RP-HPLC分离测定甘葛藤茎叶中葛根素、大豆苷和大豆苷元的含量

目的：建立一种RP-HPLC方法,用于分离测定甘葛藤茎、叶中葛根素、大豆苷和大豆苷元的含量,为甘葛藤茎、叶的开发利用提供依据。方法：采用C₁₈色谱柱,甲醇(A)-1%冰醋酸(B)溶液为流动相,梯度洗脱,流速为1 mL·min^-1,检测波长250 nm,柱温25 ℃。结果：3个化合物在测定的范围内具有良好的线性(r>0.999 5),方法的回收率在99.0%～101.6%。甘葛藤的茎中葛根素、大豆苷和大豆苷元的含量较叶中高。结论：所建立的方法准确、可靠,可作为甘葛藤的茎、叶中葛根素、大豆苷和大豆苷元含量测定的方法。     

用时间分辨荧光免疫法测定大鼠血浆中大豆苷元的含量

 目的建立时间分辨荧光免疫分析方法(TR-FIA)测定大鼠血浆中大豆苷元的浓度,并用于大鼠静脉注射大豆苷元溶液的药动学研究。方法血浆样品经酶水解后,经液液萃取法提取游离的大豆苷元,采用大豆苷元时间分辨荧光免疫分析试剂盒和Victor³ 1420型时间分辨荧光分析仪测定大豆苷元含量。结果本方法在0.13～61.02μg·L^-1内线性良好,相关系数r=0.998 1,精密度和回收率实验符合方法学要求。大鼠静脉注射大豆苷元溶液后,体内行为符合双室模型,主要药动学参数AUC,t_1/2(α),t_1/2(β),K₁₀分别为(38.09±5.01)mg·h·L^-1,(0.30±0.05)h,(18.94±0.78)h,(1.17±0.20)h^-1。结论该方法稳定、灵敏度高、操作简单,适用于大豆苷元血药浓度的测定及药动学研究。     

RP-HPLC同时测定天麻头风灵胶囊中蒙花苷、哈巴俄苷和肉桂酸的含量

 目的建立RP-HPLC同时测定天麻头风灵胶囊中蒙花苷、哈巴俄苷和肉桂酸的含量。方法采用Diamonsil C₁₈(4.6mm×200mm,5μm)色谱柱;流动相为乙腈-0.05%磷酸溶液(25∶75);流速1.0mL·min^-1;柱温35℃;检测波长278nm。结果蒙花苷、哈巴俄苷和肉桂酸的质量浓度分别在11.0～110,4.60～46.0和4.20～42.0mg·L^-1内与峰面积呈良好的线性关系,相关系数分别为0.9992,0.9996和0.9996;平均回收率分别为101.1%(RSD=1.9%,n=9),100.3%(RSD=1.6%,n=9)和101.8%(RSD=1.7%,n=9)。结论本方法简便、准确、重复性好,可用于天麻头风灵胶囊的质量控制。     

HPLC测定御感袋泡茶中葛根素和黄芩苷的含量

 目的：采用高效液相色谱法测定黄芩、葛根及其制剂御感袋泡茶中黄芩苷和葛根素的含量，评价该制剂的质量。方法与结果：黄芩苷测定以KYWG-C₁₈为固定相，0.5%磷酸-甲醇-N，N-二甲基甲酰胺(13∶10∶1)为流动相，UV检测波长为276 nm，黄芩苷在0.1～0.01 mg/ml浓度范围与峰面积呈直线关系，回归方程为Y=0.0018+9.95×10^-8X，r=0.999 6,平均回收率为102.8%，[WTBX]RSD[WTBZ]为1.86%([WTBX]n[WTBZ]=5)。葛根素测定以KYWG-C₁₈为固定相，水-甲醇-N，N-二甲基甲酰胺(40∶10∶3)为流动相，UV检测波长为250 nm，葛根素在0.2～0.020 mg/ ml浓度范围与峰面积呈直线关系，回归方程为Y=1.5×10^-4+1.09×10^-7X，r=0.999 9,平均回收率为101.7%，RSD为1.62%(n=5)。结论：本法简便、快速，结果可靠。     

