银杏叶提取物及银杏内酯B对体外培养大鼠神经元损伤的保护作用比较

目的:经预处理给药模式观察了银杏叶提取物(extract ofGinkgo biloba,EGb761)及其单体银杏内酯B(ginkgol-ide B,GB)对神经元损伤的影响,以探讨EGb761及GB在抗兴奋毒性神经损害中的应用价值与实施途径。方法:原代培养新生Sprague-Dawley(SD)大鼠的海马神经元,建立谷氨酸诱导的兴奋毒性模型。采用台盼蓝染色、凋亡神经元测定及乳酸脱氢酶(LDH)测定的方法观察不同剂量EGb761,GB的神经保护作用,并与NMDA(N-甲基-D-天门冬氨酸盐)受体非竞争性拮抗剂MK801的神经保护作用相比较。结果:EGb761,GB在不同剂量下均能不同程度的提高细胞存活率,降低凋亡率,减少LDH泄露,且在一定范围内保护作用呈剂量依赖的方式。EGb761,GB分别在100 mg.L-1,100μmol.L-1的剂量下有最佳的保护效果,但均弱于MK-801(10μmol.L-1),GB最佳剂量下保护效果优于EGb761。结论EGb761,GB对谷氨酸兴奋毒性损害有保护作用。在预处理给药模式的最佳剂量下,GB的保护效果优于EGb761,将其用于高危人群的预防干预可能有更大价值。     

β-细辛醚,丁香酚和远志皂苷对Aβ25-35神经细胞毒性的保护作用

目的:优选β-细辛醚,丁香酚和远志皂苷对Aβ25-35诱导的海马神经细胞的保护作用,确定三者最佳配比。方法:采用体外细胞培养的方法,通过NF染色鉴定,建立大鼠海马神经细胞Aβ25-35损伤模型。利用正交实验设计,测定细胞存活率(MTT法)、乳酸脱氢酶(LDH)活性,确定最佳三种药物最佳配比;通过观察细胞形态,利用Hoechst33258染色检测细胞凋亡情况。结果:L9(34)正交设计实验结果表明β-细辛醚(20,40,80μmol/L),丁香酚(2,4,8μmol/L),远志皂苷(10,20,40μmol/L)合用的最佳优化配比剂量分别为40μmol/L,2μmol/L,20μmol/L,可显著降低Aβ25-35(1μmol/L)诱导的神经细胞凋亡率(P<0.01)和LDH活性,提高细胞相对生存率。结论:三种药物联用可有效保护海马神经细胞免受β淀粉样蛋白的毒性损伤。     

白果内酯对Aβ_(25-35)诱导HT22细胞损伤及NLRP-1炎症小体激活的影响

目的研究白果内酯对Aβ_(25-35)诱导HT22细胞损伤及NLRP-1炎症小体激活的影响。方法 Aβ_(25-35 )(1μmol/L)诱导HT22建立细胞损伤模型,同时白果内酯(6、12、24μmol/L)和NADPH氧化酶抑制剂(DPI, 15μmol/L)处理24 h,采用CCK-8法检测细胞活力,Annexin V-FITC/PI双染法检测神经元细胞凋亡率,流式法(DCFH-DA荧光探针)测定细胞内ROS生成,ELISA法测定IL-1β、IL-6、TNF-α水平,Western blot法检测NLRP-1、ASC、caspase-1的蛋白表达。结果与对照组比较,模型组细胞活力下降(P0.01),神经元细胞凋亡率提高(P0.01),同时,ROS的生成、细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α水平及NLRP-1、ASC、caspase-1的蛋白表达均增多(P0.01);与模型组比较,白果内酯(12、24μmol/L)组能提高细胞活力,减少ROS生成,降低IL-1β、IL-6、TNF-α水平与神经元细胞凋亡率(P0.05,P0.01),白果内酯(24μmol/L)组能抑制细胞NLRP-1、ASC及caspase-1的蛋白表达(P0.01)。结论白果内酯对Aβ_(25-35)诱导的小鼠海马神经元HT22细胞损伤具有较好的保护作用,其机制可能与抑制NADPH氧化酶-ROS介导的NLRP-1炎症小体激活有关。     

