伴生菌对猪苓菌丝生长及多糖含量的影响

目的：研究伴生菌对猪苓菌丝的生物量及多糖含量的影响。方法：将伴生菌的胞内及胞外成分添加到猪苓的液体发酵体系中，发酵培养结束后测定猪苓菌丝的生物量及多糖含量。结果：添加伴生菌菌丝体及适量的未经灭菌的伴生菌发酵液可显著提高猪苓菌丝的生物量，而添加经灭菌的伴生菌发酵液可显著降低猪苓菌丝的生物量；添加伴生菌菌丝体及发酵液均可显著提高猪苓菌丝多糖含量，而显著降低猪苓胞外多糖含量。结论：伴生菌的胞内及胞外成分可在今后猪苓发酵生产时有选择地利用。     

假单胞菌菌株ZL8发酵培养基及发酵条件的优化

目的 课题组前期从猪苓菌核中分离得到对丹参枯萎病等植物病原真菌具有广谱抑制作用且对植物生长有促进作用的假单胞菌菌株ZL8，该研究在此基础上对假单胞菌菌株ZL8的发酵培养基和发酵条件进行优化，以提高单位体积发酵液中菌体数量，为此菌株的开发和应用提供基础。方法 测定ZL8菌株在LB培养基中的生长曲线，明确其在液体培养基中的生长规律；以ZL8菌株发酵液中活菌数、菌体干重和菌悬液A₆₀₀值为检测指标，对不同种类的氮源、碳源及无机盐进行单因素考察以确定最适培养基组分，并进行正交试验优化培养基配比，以筛选最优发酵培养基；对ZL8菌株的接种量、培养温度、时间和转速等4个方面进行单因素和正交试验考察以确定最优培养条件。结果 假单胞菌菌株ZL8的液体发酵最佳培养基为蛋白胨15 g·L^-1、葡萄糖7.5 g·L^-1、氯化钾10 g·L^-1，发酵48 h后，发酵液活菌数可达8.93×10⁹ cfu·mL^-1，为LB液体培养基的3.93倍（P<0.01）；最佳发酵条件为接种量3%、温度28 ℃、时间72 h、转速220 r·min^-1，发酵液中活菌数可达6.37×10¹⁰ cfu·mL^-1。结论 优化后的培养基配方和发酵条件相对LB培养基和初始发酵条件，不仅可有效提高单位体积中假单胞菌ZL8菌株的菌体量及延长菌株生长的稳定期，而且可降低培养基成本，为假单胞菌ZL8的高效发酵和应用提供理论基础。     

蜜环菌发酵液在猪苓菌发酵过程中的应用

 试验证明不同蜜环[lArmillaria mellea (Vahl. ex Fr. )]菌株的发酵液均对猪苓菌[_Grifora .umbellata (Fr. Pildt)]发酵生产过程中菌丝体的生长及多糖的产生具有促进作用，表现在菌球数量多、重 量大、多糖的含量高。其中尤以Am23-4号及Am28-1号蜜环菌株效果最佳，在其最佳产糖期发酵液中粗多糖含量达7. Omg/ml,而未加蜜环菌发酵液的对照仅有5. 2mg/ml。     

液体发酵生产猪苓胞内多糖的条件优化

目的: 优选猪苓液体发酵生产胞内多糖的工艺条件。方法: 采用摇瓶培养法制备猪苓胞内多糖的发酵培养基,以猪苓胞内多糖得率为指标,通过单因素试验考察氮源、碳源和发酵条件,正交试验优选培养基的组成。结果: 液体发酵生产猪苓胞内多糖的最适碳源为蔗糖,最适氮源为黄豆粉,优选的培养基组成为马铃薯10.0%,蔗糖4.0%,黄豆粉0.3%,KH₂PO₄ 0.2%,MgSO₄·7H₂O 0.15%;发酵条件为初始pH 5.2~5.6,振荡速度180~200 r·min^-1,培养温度28℃,培养时间7 d。结论: 液体发酵猪苓胞内多糖具有周期短、产量高的优势,对猪苓多糖工业化生产和降低生产成本具有重要意义。     

灰树花发酵液及其胞内纯化物的降血脂作用

 目的检测药用真菌灰树花发酵液及胞内多糖纯化物降血脂作用。方法建立小鼠高血脂动物模型，并灌胃给药灰树花发酵液GFL和胞内多糖纯化物GIP。结果药理实验表明，灰树花发酵液GFL在160，80 mg·kg^-1的剂量下，胞内多糖纯化物GIP在40，20，10 mg·kg^-1的剂量下，具有较显著的调节血脂作用。结论灰树花发酵液及胞内多糖纯化物在一定的剂量下，具有降血脂作用。     

