人工虫草与冬虫夏草HPLC特征图谱研究

目的以人工北虫草、发酵虫草菌粉和冬虫夏草为研究对象,建立高效液相色谱(HPLC)特征图谱。方法采用超声法提取虫草中的水溶性成分,HPLC建立虫草的特征图谱。采用Agilent ZORBAX SB-Aq色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈(A)-0.04 mol/L磷酸二氢钾溶液(B),梯度洗脱(0~16 min,0%A;16~38 min,0%→10%A;38~58 min,10%→15%A;58~65 min,15%→0%A),流速1.0 m L/min,柱温25℃,检测波长260 nm,进样体积20μL。运用国家药典委员会《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004 A)》,建立人工虫草与天然虫草HPLC特征图谱,同时指认了7个核苷类成分,并进行比较研究。结果本方法精密度、重复性、稳定性良好。以腺苷为参照峰,对11批冬虫夏草、10批人工北虫草和12批发酵虫草菌粉进行指纹图谱分析结果显示,其指纹图谱相似度分别为0.889~0.982、0.781~0.980、0.502~0.970。结论天然虫草的指纹图谱相似度较高,人工北虫草和发酵虫草菌粉指纹图谱的相似度较低。本方法可作为评价人工虫草和天然虫草质量的参考依据。     

冬虫夏草中核苷类成分的毛细管区带电泳定量分析研究

目的:建立冬虫夏草中核苷类成分(腺苷、鸟苷、尿苷和次黄嘌呤核苷)的毛细管电泳定量分析方法,研究青海产天然冬虫夏草和人工发酵虫草菌粉的核苷类成分差异。方法:采用0.025mol·L^-1硼砂缓冲液,pH9.5,工作电压为20kV,毛细管温度25℃,波长检测260nm,对4种核苷定量分析。结果:用毛细管区带电泳法定量分析冬虫夏草及人工发酵虫草菌粉中的腺苷、尿苷、鸟苷和次黄嘌呤核苷,平均加样回收率分别为98.9%,95.1%,97.8%和98.8%,RSD分别为0.4%,1.7%,1.3%和5.0%。在天然冬虫夏草中未检测到腺苷,而在人工发酵虫草菌粉中未检测到次黄嘌呤。结论:本研究方法可满意地用于腺苷、尿苷、鸟苷和次黄嘌呤核苷的定量分析。青海产地道药材冬虫夏草核苷类成分组成与人工发酵虫草菌粉有明显差异。     

蛹虫草菌丝与冬虫夏草中核苷类成分的含量测定

蛹虫草菌丝与冬虫夏草中核苷类成分的含量测定刘静明,刘岱,杨立新,钟裕容,崔淑莲(中国中医研究院中药研究所北京100700)蛹虫草CardycepsmiliLaris(L.)Link,为冬虫夏草同属真菌,近年来发现蛹草有重要的药用价值,越来越受到国内外的重视,国外报道从蛹虫草人工培养液中分离出虫草素,3′-氨基-3-去氧腺甙及肌氨酸氨基腺音。我们从蛹虫草菌丝中分离得6种成分:β-谷甾醇、麦角甾醇、D-甘露醇、腺嘌呤、腺苷和虫草素￣[1]。并对5批样品....     

HPLC法测定北冬虫夏草和常见食用菌中腺苷和虫草素

目的 建立一种HPLC法快速测定北冬虫夏草和几种常见食用菌中腺苷和虫草素的方法.方法Welch Material XB-C18色谱柱(250mm×4.6mn,5μm),以水-甲醇(85∶15)为流动相,体积流量1.0mL/min,检测波长258 nm,柱温40℃.结果腺苷在0.023 2～0.464 0μg、虫草素在0.030 0～0.600 0μg与峰面积线性关系良好,平均加样回收率分别为98.97％、99.15％,RSD分别为1.41％、1.01％.结论腺苷普遍存在于各种食用菌子实体中,而虫草素是虫草属真菌子实体中的特有活性成分.本法简便快速,为全面评估北冬虫夏草中核苷类成分的质量,推进人工培育北冬虫夏草替代野生冬虫夏草提供检测方法.     

