金银花分子生物学研究进展

分子生物学(molecular biology)是从分子水平阐明生命现象和本质的科学,其发展为传统生药学的研究提供了新的生物技术和方法。金银花作为常用大宗药材之一,国内外学者在深入研究传统方法的基础上,采用分子生物学手段对其展开真伪鉴别、品质评价和控制等方面的相关研究,并取得了一定成果。该文主要综述了近年来分子生物学技术方法在金银花鉴别、有效成分生物合成的分子机制以及胁迫条件下次生代谢产物积累的分子机制研究,并针对基于杂交技术的标记(RFLP)、基于PCR的分子标记(RAPD,AFLP,SSR,ISSR)和基于DNA序列分析的SNP及DNA条形码对金银花的多样性识别、诊断、鉴定等方面进行了详细的总结,同时提出可以采用多组学技术,构建系统生物学技术和平台,建立次生代谢产物生物合成的相关模型,从而更好地研究金银花活性成分生物合成的分子机制以及药用植物在环境胁迫下的相关代谢产物的合成和积累等生命活动规律并进行调控,为进一步推动金银花现代化及其他中药资源的开发利用提供支撑与参考。     

HPLC法同时测定9个不同产区人参花中5种皂苷含量

目的:建立HPLC法测定人参花中5种人参皂苷Re、Rb_1、Rg_2、Rb_2、Rd的含量。方法:采用Thermo HYPERSIL GOLD C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱;以乙腈-0.1%磷酸-水为流动相,梯度洗脱;流速:0.8 mL/min;柱温:30℃;检测波长:203 nm;进样量:10μL。结果:人参皂苷Re在0.987～12.325μg范围内线性关系良好,平均加样回收率为99.75%,RSD%为2.23%;人参皂苷Rb_1在1.999～24.975μg范围内线性关系良好,平均加样回收率为99.11%,RSD%为0.155%;人参皂苷Rg2在2.040～25.500μg范围内线性关系良好,平均加样回收率为99.32%,RSD%为1.37%;人参皂苷Rb_2在6.210～77.625μg范围内线性关系良好,平均加样回收率为101.27%,RSD%为0.82%;人参皂苷Rd在5.560～69.500μg范围内线性关系良好,平均加样回收率为99.72%,RSD%为1.95%。结论:该方法可用于人参花中人参皂苷Re、Rb_1、Rg_2、Rb_2、Rd的含量测定。     

超快速液相色谱-三重四级杆/线性离子阱质谱法同时测定鸡血藤不同产地及商品药材中多元活性成分

目的 建立超快速液相色谱-三重四级杆/线性离子阱质谱法(UFLC-QTRAP-MS/MS)同时测定鸡血藤不同产地及商品药材中黄烷醇、异黄酮、黄酮醇、二氢黄酮、二氢黄酮醇、查耳酮、紫檀烷、花色素和酚酸类共22种活性成分含量的方法;根据22种目标成分的含量,用主成分分析对不同产地的鸡血藤药材进行综合评价。方法 采用XBridge C₁₈柱(4.6 mm×100 mm, 3.5 μm),以0.3%甲酸水-甲醇为流动相,梯度洗脱,流速0.8 mL·min^-1,柱温30 ℃,多反应监测离子扫描模式(MRM)测定;根据22种目标成分的含量,用主成分分析(PCA)对所检测的31个批次鸡血藤药材进行综合评价。结果 22种目标成分的浓度与峰面积的线性关系良好(r>0.999 0);平均加样回收率为97.95%~103.1%,RSD均小于5%。结论 所建立的方法准确、可靠,可用于鸡血藤中多元功效物质或指标成分的同时测定,为鸡血藤药材内在质量的综合评价和全面控制提供新的方法参考。     

经典名方中金银花的本草考证

金银花一名始载于南宋本草著作《履巉岩本草》,宋以后,金银花一名逐渐被后世延用,成为药材正名。古代金银花的品种来源复杂,自2005版《中国药典》记载忍冬Lonicera.japonica Thunb.为金银花的唯一来源。药用部位为花蕾或带初开的花,多用生品,炮制辅料以酒为主,山东、河南为道地产区,在头茬采收的花蕾品质更佳。基于当前考证结果,结合近现代的研究结果及资源栽培情况,《古代经典名方目录(第一批)》所载3首含金银花的经典名方(即四妙勇安汤、五味消毒饮和托里消毒散)的应用和开发建议使用忍冬L.japonica Thunb.为基原,山东、河南等道地产区的生品,且优选头茬采收的二白至大白期的花蕾入药。并基于以上3首经典名方的临床应用文献和文献计量学方法分析得到方剂中金银花的常用剂量和平均剂量,可作为经典名方开发时金银花的参考用量。     

广西桑寄生中多元活性成分动态积累的分析与评价北大核心CSCD

建立超高效液相色谱-三重四极杆/线性离子阱质谱(UHPLC-QTRAP-MS/MS)同时测定桑寄生中黄酮、有机酸、核苷和氨基酸共33种活性成分含量的方法,并对其多元活性成分的动态积累进行分析与评价。采用XBridge C_(18)色谱柱(4.6 mm×100 mm,3.5μm),以0.1%甲酸水-甲醇为流动相进行梯度洗脱,流速0.5 mL·min^(-1),柱温30℃,进样量为2μL;质谱采用电喷雾离子源(ESI),多反应离子监测(MRM)模式测定;采用熵权TOPSIS法对各项指标成分客观赋权,根据相对贴近度(C_(i))进行综合排序,构建桑寄生多指标综合评价模型。结果表明,33种目标成分的浓度和峰面积在各自线性范围内具有良好的线性关系,相关系数(r)均不小于0.9990;精密度、重复性、稳定性RSD≤4.7%;平均加样回收率为98.03%~101.3%,RSD均小于4.0%。桑寄生中各成分的积累动态不一,2月中旬至3月初采收的桑寄生药材综合质量较好,与当地传统采收期相符。该研究为揭示桑寄生中多元活性成分的动态积累规律及确定其药材的适宜采收期提供基础资料,同时为桑寄生药材内在质量的综合评价提供新的方法参考。     

