刘寄奴抗炎组分筛选及其机制研究

目的考察刘寄奴活性组分及其对干扰素-γ(IFN-γ)和脂多糖(LPS)协同诱导RAW264.7细胞的抗炎机制。方法应用溶剂萃取和D101大孔树脂分别制备刘寄奴各提取物和总黄酮,紫外分光光度法测定总黄酮的含量;IFN-γ和LPS协同诱导细胞炎症模型;Greissreaction法测定各提取物及总黄酮对细胞上清液中亚硝酸盐含量的影响;RT-PCR法考察总黄酮对细胞内诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、诱导型环氧合酶(COX-2)mRNA的影响;Westernblot法考察总黄酮对细胞iNOS、COX-2、磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)蛋白表达的影响。结果刘寄奴乙酸乙酯部位与其他提取物相比,在相同剂量时对亚硝酸盐含量的抑制率最高,由此富集获得的总黄酮含量达53%。刘寄奴总黄酮呈剂量依赖性抑制细胞上清液中亚硝酸盐的含量,并对刺激后的细胞活力有保护作用;刘寄奴总黄酮呈抑制iNOS、COX-2mRNA表达,抑制iNOS、COX-2、p-ERK的蛋白表达。结论活性导向的分离提示乙酸乙酯部位是刘寄奴抗炎活性组分之一,由此富集的总黄酮呈剂量依赖性抑制细胞上清液中亚硝酸盐含量,部分通过丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)中的细胞...     

黑种草子总皂苷对炎症介质及ERK/MAPK信号转导通路的影响

目的:研究黑种草子总皂苷的抗炎机制。方法:IFN-γ和LPS协同造成小鼠RAW264.7巨噬细胞炎症模型;Griess反应测定细胞上清液中NO产量;FRAP法测定细胞总抗氧化能力;RT-PCR检测iNOS,COX-2,IL-1β,IL-6,TNF-α,PPAR-γmRNA表达;Western blot检测iNOS,PPAR-γ,p-ERK蛋白表达水平。结果:黑种草子总皂苷呈剂量依赖性抑制细胞上清液中NO含量,提高细胞总抗氧化能力,下调iNOS,COX-2,IL-1β,IL-6 mRNA和iNOS蛋白的表达,抑制ERK磷酸化,上调PPAR-γ mRNA和蛋白表达。但对TNF-α mRNA表达影响不大。结论:黑种草子总皂苷部分通过抑制MAPK信号转导通路中的ERK磷酸化来下调iNOS基因和蛋白的表达从而减少NO的产量,下调COX-2,IL-1β,IL-6炎症介质表达;同时提高细胞总抗氧能力及上调抗炎介质PPAR-γ的表达而发挥抗炎效果。     

桑枝总黄酮体外抗炎活性及机制研究

目的 研究桑枝总黄酮的体外抗炎活性及其作用机制.方法 IFN- γ和LPS 协同造成小鼠RAW264.7细胞炎症模型;Griess反应测定细胞上清液中NO产量;FRAP测定细胞总抗氧化能力;RT- PCR检测iNOS、COX-2、HO-1、IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA表达;Western blot检测iNOS、p-ERK蛋白表达水平.结果 桑枝总黄酮呈剂量依赖性抑制细胞上清液中NO含量并且无细胞毒性,提高细胞总抗氧化能力,下调iNOS、COX-2、 IL-1β、IL-6 mRNA和iNOS、p-ERK蛋白的表达,上调HO-1mRNA表达,但对TNF-α mRNA表达影响不大.结论 桑枝总黄酮部分通过MAPK中的ERK信号转导通路抑制iNOS基因和蛋白的表达从而抑制NO的产量,提高细胞总抗氧化能力,同时下调COX-2、IL-1β、IL-6等炎症介质和上调抗炎介质HO-1的表达而发挥抗炎效果.     

