臭氧穴位注射治疗肌筋膜炎的临床研究

目的探讨医用臭氧对"痛痹型"腰背肌筋膜炎的疗效。方法在伦理委员会批准的情况下采用前瞻性随机对照研究,选取符合"痛痹型"腰背肌筋膜炎的患者60例,随机分为臭氧穴注组和口服氯唑沙宗组,每组30例,通过MPQ量表评分、ODI量表评分进行疗效评价并进行统计学分析。结果两组治疗后MPQ量表评分、ODI评分比较均有显著差异(P0.05),治疗组优于对照组。结论医用臭氧穴注治疗痛痹型腰背肌筋膜炎疗效显著。     

重组人p43蛋白抗血管生成活性及其机制

为了研究重组人p43(YS-1)蛋白对血管生成的影响及其机制,并考察其对肺癌实体瘤的抑制作用。采用内皮细胞增殖实验、细胞迁移实验、管腔形成实验、大鼠动脉环体外实验、鸡胚尿囊膜体内实验考察YS-1的抗血管生成作用;采用Western印迹法检测细胞内磷酸化MEK1/2、Akt蛋白质的表达;选用人肺腺癌A-549裸小鼠移植瘤模型检测YS-1的体内抗肿瘤活性。结果发现,YS-1能明显抑制内皮细胞迁移和管腔形成,可以抑制体外培养的大鼠动脉环微血管样结构及鸡胚尿囊膜血管,YS-1可以明显抑制血管内皮生长因子（VEGF）诱导的内皮细胞中VEGFR2及下游MEK1/2及Akt的磷酸化,YS-1高剂量(10mg/kg)能显著抑制肺癌A549移植瘤的生长。研究结果表明：YS-1能抑制人肺腺癌A-549裸鼠移植瘤的生长,其作用机制可能跟抑制VEGF引起的VEGFR2活化及信号转导而影响血管生成有关。     

全长及细胞内磷酸化位点缺失的人组织因子真核表达重组质粒的构建及其生物学功能

目的： 研究组织因子(tissue factor,TF)细胞内区域的功能,分析TF细胞内区域对人乳腺癌细胞MCF-7迁移能力的影响。方法： Trizol一步法抽提人乳腺癌细胞MDA-MB-231总RNA,RT-PCR扩增TF全长(TF full-length)基因和TF细胞内磷酸化位点缺失(TF truncated)基因,分别克隆入pGEM-T载体,再构建人TF full-length基因和TF truncated基因的真核表达质粒pcDNA3.1(+)-TF full-length和pcDNA3.1(+)-TF truncated。将构建好的pcDNA3.1(+)-TF full-length和pcDNA3.1(+)-TF truncated瞬时转染MCF-7细胞,RT-PCR和Western blotting鉴定重组质粒的表达,并用发色底物法检测瞬时转染后TF的促凝血功能。利用Transwell小室检测转入人TF full-length基因和TF truncated基因后MCF-7细胞的迁移能力。结果： 扩增出人TF full-length基因和TF truncated基因,成功克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+),并且在MCF-7细胞中表达后具有促凝血活性。瞬时转染pcDNA3.1(+)-TF truncated不能增加MCF-7 细胞的迁移能力,而转染 pcDNA3.1(+)-TF full-length后可以显著增强MCF-7细胞的迁移能力。结论： 成功构建了带有人TF full-length,TF truncated基因的真核表达质粒pcDNA3.1(+)-TF full-length和pcDNA3.1(+)-TF truncated,为研究TF以及其细胞内磷酸化位点区域在肿瘤学中的作用奠定了基础。     

TGF-β对EMT的诱导及EMT抑制剂研究进展

上皮-间质转化(EMT)是肿瘤细胞获得侵袭和转移能力的最主要途径。转化生长因子β(TGF-β)是已知诱导肿瘤细胞发生EMT的关键因子。本文系统介绍TGF-β及其诱导肿瘤细胞发生EMT的信号通路,并综述抑制EMT发生的新抑制剂。     

沉默CC型趋化因子受体5对人乳腺癌细胞黏附及迁移的影响

构建CC型趋化因子受体5(CCR5)基因shRNA的真核表达载体,探讨沉默CCR5对乳腺癌细胞黏附与迁移能力的影响。在多种人乳腺癌细胞中检测CCR5的基因表达,选择CCR5表达较高的MDA-MB-231细胞做为基因沉默的研究对象;设计并合成2对靶向人CCR5基因的RNA沉默序列,连入基因沉默载体pSilencer 2.1-U6中,构建沉默质粒shCCR5-1 和shCCR5-2,定量PCR和蛋白印迹法检测CCR5基因沉默的效率;以细胞黏附实验和Transwell趋化小室实验分别检测沉默CCR5对MDA-MB-231细胞黏附和迁移能力的影响。结果表明,沉默CCR5可以抑制MDA-MB-231细胞的黏附能力,同时显著降低MDA-MB-231细胞的迁移和趋化。     

