夏枯草注射液诱导K562细胞凋亡的实验研究

目的探讨夏枯草注射液体外抗白血病作用,为临床应用夏枯草注射液治疗白血病提供实验依据。方法采用M TT法测定夏枯草注射液对K 562细胞的增殖抑制率,计算出IC50值;绘制夏枯草注射液(50、100 m g/mL)作用于K 562细胞的生长曲线。用倒置显微镜、姬姆萨染色法、M TT染色法光镜下观察细胞形态,台盼蓝拒染法、流式细胞仪P I染色观察夏枯草注射液对K 562细胞的促凋亡活性,用免疫细胞化学法检测夏枯草注射液对凋亡相关基因bcl-2和bax蛋白表达的影响,并用图文分析系统进行定量分析。结果夏枯草注射液对K 562细胞增殖具有明显的抑制作用,且在一定的剂量范围内抑制作用具有明显的剂量依赖性(r=0.985 0),IC50为0.113 m g/mL。夏枯草注射液(50 m g/mL)作用于K 562细胞后,倒置显微镜、姬姆萨染色、M TT染色光镜下观察,均可见典型的凋亡细胞的形态学特征。流式细胞仪检测结果显示,处理组细胞凋亡率[(37.15±1.46)%]明显高于对照组细胞凋亡率[(5.56±0.68)%](P<0.01)。夏枯草注射液(50 m g/mL)作用于K 562细胞48 h,bcl-2蛋白表达增强,而bax表达减弱,与对照组相比差异显著(P<0.01)。结论夏枯草注射液可明显抑制K 562细胞增殖,可望成为新的抗白血病药物,诱导K 562细胞凋亡可能是其发挥抗肿瘤作用的机制之一。     

夏枯草提取物诱导B、T淋巴瘤细胞凋亡的实验研究

目的:研究夏枯草提取物对人B淋巴瘤Raji细胞及T淋巴瘤Jurkat细胞增殖的影响及其差异,探讨夏枯草提取物体外抗淋巴瘤的作用机制。方法:不同浓度的夏枯草提取物分别作用于Raji细胞及Jurkat细胞;48 h后分别收集各组细胞,应用MTT法、琼脂糖凝胶电泳法及流式细胞技术分别检测每组细胞的增殖抑制率、细胞凋亡率及细胞凋亡情况;Western blot检测BCL-2及BAX蛋白表达变化。结果:不同浓度的夏枯草提取物对Raji及Jurkat细胞均有明显的增殖抑制作用(P0.01),且对Raji细胞的抑制作用大于Jurkat,其对Raji细胞IC50(18.01±0.92)μg/mL显著低于Jurkat细胞(25.47±0.96)μg/mL(P0.05);凝胶电泳检测结果表明夏枯草提取物处理Raji及Jurkat细胞后均出现凋亡相关DNA Ladder;随夏枯草提取物浓度的增加,Raji及Jurkat细胞的早期凋亡率均显著增加,与空白对照组比较差异显著(P0.01),浓度为15、20、25μg/mL的夏枯草提取物作用于Raji及Jurkat细胞后的早期凋亡率分别为(9.4±0.25)%、(21.68±0.46)%、(35.03±0.35)%和(4.06±0.14)%、(13.59±0.23)%、(22.92±0.20)%,同浓度条件下,Raji细胞的早期凋亡率显著高于Jurkat细胞(P0.01);随夏枯草提取物浓度增加,实验组细胞中BCL-2蛋白的表达逐渐减弱,BAX蛋白的表达逐渐增强,与空白对照组比较均有显著性差异(P0.05),同浓度条件下,Raji细胞内BCL-2蛋白表达的下降程度、BAX蛋白表达的增加程度显著高于Jur-kat细胞(P0.05)。结论:夏枯草提取物具有抑制淋巴瘤细胞增殖的作用,其机制可能与调节BCL-2和Bax蛋白的表达以诱导细胞凋亡有关,且夏枯草提取物对Raji细胞的抑制作用大于Jurkat细胞。     

