白芍提取物对大鼠海马原代培养神经元5-羟色胺3受体介导离子通道的影响

目的探讨白芍提取物含药血清对原代培养海马神经元5-羟色胺3受体(5-HT3R)介导离子通道的影响。方法采用孤养结合慢性温和刺激法复制抑郁情绪大鼠模型,并采用旷场实验和糖水偏好实验进行模型评价,以白芍提取物进行药物干预,制备大鼠含药血清,对原代培养的大鼠海马神经元干预24 h后,利用Western blotting法检测各组神经元细胞5-HT3AR、5-HT3BR蛋白表达,采用全细胞膜片钳技术检测各组神经元细胞5-HT3受体通道电流。结果与对照组相比,模型组大鼠旷场实验总路程、糖水偏好率均显著性降低(P0.01);模型组大鼠血清孵育的海马神经元5-HT3AR、5-HT3BR蛋白表达量均显著性升高(P0.05),模型组大鼠血清孵育的海马神经元电流密度值明显增加(P0.05)。与模型组相比,白芍提取物组和氟西汀组旷场实验总得分明显提高(P0.05),糖水偏好率均明显增加(P0.01);白芍提取物组和氟西汀组大鼠含药血清孵育的海马神经元5-HT3AR、5-HT3BR蛋白表达量显著性降低(P0.05、0.01、0.001);白芍提取物组和氟西汀组大鼠含药血清孵育的海马神经元电流密度值均明显减少(P0.01)。结论白芍提取物能改善抑郁情绪模型大鼠异常升高的5-HT3R离子通道电流,这可能是白芍发挥其抗抑郁情绪的中枢作用机制之一。     

经前舒对大鼠海马神经元细胞ERβ蛋白和基因表达的影响

目的 观察经前舒颗粒对大鼠海马神经元ERβ蛋白和基因表达的影响,探讨经前舒颗粒治疗经前期综合征(PMS)肝气郁证的作用机制.方法 以束缚造模法复制PMS肝气郁证大鼠模型,给药组给予调肝方药经前舒颗粒,模型组给予灭菌饮用水,并设不造模正常组,取各处理组血清,对体外培养大鼠海马神经元细胞进行干预;采用蛋白质印迹技术(Western blot,WB)和半定量RT-PCR技术分别对各组细胞ERβ蛋白和基因表达变化进行检测.结果 模型组血清能显著升高大鼠海马神经元ERβ蛋白和基因表达水平,western blot 和RT-PCR检测结果均显示经前舒颗粒含药血清能显著改善PMS肝气郁证模型血清干预的大鼠海马神经元ERβ蛋白和基因表达水平异常升高的状况.结论 大鼠海马神经元中的ERβ是调肝方药经前舒颗粒的作用靶点之一,经前舒颗粒可能通过降低ERβ蛋白和基因的表达水平而发挥治疗作用.     

舒郁胶囊对原代大鼠海马神经元5-HT3A/3B受体表达的影响

目的:观察抑郁情绪模型组和模型治疗组大鼠血清对原代培养的大鼠海马神经元5 - HT3 A/3B受体(5-HT3A/3BR)蛋白水平表达的影响,探索复方舒郁胶囊治疗抑郁情绪的微观作用机制.方法:大鼠随机分为5组:正常组、模型组、舒郁胶囊治疗组(0.51g·kg-1)、柴胡治疗组(0.4 g·kg-1)和氟西汀治疗组(0.002 g·kg-1),采用孤养结合28 d慢性温和刺激(CMS)制备抑郁情绪大鼠模型,治疗组造模的同时灌胃给药,收集各组大鼠血清灭活除菌,干预神经元24 h后利用蛋白印迹技术( Western blot)和细胞免疫荧光技术(immunofluorescence,IF)分别测定神经元胞内5-HT3A/3BR蛋白表达.结果:与正常血清组相比,模型组血清海马神经元5-HT3A/3BR表达水平均显著升高(P ＜0.01,P＜0.05);与模型组比较,治疗组均显著下调5-HT3AR的异常升高状态(P＜0.01),但对5-HT3BR表达无明显改变.结论:大鼠海马神经元内5-HT3R表达与抑郁情绪关系密切,5-HT3A/3BR的表达变化可能是导致抑郁情绪的重要病因之一.舒郁胶囊及其君药柴胡含药血清对以上2种蛋白表达的调节趋势与氟西汀一致,对该病症的疗效显著,作用机制可能是调节海马神经元内5-HT3AR的异常表达.     