泰山虫草菌丝体与天然冬虫夏草化学成分初步分析

目的:与天然冬虫夏草做对比,对泰山虫草菌丝体的多糖、水溶性蛋白、核苷类成分及无机元素进行了分析。方法:采用硫酸-苯酚法、Folin-酚试剂法、双波长薄层扫描法、原子吸收分光光度法、凯氏定氮法及荧光光谱法测定了上述各成分的含量。结果:泰山虫草菌丝体中多糖的含量为3.14%,低于冬虫夏草中多糖含量(5.89%);水溶性蛋白的含量二者相当,分别为0.795%和0.783%;泰山虫草菌丝体中核苷类成分腺苷、尿苷、次黄嘌呤核苷和次黄嘌呤含量分别为0.230%、0.908%、0.515%和0.097%,明显高于冬虫夏草中核苷类成分的含量,分别是冬虫夏草的8.21、3.75、11.7、5.7倍;钙、铁、锌、硒和锰微量元素的含量分别为100、53.6、12.2、0.12和1.50μg/g,其它无机元素氮、磷、镍的含量高于冬虫夏草样品,铝、汞等有害元素含量接近或低于冬虫夏草样品。结论:泰山虫草菌丝体中富含多糖、蛋白质、核苷类成分及微量元素等营养物质,尤其泰山虫草菌丝体中主要有效成分核苷类成分明显高于冬虫夏草,是很有开发利用价值的食品或药物新资源。     

基于主成分分析和聚类分析的发酵虫草菌粉类产品氨基酸比较研究

目的分析不同发酵虫草菌粉类产品氨基酸的含量差异,结合聚类分析和主成分分析法评价发酵虫草菌粉类产品的质量。方法采用氨基酸自动分析仪测定氨基酸含量,色谱柱为LCA K06/Na离子柱,流动相为柠檬酸钠0.06 mol/L(pH 3.45)(A)-柠檬酸钠0.1 mol/L(pH 10.85)(B),梯度洗脱:0~3.5 min,100%A;3.5~11.0 min,85%A;11.0~17.0 min,80%A;17.0~23.5 min,67%A;23.5~28.0 min,20%A;28.0~45.0 min,100%B,体积流量为0.45 m L/min洗脱泵+0.25 m L/min衍生泵;检测波长440 nm(脯氨酸)+570 nm(其余氨基酸);温度为58~74℃梯度控温,进样50μL,外标法测定氨基酸含量。结果分别对3种发酵虫草菌粉类产品A、B、C中氨基酸进行含量测定,产品A总氨基酸质量分数为251.82~265.93 mg/g,产品B总氨基酸质量分数为279.67~333.40 mg/g,产品C总氨基酸质量分数为321.37~370.86 mg/g,样品各批次间一致性较好。产品A和产品B为同一原料药,氨基酸含量差异不明显,产品C中组氨酸和精氨酸含量与产品A和产品B存在较大差异。主成分分析筛选的前3个主成分的累积方差贡献率达到93.551%,包含了各样品中氨基酸含量的大部分信息。聚类分析将30批样品聚为2类,其中产品A和产品B聚为一类,产品C聚为一类,聚类分析结果与实际情况相符。变量聚类分析表明当氨基酸变量聚为5类时,随机选择其中的5个变量能够准确反映发酵虫草菌粉氨基酸的质量。结论通过氨基酸含量差异研究,能够有效区别不同发酵虫草菌粉类产品,结合主成分分析和聚类分析能够客观评价发酵虫草菌粉类产品的质量。     

培养北虫草子实体与野生冬虫夏草子实体主要活性成分比较

目的:比较和评价培养北虫草子实体与野生冬虫夏草子实体的特征性化学活性成分。方法:运用现代化学分析技术,对人工低温培养的北虫草的子实体与野生冬虫夏草的主要化学成分虫草酸、虫草多糖、腺苷、超氧化物岐化酶、氨基酸组分等进行了比较分析。结果:培养北虫草子实体中虫草素含量(12.700±0.544) g/kg,为野生冬虫夏草子实体的302倍,腺苷含量为(0.037%±0.010)%,为野生冬虫夏草子实体的1.42倍,虫草多糖(5.680%±1.500%)高于野生冬虫夏草46%。培养北虫草子实体中可溶性蛋白总量(34.200%±8.090%)为野生虫草的1.31倍,且SOD活性达1616 U/g,但野生冬虫夏草中SOD活性极低。氨基酸分析结果显示,培养北虫草子实体中具有17种必需氨基酸,除甘氨酸和甲硫氨酸外,其它氨基酸含量均高于野生冬虫夏草子实体。结论:人工培养北虫草子实体,具有高含量活性成分,可以深度开发替代野生冬虫夏草作为药用材料和食品保健开发。     