薄荷化学成分的研究

目的 对薄荷Mentha haplocalyx的化学成分进行研究。方法 采用多种柱色谱技术进行分离纯化,并通过波谱分析方法鉴定化合物的结构。结果 从薄荷乙醇提取物中分离得到了11个化合物,分别鉴定为薄荷木酚素（1）、5-羟基-6, 7, 8, 4′-四甲氧基黄酮（2）、桦木酸（3）、橙皮素-7-O-β-D-葡萄糖苷（4）、龙胆酸-5-O-β-D-(6′-水杨酰基)-葡萄糖苷（5）、蒙花苷（6）、刺槐素（7）、5-羟基-6, 7, 8, 3′, 4′-五甲氧基黄酮（8）、5, 6, 4′-三羟基-7, 8-二甲氧基黄酮（9）、田蓟苷（10）、藿香苷（11）。结论 化合物1为新的木酚素类化合物,命名为薄荷木酚素;化合物2为新天然产物;化合物4为首次从唇形科中分离得到;化合物3、5为首次从薄荷属中分离得到。     

桂枝的化学成分分析

目的:研究桂枝的化学成分。方法:采用硅胶、凝胶等色谱方法进行分离和纯化,并通过理化性质和波谱分析鉴定化合物的结构。结果:从桂枝乙醇提取物的乙酸乙酯和正丁醇萃取部分中分离得到16个化合物,分别鉴定为反式肉桂酸(1),香草醛(2),4-羟基-2-甲氧基反式肉桂醛(3),3,5-二甲氧基-4-羟基反式桂皮醛(4),(E)-3,3’-dimethoxy-4,4’-dihydroxystilbene(5),甘油-1-二十七烷酸酯(6),正二十三烷酸(7),豆甾-4-稀-3,6-二酮(8),正二十二烷酸-1-甘油酯(9),正十七烷酸(10),β-谷甾醇(11),香豆素(12),反式肉桂醇(13),3-羟基-4-甲氧基苯甲酸(14),香草酸(15),丁香醛(16)结论:其中化合物3~9,14,15为首次从该植物中分离得到。     

南沙参的化学成分

目的:研究南沙参的化学成分。方法:采用硅胶、凝胶等色谱方法进行分离和纯化,并通过理化性质和波谱分析鉴定化合物的结构。结果:从南沙参甲醇提取物的石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取部分中分离得到13个化合物,分别鉴定为α-香树脂醇乙酸酯(1),蒲公英萜酮(2),羽扇豆烯酮(3),β-谷甾醇(4),羽扇豆醇乙酸酯(5),无柄沙参酸-3-O-异戊酸酯(6),胡萝卜苷(7),正十五烷酸(8),邻苯二甲酸二己酯(9),汉黄芩苷(10),愈创木酚β-D-吡喃葡萄糖苷(11),5-羟甲基糠醛(12),黄芩苷(13)。结论:其中化合物1,8,10,11,13为首次从桔梗科分离得到;9,12为首次从沙参属分离得到;6为首次从该植物中分离得到。     

基于多元统计分析评价不同干燥方法对金钱草中多元指标成分的影响

目的 探究不同干燥方法对金钱草中多元指标成分的影响。方法 采用超高效液相色谱-三重四极杆/线性离子阱质谱(UHPLC-QTRAP-MS/MS)同时测定不同干燥方法下金钱草中黄酮、有机酸、氨基酸及核苷类共44种指标成分的含量;根据44种目标成分的含量,用聚类分析(HCA)、灰色关联度分析(GRA)及逼近理想解排序方法(TOPSIS)法对不同干燥方法下金钱草样品进行综合评价。结果 HCA结果显示,7个不同干燥方法主要分为2类,第1类为晒干和阴干,第2类为不同温度烘干、微波干燥和冷冻干燥;综合GRA和TOPSIS结果,晒干的金钱草样品综合质量较好,阴干和冷冻干燥也可以作为代替干燥方法。结论 该研究可为揭示金钱草传统干燥方法科学内涵提供依据,同时为金钱草药材产地加工时干燥方法的优选提供基础资料。     

基于液相色谱-串联质谱结合多元统计分析盐胁迫下金银花代谢产物积累的变化

目的?探究盐胁迫下金银花中代谢产物积累的变化。方法?采用超快速液相色谱-串联三重四级杆飞行时间质谱（UFLC-Triple TOF-MS/MS）对金银花盐胁迫组与对照组样品进行分析,用主成分分析（PCA）、偏最小二乘法判别分析（PLS-DA）进行数据处理,找出潜在的差异代谢物;通过一级质谱精确质荷比和二级质谱碎片信息,结合质谱数据库搜索、标准品比对及相关文献进行差异成分鉴定。然后用超快速液相色谱-三重四级杆线性离子阱串联质谱（UFLC-QTRAP-MS/MS）对15个目标差异成分进行测定,并作灰色关联分析（GRA）。结果?金银花盐胁迫组与对照组的样品得到有效区分,筛选并鉴定31个差异成分;15个目标差异成分呈现不同的变化规律,GRA分析初步表明适度的盐胁迫可促进金银花中药效成分的合成与积累。结论?为盐胁迫下金银花的质量评价及提高金银花的药用价值提供了新思路。