芫花总黄酮的抗炎机制研究

目的研究芫花总黄酮（TFDG）对脂多糖（LPS）协同干扰素γ（IFN-γ）诱导鼠RAW264.7巨噬细胞炎症模型中亚硝酸盐含量、诱导型合酶和细胞因子表达的影响,并从ERK/MAPK通路探讨其抗炎机制。方法细胞随机分为芫花总黄酮处理组,阳性药物组（I-NIL50μM）、炎症模型组和正常对照组;Griess反应测定TFDG25、50、100mg/L3个剂量和预刺激、同时加入、预处理3个处理时间及I-NIL对激活细胞上清液中亚硝酸盐的影响,并测定TFDG3个剂量及I-NIL对静息细胞上清液中亚硝酸盐产量的影响;MTT法测定TFDG3个剂量和I-NIL分别对激活细胞和静息细胞的细胞活力的影响;RT-PCR检测TFDG50、100mg/L预处理1h对激活细胞中诱导型合酶iNOS、COX-2、细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α基因表达的影响;Western blot检测TFDG50、100mg/L预处理1h对激活细胞中诱导型合酶iNOS、COX-2和p-ERK蛋白表达的影响。结果模型组中一氧化氮（NO）产物亚硝酸盐含量、诱导型合酶iNOS和COX-2基因和蛋白表达,细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α基因表达,ERK蛋白磷酸化水平均明显高于正常对照组（P〈0.01,P〈0.05）,细胞活力显著下降（P〈0.01）;TFDG呈剂量和时间依赖性抑制激活细胞上清液中亚硝酸盐含量（P〈0.01）,提高炎症损伤的细胞活力（P〈0.01）;TFDG对静息细胞上清液中亚硝酸盐含量无影响,无细胞毒性且于100mg/L剂量促进细胞增殖（P〈0.05）。阳性药物I-NIL于50μM剂量的抑制率为35.20%（P〈0.01）,提高炎症损伤后的细胞活力（P〈0.01）,但对静息细胞呈细胞毒性（P〈0.05）。与模型组比较,芫花总黄酮下调iNOS基因和蛋白表达（P〈0.01,P〈0.05）,抑制COX-2基因表达（P〈0.01）,对COX-2蛋白表达仅在高剂量100mg/L具抑制效果（P〈0.01）;下调细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α的基因表达（P〈0.01）,同时能抑制ERK蛋白的磷酸化水平（P〈0.05）。结论芫花总黄酮抑制激活细胞中iNOS基因和蛋白的表达从而降低NO稳定产物亚硝酸盐的产量,抑制COX-2基因和蛋白的表达,同时抑制细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α的基因表达,部分机制为抑制ERK/MAPK信号通路中ERK蛋白磷酸化而达到多靶点抗炎效果。     

防己茯苓汤抗炎组分筛选及其机制分析

目的研究防己茯苓汤(防己、黄芪、桂枝、茯苓、甘草)的抗炎活性组分及其作用机理。方法利用水煎、乙醇提取和有机溶剂萃取方法获得水/醇提取物和组分,利用脂多糖和IFN-γ刺激造成鼠巨噬细胞炎症模型,采用Griess法考察细胞中一氧化氮产量,FRAP法考察总抗氧化能力;Western Blot法考察诱导型—氧化氮合酶(iNOS)和环氧合酶2(COX-2)蛋白的表达。结果和其它组分相比,乙醇-乙酸乙酯提取组分(EAFD)抑制亚硝酸盐的活性最强,其IC50最低,且对静息巨噬细胞的活力无影响。该组分能抑制iNOS(P<0.01)和COX-2(P<0.05)的蛋白表达,同时提高总抗氧化能力(P<0.01)。结论实验结果提示乙醇-乙酸乙酯提取组分是防己茯苓汤主要的抗炎活性组分,部分通过抑制炎症中关键诱导型合酶的蛋白表达,提高总抗氧化能力而发挥抗炎作用。     

不同型号大孔树脂纯化的刘寄奴总黄酮对诱导型一氧化氮合酶的抑制作用

目的考察不同型号大孔树脂纯化的刘寄奴总黄酮对IFN-γ和LPS协同诱导RAW264.7细胞中NO表达的影响。方法应用溶剂萃取和AB-8、D101、ADS-17大孔树脂分别制备刘寄奴总黄酮,分光光度法测定总黄酮的含量;IFN-γ和LPS协同诱导RAW264.7造成炎症模型;Griessreaction测定总黄酮对细胞上清液中亚硝酸盐含量的影响;RT-PCR考察总黄酮对细胞内诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA的影响;Westernblot考察总黄酮对细胞iNOS蛋白表达的影响。结果3种刘寄奴总黄酮含量均达到50%以上,且以ADS-17型大孔树脂富集所得的总黄酮含量最高,达到67.78%。3种刘寄奴总黄酮均呈剂量和时间依赖性抑制细胞上清液中亚硝酸盐的含量,同等流程中以ADS-17型大孔树脂富集的总黄酮达到半抑制率的剂量为最小。ADS-17型刘寄奴总黄酮呈剂量依赖性抑制iNOSmRNA和蛋白的表达。结论ADS-17型大孔树脂有效富集刘寄奴黄酮类化合物,适用于刘寄奴总黄酮的提取。ADS-17型刘寄奴总黄酮呈时间和剂量依赖性抑制细胞上清液中亚硝酸盐含量,部分通过抑制iNOSmRNA和蛋白的表达达到下调NO产量的结果。刘寄奴总黄酮可能是刘寄奴抗炎药效的物质基础,有望进一步开发成为iNOS抑制剂。     