栝楼桂枝颗粒对谷氨酸诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞兴奋性毒性损伤的影响

目的观察栝楼桂枝颗粒对谷氨酸诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12)兴奋性毒性损伤的影响,并初步探讨其作用机制。方法采用谷氨酸诱导PC12兴奋性毒性损伤造模。将细胞随机分为正常组、谷氨酸组和栝楼桂枝颗粒低(200μg/m L)、中(400μg/m L)、高(800μg/m L)剂量组,MTT法和LDH法检测PC12活力;Caspase-3活性检测法、Annexine V/PI双染色法检测细胞凋亡,Western blot和RT-PCR分别检测Bcl-2、Bax蛋白和m RNA表达。结果与谷氨酸组比较,MTT法栝楼桂枝颗粒各剂量组PC12活力升高,LDH法栝楼桂枝颗粒各剂量组细胞活力降低;Annexine V/PI双染色法栝楼桂枝颗粒各剂量组PC12凋亡率降低;Caspase-3活性检测法栝楼桂枝颗粒各剂量组Caspase-3活性降低;RT-PCR及Western blot检测栝楼桂枝颗粒各剂量组Bax表达降低、Bcl-2表达升高。结论栝楼桂枝颗粒对谷氨酸诱导PC12兴奋性毒性损伤有一定的保护作用,其保护作用与其抗细胞凋亡作用有关。     

银杏内酯B对谷氨酸诱导SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用

目的:探讨银杏内酯B对谷氨酸诱导的人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞凋亡的保护作用及其机制。方法:用2mmol/L谷氨酸诱导SH-SY5Y细胞凋亡建立模型,以不同浓度的银杏内酯B(10、50和250μmol/L)进行保护,MTT比色法检测细胞存活率;Hoechst 33258染色法观察药物作用后细胞凋亡的形态学变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Fura-2/AM双波长荧光法测定细胞内钙离子浓度;Western blot检测线粒体和胞浆中Cyt C蛋白的表达。结果:2 mmol/L谷氨酸作用SH-SY5Y细胞24 h后细胞存活率为0.721±0.013,与正常组相比明显降低;细胞核固缩裂解,呈凋亡特征性改变;细胞凋亡率为(13.27±0.08)%、细胞内钙离子浓度为359±11 nmol/L,均明显升高。与凋亡组相比,银杏内酯B(10、50、250)μmol/L保护组细胞存活率分别为0.768±0.014、0.819±0.013、0.897±0.010,均明显升高;细胞核核固缩裂解减少,形态有所改善;细胞凋亡率分别为11.33±0.57、7.02±0.47、5.85±0.24;细胞内钙离子浓度为302±9 nmol/L、243±9 nmol/L、186±8 nmol/L,均明显降低;Western blot结果显示,与凋亡组相比银杏内酯B保护组可以显著减少细胞线粒体以及胞浆中Cyt C蛋白的含量。结论:银杏内酯B对谷氨酸诱导的SH-SY5Y细胞凋亡具有保护作用,其机制可能与银杏内酯B降低了细胞内钙离子的浓度及阻断了Cyt C从线粒体释放入胞浆中有关。     