灰毡毛忍冬抑制表皮生长因子受体激酶活性及活性部位UPLC-Q-TOF/MS分析

应用高通量药物筛选技术,筛选发现具有表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)激酶抑制活性的中药提取物,同时采用超高效液相色谱与串联四极杆飞行时间质谱仪联用技术(UPLC-Q-TOF/MS)对其活性部位进行分析和鉴别。灰毡毛忍冬药材经石油醚渗滤、乙醇提取、乙酸乙酯萃取和水煎煮后,得到4个相应的提取部位。采用均相时间分辨荧光(HTRF)法检测抑制EGFR激酶活性,于波长为620和665 nm 处测定荧光信号的变化及信号值,计算提取物对EGFR激酶的抑制率。采用Acquity UPLC BEH C₁₈色谱柱,以0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B)为流动相梯度洗脱,210~400 nm 扫描,使用ESI离子源,在正离子模式下采集数据。结果显示,灰毡毛忍冬的乙酸乙酯部位显示较强的EGFR激酶抑制活性,IC₅₀为2.027 μg/mL。Q-TOF/MS测定的一级、二级质谱信息及结合文献鉴定灰毡毛忍冬乙酸乙酯提取物中11个化合物,其中7个分别是:咖啡酸(caffeic acid),七叶内酯(esculetin),槲皮素(quercetin),3,5-二咖啡酰奎尼酸(3,5-O-dicaffeoylquinic acid),扁柏黄酮(hinoki flavone),绿原酸(chlorogenic acid),β-谷甾醇(β-sitosterol)。3,5-二咖啡酰奎尼酸、咖啡酸、扁柏黄酮为灰毡毛忍冬的主要成分,灰毡毛忍冬中含有的酚酸类和黄酮类化合物可能是抑制EGFR激酶活性的主要成分。     

骨桥蛋白启动子区报告基因的构建

目的 克隆和构建带人骨桥蛋白(OPN)启动子区基因的载体pGL3-OPN.方法 一步法提取人脐静脉内皮细胞(HUVEC)总DNA,PCR扩增 OPN全长基因,克隆入T载体,测序,双酶切连入真核表达载体pGL3-vector,酶切鉴定.将构建好的pGL3-OPN瞬时转染到人乳腺癌细胞MDA-MB-435中,利用双荧光素酶报告基因检测试剂盒进行检测,通过计算两种质粒荧光素酶活性的比值来筛选药物.结果 扩增出人OPN基因全长,测序结果和GenBank记载一致,成功克隆入真核表达载体.p47可一定程度激活OPN启动子活性.结论 成功构建带有人OPN基因的真核表达载体pGL3-OPN.     

构造因子对肺癌CT图像纹理特征指标的影响

目的 探索构造因子对肺癌CT图像纹理特征指标的影响.方法 采用数值模拟研究不同取值的构造因子对基于灰度共生矩阵提取的肺癌CT图像纹理特征指标的影响.结果 给出了能量、惯性矩、熵、局部平稳性(逆差矩)随生成步长不同取值的变化曲线.结论 构造因子的合理选取有助于肺癌CT图像特征指标的提取,有利于建立适用于肺癌分型的辅助诊断模型.     

经右上腹免气腹单孔保胆取石术对胆结石患者肠黏膜屏障 功能及内环境的影响

目的：探讨经右上腹免气腹单孔保胆取石术对胆结石患者肠黏膜屏障功能及内环境的影响。 方法：回顾性分析 2019 年 3 月 ~2020 年 6 月收治的 91 例胆结石患者临床资料,将采用传统三孔法保胆取石术治疗的 43 例患者纳入对照组,采用经右上腹 免气腹单孔保胆取石术治疗的 48 例患者纳入观察组。 比较两组术前及术后 2%d 肠黏膜屏障功能指标（ D- 乳酸、二胺氧化酶）及内 环境指标（血清皮质醇、 C 反应蛋白）。 结果：两组术后 D- 乳酸、二胺氧化酶水平均较治疗前降低,且观察组 D- 乳酸、二胺氧化酶水 平低于对照组,差异有统计学意义（ P ＜0.05 ）;两组术后皮质醇、 C 反应蛋白水平均较术前升高,但观察组皮质醇、 C 反应蛋白水平 低于对照组,差异有统计学意义（ P ＜0.05 ）。结论：经右上腹免气腹单孔保胆取石术治疗胆结石效果较好,具有对肠黏膜屏障功能损 伤较小、机体内环境影响较小的优点。     

新型表位基因疫苗的构建及对小鼠黑色素瘤的影响

目的：构建以MAGE-1（161—169）为表位的癌症基因疫苗并检测其抗小鼠黑色素瘤效果。方法：构建基因疫苗pcDNA—HSP70-MAGE—l（161-169）,并免疫C57BL／6小鼠。最后一次免疫后第2周,接种小鼠黑色素瘤细胞。于肿瘤细胞接种后14d,处死全部动物,称量肿瘤的重量。采用ELISA法对小鼠血清中抗MAGE-1-IgG类抗体及小鼠原代脾淋巴细胞IFN-7释放水平进行检测。结果：pcDNA-HSP70-MAGE-1（161—169）表位基因疫苗能够成功地诱发机体产生抗MAGE-1的特异性抗体,并能在体内起到抗小鼠黑色素瘤作用,抑瘤率为40．7％。同时还能提高约3．05倍的小鼠原代脾淋巴细胞IFN-7释放量。结论：pcDNA-HSP70-MAGE-1（161-169）有望成为有效的抗小鼠黑色素瘤基因疫苗。