3种灵芝多糖的研究

 目的对3种灵芝多糖的含量、单糖组成和糖蛋白含量进行研究。方法提取和纯化灵芝子实体、菌丝体和发酵液多糖,应用高效液相色谱法和凯氏定氮法对多糖的含量、单糖组成及糖蛋白质含量作了分析、比较。结果3种灵芝多糖含量分别为：子实体含0.75%;菌丝体含2.13%;发酵液含0.982 g·L^-1。3种多糖均由葡萄糖、果糖组成,这两种单糖在子实体和菌丝体多糖中的摩尔比相同,为7∶1;在发酵液多糖中的摩尔比为2∶1。3种灵芝多糖中糖蛋白含量分别为：子实体多糖含12.22%;菌丝体多糖含26.62%;发酵液多糖含2.92%。结论研究结果为综合开发利用灵芝提供了科学依据。     

14个灵芝菌株的新型(双向型)固体发酵及菌质多糖含量测定

目的：探索甘草渣和11种不同的灵芝菌株的复合型双向发酵，考察灵芝发酵基质中多糖含量的变化。方法：以甘草渣为培养基质进行灵芝菌的新型固体发酵，采用苯酚一硫酸法测定发酵基质中的多糖含量。结果：经过灵芝菌发酵的菌质多糖含量，都比没有经过发酵的纯甘草渣有了不同程度的提高。结论：利用灵芝菌和甘草渣进行的新型复合发酵能够有效提高基质中的药用成分。     

HPLC测定小儿双扑伪麻片3组分及含量均匀度

 目的：研究和寻找能准确测定小儿双扑伪麻片中3组分含量的简便方法。方法：采用高效液相色谱法，以2种不同的样品浓度，同一流动相，同一内标，2次进样测定3组分含量，可在20min内完成。结果：本方法线性范围：对乙酰氨基酚为1．5μg·ml^－1～7．5μg·ml^－1，r＝0．9993；盐酸伪麻黄碱为0．12mg·ml^－1～0．36mg·ml^－1，r＝0．9995；马来酸氯苯那敏为8μg·ml^－1～24μg·ml^－1，r＝0．9971。平均回收率（x％）及变异系数（RSD％）分别为：对乙酰氨基酚（99．8±1．7）；盐酸伪麻黄碱（99．8±1．2）、马来酸氯苯那敏（98．7±1．5）。结论：本方法可用于小儿双扑伪麻片的含量测定；外标法可用于盐酸伪麻黄碱、马来酸氯苯那敏的含量均匀度测定。     

二味康中多糖的含量测定

 目的：建立二味康中多糖的含量测定方法。方法：用苯酚-硫酸比色法测定多糖的含量，测定波长488 nm。结果：本法线性范围为6～60 μg·ml^-1，平均回收率=97.94%，RSD=2.33%(n=6)。测得5批样品中多糖含量分别为56.7,68.4,73.1,73.4,90.4 mg·ml^-1。结论：该法可用于二味康中多糖的含量测定。     

灵芝菌发酵基质的条件优化及菌质活性物质的分析

目的：通过灵芝菌与玉米须、玉米芯的双向固体发酵,形成新的药性菌质,并对其活性成分进行分析。方法：以不同配比的玉米须和玉米芯为基质,以活性物质多糖和三萜的含量为指标考察菌质的最佳培养基配比,分别采用紫外分光光度法、薄层色谱法和高效液相色谱法进行定性及定量分析。结果：玉米须和玉米芯以1：0,1：1,1：2,1：3,1：4,1：5,0：1配比,用灵芝菌发酵,形成的菌质多糖含量递增,三萜含量递减;薄层色谱结果显示,与发酵前对比,发酵后色谱斑点由红色转为蓝绿色荧光,并随着玉米须在培养基中比重增加而斑点越明亮;高效液相色谱结果显示,发酵后原有一些物质峰减弱或消失,并生成新的物质。结论：以玉米须-玉米芯1：5作为基质产生的菌质长势及活性成分含量最高,发酵前后菌质的物质组成有明显改变。     