知母皂苷元对谷氨酸诱导的皮层神经元损伤的保护作用及其机制

目的:观察知母皂苷元(Sarsasapogenin,SAR)对谷氨酸引起的皮层神经元损伤的保护作用及其机制研究。方法:大鼠乳鼠大脑皮层神经元,培养7 d后用于实验。倒置相差显微镜观察神经元树突生长情况;用MTT法测定细胞活力;Hoechst33258核染色观察细胞凋亡的形态学改变;Western印迹法检测神经元SYP、p-PDK1、p-Akt473、p-mTOR蛋白表达水平。结果:形态学观察结果显示谷氨酸(150μmol/L)可明显抑制神经元树突的生长发育。谷氨酸150μmol/L+SAR 30μmol/L组可明显对抗谷氨酸的抑制作用。谷氨酸150μmol/L+SAR30μmol/L+各阻断剂组能够阻断SAR的作用。谷氨酸可降低神经元细胞活力及增加神经元细胞凋亡百分比。谷氨酸150μmol/L+SAR 30μmol/L组能明显抑制谷氨酸引起的神经元细胞活力降低及细胞凋亡百分比增加。谷氨酸150μmol/L+SAR 30μmol/L+各阻断剂组能够阻断SAR的保护作用。Western印迹结果显示谷氨酸可明显降低SYP、p-PDK1、p-Akt473、p-mTOR蛋白表达水平。谷氨酸150μmol/L+SAR 30μmol/L组可明显增加SYP、p-PDK1、p-Akt473及p-mTOR蛋白表达水平。谷氨酸150μmol/L+SAR 30μmol/L+各阻断剂组能够明显降低神经元SYP、p-PDK1、p-Akt473及p-mTOR的蛋白表达水平。结论:SAR对谷氨酸引起的体外培养皮层神经元的损伤有保护作用,这种作用可能与PI3K/Akt/mTOR信号转导通路有关。     

丹酚酸B对谷氨酸诱导的 PC12 细胞兴奋毒保护作用的研究

目的:研究丹酚酸B对谷氨酸诱导PC12细胞兴奋毒的保护及作用机制。方法:以谷氨酸损伤PC12细胞24 h为模型,采用四甲基偶氮唑蓝法检测细胞存活率;LDH法检测乳酸脱氢酶的漏出率;AO/EB双染法荧光显微镜和PI单染流式细胞术检测细胞凋亡;流式细胞术检测细胞内活性氧的含量;Western blotting法检测细胞内Caspase-3蛋白的表达。结果:丹酚酸B可明显抑制谷氨酸诱导的PC12细胞的损伤,阻止细胞LDH的释放,在50～200μmol.L-1剂量呈一定的量效关系;同时,丹酚酸B明显降低谷氨酸诱导的活性Caspase-3蛋白的表达,抑制谷氨酸引起的ROS的累积,降低PC12细胞的凋亡率,在50～200μmol.L-1剂量呈量效相关性。结论:在一定剂量范围内,丹酚酸B对谷氨酸损伤的PC12细胞有保护作用,其保护的机制可能与丹酚酸B减少ROS的生成,阻止氧化损伤的发生,抑制Caspase-3途径依赖的凋亡相关。     

银杏叶内酯N对谷氨酸诱导PC12细胞损伤的保护作用

目的:探讨银杏内酯N抗谷氨酸诱导大鼠PC12细胞损伤的影响及机制。方法:使用谷氨酸建立PC12细胞损伤模型,给予不同浓度银杏内酯N,并以银杏内酯B为阳性对照。采用MTT比色法测定细胞存活率;采用吖啶橙(AO)染色检测银杏内酯N对PC12凋亡的作用;采用流式细胞术检测银杏内酯N对PC12细胞活性氧(ROS)、线粒体膜电位的影响,采用Western blot检测Cleaved Caspase-3蛋白的表达。结果:银杏内酯N在2~8μmol/L剂量时,可抑制谷氨酸诱导的PC12细胞凋亡及ROS的升高,稳定受损PC12细胞的膜电位,降低Cleaved Caspase-3蛋白表达。结论:银杏内酯N能拮抗谷氨酸导致的PC12细胞损伤,其机理与减少ROS的生成,稳定细胞膜电位,抑制Cleaved Caspase-3蛋白表达有关。     