经前舒颗粒对大鼠海马5-HT3B受体mRNA水平和蛋白表达的影响

目的:观察经前舒颗粒对郁怒模型大鼠海马5-HT3B受体蛋白表达和mRNA水平以及5-HT含量的影响,研究郁怒情绪的中枢机制,探讨经前舒颗粒的中枢作用机制。方法:以居住入侵方法制备大鼠郁怒情绪模型,给药组给予调肝方药经前舒颗粒,模型组给予灭菌饮用水,并设不造模正常组,用蛋白质印迹技术(WB)检测各组大鼠海马5-HT3B受体蛋白水平表达量,半定量RT-PCR技术检测各组大鼠海马5-HT3B受体mRNA的表达。高效液相色谱-荧光检测器检测海马中5-HT的含量。结果:与正常组比较,模型组大鼠海马5-HT3B受体mRNA水平和蛋白表达水平都极显著升高(P<0.01),5-HT含量显著下降(P<0.05);与模型组比较,经前舒颗粒组大鼠海马蛋白表达和mRNA水平都极显著降低(P<0.01),5-HT含量显著升高。结论:郁怒刺激能显著升高大鼠海马5-HT3B受体蛋白表达和mRNA表达水平并显著降低5-HT的含量,调肝方药经前舒颗粒可能通过下调海马过高的5-HT3B受体蛋白表达和mRNA水平以及上调5-HT含量达到调肝解郁治疗疾病的目的。     

经前舒颗粒对经前期综合征肝气郁证大鼠海马和下丘脑5-HT1A受体表达的影响

目的:研究经前舒颗粒对经前期综合征(premenstrual syndrome,PMS)肝气郁证大鼠海马下丘脑5-羟色胺1A受体( serotonin receptor-1A,5-HT1AR)表达水平的影响.方法:束缚造模法复制PMS肝气郁证大鼠模型,旷场实验评价模型,RTPCR和Western blot方法分别检测大鼠海马和下丘脑5-HT1AR的mRNA及蛋白的表达.结果:经前舒颗粒给药后大鼠旷场实验得分显著升高,海马、下丘脑5-HT1AR mRNA和蛋白表达均显著升高.结论:经前舒颗粒可上调海马和下丘脑中5-HT1AR的表达,这可能是其治疗PMS肝气郁证的作用机制之一.     

左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症胎鼠海马神经元NR-5-HT信号轴的影响

目的:研究左归降糖解郁方(ZGJTJYF)对模拟糖尿病并发抑郁症(Diabetes mellitus with depression,DD)环境下大鼠胎鼠海马神经元N-甲基-D-天冬氨酸受体(N-methyl-D-aspartic acid receptor,NR)-5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)信号轴的影响。方法:分离、纯化、培养并鉴定胎鼠海马神经元,将培养的海马神经元随机分为6组:空白组、空白血清组、模型组、氟西汀+二甲双胍阳性药组、左归降糖解郁方组和NR阻断剂MK-801组。除空白组和空白血清组外,其余各组分别给予葡萄糖(150 mmol/L)和皮质酮(200μmol/L)用以构建DD海马神经元体外模型,氟西汀+二甲双胍阳性药组和左归降糖解郁方组分别给予10%相应含药血清,阻断剂组加入100 mmol/L MK-801,干预18 h。采用高内涵细胞成像分析技术(High Content Analysis,HCA)检测NR2A、NR2B和5-HT1AR蛋白的表达;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测NR2A、NR2B、5-HT1AR基因的表达。结果:与空白组比较,模型组NRs蛋白和基因表达显著升高,5-HT1AR则表达显著降低;与模型组比较,氟西汀+二甲双胍阳性药组和左归降糖解郁方10%含药血清组可以逆转上述表达;使用阻断剂后NRs蛋白和基因表达明显降低,5-HT1AR蛋白含量显著升高,但基因表达显著降低。结论:左归降糖解郁方抗DD海马神经元损伤,可能与调控NR-5-HT信号轴有关。     