外燥对小鼠气管细胞凋亡与bcl-2基因及bax基因表达的影响

目的观察外燥对小鼠气管细胞凋亡与bc l-2基因及bax基因表达的影响。方法30只昆明种小鼠随机分为常温常湿组(A组),温燥组(B组),凉燥组(C组),每组10只。经处理后第14天用免疫组化法检测各组气管细胞凋亡率(%)、bc l-2、bax阳性指数(PI,%)、bc l-2/bax累积阳性指数(AI,%)与bc l-2:bax蛋白表达比值。结果3组小鼠气管细胞凋亡率均≤0.3%;B组与C组bc l-2 PI与AI均低于A组(P<0.01),B组、C组气管细胞bc l-2:bax蛋白比值中bax增加。结论外燥致气管细胞bc l-2表达降低、bc l-2:bax蛋白比值改变,bc l-2、bax阳性细胞以气道炎性病灶或纤毛缺损处多见,提示与外燥分子致病机制有关。     

牛蒡子苷对胰腺癌细胞抑制作用及其作用机理的实验研究

目的通过牛蒡子苷对胰腺癌细胞株(CAPAN-1)体内外实验,验证其是否具有抗胰腺癌作用。方法在CAPAN-1细胞培养液中加牛蒡子苷,培养72 h并观察癌细胞的增殖抑制率及癌细胞形态变化。流式细胞仪(FCM)检测CA-PAN-1细胞周期及凋亡率;TUNEL法检测CAPAN-1细胞凋亡率;免疫细胞化学检测CAPAN-1细胞的增殖凋亡调控相关蛋白(bax、bc l-2)表达。用CAPAN-1细胞制作Balb/c裸小鼠荷瘤模型,连续每天腹腔注射牛蒡子苷(10 mg.kg-1.d-1)10d,以5-FU(30 mg.kg-1.d-1)作阳性对照观察抑瘤率。结果牛蒡子苷抑制CAPAN-1细胞生长;阻滞CA-PAN-1细胞周期于G0/G1期并诱导细胞凋亡;通过上调bax蛋白表达(P<0.01),下调bc l-2蛋白表达(P<0.05)诱导CAPAN-1细胞凋亡;抑制荷瘤裸小鼠肿瘤生长,抑瘤率为41.7%。结论牛蒡子苷具有抗胰腺癌活性,其作用机理之一是诱导细胞凋亡。     

夏枯草对3种肿瘤细胞抑制作用的实验研究

目的:探索夏枯草粗提物对3种肿瘤细胞(淋巴瘤细胞株Jurkat、人肺癌细胞株A-549、子宫内膜癌细胞株Ishikawa)生长抑制作用,为夏枯草抗癌机制的深入研究提供实验参考依据。方法:以不同浓度的夏枯草粗提物供试液作用于3种肿瘤细胞,采用MTT法计算其IC50值,观察药物对3种肿瘤细胞的抑制作用,同时设置空白组、对照组、阳性对照组。结果:夏枯草粗提物对Jurkat细胞、A-549细胞、IShikawa细胞IC50值分别为59.628 mg/m L、53.917 mg/m L、48.017 mg/m L,且夏枯草对3种肿瘤细胞的抑制率在一定范围内随药物浓度增加而加强。结论:夏枯草对Jurkat细胞、A-549细胞、IShikawa细胞的增殖具有一定的抑制作用,对抗癌机制的研究以及临床抗癌药物的筛选具有一定的参考价值。     

天花粉蛋白诱导小鼠前列腺癌细胞

目的:研究天花粉蛋白诱导小鼠前列腺癌细胞RM-1凋亡的作用,并探讨其作用机制.方法:将不同浓度的天花粉蛋白作用于小鼠RM-1前列腺癌细胞,用MTT法检测其半数抑制浓度(IC50),用这一浓度作用于RM-1细胞一定时间后,通过Hoechest33258荧光染色、流式细胞仪检测RM-1细胞凋亡的情况.采用Western Blot检测凋亡基因bax蛋白表达的变化.结果:MTT法测得天花粉蛋白对RM-1细胞的IC50值为117.32 mg/L;Hoechest33258荧光染色提示天花粉蛋白干预后RM-1细胞出现凋亡小体;流式细胞仪检测结果显示随着天花粉蛋白干预时间的延长,RM-1细胞凋亡率增加,同时凋亡基因bax蛋白的表达在天花粉蛋白干预后逐渐增加.结论:天花粉蛋白具有抗小鼠前列腺癌细胞RM-1的作用,其作用机制之一是诱导肿瘤细胞凋亡;bax基因在天花粉蛋白诱导RM-1细胞凋亡过程中起重要调控作用.     