基于“自洽调节”的葛根异黄酮类成分对葛根素溶解性及渗透性影响研究

目的 基于中药整体观,以葛根Puerariae Lobatae Radix自身作为整体,考察葛根异黄酮类成分对葛根素溶解度及渗透性的调节作用,探讨单味中药所含成分发挥作用时的“自洽性”。方法 选取葛根中3种高含量黄酮类成分3''-羟基葛根素、大豆苷元和染料木苷,设计人工多成分环境,采用平衡溶解度的研究方法考察pH 7.4磷酸盐缓冲液中多成分环境下葛根素溶解度的变化;采用在体单向肠灌流模型考察葛根异黄酮类成分对葛根素肠吸收的调节作用。结果 实验结果表明,不同成分背景、不同成分组合及其不同比例的3''-羟基葛根素、大豆苷元、大豆苷和染料木苷对葛根素溶解度与渗透性均有一定的影响。采用递进式进行2成分及3成分背景的溶解度研究,表明葛根素溶解度和渗透性变化均存在“叠加性”和“饱和性”的特点,溶解性方面：以葛根自身成分为整体,在水溶液体系中各异黄酮类成分对葛根素溶解度提高了42.60%,在pH 7.4缓冲液体系中提高了18.62%。渗透性方面：葛根素的肠渗透性具有“叠加效应”。以葛根自身成分为整体,主要异黄酮类成分3''-羟基葛根素、染料木苷及大豆苷元对葛根素的肠渗透系数表观渗透系数（apparent permeability coefficients,P_app）、肠吸收速率常数（absorptive promoter,K_a）、肠吸收分数（intestinal absorption fraction,F_a）分别提高220%、236%、213%,即对葛根素的肠渗透性提升了约220%。结论 以上研究表明,葛根异黄酮类成分在人体作用时可能存在“叠加效应”,葛根素在葛根自身多组分环境中具有部分“自洽性”,从而改善了葛根素生物利用度。     

葛根-石膏药对不同配伍比例中有效成分含量变化研究

[目的] 通过建立超高效液相色谱(UPLC)法测定葛根-石膏药对中葛根素和大豆苷的含量,并通过此法探讨有效成分随葛根石膏配比变化的溶出规律。[方法] 不同比例葛根石膏配伍,水煎提取,采用超高效液相色谱(UPLC)法,色谱柱: Acqioty UPLC C₁₈,2.1 mm×100 mm,1.7 μm,检测器:二极管阵列检测器,工作站:Empower 3,流动相:乙腈-甲醇-1.5‰磷酸水溶液梯度洗脱,检测波长:254 nm。[结果] 葛根配伍石膏,葛根素和大豆苷煎出量均比葛根单煎高。以葛根-石膏(1:2)时葛根素、大豆苷的煎出率最高。[结论] 说明葛根配伍石膏有利于葛根素和大豆苷的煎出,从而增加有效成分的溶出。     

反相高效液相色谱法测定银翘散抗流感病毒有效部位群中醉鱼草苷的含量

目的 :建立反相高效液相色谱法测定银翘散抗流感病毒有效部位群中醉鱼草苷含量的方法。方法 :选用YWG-C₁₈色谱柱 (4 .6mmid×25 0mm ,10μm) ,乙腈-3%醋酸水溶液 (25∶75)为流动相 ,紫外检测波长为 326nm ,室温下对醉鱼草苷进行含量测定。结果 :醉鱼草苷进样量在 0.25～0.84μg与其峰面积积分值呈良好的线性关系 ,r=0.9997(n=5 ) ,平均加样回收率为 99.3% ,RSD为 1.82 %。结论 :本法简便、准确、快速 ;可作为银翘散抗流感病毒有效部位群的质量控制方法。     

不同产地麻花秦艽中5种环烯醚萜苷成分的含量比较

目的: 建立HPLC同时测定麻花秦艽中马钱苷酸、龙胆苦苷、獐牙菜苦苷、獐牙菜苷、山栀苷甲酯含量的方法。方法: 采用Diamonsil C₁₈色谱柱(4.6 mm× 250 mm,5 μm),流动相乙腈-0.05%磷酸水梯度洗脱,流速1.0 mL·min^-1,柱温30 ℃, 检测波长240 nm。结果: 以上5种环烯醚萜类成分的线性范围分别为0.042 1~8.420 0(r=0.999 7),0.094 2~18.830 0(r=1.000 0),0.012 4~2.471 2(r=0.999 9),0.009 9~1.971 2(r=1.000 0),0.011 3~2.260 0 μg (r=0.999 0),平均回收率均在95.39%~103.75%,RSD≤2.6%。结论: 该法简便、快速、准确,可以用来同时测定麻花秦艽中5种环烯醚萜苷成分的含量。     