白香丹胶囊对经前期综合征肝气逆证模型大鼠血清与不同脑区孕酮的影响

目的：研究白香丹胶囊对经前期综合征（PMS）肝气逆证模型大鼠血清与不同脑区（下丘脑、边缘叶、海马、额叶皮层）孕酮的影响，探讨PMS微观机制及该药对此病证模型大鼠的作用机制。方法：以情志刺激多因素法复制PMS肝气逆证大鼠模型，以白香丹胶囊干预，放射免疫法（RIA）测定大鼠血清与脑组织中孕酮的浓度。结果：模型对照组与正常对照组相比，血清与4个脑区孕酮水平显著降低（P〈0.05或P〈0.01），而白香丹给药组可将其显著上调接近正常水平。结论：PMS肝气逆证与血清及4个脑区孕酮含量变化密切相关。白香丹能显著上调PMS肝气逆证模型大鼠孕酮水平而发挥对此病证的治疗作用。     

经前舒颗粒对大鼠海马5-HT含量及其5-HT3B受体表达的影响

目的:观察经前舒颗粒对郁怒模型大鼠海马5-HT<,3B>受体蛋白表达和mRNA水平以及5-HT含量的影响,研究郁怒情绪的中枢机制,探讨经前舒颗粒的中枢作用机制.方法:以居住入侵方法制备大鼠郁怒情绪模型,给药组给予调肝方药经前舒颗粒,模型组给予灭菌饮用水,并设不造模正常组,用蛋白质印迹技术(WB)检测各组大鼠海马5-HT<,3B>受体蛋白水平表达量,半定量RT-PCR技术检测各组大鼠海马5-HT<,3B>受体mRNA的表达.高效液相色谱-荧光检测器检测海马中5-HT的含量.结果:与正常组比较,模型组大鼠海马5-HT<,3B>受体mRNA水平和蛋白表达水平都极显著升高(P<0.01),5-HT含量显著下降(P<0.05);与模型组比较,经前舒颗粒组大鼠海马蛋白表达和mRNA水平都极显著降低(P<0.01),5-HT含量显著升高.结论:郁怒刺激能显著升高大鼠海马5-HT<,3B>受体蛋白表达和mRNA表达水平并显著降低5-HT的含量,调肝方药经前舒颗粒可能通过下调海马过高的5-HT<,3B>受体蛋白表达和mRNA水平以及上调5-HT含量达到调肝解郁治疗疾病的目的.     