肿节风注射液对小鼠T细胞淋巴瘤EL-4细胞的体内外实验研究

目的观察肿节风注射液对小鼠T细胞淋巴瘤EL-4细胞的抑制效应。方法体外实验中,EL-4细胞经不同浓度肿节风注射液处理48 h后,采用MTT、吖啶橙/碘化丙啶(AO/PI)染色法和流式细胞术(FCM)观察细胞生长抑制及凋亡。体内实验中,分设正常组,模型组,环磷酰胺组(25 mg·kg-1),肿节风注射液低、高剂量组(300,500 mg·kg-1),每组5只,腹腔注射给药,连续10 d,观察小鼠一般状况,测量肿瘤生长,计算抑瘤率。结果 MTT结果表明,肿节风注射液体外对EL-4细胞生长呈浓度依赖性抑制,半抑制浓度IC50值为(36.98±0.97)mg·m L-1。浓度在12.5,25和50 mg·m L-1时EL-4细胞的凋亡率分别为10.3%,31.7%和45.2%。低剂量(300 mg·kg-1)和高剂量(500 mg·kg-1)肿节风组的抑瘤率分别为11.9%和37.1%,与模型组比较,差异均有统计学意义(P0.05)。肿节风治疗组荷瘤小鼠在一般状况、体质量、血细胞计数等方面未见明显毒副作用。结论肿节风注射液对小鼠T细胞淋巴瘤EL-4细胞具有一定抑制效应,值得进一步深入研究。     

夏枯草提取物体外诱导EL-4细胞凋亡的实验研究

目的:检测夏枯草提取物对EL-4细胞(小鼠T细胞性淋巴瘤白血病细胞株)体外抗肿瘤活性并探讨其诱导EL-4细胞凋亡的特点。方法:应用MTT法检测夏枯草提取物对EL-4细胞的体外抗肿瘤活性,并绘出其生长曲线;倒置显微镜和HE染色观察细胞用药前后形态学变化;琼脂糖凝胶电泳法及TUNEL法检测夏枯草提取物对EL-4细胞的诱导凋亡作用。结果:夏枯草提取物对EL-4细胞有显著的增殖抑制作用,IC50值为23.67μg/mL;琼脂糖凝胶电泳结果显示实验组出现明显的DNA梯形凋亡带而空白对照组没有出现;TUNEL结果显示夏枯草组EL-4细胞经染色后胞核中出现棕黄色颗粒或核周出现棕黄色半月形深染区,而空白对照组则仅有个别细胞出现胞核棕黄色深染。结论:夏枯草提取物对EL-4细胞有显著的体外抗肿瘤活性,诱导凋亡可能是其抗肿瘤的主要机制之一。     

绞股蓝对肝癌细胞表达Bcl-2及Bax的影响

目的:研究绞股蓝(GpM)对人肝癌细胞促凋亡作用的分子机制。方法:采用W estern b lot分析GpM作用Huh-7细胞后表达的Bc l-2和Bax蛋白水平。结果:20mg/m l GpM作用于细胞24小时后,Huh-7细胞中Bc l-2表达明显降低,而Bax表达显著上调。结论:GpM作用于人肝癌细胞Huh-7,是通过下调Bc l-2和上调Bax的表达而诱导细胞凋亡的。     

灵芝孢子粉对HepG2细胞生长增殖和生长周期的影响

目的:观察灵芝孢子粉对人肝癌细胞株HepG2细胞生长增殖和生长周期的影响,并初步探讨其作用机制。方法:采用MTT比色法研究灵芝孢子粉对HepG2细胞生长抑制作用;通过流式细胞仪检测DNA含量,分析细胞周期的分布。结果:MTT实验结果表明高剂量的灵芝孢子粉对HepG2细胞具有直接的抑制作用,并呈剂量和时间依赖性,2500μg/m l的灵芝孢子粉作用于HepG2细胞72h后,对细胞生长的抑制率最高可达51.4%;流式细胞术实验结果表明,灵芝孢子粉浓度为3mg/m l时,可使肿瘤细胞生长G2期减小,浓度为6 mg/m l时,可使HepG2细胞出现明显的凋亡峰。结论:灵芝孢子粉具有直接抑制肿瘤细胞生长的作用,并可作用于细胞周期的G2期,高剂量的灵芝孢子粉还可使肿瘤细胞发生凋亡。     

