取时间和提取次数对总酚提取工艺的影响,确定含量测定中供试品溶液的制备方法。结果： 显色条件为检测波长760 nm,福林酚试剂用量3.5 mL,10%碳酸钠溶液用量7 mL,显色温度20~30℃,避光反应时间0.5 h。铁皮石斛总酚的提取工艺为加40倍量70%乙醇提取1 h。总酚含量测定的线性范围3.168~9.504 mg·L^-1,平均加样回收率97.9%,RSD 1.53%。结论： 建立的含量测定方法操作简便、快速、准确、稳定、重复性好,可用于铁皮石斛中总酚含量的测定。     

五倍子抑制表皮生长因子受体活性及活性部位的UPLC/Q-TOF-MS分析

目的 应用均相时间分辨荧光（HTRF）技术,筛选发现具有抑制表皮生长因子受体（EGFR）活性的五倍子提取物,同时采用超高效液相色谱与串联四级杆飞行时间质谱仪联用技术（UPLC/Q-TOF-MS）对其活性部位进行分析和鉴别。方法 药材经石油醚渗滤、乙醇提取、醋酸乙酯萃取和水煎煮后,得到4个提取部位。采用HTRF法检测五倍子醋酸乙酯提取物对EGFR的抑制作用,并计算抑制率。采用Acquity UPLC BEH C₁₈色谱柱,以0.1%甲酸水溶液-乙腈为流动相,梯度洗脱,200～400 nm扫描,使用ESI离子源,在正离子模式下采集数据。结果 五倍子的醋酸乙酯部位显示较强的EGFR抑制活性,并从其活性部位中分析鉴定出14个化合物,主要成分为鞣质类化合物,其中11个分别为石榴皮鞣素、香草醛、六羟基二苯酰胺葡萄糖、鞣花鞣质、杨梅苷、原儿茶素、五倍子鞣质倍酰葡萄糖、五倍子鞣质、鞣花酸、3, 5-二咖啡酰奎宁酸、monogalloyl-glucose,另外3个为未知成分。结论 本研究首次发现五倍子醋酸乙酯提取部位具有较强的EGFR抑制活性,IC₅₀为5.528 μg/mL,Q-TOF-MS测定的相对分子质量及正离子信息鉴定表明五倍子醋酸乙酯提取物中主要为鞣质类成分,其中五倍子鞣质、鞣花酸、鞣花鞣质为最主要成分。五倍子中含有的鞣质类成分为抑制EGFR活性的主要成分,为其在抗癌方面的应用提供理论依据,同时为进一步跟踪分离活性成分奠定基础。     

薯莨中鞣质纯化工艺优选

目的: 优选薯莨中鞣质的纯化工艺条件。 方法: 以鞣质含量和保留率为指标,采用静态吸附法考察不同大孔树脂的吸附、洗脱性能,通过单因素试验和L₉(3⁴)正交试验对薯莨中鞣质的纯化工艺条件进行优化。 结果: 选用AB-8型大孔吸附树脂,其最佳纯化工艺条件为上样量以每克树脂儿茶素不超过17.25 mg为宜,加3 BV水洗除杂,用1.5 BV 40%乙醇以0.5 BV·h^-1洗脱,收集洗脱液,鞣质保留率82.02%,鞣质纯度64.39%。 结论: 优选的纯化工艺合理、稳定可行,可为薯莨中鞣质的工业化纯化提供实验依据。     

胡芦巴总皂苷的提取纯化工艺考察

目的：制备高纯度的胡芦巴总皂苷。方法：采用乙醇回流法提取胡芦巴总皂苷,依次加正己烷、三氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇进行系统溶剂萃取,三氯甲烷有效部位经HPD-400型大孔吸附树脂富集纯化。采用显色反应和TLC鉴别总皂苷,运用UV测定胡芦巴总皂苷含量。结果：三氯甲烷萃取部位中总皂苷纯度40%,得率6.28%;水洗脱液中胡芦巴总皂苷纯度80.5%,得率0.32%。结论：优选的提取纯化工艺快速简便,为胡芦巴总皂苷的药效学评价奠定基础。     