虫草保健品中13种核苷类成分的UHPLC-ESI-MS/MS定量分析及评价

目的:对香港和大陆市场上销售的8种常见虫草保健品进行核苷类成分的定量分析及评价。方法:采用冰浴超声提取法与UHPLC-ESI-MS/MS分析法,快速检测虫草保健品中的13种核苷类成分。结果:虫草保健品中被测核苷类成分的含量明显高于天然冬虫夏草药材。这些保健品绝大部分组成为冬虫夏草菌丝体粉,而并非是由天然冬虫夏草经直接粉碎加工而成。结论:通过对13种核苷类成分的含量测定,比较市场上以虫草药材或虫草菌丝体为原料制备的保健品质量,可以反映部分已经上市销售的虫草类保健品在核苷类成分种类及含量之间的差异性。     

冬虫夏草及人工虫草抗肝纤维化作用谱效关系研究

目的 研究冬虫夏草及人工虫草的高效液相色谱指纹图谱与其抗肝纤维化药效的相关性,以揭示其抗肝纤维化作用的＂药效成分组＂.方法 考察虫草高效液相色谱指纹图谱较优的测定分析方法,通过该HPLC测定分析法得到冬虫夏草、发酵虫草菌粉、百令胶囊及蛹虫草菌粉胶囊的指纹图谱,找出特征共有峰,以LX-2肝星状细胞系为模型研究其对肝纤细胞的抑制效果,用pearson相关分析研究谱效相关性.结果 冬虫夏草、发酵虫草菌粉、百令胶囊及蛹虫草菌粉胶囊的高效液相色谱指纹图谱中共有10个特征共有峰,其中4、5、10号峰与肝星状细胞（LX-2）细胞抑制效果（OD值）相关性最好.结论 冬虫夏草、发酵虫草菌粉及蛹虫草菌粉胶囊对LX-2细胞均有抑制效果,冬虫夏草及人工虫草HPLC指纹图谱与其抗肝纤维化作用之间有一定对应关系,可以作为目前冬虫夏草及人工虫草抗肝纤维化作用的质量控制的有效方法.     

RP-HPLC测定天然虫草与人工虫草中核苷类成分的含量

 目的分析不同来源的天然虫草与人工虫草中主要核苷类成分的差异。方法应用RP-HPLC检测18个样品中尿苷、腺嘌呤、腺苷、虫草素的含量。Symmetry Shield Rp18柱(3.9 mm×150 mm,5μm),以乙腈-水为流动相,梯度洗脱。流速0.2～1.2mL·min^-1,检测波长260 nm,柱温30℃。结果本法高效灵敏,重现性好。所测人工虫草核苷类成分的含量较天然虫草高,不同产地天然虫草4种主要的核苷类成分的差异较不同来源人工虫草的小。结论本法能有效鉴别虫草的核苷类成分,可用于天然虫草和人工虫草中核苷类成分的分析,评价不同来源虫草的质量。     

北虫草中核苷类成分的含量测定与质量评价

目的 建立北虫草中尿苷、腺嘌呤、腺苷、虫草素4种核苷类成分的含量测定方法,确定其含量测定指标成分及其限量标准.方法 Agilent TC-C 18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),甲醇-水为流动相梯度洗脱,柱温30℃,流速1.0 mL/min;检测波长260 nm,进样量20 μL.结果 线性关系良好,精密度高,重现性好,回收率均在95.39％～103.3％;不同产地的北虫草中各核苷类成分含量变异较大.结论 该方法简便、灵敏、准确、重现性好,适用于北虫草中核苷类成分的含量测定;建议以腺苷和虫草素作为北虫草中核苷类成分的含量测定指标成分,其含量限量分别为不低于0.07％、0.27％.     