不同产地夏枯草中抗非小细胞肺癌成分科罗索酸的差异比较

目的:比较不同产地夏枯草中抗非小细胞肺癌活性成分科罗索酸的含量差异。方法:通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)和吖啶橙(AO)/溴化乙啶(EB),评价科罗索酸对非小细胞肺癌细胞的增殖抑制以及凋亡作用;建立高效液相色谱法,比较14个产地夏枯草中科罗索酸的含量差异。结果:科罗索酸抑制SPC-A-1人非小细胞肺癌的生长增殖(IC50=1.05×10-6mol/L),并且诱导SPC-A-1细胞凋亡。14个产地夏枯草中科罗索酸的含量差异较大,山西产地的含量最高,河南-2产地的含量最低。结论:科罗索酸为夏枯草中的抗非小细胞肺癌的活性成分,不同产地夏枯草的科罗索酸含量差异较大。     

苦参碱对NCI-N87胃癌细胞增殖凋亡及bcl-2蛋白表达的影响

目的:探讨不同浓度苦参碱对体外培养的人胃癌细胞NCI-N87的增殖、凋亡及bcl-2蛋白表达的影响。方法:NCI-N87细胞经不同浓度苦参碱处理后,采用CCK-8法检测药物对肿瘤细胞的抑制作用,显微镜观察细胞形态学改变;应用流式细胞仪分析苦参碱对细胞凋亡和bcl-2蛋白的影响。结果:苦参碱浓度>3mg/mL,细胞毒作用较大;浓度在0.5～2.0mg/mL时,对肿瘤细胞的生长有抑制作用,且呈时间剂量依赖性;浓度在0.1mg/mL,对肿瘤细胞生长几乎无抑制作用。流式细胞仪分析结果显示,细胞凋亡百分率随着药物浓度的增加和作用时间的延长而增加,而bcl-2蛋白则随之下降。结论:苦参碱对人胃癌细胞NCI-N87增殖有抑制作用,并能诱导细胞凋亡,下调bcl-2蛋白水平。     

埃克特注射液体内外抗肝癌作用研究

目的:观察埃克特注射液对人肝癌细胞SMMC-7721细胞及小鼠移植性肿瘤H22的抑制作用。方法:用MTT法、细胞生长曲线实验研究不同浓度的埃克特注射液作用48h对SMMC-7721细胞的生长抑制作用,Hoechst 33258染色观察细胞凋亡,以了解该药物对肝癌细胞的体外增殖作用;同时建立小鼠H22肝癌移植性实体瘤模型研究埃克特注射液对肝癌的体内抑制作用。结果:埃克特注射液对SMMC-7721具有抑制作用,呈明显的量效关系,IC50为2.325mg/L;生长曲线提示埃克特注射液对SMMC-7721细胞的抑制作用呈明显时效和量效关系;Hoechst 33258染色后,给药组出现明显的细胞凋亡形态学变化;腹腔注射0.5、1、2mg/kg埃克特注射液对小鼠移植性肿瘤H22的抑制率分别为34.37%、42.36%、57.99%,呈剂量依赖性。结论:埃克特注射液对人肝癌细胞SMMC-7721细胞具有明显体外抗增殖作用,对小鼠移植性肿瘤H22有一定的抑制作用。     

大黄素对HL-60细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨大黄素对人白血病细胞HL-60增殖及凋亡的影响。方法:应用MTT法检测大黄素对HL-60细胞增殖的影响;应用流式细胞术、DNA琼脂糖凝胶电泳观察和检测细胞凋亡;蛋白印迹法(Western-Blot)检测Bcl-2蛋白表达水平的变化。结果:在5～20mg/L浓度范围内,大黄素对HL-60细胞增殖的抑制作用呈时间剂量依赖性20mg/L作用72h后,抑制率分别达到(19.8±2.7)%,(58.8±4.4)%和(73.8±5.7)%;流式细胞术检测发现:大黄素5、10和20mg/L作用24h后,细胞凋亡率分别为(15.5±3.4)%、(56.0±3.4)%和(71.1±5.0)%,与对照组(1.01±0.06)%有显著性差异(P<0.05);DNA琼脂糖凝胶电泳显示典型的梯形条带。大黄素作用24h后,Bcl-2蛋白的表达水平随药物波度增加呈逐渐下降趋势。结论:大黄素能够抑制HL-60细胞增殖,并诱导其凋亡。Bcl-2基因可能参与了大黄素抑制HL-60细胞增殖和诱导凋亡的过程。     