卫矛提取物不同组分总黄酮含量及抗氧化抗炎活性评价

目的比较卫矛提取物不同极性组分总黄酮含量及抗氧化抗炎活性。方法 60%乙醇提取卫矛黄酮类化合物,经萃取制得4个不同极性的组分(石油醚组分、乙酸乙酯组分、正丁醇组分、水组分)。采用分光光度法测定各组分的总黄酮含量;通过清除DPPH自由基、ABTS自由基试验和还原力试验,评价各组分的抗氧化活性;利用脂多糖诱导小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7释放一氧化氮模型,评价各组分的抗炎活性。结果卫矛提取物总黄酮的含量为(271.25±5.51)mg·g-1,其中乙酸乙酯组分的总黄酮含量最高,为(773.61±12.03)mg·g-1,显著高于总提取物和其他组分(P0.01)。活性评价结果表明卫矛提取物具有良好的抗氧化和抗炎活性,其中乙酸乙酯组分的抗氧化活性最强,乙酸乙酯组分和石油醚组分则具有良好的抗炎活性。结论卫矛的化学成分具有良好的多样性,其作用机制具有多组分、多靶点、多途径的特点,其具体机制有待进一步深入研究。     

桑枝提取部位及其组合对巨噬细胞炎症介质的影响

目的 研究桑枝不同提取部位及其配比对脂多糖(LPS)协同γ-干扰素(IFN-γ)刺激的巨噬细胞RAW264.7中炎症介质的影响.方法 采用有机溶剂萃取和大孔树脂富集的方法制备桑枝乙醇提取物不同萃取部位Ⅰ～Ⅳ.各提取部位及不同部位组合分别作用于细胞后,Griess法测定RAW264.7细胞亚硝酸盐的量;MTT法检测细胞活力;三价铁还原抗氧化能力测试(FRAP)法测定细胞抗氧化能力;半定量PCR法测定炎症介质基因的表达;Western blotting法测定炎症介质蛋白的表达.结果 桑枝4个提取部位中,Ⅰ和Ⅱ以剂量相关方式抑制细胞悬液中亚硝酸盐的量,IC50分别为145.23、152.14 mg/L.在Ⅰ与Ⅱ 3种配比(1:1、1:4、4:1)组合中,1:1配比时抑制细胞上清液中亚硝酸盐量的IC50值最低,为110.31 mg/L,且对细胞活力具有保护作用.与模型组相比,Ⅰ和Ⅱ在200 mg/L时显著下调白细胞介素-1β (IL-1β)、IL-6、诱生型NO合酶(iNOS)、环氧合酶-2(COX-2)、核因子-κB (NF-κB)基因表达水平(P＜0.05、0.01),同时上调血红素加氧酶(HO-1)和过氧化物酶增殖体受体(PPAR-γ)基因表达水平(P＜0.05),提高细胞抗氧化能力(P＜0.05),且抑制ERK蛋白的磷酸化(P＜0.05).Ⅰ和Ⅱ(1:1)组合对COX-2、IL-1β、HO-1、NF-κB、PPAR-γ的表达有一定的协同调控效果.结论 提取部位Ⅰ和Ⅱ是桑枝抗炎的活性部位,其部分通过NF-κB和ERK/MAPK信号转导通路调控炎症介质的表达,其1:1配比组合对炎症中某些靶点均有较好的协同调控作用,抗炎效果更佳.     