丹皮酚对Aβ1-42致神经元细胞毒的保护作用及机制

目的:考察丹皮酚对β-淀粉样蛋白(Aβ)损伤神经元的保护作用及机制.方法:取生长良好的新生大鼠海马神经元和经诱导分化后的SH-SY5Y细胞株,在培养液中加入不同浓度(1,5,10 μmol·L-1)的丹皮酚孵育6h后,再加入Aβ1-42寡聚体(30 μmol·L-1)分别孵育24,48 h.采用Heochst33258荧光染色法观察神经元的凋亡形态,Annexin V/PI双染流式细胞术测定SH-SY5Y细胞凋亡率,RT-PCR法检测神经元BDNF和Bcl-2 mRNA的表达.结果:与模型组比较,各剂量丹皮酚(1,5,10 μmol·L-1)显著减少海马神经元核固缩,降低SH-SY5Y细胞的凋亡率至22.4％,18.1％,16.4％,显著增加海马神经元BDNF和Bcl-2 mRNA的表达.结论:丹皮酚可通过增加神经元BDNF和Bcl-2的表达,拮抗Aβ1-42寡聚体诱导的神经细胞损伤.     

Humanin对缺氧诱导的大鼠皮层神经元损伤的保护作用

目的观察Humanin（HN）对缺氧诱导皮层神经细胞损伤的保护作用。方法培养10d的原代皮层神经元在缺氧环境下（氧含量〈2％）放置4h诱导神经细胞损伤。实验组在缺氧之前24h分别加入终浓度为10μmol／L和20μmol／L的HN。通过测定MTT和Calcein—AM染色检测细胞活力。通过测定丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、乳酸脱氢酶（LDH）的变化检测细胞损伤的程度。结果HN可以提高缺氧4h后细胞的存活率，同时可以降低由细胞损伤所引起的MDA、SOD、LDH的升高。20μmol／L的HN具有比10μmol／L更显著的保护作用。结论HN对缺氧诱导的神经元细胞损伤具有保护作用。     

银杏内酯对三种脑缺血模型大鼠的保护作用

目的研究银杏内酯对3种模型大鼠脑缺血的保护作用.方法建立大鼠急性不完全性脑缺血(AICI)模型、大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型、大鼠全脑缺血(GI)模型,以尼莫地平及银可络为阳性对照组,观察银杏内酯对脑缺血大鼠脑梗塞体积、血液流变学指标、脑生化指标、神经行为及脑组织病理变化等的影响.结果银杏内酯降低急性不完全性脑缺血大鼠的脑含水量及脑毛细血管通透性,改善大脑中动脉阻塞大鼠神经行为,减少其脑梗塞灶体积,升高超氧化物歧化酶(SOD)水平,降低丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)、LA水平;降低全脑缺血大鼠的血液粘度,改善血液流变学指标;改善脑组织神经细胞缺血后病理改变.结论银杏内酯可改善脑缺血状态,对抗缺血性脑损伤,具有明确的脑保护作用.     

天麻素对大鼠皮层缺氧神经细胞NR1亚基mRNA表达的影响

目的:观察天麻素对体外培养大鼠皮层缺氧神经细胞N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体NR1亚基mRNA表达的影响,探讨天麻素在神经保护方面的可能作用机制。方法:体外培养大鼠胚胎皮层神经细胞,以缺氧无糖培养建立神经细胞损伤模型,采用不同质量浓度的天麻素(13,26,52 mg.L^-1)处理细胞,用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测神经细胞NR1 mRNA的表达。结果:神经细胞缺氧损伤后,NR1 mRNA的表达显著增高;加入不同质量浓度的天麻素后均能显著降低神经细胞NR1 mRNA的表达。其中以26,52 mg.L^-1的抑制作用最佳。结论:天麻素可能通过拮抗由缺氧引起的神经细胞NMDA受体NR1亚基mRNA表达的增加,发挥其神经保护作用。     