全蝎蛋白药效组分对L1210肿瘤细胞凋亡的影响

目的 研究全蝎(Scorpio)蛋白药效组分对L1210肿瘤细胞凋亡的影响,为建立全蝎与临床疗效对应的生物效应质量评价方法奠定基础.方法 采用改良MTT法、流式细胞法研究全蝎蛋白药效组分对L1210细胞毒和细胞周期抑制的作用.结果 抑制癌细胞生长的浓度≥37 mg/ml,剂量与浓度呈正比,相关系数为0.9357,IC50为175 mg/ml,显效时间0～48 h;全蝎蛋白药效组分浓度≥9.25 mg/ml时,可显著提高L1210细胞的凋亡率.结论 全蝎蛋白药效组分具有促进L1210细胞凋亡、抑制增殖的作用,其抗肿瘤生物效应指标为:9.25～175 mg/ml,可作为全蝎生物效应质量评价的指标之一.     

夏枯草醇提取物对正常大鼠离体胸主动脉环的舒张作用

目的：探讨夏枯草醇提取物对胸主动脉环的舒张作用及其作用机制。方法：采用大鼠离体胸主动脉环灌流模型法,观察夏枯草醇提取物（0.05,0.10和0.15mg.ml-1）对苯肾上腺素（PE）1.0μmol.L-1和KCl 50 mmol.L-1预收缩的胸主动脉环张力的影响。结果：夏枯草醇提取物对离体大鼠内皮完整和去内皮的胸主动脉环均有浓度依赖性的舒张作用,而对苯肾上腺素（PE）预收缩血管的舒张作用是内皮依赖性的。用一氧化氮合酶抑制L-NAME和岛苷酸环化酶抑制剂MB预处理后,两者的血管舒张作用均被阻断。但用环氧合酶抑制剂吲哚美辛,不能阻断夏枯草醇提取物引起的舒张血管作用。结论：夏枯草醇提取物可能是通过NO-鸟苷酸环化酶途径产生内皮依赖性的血管舒张作用。     

大蒜多糖体外抗乙型肝炎病毒作用研究

目的:观察比较大蒜多糖A、B、C对乙型肝炎病毒(HBV)基因转染的人肝癌细胞系2215细胞分泌 HBsAg、HBeAg的影响及其细胞毒性.方法:在2215细胞接种24h后加入大蒜多糖A、B、C,12天后收集细胞培养上清,以ELISA法检测HBeAg与HbsAg,并用MTT染色法观察药物的细胞毒性.结果:大蒜多糖A、B、C对2215细胞半数毒性浓度分别为110.53 mg/ml、108.65 mg/ml、16.00 mg/ml;可剂量依赖性抑制HBsAg的分泌,其半数抑制浓度分别为9.31mg/ml、21.30mg/ml和1.31mg/ml,治疗指数分别为11.87、5.10和12.21,对HBeAg的分泌则均无明显抑制作用.结论:大蒜多糖A、B、C在培养 2215细胞中可抑制HBsAg的分泌.     

夏枯草提取物对α-淀粉酶抑制作用的初步研究

目的探讨夏枯草提取物对α-淀粉酶的抑制作用。方法采用水提和水提醇沉方法得到夏枯草水提物、浸膏、粗多糖,通过Van Loon′s碘比色法检测α-淀粉酶活性,以夏枯草水提物测定该酶动力学。结果夏枯草水提物对α-淀粉酶有抑制作用,呈量效关系,对该酶抑制类型为反竞争性抑制。夏枯草浸膏对α-淀粉酶抑制作用较水提物明显。结论夏枯草水提物、浸膏对α-淀粉酶存在抑制作用,有效部位可能在浸膏部分,为深入研究夏枯草提取物抑制单糖吸收作用提供了依据。