植物乳杆菌发酵转化人参皂苷的研究

目的：探索植物乳杆菌对人参的发酵工艺,将人参中的部分人参总苷转化成活性更强的人参皂苷Rd。方法：采用静止暗培养法进行微生物发酵;索氏提取法提取人参总苷;香草醛-硫酸显色,紫外-可见分光光度法测定人参总苷含量;HPLC测定供试品中人参皂苷Rd含量。结果：植物乳杆菌对人参的发酵工艺为：发酵培养基为MRS培养基、培养温度35 ℃、培养pH为5.0、发酵时间2 d;发酵后的人参,其发酵产物中人参总苷含量提高了32%,单体人参皂苷Rd含量增加4.864 mg·g^-1。结论：建立的发酵体系工艺合理,适用于大规模生产,对微生物转化人参皂苷的研究具有重要意义。     

基于3D微流控芯片分析鸡血藤总鞣质对宫颈癌细胞HeLa的药理作用

目的:研究鸡血藤总鞣质的化学成分,并分析该有效部位对宫颈癌细胞HeLa的药效与作用机制,为鸡血藤抗宫颈癌提供实验依据。方法:运用UPLC-Q-TOF/MS对鸡血藤鞣质类化学成分进行定性分析。将不同质量浓度的鸡血藤总鞣质作用于宫颈癌细胞HeLa,通过3维(3D)微流控芯片筛选合适的给药浓度及时间。运用流式细胞仪测定鸡血藤总鞣质对宫颈癌细胞HeLa周期与凋亡的影响,分别应用Flow Jo v10. 0. 7及ModFit LT 3. 2软件进行分析。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)测定经鸡血藤总鞣质作用后,宫颈癌细胞HeLa上清液中血管内皮生长因子-A(VEGF-A)与半胱天冬酶-3(Caspase-3)因子的含量变化。结果:鉴定并推断了鸡血藤总鞣质中15种成分。最终确定鸡血藤总鞣质低、中、高给药质量浓度分别为0. 5,1. 0,2. 0 g·L-1,36 h为最佳给药时间。经鸡血藤总鞣质作用后宫颈癌细胞HeLa早凋与晚凋比例明显增加,宫颈癌细胞HeLa DNA合成前期(G0/G1期)明显增加,DNA合成期(S期)与DNA合成后期(G2/M期)减小。经鸡血藤总鞣质作用后,宫颈癌细胞HeLa上清液中VEGF-A因子显著降低,Caspase-3因子显著增加。结论:鸡血藤中含有丰富的鞣质类成分,此类成分对宫颈癌细胞HeLa有明显的抑制其增殖并促进其凋亡的作用,为该有效部位的后续研究与开发提供了实验依据。     

密花豆的保育学研究进展

鸡血藤为妇科要药,具有极高的药用价值,市场需求量大,野生资源稀缺。在对鸡血藤药材基原植物密花豆资源现状进行分析的基础上,综述了近年来其迁地保育和回归保育的方法,旨在促进鸡血藤产业健康发展并为其他珍稀濒危药用植物保育研究及实践提供参考。     

不同产地藏药余甘子总鞣质含量测定

目的:建立磷钼钨酸/干酪素分光光度法测定不同产地藏药余甘子中总鞣质含量的方法.方法:以没食子酸为对照品,磷钼钨酸为显色剂,检测波长760 nm,测定8个不同产地余甘子中总鞣质含量.结果:没食子酸在0.306～2.448 mg·L-1与吸光度呈良好线性关系(r=0.999 1),平均加样回收率99.27％,RSD 2.30％.不同产地余甘子药材总鞣质含量差别较大(6.72％ ～ 11.95％),印度和尼泊尔产余甘子中总鞣质含量最高.结论:该方法简单、准确、重复性好,可用于测定余甘子中总鞣质含量.     