冬虫夏草及人工发酵虫草的药理作用及临床应用

目的:冬虫夏草[Cordyceps sinensis(Berk.)Sacc.]是一种传统的滋补强壮中药。近年来大量研究报道证明人工发酵培养所获得的发酵虫草菌丝体或菌粉的有效成分、药理作用及临床效果都与冬虫夏草相似,可以代替冬虫夏草在临床上广泛应用。对近年来虫草与发酵虫草,尤其是2008年以后的药理及临床研究报道进行综述。     

冬虫夏草及人工虫草核苷类成分的TLCS研究

目的：以腺苷、尿苷、鸟苷为指标测定天然虫草与人工虫草菌丝体中核苷类有效成分的含量，并对不同虫草样品进行薄层色谱指纹图谱对比研究，探求虫草中核苷类化合物鉴别的专属性。方法：采用高效薄层色谱扫描法进行含量测定，同时建立了不同虫草样品的荧光淬灭薄层色谱指纹图谱。结果：虫草菌丝体中测得腺苷、尿苛鸟苷成分高于天然虫草。结论：该法快速简便，重现性好，能有效鉴别出虫草中核苷类成分以及评价不同电菌样品的质量。     

虫草类产品中5种核苷类成分的测定及蛹虫草质量分析

目的建立HPLC法对4种常见虫草类样本[蛹虫草、发酵虫草菌粉(Cs-4)、中华被毛孢和冬虫夏草]中尿苷、鸟苷、腺苷、虫草素和N6-(2-羟乙基)-腺苷5种核苷类成分进行含量测定,比较成分差异,确定蛹虫草的特征成分,为控制蛹虫草及其提取物的质量提供科学依据。方法采用岛津ODS-3 C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-水进行梯度洗脱,体积流量为0.8 mL/min,检测波长为260 nm,柱温为30℃。结果蛹虫草样品均含有尿苷、鸟苷、腺苷、虫草素和N6-(2-羟乙基)-腺苷,而CS-4、中华被毛孢和冬虫夏草中未检测到虫草素和N6-(2-羟乙基)-腺苷。供试品制备方法对核苷类成分的影响较大,蛹虫草粉采用6种方法制备供试品溶液,发现用水超声提取180 min获得的尿苷、鸟苷和腺苷的含量最高,且在24 h内稳定。虫草素性质稳定,而N6-(2-羟乙基)-腺苷对热和酸都不太稳定;其中4种制备方法测得的虫草素和N6-(2-羟乙基)-腺苷含量一致。结论为蛹虫草及其提取物的质量分析提供了依据,以特征成分虫草素和N6-(2-羟乙基)-腺苷为指标可更好地对蛹虫草及其提取物的质量进行控制。     

反相高效液相法测定虫草菌粉中核苷类成分的含量

目的　用反相高效液相色谱法测定冬虫夏草菌粉中核苷类成分 (腺苷、腺嘌呤、鸟苷、尿苷 )含量。方法　采用Agilent110 0高效液相色谱仪 ,PolarisC18分析柱 (4.6mm× 2 5 0mm) ,柱温 2 5℃ ,流速 0 .5～ 1.0mL·min-1。以乙腈 水梯度洗脱的方法同时测定 4个核苷含量。结果　 4个核苷的线性范围分别为 ,尿嘧啶 :0 .0 113～ 0 .4 5 2 μg(r =0 .9999) ;尿苷 :0 .0 0 84～0 .336 μg(r =0 .9999) ;腺嘌呤 :0 .0 0 5 1～ 0 .2 0 4 μg(r =0 .9998) ;腺苷 :0 .0 0 5 4～ 0 .2 17μg(r =0 .9999)。平均加样回收率分别为 ,尿嘧啶 10 1.4 % ,RSD为 1.85 % ,尿苷 96 .7% ,RSD为 1.2 6 % ,腺嘌呤 10 0 .8% ,RSD为 1.86 % ,腺苷 98.3% ,RSD为1.35 %。结论　实验表明 ,该方法灵敏度高、操作简便、重现性好、效率高。为全面评价虫草质量提供一个可靠方法     

人工培育北冬虫夏草主要有效成分分布特点的研究

目的:研究人工培育北冬虫夏草主要有效成分的分布特点。方法:以虫草素、腺苷和虫草多糖的含量为主要评价指标,采用HPLC和苯酚-硫酸法,分别研究了这三种活性物质在人工北冬虫夏草子实体上部、中部、下部和培养基中的分布情况。结果:人工北冬虫夏草整个生长过程中,腺苷、虫草素和虫草多糖在培养基中的含量都远远低于其他三个部分。结论:人工北冬虫夏草子实体的活性物质主要分布在子实体中,在培养基中的含量极少。     