祖师麻醋酸乙酯提取物体外抗炎作用及其机制

目的研究祖师麻醋酸乙酯提取物(EAEDGC)的体外抗炎作用及其机制。方法用γ-干扰素(IFN-γ)和脂多糖(LPS)协同制备小鼠RAW264.7细胞炎症模型,Griess反应测定细胞上清液中NO生成量,MTT法测定细胞活力,三价铁还原抗氧化能力测试(FRAP assay)测定细胞总抗氧化能力,RT-PCR检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、环氧化酶-2(COX-2)、血红素加氧酶-1(HO-1)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA的表达;Western blotting检测iNOS、COX-2、HO-1、p-ERK蛋白表达水平。结果 EAEDGC以剂量依赖方式抑制细胞上清液中NO的生成,提高细胞总抗氧化能力,下调iNOS、IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA及iNOS、p-ERK蛋白的表达,上调HO-1 mRNA和蛋白表达,同时不影响细胞生长;但对COX-2 mRNA和蛋白表达影响不大。结论 EAEDGC部分通过丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)中的细胞外信号调节激酶(ERK)信号转导通路抑制iNOS基因和蛋白的表达,从而抑制NO的生成,提高细胞总抗氧化能力,同时下调IL-1β、IL-6、TNF-α炎症介质和上调抗炎介质HO-1的表达,进而发挥抗炎作用。     

培养雪莲总黄酮对巨噬细胞炎性介质一氧化氮和前列腺素E_2的影响

目的:研究培养雪莲总黄酮对炎性介质一氧化氮(NO),前列腺素E2(PGE2)分泌以及一氧化氮合酶(iNOS),环氧酶-2(COX-2)mRNA表达的影响,探讨其抗炎机制。方法:用Griess法测定培养雪莲总黄酮对Raw264.7细胞NO的影响,放射免疫法测定培养雪莲总黄酮对Raw264.7细胞PGE2含量;逆转录聚合酶链式反应方法检测Raw264.7细胞iNOS,COX-2mRNA表达情况。结果:培养雪莲总黄酮可明显降低Raw264.7细胞上清中NO,PGE2含量,同时,降低iNOS,COX-2 mRNA表达。结论:培养雪莲总黄酮的抗炎作用与抑制炎性介质NO,PGE2分泌有关,抑制iNOS,COX-2 mRNA表达从而降低炎性介质NO,PGE2分泌可能是培养雪莲总黄酮的抗炎作用的机制之一。     

HOW TO MASTER THE DIFFERENTIATION OF SYNDROMES AND THE SELECTION OF ACUPOINTS QUICKLY

Differentiation of syndromes can be done by three steps:First to differentiate thenature of disease,second to differentiate the location of disease,third to analyse comprehensively thenature and location of disease.Depend on complete differentiation of syndromes,the acupoints are selected.Three cases are analysed to explain how to dominate preceding contents.     

反牵引复位固定治疗Ⅱ型、Ⅲ型距骨颈骨折

为观察反牵引复位固定治疗Ⅱ 型、Ⅲ 型距骨颈骨折的临床疗效 ,采用复位手法结合反牵引外固定器治疗 Ⅱ 型、Ⅲ 型距骨颈骨折 3 4例 ,与文献组报道结果相对比显示 :反牵引复位固定治疗Ⅱ 型、Ⅲ 型距骨颈骨折 ,疗效明显优于文献对照组 (P <0 .0 5 ) ,距骨体坏死率明显低于文献对照组 (P <0 .0 5 )。表明反牵引复位固定有利于距骨骨折的复位和稳定 ,是治疗 Ⅱ 型、Ⅲ 型距骨颈骨折的一种很好的治疗方法。     

基于临床数据分析的肝脾不调证候诊断标准临床适用性研究

目的：利用名老中医结构化病历数据库，开展中医证候诊断标准的适用性研究。方法：采用“名老中医临床诊疗信息采集系统”录入医案，使症状、舌脉等临床信息形成关系数据库。结果：A组按照《标准》判断与其符合者为155例，符合率为16.01％（155/968），175诊次，符合率为9.35%（175/1870）；Ｂ组按照《标准》判断的结果98.34%与专家判断一致，同时，《标准》将1.66％的诊次判断为肝脾不调证。结论：证候诊断标准与专家判断符合率低，标准不能适应临床实际的需要，今后应采用专家共识结合临床实际数据的方法，研究形成基于不同层次的中医证候诊断标准，提高中医证候诊断标准的普适性。     

论平性药药性在方剂配伍中的体现

对于平性药药性的认识历代一直存在争议,目前尚缺乏关于平性药配伍的专题研究.作者就平性药药性特点在方剂配伍中的体现做了探讨,认为:平性药与他药配伍后在"整体取性"、"相关奏效"、"中介调节"3点的体现尤为突出;通过配伍可以体现平性药"体平用偏"、"双向适用,条件显性"的药性特点;气味配伍是体现平性药"调整阴阳"、"以偏纠偏"作用的主要途径.     