液体深层培养猪苓多糖脱色技术的研究

 目的研究液体深层培养猪苓菌丝体水提部位粗多糖脱色的最佳工艺条件。方法采用单因素试验和正交试验分别考察双氧水、活性炭、DEAE纤维素等3种脱色剂对菌丝体粗多糖的脱色效果,用光谱扫描法检测光吸收强度的变化。结果活性炭作为脱色剂,效果优于其他2种,脱色最佳工艺条件为:温度60℃,时间40min,活性炭添加量3g·100mL^-1。结论实验中优化后的脱色方法简便、易行,也为猪苓菌丝体多糖的工业化提取中脱色工序的操作提供理论依据。     

猪苓多糖硫酸酯的制备及活性测定

目的:制备猪苓多糖硫酸酯,同时测定其活性.方法:采用醇沉分级、大孔吸附树脂、聚酰胺树脂和脱蛋白法从中药猪苓中提取分离得到猪苓多糖,硫磺酸-吡啶法进行硫酸酯化,经Sephadex G-75、透析得到硫酸化猪苓多糖,并体外观察硫酸酯化多糖对羟基自由基清除作用.结果:猪苓多糖硫酸酯化前后均有清除Fenton反应由Fe2+-H2O2体系产生的羟自由基,硫酸酯化猪苓多糖对羟自由基的清除能力增强,并呈明显量效关系.结论:制备猪苓多糖硫酸酯的方法准确可靠,为猪苓多糖的进一步开发利用提供实验依据.     

药用真菌猪苓共生的蜜环菌种类研究

 目的 对国内猪苓产区与猪苓共生的蜜环菌种类进行探究。方法 经PDA平板培养后长出健壮的蜜环菌根状菌索。运用IGS测序技术对分离的22株蜜环菌菌株的纯培养菌种进行分子鉴定,并基于蜜环菌的IGS序列进行核酸序列数据库GenBank同源序列比对、构建系统发育树。结果 本实验获得的猪苓菌核组织分离的22株蜜环菌菌株为其纯培养菌种。基于IGS的系统发育分析表明,与猪苓菌核共生的蜜环菌分别属于Armillaria cepistipes, A.gallica, A. ostoyae以及A. mellea 4个种,其中A.cepistipes, A. gallica分别分离得到10株,为优势种。结论 猪苓共生对蜜环菌物种专一性较低,与相关书籍及文献报道的与猪苓共生蜜环菌为单一A. mellea种的结论不符。与猪苓共生的蜜环菌多样性及不同种类蜜环菌对猪苓菌核生长发育的影响需进一步研究。     

不同品种灵芝主要活性成分分析

目的:对不同品种灵芝子实体中4类活性成分进行测定分析,为灵芝品种专用化育种提供依据.方法:采用紫外分光光度法测定灵芝样品总多糖、总三萜和蛋白质含量;采用反相高效液相色谱法测定灵芝样品麦角甾醇含量.结果:不同品种灵芝子实体中总多糖、总三萜、蛋白质均为含量较高的主要成分,但麦角甾醇的含量极低;4类成分在不同灵芝品种中含量差异显著,含量之间未发现有相关性.结论:灵芝多糖、三萜、蛋白质这3类各具典型功效的主要成分含量测定对灵芝子实体的质量控制均有重要的意义,并且可为制剂生产、临床应用的专用品种选育提供科学依据.     

灵芝孢子粉化学成分和药理作用的研究进展及其质量标志物（Q-Marker）预测分析

灵芝孢子粉是灵芝的生殖细胞，包含灵芝所有的化学成分，主要含有灵芝三萜类、多糖类、甾体类、脂肪酸类和蛋白质类等多种化合物。灵芝孢子粉具有抗肿瘤、免疫调节、抗氧化、保护心血管、保肝护肝等药理作用。《中国药典》2020年版对灵芝孢子粉的质量控制标准尚未明确规定，就灵芝孢子粉化学成分和药理作用研究进展进行综述，并基于质量标志物（quality marker，Q-Marker）理论，从植物亲缘性与特有性、有效性、可测性、临床应用、可入血成分等方面进行Q-Marker预测分析，初步推测多糖类、灵芝酸、甾醇类（麦角甾醇）、不饱和脂肪酸（油酸）等成分为其Q-Marker，为规范灵芝孢子粉质量研究和建立、完善灵芝孢子粉质量标准提供参考。     

灵芝孢子粉多糖研究进展

灵芝Ganoderma lucidum为多孔菌科灵芝属药食两用真菌,是我国具较高药用价值的传统珍贵药材。灵芝孢子粉多糖是灵芝中的主要活性成分,现已证实其具有多种生物活性,在医药领域中有广阔的应用前景。对近15年来国内外灵芝孢子粉多糖结构、提取工艺和生物活性方面的研究进展进行综述,为其保健功能与药用价值的开发提供重要参考。