高乌头炮制前后镇痛抗炎活性部位HPLC指纹图谱建立及质量研究

目的建立高乌头炮制前后镇痛抗炎活性部位指纹图谱,从物质基础上揭示高乌头炮制后镇痛抗炎活性增强的原因。方法通过HPLC梯度洗脱分别建立10批不同地区高乌头药材炮制前后三氯甲烷萃取部分的指纹图谱,并采用中药指纹图谱相似度评价系统(2012版)进行分析。结果建立了生、制高乌头三氯甲烷活性部位HPLC指纹图谱;在生、制品三氯甲烷活性部位图谱中分别标出3个共有峰、15个共有峰,制品新增12个峰,其中1、2、7号峰增加特别明显,占新增峰面积的72.3%~84.5%;同时对生、制品三氯甲烷部分2个共有成分(高乌甲素、冉乌头碱)进行定量测定,炮制后其量均降低,冉乌头碱量降低至原来的1/3。结论该方法重现性好、特征性强,可用于高乌头生、制品镇痛抗炎活性部位的质量评价,为阐明高乌头炮制前后物质基础变化及炮制原理提供科学依据。     

超快速液相色谱-三重四级杆/线性离子阱质谱法同时测定鸡血藤不同产地及商品药材中多元活性成分

目的 建立超快速液相色谱-三重四级杆/线性离子阱质谱法(UFLC-QTRAP-MS/MS)同时测定鸡血藤不同产地及商品药材中黄烷醇、异黄酮、黄酮醇、二氢黄酮、二氢黄酮醇、查耳酮、紫檀烷、花色素和酚酸类共22种活性成分含量的方法;根据22种目标成分的含量,用主成分分析对不同产地的鸡血藤药材进行综合评价。方法 采用XBridge C₁₈柱(4.6 mm×100 mm, 3.5 μm),以0.3%甲酸水-甲醇为流动相,梯度洗脱,流速0.8 mL·min^-1,柱温30 ℃,多反应监测离子扫描模式(MRM)测定;根据22种目标成分的含量,用主成分分析(PCA)对所检测的31个批次鸡血藤药材进行综合评价。结果 22种目标成分的浓度与峰面积的线性关系良好(r>0.999 0);平均加样回收率为97.95%~103.1%,RSD均小于5%。结论 所建立的方法准确、可靠,可用于鸡血藤中多元功效物质或指标成分的同时测定,为鸡血藤药材内在质量的综合评价和全面控制提供新的方法参考。     

金樱根、金樱茎多糖对小鼠肠道菌群失调的调整作用

目的:研究金樱根、金樱茎多糖对肠道菌群失调小鼠的调整作用。方法:用盐酸林可霉素15 g.kg-1ig,2次/d,连续3 d,建立小鼠肠道菌群失调模型,用含生药100 g.kg-1的金樱根、金樱茎多糖进行ig治疗,连续6 d,于第10天取新鲜粪便检测肠道正常菌群(肠杆菌、肠球菌、双歧杆菌和乳杆菌)的变化。CFU.g-1粪便=每一稀释度平均菌落数×稀释倍数/滴种体积(mL)。结果用1 g粪便中菌数的对数表示(lg10n.g-1)。同时设正常对照、阳性对照、模型对照及自然恢复组。结果:6 d治疗后,全樱根多糖组小鼠肠道主要菌群的数量基本恢复,其中肠球菌、肠杆菌、双歧杆菌优于自然恢复组(P<0.05);金樱茎多糖组仅乳杆菌数量高于模型组(P<0.01)。结论:金樱根、金樱茎多糖对正常小鼠肠道菌群失调有一定调整作用,且金樱根多糖效果优于金樱茎多糖。     