发酵虫草菌粉及制剂质量控制方法研究进展

人工发酵虫草菌粉是从冬虫夏草分离提取的药用菌株经人工发酵生产的菌粉。市场上以人工发酵虫草菌粉为原料的制剂生产企业较多,由于各家菌种差异、发酵及生产工艺不同、质量控制方法各异等因素,导致市场产品质量参差不齐。因此,保证原料的质量,并进一步提高和完善其相关制剂的质量标准是保证人工发酵虫草菌粉类药品质量的关键。针对市场上常见发酵虫草菌粉及其制剂的化学成分、药理作用、分析方法及质量控制研究现状进行总结,并对人工发酵虫草菌粉类制剂的质量控制提出建议。     

新疆虫草与冬虫夏草中腺苷和虫草素的HPLC法测定比较

目的：建立测定虫草类药材腺苷和虫草素含量的HPLC方法,比较新疆虫草和不同地区冬虫夏草中腺苷和虫草素的含量差异。方法：采用反相高效液相色谱法,色谱柱：DikmaTM C18（4.6mm×250mm,5μm）;流动相：甲醇-水（15：85）;柱温为30℃,流速：1.0ml/min;检测波长：260nm。结果：新疆虫草和冬虫夏草中均含有腺苷和虫草素,其中新疆虫草中腺苷含量为237.7μg/g,介于3个冬虫夏草样品（145.2～307.4μg/g）之间;虫草素含量为38.9μg/g,明显高于冬虫夏草（4.2～11.3μg/g）的3～10倍左右。结论：本方法具有简便、快捷、准确等特点,适用于虫草类药材中腺苷和虫草素含量的测定,本研究提示新疆虫草可作为冬虫夏草新资源。     

发酵虫草菌粉类产品质量标准研究进展

随着冬虫夏草资源的日益稀缺,从中分离提取的药用菌株经人工液体深层发酵加工得到的菌粉,即发酵虫草菌粉,已逐渐成为其替代品。现代药理学证明,发酵虫草菌粉与冬虫夏草有效成分类似,具有相似的药理作用。目前,市场上发酵虫草菌粉类产品众多,主要有金水宝胶囊、百令胶囊、心肝宝胶囊、至灵胶囊、宁心宝胶囊五大品种。其中,仅金水宝胶囊和百令胶囊被收载入2015年版《中国药典》,质量标准相对较为全面,而其他产品的质量标准则较为粗放。对于发酵虫草菌粉类产品,目前尚无统一对其产品质量进行全面控制的方法。因此,完善并统一发酵虫草菌粉类产品的质量标准是提升其产品质量标准及保证其产品安全、优质、高效的关键。文章全面综述了发酵虫草菌粉类产品的化学成分及质量标准研究进展,分析了现有发酵虫草菌粉类产品质量标准的不足,提出了建立一个更为科学合理的质量标准新模式以综合评价其质量方法的建议,旨在为发酵虫草菌粉类产品的质量标准提升及规范化生产提供参考。     

九州虫草中黄酮类化合物的提取及定性研究

目的提取九州虫草中黄酮类化合物,并对提取物进行初步的定性和定量分析。方法通过正交实验探索乙醇回流法提取九州虫草中黄酮类化合物的最佳工艺条件,在此基础上对九州虫草和冬虫夏草中黄酮类化合物进行分离提取,并进行定性研究,采用紫外分光光度法检测提取物中总黄酮类化合物的含量。结果九州虫草中黄酮类化合物最佳提取工艺条件为:乙醇浓度80%,料液比1:4(0g/ml),回流时间3h,提取温度80℃,最高得率为3.730mg/g。九州虫草和冬虫夏草全草干粉的黄酮类化合物提取得率分别为3.730mg/g、1.895mg/g。结论乙醇回流法提取九州虫草中黄酮类化合物的最佳提取工艺,数据可靠,具有良好的重复性,且定性研究方法简便易行。首次报道了九州虫草较冬虫夏草含有更多的黄酮类化合物,从而为寻找冬虫夏草的替代品提供数据参考。