Biological Activities of Oleanolic Acid Derivatives from Calendula officinalis Seeds

Phytochemical examination of butanol fraction of Calendula officinalis seeds led to the isolation of two compounds identified as 28‐O‐β‐D‐glucopyranosyl‐oleanolic acid 3‐O‐β‐D–glucopyranosyl (1→3)‐β‐D‐glucopyranosiduronic acid (CS1) and oleanolic acid 3‐O‐β‐D–glucopyranosyl (1→3)‐β‐D‐glucopyranosiduronic acid (CS2). Biological evaluation was carried out for these two compounds such as melanin biosynthesis inhibitory, hyaluronic acid production activities, anti obesity using lipase inhibition and adipocyte differentiation as well as evaluation of the protective effect against hydrogen peroxide induced neurotoxicity in neuro‐2A cells. The results showed that, compound CS2 has a melanin biosynthesis stimulatory activity; however, compound CS1 has a potent stimulatory effect for the production of hyaluronic acid on normal human dermal fibroblast from adult (NHDF‐Ad). Both compounds did not show any inhibitory effect on both lipase and adipocyte differentiation. Compound CS2 could protect neuro‐2A cells and increased cell viability against H₂O₂. These activities (melanin biosynthesis stimulatory and protective effect against H₂O₂ of CS2 and hyaluronic acid productive activities of these triterpene derivatives) have been reported for the first time. Copyright © 2016 John Wiley & Sons, Ltd.     

舒肝方对心理应激肝郁大鼠神经生殖内分泌的作用

目的:探讨舒肝方(柴胡、芍药、枳壳等)对心理应激肝郁雌性大鼠神经生殖内分泌的影响。方法:以夹尾激怒法建立心理应激肝郁证大鼠模型,检测疏肝补肾中药对大鼠下丘脑垂体和血清NE、DA、5-HT、HVA、DOPAC、5-H IAA以及血清LH、FSH、E2、T、P、PRL水平。结果:模型大鼠下丘脑垂体NE减少,DA、5-HT及5-H IAA含量增加,血清FSH、LH、E2、P降低,NE、DA、5-HT、5-H IAA及T水平升高(P<0.05,P<0.01)。舒肝补肾组血清P及LH水平明显升高;舒肝及舒肝补肾方均能升高模型大鼠下丘脑垂体NE及血清FSH、E2水平,降低下丘脑垂体DA、5-HT、5-H IAA及血清NE、5-HT、T水平;补肾方亦能抑制下丘脑垂体NE、血清FSH、P水平下降及下丘脑垂体与血清5-HT、血清NE、T水平升高。(P<0.05)。结论:心理应激状态下肝郁证雌性大鼠的神经生殖内分泌功能紊乱,舒肝补肾中药具有改善神经生殖内分泌功能的作用。     

中风皂贝化痰胶囊对大鼠脑缺血再灌注损伤后的神经保护作用及血管内皮生长因子表达的影响

目的:观察中风皂贝化痰胶囊对大鼠脑缺血再灌注损伤后神经保护作用及血管内皮生长因子(vascularendothelial growth factor,VEGF)表达的影响。方法:50只SD大鼠随即分成:假手术组,缺血再灌注组,脑缺血再灌注+中风皂贝化痰胶囊高、中、低剂量组(1.62,1.08,0.54 g.kg-1.d-1)。采用Zea-Longa方法制备大鼠脑缺血再灌注模型,观察中风皂贝化痰胶囊对大鼠脑缺血再灌注损伤后的神经保护作用及VEGF表达的影响。结果:与假手术组相比,缺血再灌注大鼠出现严重的神经功能缺失症状,皮质和海马区VEGF表达增强;与脑缺血再灌注组相比,中风皂贝化痰胶囊治疗组能显著改善大鼠神经功能缺失症状,增加VEGF的表达,其中以中风皂贝化痰胶囊高剂量组的神经保护作用最为显著,VEGF阳性细胞区积分吸光度为(150.8±9.8)。结论:中风皂贝化痰胶囊对大鼠脑缺血再灌注损伤具有保护作用,其作用机制可能与增加VEGF的表达有关。     