三七方的拆方研究

目的:探讨三七方组方的合理性,分析方中各药味对全方镇静催眠作用的影响.方法:本研究在中医理论指导下采用撤药拆方法进行拆方研究,将小鼠随机分为空白对照组、全方组(0.767 g·kg-1)、去酸枣仁组(0.517 g·kg-1)、去鸡血藤组(0.433 g·kg-1)、去三七组(0.683 g·kg-1)和去小蓟组(0.667 g·kg-1).各组连续灌胃给药1id,空白对照组予同容积的蒸馏水,第11天进行行为学测试,自主活动和与戊巴比妥钠的协同作用.结果:与空白对照组比较,全方组和去鸡血藤组均能显著降低小鼠自主活动次数(P＜0.05);全方组能显著增加小鼠的入睡率(P＜0.05);去鸡血藤组和去小蓟组有增加小鼠入睡率的趋势;全方组(P＜0.05)和去三七组(P＜0.01)均能明显缩短小鼠的入睡时间,去小蓟组有缩短小鼠入睡时间的趋势;全方组、去小蓟组和去三七组均能显著增加小鼠的睡眠时间(P＜0.05).结论:三七方具有确切的镇静催眠作用,组方合理.酸枣仁(制)、鸡血藤、三七和小蓟均影响着全方镇静催眠作用的发挥,是三七方不可或缺的组成部分.     

核桃楸叶总鞣质的大孔树脂纯化工艺考察

目的:优选核桃楸叶总鞣质的大孔树脂纯化工艺。方法:利用静态吸附-洗脱试验考察AB-8,D101,NKA-9,Daion HP-20型大孔树脂的吸附与洗脱能力,通过单因素试验考察上样量、水洗用量及洗脱溶媒对核桃楸叶总鞣质纯化工艺的影响。采用干酪素法测定核桃楸叶总鞣质含量,检测波长760 nm。结果:选用AB-8型大孔吸附树脂,最佳纯化工艺为上样液质量浓度2.672 g·L-1,上样量250 mL,洗脱流速2 BV·h-1,加水6 BV洗脱除杂,收集50%乙醇洗脱液10 BV;总鞣质洗脱率、纯度分别为73.32%,35.02%。结论:AB-8型大孔树脂对核桃楸叶总鞣质的分离性能较好,优选的纯化工艺适用于工业化生产。     

何首乌和夜交藤药材指纹图谱研究与评价

目的 建立何首乌、夜交藤药材指纹图谱分析方法,并依据指纹图谱对两种药材进行比较,为科学评价与有效控制何首乌、夜交藤药材质量提供新方法.方法 何首乌和夜交藤分别用甲醇和醋酸乙酯超声处理,提取液用HPLC进行测定.HPLC法采用C18色谱柱,乙腈-0.1%磷酸梯度洗脱,检测波长分别为265和290 nm,体积流量1mL/min,柱温30℃.结果 建立了何首乌、夜交藤药材HPLC指纹图谱,并对不同产地何首乌、夜交藤药材进行了相似度比较.测定结果显示不同产地药材存在较大差异,化学成分组成及质量分数存在一定差异.结论 所建立的方法简便、可靠,可用于不同产地何首乌、夜交藤药材的指纹图谱测定和质量评价,为全面有效控制何首乌药材的内在质量提供了依据.     

鸡血藤指纹图谱的建立及抗肿瘤谱效关系研究

目的 建立鸡血藤Spatholobus suberectus HPLC指纹图谱,研究鸡血藤指纹图谱与抗肿瘤活性之间的谱效关系。方法 采用HPLC法建立鸡血藤指纹图谱;以人肝癌HepG2细胞为供试细胞,采用MTT法测定鸡血藤抗肿瘤活性,运用灰色关联度和偏最小二乘法分析鸡血藤指纹图谱与抗肿瘤作用的谱效关系。结果 构建鸡血藤的HPLC图谱,标出了14个共有峰,并指认了其中6个共有峰,其中2号峰儿茶素、3号峰葛根素、9号峰大豆苷元偏最小二乘标准方程回归系数为正值,与抗肿瘤活性呈正相关,且VIP值＞1.0;同时,通过活性成分验证结果显示儿茶素、葛根素、大豆苷元均具可抑制HepG2细胞生长,且存在浓度相关性,可认为是鸡血藤抗HepG2细胞的物质基础。结论 通过鸡血藤HPLC指纹图谱与抗肿瘤活性之间的相关性分析,为挖掘鸡血藤的质量标志物以及药材质量控制提供参考。