股骨头坏死髋周经筋辨证分型规律的临床研究

[目的] 分析股骨头坏死患者髋周经筋辨证分型的规律,初步形成股骨头坏死的经筋辨证体系,为其经筋疗法提供理论依据。[方法] 对190例股骨头坏死患者循髋周足六经筋进行触诊,统计各结筋病灶点出现的频次以及所属的经筋,分析各经筋证型的分布特征。[结果] 190例患者（双侧患病169例,单侧患病21例）,总计359髋,其中27髋因结筋病灶点不明显（占7.52%）无法判定经筋证型;332髋存在数量不等的结筋病灶点（占92.48%）。单一经筋证型（47.08%）与复合经筋证型（45.40%）的出现频率基本相当。最常见的单一经筋证型为足阳明经筋型（16.99%）,其次依次为足三阴经筋型（15.04%）、足太阳经筋型（8.64%）和足少阳经筋型（6.41%）。在两经筋复合证型中,足阳明经筋的总出现率为21.45%,足三阴经筋的总出现率为20.34%,足太阳经筋的总出现率为17.55%,足少阳经筋的总出现率为15.88%。少见3经筋以上的复合证型（5.29%）。[结论] 股骨头坏死患者髋周经筋病变存在多种证型,该证型分布有着明显规律,该规律与髋周经筋的生理功能密切相关,对临床运用经筋理论指导股骨头坏死的保髋治疗具有重要意义。     

方证相对论研究的关键问题与思考

中医学以间接致思的思维方式探求人体生理、病理及防病治病规律，开展方证研究也应遵循中医学的本原思维模式。方随证出，因证变化而药物组成变化是方证对应的一般规律，称之为“方证相对论”。方证对应理论体系是非线性的、多维的、开放的复杂系统，其研究内容应体现当代医学最新成就。从中药分子水平开展方剂配伍规律研究，阐明方剂作用机理以求得方证的最佳对应和变化规律，应是方证研究深化的客观要求和关键所在。     

浅述《金匮方论衍义》对《金匮要略》的注释发微

《金匮方论衍义》对《金匮要略》的注释发微有许多独到之处：“以经释经”，藉《内经》《伤寒论》发阐《金匮要略》；注重对仲景脉象的阐释发挥；注重病证辨证，强调病因与体质因素；方论阐发，精见独到。由于此书为注释《金匮要略》第一家，故对后世《金匮要略》的注释产生了重要影响。     

生药学的发展及其研究思路

生药学为一门传统而又充满生机的学科，本文围绕着生药学科的三大研究方向“中药资源及可持续利用”、“中药物质基础及其作用机理”、“中药品质评价及质量控制”，结合科学技术发展的现状与趋势，对当前生药学科的主要研究内容、研究方法和研究思路进行了阐述，特别在植物次生代谢产物的生源途径及其调控研究，中药物质基础的快速、高效研究方法，中药复杂体系的体内药物学研究，中药复杂体系多组分、多靶点的物质基础及其作用机理研究，中药化学成分的定性、定量分析研究等方面提出一些新的研究思路和方法．为现代生药学研究提供有益的参考。     

基于“整体观”探讨中药的研究思维和方法

中药源于自然，治疗疾病有自身的优势和特点，其作用方式一直是中药研究者们不断研究和探索的重要内容。本文从中医的“整体观”对中药起效机制进行深入思考，认为中药成分多样可契合生物多靶，而生物靶标之间的协同作用是中药起效机制的重要补充；此外，中药对情志及肠道菌群稳态的调节作用也不容忽视，或许可为今后开展中药作用机制的研究提供新的思维和方法。     

试论小肠疾病的发病特点

小肠病为临床所常见,中医辨证论治有其独到之处。小肠作为六腑之一,有其自身的生理病理特性,故小肠病的发病,亦有一定的规律和特点。主要有:1.内外相召,湿邪为患。内外湿邪最易留滞小肠而出现多种病证,同时在病机上常有寒化和热化的趋势。2.易虚易实,虚实相兼。小肠疾病极易出现虚证、实证或虚实夹杂证候,不仅表现在小肠本腑,而且可波及他脏他腑,乃至全身。3.或寒或热,寒热互见。小肠寒热不仅可引起本腑的许多病证,并可出现小便异常及体表病证。同时小肠寒热可互相转化,或寒热错杂,或伤及血分,或损及脾阳。4.可急可缓,病情缠绵。小肠病的发病,有的相当急重,有的发病缓慢,病情缠绵难愈。