针灸抗脑衰的实验研究

本文将 1 996年以来关于针灸抗脑衰实验研究的主要文献报道归纳整理 ,分为针刺的调节作用、艾灸的调节作用及其他疗法三个方面 ,陈述了目前这些疗法对神经内分泌系统调节作用的实验研究概况 ,并作了简要评述 ,对今后的研究提出了几点建议。     

中央型腰椎间盘突出症牵引推拿治疗疗效与CT成像及唾液中单胺类神经递质含量变化的关系

为客观评价牵引推拿治疗中央型腰椎间盘突出症的疗效 ,了解患者治疗前后的CT成像变化、唾液中单胺类神经递质含量变化及其与疗效的关系。对采用牵引推拿手法治疗的 5 6例患者进行了观察 ,于治疗 6周后评定疗效 ,同时测量比较突出物CT成像的大小变化并采用荧光法技术分析治疗前后唾液中单胺类神经递质含量变化及其与疗效的关系。结果显示 ,临床痊愈 36例 ,好转 17例 ,无效 3例 ,总有效率达 94.7%。治疗后突出椎间盘的CT成像均有缩小 ,但无统计学意义 (P >0 .0 5 ) ,其形态变化较明显 (P <0 .0 5～ 0 .0 1) ,有显著性意义 ;5 HT的含量治疗后明显下降 ,有非常显著意义 (P <0 .0 1) ;5 HIAA、NE和DA的含量治疗后下降 ,有显著意义 (P <0 .0 5 )。表明牵引推拿治疗中央型腰椎间盘突出症可使突出椎间盘与周围神经根位置关系发生改变 ,具有显著的临床疗效 ,并与唾液中单胺类神经递质 5 HT、NE含量有关     

祛除外风和益气活血方药治疗实验性缺血性卒中的比较研究

目的 :观察祛除外风和益气活血两类方药治疗缺血性卒中的疗效并进行比较研究。方法 :雄性SD大鼠 30只 ,随机分成模型组、祛除外风治疗组和益气活血治疗组 ,观察比较缺血90min再灌注 2 4h、4 8h神经功能缺损评分和体重的变化情况 ,并通过TTC染色研究两类方药对再灌注 4 8h梗塞体积的影响。结果 :两治疗组的神经功能缺损评分与梗塞体积相较模型组均显著减小(P <0 0 5 ) ,并且祛除外风治疗组的体重下降较模型组和益气活血治疗组有明显改善。结论 :祛除外风和益气活血方药对缺血性卒中均有一定疗效。     

中医药治疗慢性心力衰竭临证应用浅析

中医学认为,慢性心力衰竭病机为阳气虚衰、水瘀内停。治疗原则为温阳益气、利水活血,配合现代医学抑制神经内分泌,抑制心肌重构,从而更好地改善症状,改善预后,延长生存期。     

脑功能成像技术在针灸治疗肠易激综合征中的应用

肠易激综合征(IBS)是一种慢性功能性肠病并常伴有焦虑、抑郁等心理障碍,其发病率高、症状易反复,严重影响患者的生活和工作。针灸治疗IBS的临床疗效肯定,但其作用机制尚不明确。随着神经影像学技术的发展,越来越多的学者应用该技术研究IBS患者脑功能活动的变化,发现IBS多个脑区活动存在异常,如脑岛、前扣带回、前额叶等与IBS内脏感觉与情绪调节密切相关的脑区,而针灸治疗对相应脑区的功能活动具有一定的调节作用,这可能为我们了解针灸治疗IBS的作用机制提供了客观的依据。因此,本文就应用脑功能成像技术在针灸治疗对IBS脑功能活动的影响及其可能的作用机制作一综述。