山茱萸注射液中马钱素与莫诺苷的药代动力学研究

目的 :建立高效液相色谱法同时测定血浆中山茱萸单体成分马钱素和莫诺苷的浓度 ,研究小鼠静注和灌胃给药后体内药代动力学特点。方法 :采用DiamonsilTMC₁₈色谱柱 (4.6mm× 250mm ,5 μm) ,流动相乙腈 甲醇 0.2 %甲酸 (12∶8∶80 ) ,流速 1.0mL·min^-1,检测波长 237nm。结果 :马钱素和莫诺苷的回归方程分别为Y=1.76 4X-0.0615和Y=1.242X-0.00199,r=0.9999(n =9) ;马钱素和莫诺苷的线性范围分别为 0.38～68.2 5mg·L^-1和 0.66～117.2 2mg·L^-1;其最低检测浓度分别为 0.10,0.16mg·L^-1。马钱素的平均回收率及相对标准偏差分别为99.6% (2.0% ) ,102.0% (1.0% ) ,87.9% (7.2%) ,莫诺苷的平均回收率及相对标准偏差分别为 99.2% (2.5 % ) ,104.1% (1.2%) ,92.7%(4.2%) ,该法的日内和日间精密度 (RSD)均小于 6.8%。小鼠静脉注射山茱萸注射液后 ,药动学行为均符合二室模型 ,马钱素和莫诺苷的主要药动学参数T_1/2(α) ,T_1/2(β) ,K₂₁,K₁₂ ,K₁₀ ,V(c) ,AUC ,CL分别为3.2 ,2 5 .1min ,5.997,4 .981,3.564h^-1,0 .5 5 1L·kg^-1,13.59mg·L^-1·h ,1.965L·kg^-1·h^-1;3.6 ,21.5min ,5.926,3.833,3.797h^-1,0.647L·kg^-1,2 7.15mg·L^-1·h,2.457L·^-1·^-1。结论：首次建立了山茱萸注射液中马钱素和莫诺苷血药浓度的HPLC测定方法，阐明了山茱萸中马钱素和莫诺苷的药代动力学参数，方法的专属性强，结果可靠。     

大豆苷元抗心律失常作用的研究

目的 :研究大豆苷元抗心律失常作用。方法 :常规抗心律失常方法。结果 :大豆苷元 (3.0,5.0mg·kg^-1)对氯仿诱发的小鼠室颤有明显的预防作用 ,大豆苷元 (0.8,1.0mg·kg^-1)对乌头碱诱发的大鼠心律失常有明显的治疗效果。大豆苷元 (0.2,0.3mg·kg^-1)还能对抗肾上腺素诱发的家兔心律失常 ,大豆苷元 (0.03% ,0.05%)能明显降低蟾蜍离体坐骨神经动作电位振幅。大豆苷元 (0.8,1.0mg·kg^-1)对氯化钙诱发的大鼠室颤具有预防作用 ,且能明显的降低大鼠的死亡率。以上作用具有明显的剂量依赖性。结论 :大豆苷元有明显的抗心律失常作用。其抗心律失常作用可能与其抑制Na⁺内流或Ca²⁺ 内流及与阻断-β 肾上腺素受体有关。     

秦岭太白野葛根异黄酮成分的研究

 目的:对秦岭太白野葛根(Pueraria Lobata)的异黄酮成分进行分离鉴定。方法:以甲醇冷浸提取物,硅胶柱层析分离,理化常数和光谱数据确定异黄酮类化合物的结构。结果:分得6个异黄酮成分,分别鉴定为芒柄花素(Ⅰ)、大豆苷元(Ⅱ)、3＇-甲氧基葛根素(Ⅲ)、8-碳-芹菜糖(1→6)葡萄糖大豆苷(Ⅳ)、大豆苷(Ⅴ)和葛根素(Ⅵ)。结论:化合物(Ⅰ),(Ⅲ)和(Ⅳ)系首次从该植物中分得。     

葛根总黄酮分散片的药动学研究及其与愈风宁心片的比较

目的：研究葛根总黄酮分散片在大鼠体内的药代动力学特征及生物利用度,并与市售愈风宁心片进行比较。方法：大鼠灌胃给药葛根总黄酮分散片（受试制剂）及市售片（参比制剂）混悬液,采用HPLC测定给药后各时间点的血药浓度,用统计软件计算主要药代动力学参数。结果：分散片与市售片的Cmax分别为（20.21±0.18）,（9.90±0.25）mg·L^-1;分散片的Tmax=（0.50±0.03）h,市售片T_max=（1.09±0.02）h;分散片相对于市售片的生物利用度为182.68%。结论：葛根总黄酮分散片吸收快,起效时间明显提前,生物利用度明显优于市售片。     

大别山野葛根异黄酮超声辅助提取工艺的响应面优化与还原力测定

 目的 确定大别山野葛根异黄酮的超声辅助最佳提取工艺与还原力。方法 在单因素实验的基础上,进行4因素5水平的Box-Behnken中心组合实验设计,利用响应面分析优化工艺条件,并测定优化工艺条件下葛根异黄酮提取液的还原力。结果 大别山野葛根异黄酮300 W功率的超声辅助提取最佳工艺条件为乙醇75%、液料比35 mL·g^-1、处理时间35 min、处理温度50 ℃,此工艺条件下葛根异黄酮得率为24.18%,相对误差仅3.02%;葛根异黄酮还原力的EC₅₀值为0.135 mg·mL^-1。结论 响应面法适用于对葛根异黄酮超声辅助提取得率进行回归分析和参数优化。     

葛根药材HPLC指纹图谱研究

目的 :对不同来源的葛根药材指纹图谱比较研究。方法 :应用RP HPLC法、Kromasil C₁₈分析柱、乙腈 水二元梯度洗脱 ,流速为 1.0mL·min^-1,检测波长 250nm。结果与结论 :不同来源的葛根药材所含黄酮类成分均得到很好的分离 ,该法可用于鉴别葛根的品种 ,并为葛根注射液及含葛根药材的中药复方注射液指纹图谱研究奠定基础。     

抗氧化效应法研究葛根黄酮微丸的药动学

目的：研究葛根黄酮微丸的药动学。方法：采用抗氧化效应法测定给药后不同时间点大鼠血浆中所含黄酮类成分的抗氧化能力,计算出血浆中黄酮类物质的含量,得到大鼠给药葛根黄酮后血浆中黄酮类物质的含量的变化曲线,得出微丸制剂在体内的药动学过程。结果：葛根黄酮微丸给药后的AUC为愈风宁心片的4.40倍。结论：将葛根黄酮制成微丸能够有效提高葛根中黄酮类物质的生物利用度。     

Antiviral activity of puerarin as potent inhibitor of influenza virus neuraminidase

Puerarin is a major isofiavone compound isolated from the root of Pueraria lobata. It was reported that puerarin had antioxidant, antiinflammatory, antitumor, cholesterol lowering, liver protective, and neuroprotective properties. However, few studies have explored the antiviral effect of puerarin and its target mechanism related to influenza virus. Here, the antiinfluenza activity of puerarin in vitro and in vivo and its mode of action on the potential inhibition of neuraminidase (NA) were investigated. Puerarin displayed an inhibitory effect on A/FM/1/1947(H1N1) (EC₅₀ = 52.06 μM). An indirect immunofluorescence assay indicated that puerarin blocked the nuclear export of viral NP. The inhibition of NA activity confirmed that puerarin can block the release of newly formed virus particles from infected cells. Puerarin (100 and 200 mg/kg/d) exhibited effective antiviral activity in mice, conferring 50% and 70% protection from death against H1N1, reducing virus titers, and effectively alleviating inflammation in the lungs. The molecular docking results showed that puerarin had a strong binding affinity with NA from H1N1. The results of the molecular dynamics simulation revealed that puerarin had higher stable binding at the 150‐loop region of the NA protein. These results demonstrated that puerarin acts as a NA blocker to inhibit influenza A virus both in cellular and animal models. Thus, puerarin has potential utility for the treatment of the influenza virus infection.     

野葛主要成分积累动态变化研究

 目的通过对野葛块根产量和主要活性物质含量积累动态变化规律进行研究,以确定野葛的适宜采收期。方法用紫外法于250 nm处比色以测定总异黄酮含量和HPLC测定其葛根素含量。结果5年生野葛6月份采收,葛根素和异黄酮含量最高,分别为7.91%,8.73%;11月份二者含量次之,分别为5.90%,7.53%。而块根产量在11月份最高,且单株块根中葛根素和异黄酮总量最高,分别为29.81,38.05g。结论5年生野葛在11月采收具有最高的利用价值。     

葛根的实验研究与临床应用新进展

本文对葛根的实验研究及临床应用新进展作了综述。实验表明葛根可提取多种有效成分,对心律失常等有明显作用;临床用于内、外、儿、皮肤、五官等各科疾病的治疗,均收到较好疗效,认为葛根有广泛的使用价值。     

野葛藤总黄酮提取的工业化生产和实验室工艺验证比较

目的验证比较生产车间和实验室制备的葛藤提取物的内在质量,探讨实验制备与工业化生产工艺之间的差异。方法采用紫外-可见分光光度法和HPLC法,以葛根素、大豆苷、大豆苷元等成分的含量为评价指标,测定葛藤提取物含量,通过HPLC法制作的葛藤提取物指纹图谱比较和分析各提取物中异黄酮成分组成和含量。结果工业化生产和实验室制备的不同批次间葛藤提取物样品的异黄酮含量相近,差异较小,质量稳定。结论葛藤提取物实验室制备工艺转化为产业化工艺流程可靠可行,为工业化生产提供了保障。