补肾调肝清心方对围绝经期抑郁症睡眠障碍大鼠模型海马5-羟色胺1A受体、5-羟色胺2A受体的影响

目的：观察补肾调肝清心方对围绝经期抑郁症睡眠障碍模型大鼠海马5-羟色胺1A受体（5-hydroxytryptamine 1A receptor,5-HT1AR）、5-羟色胺2A 受体（5-hydroxytryptamine 2A recep-tor,5-HT2AR）的影响。方法将60只围绝经期大鼠按体重随机分为5组,每组12只：围绝经期正常对照组（ A）;围绝经期抑郁症睡眠障碍模型组（ B）;围绝经期抑郁症睡眠障碍补佳乐治疗组（ C）;围绝经期抑郁症睡眠障碍米氮平治疗组（ D）;围绝经期抑郁症睡眠障碍中药治疗组（ E）;A组为围绝经期正常大鼠,其余4组进行18天不可预知慢性应激。于应激后对造模动物进行72小时连续快速眼相睡眠剥夺（ REM）。每天在应激前1小时按组给药。在末次灌胃24小时后,颈椎脱臼法处死大鼠,取大鼠海马,分别用荧光定量检测海马5-HT1ARmRNA和5-HT2ARmRNA、蛋白印迹和免疫荧光检测海马5-HT1AR和5-HT2AR的表达。结果蛋白印迹检测（ western blot）海马及免疫荧光检测海马CA1区均显示：海马区5-HT1AR表达水平各组无明显差异（P〉0．05）,而5-HT2AR表达水平上,模型组显著低于正常组（P〈0．05）,治疗组提高了5-HT2AR的表达水平,且与模型组相比存在显著性差异（P〈0．05）;RT-PCR显示：海马区5-HT1AR mRNA水平各组无明显差异（P〉0．05）,而5-HT2AR mRNA水平,模型组明显低于正常组（P〈0．01）,米氮平组较模型组有极显著性差异（P〈0．001）,中药组较模型组有显著性差异（P〈0．05）。结论补肾调肝清心方能提高5-HT2AR的mRNA及蛋白水平的表达,免疫荧光的结果表明在海马CA1区发挥作用,表明补肾调肝清心方可以通过调节海马CA1区5-HT2AR表达来改善睡眠障碍。     

白香丹上调经前期综合征肝气逆证大鼠下丘脑神经类固醇受体的表达

目的：研究白香丹治疗经前期综合征（PMS）肝气逆证的中枢作用靶点。方法：阴道涂片法测定大鼠动情周期、动情前期电刺激复制PMS肝气逆证大鼠模型并用白香丹治疗。免疫荧光标记＋激光流式细胞仪、激光共聚焦显微镜检测脑组织内主要的神经类固醇受体的蛋白表达水平及定位分布模式。结果：白香丹胶囊能够显著上调PMS肝气逆证模型大鼠下丘脑中雌激素受体、孕酮受体的蛋白表达水平。结论：下丘脑中雌激素受体（ER）和孕酮受体（PR）是白香丹的两个重要作用靶位,白香丹可能通过上调ER、PR表达水平发挥平肝理气作用。     

学《黄帝内经》辨证论治——浅谈“中风”的中医药辨证论治体会

《黄帝内经》是中医学最早，最完善的中医基础理论书籍，几千年来一直指导中医临床，特别辨证论治观点贯穿着中医学始终，有广泛的临床应用价值。中风好发于中老年人群中，临床上较为常见，多与现代医学的心、脑、血管疾病相关。适宜的中医药治疗，有着广泛的临床应用价值。     

米非司酮在妇科临床中的应用

米非司酮是一种合成类固醇,结构类似炔诺酮,是一种强有力的抗孕激素药物,对终止早孕、抗着床、诱发月经及促进宫颈成熟有明显作用。随着基础研究的进展及临床经验的积累,米非司酮已推广应用于各类妇科疾病及计划生育领域,取得了满意效果。现总结如下。     

丹参素在大鼠体内代谢产物的鉴定分析

应用UHPLC-LTQ-Orbitrap技术对丹参素在大鼠血浆和尿液中的代谢产物进行鉴定。SD大鼠灌胃给药丹参素CMC-Na混悬液后,收集其血浆和尿液,应用固相萃取法进行样品前处理。采用ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),以0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B)为流动相进行梯度洗脱。在电喷雾负离子模式下采集生物样品的质谱数据。根据精确相对分子质量以及多级质谱裂解信息,结合对照品及文献报道结果比对,最终鉴定了丹参素以及21个丹参素Ⅰ相和Ⅱ相代谢产物,同时分析了丹参素主要的体内代谢反应,如脱水、甲基化、葡萄糖醛酸化、硫酸酯化、去羟基化以及相关的复合反应等。该文应用高分辨液质联用技术快速阐明了丹参素在大鼠体内的代谢产物,为今后药效物质基础和作用机制研究奠定了基础。     

药物体外肝代谢研究进展

 目的介绍药物体外肝代谢方法的最新进展。方法根据近几年的文献资料进行分析、综合、归纳。分别按肝微粒体体外温孵法及基因重组P450酶系、肝细胞体外温孵法、离体肝灌流及器官组织切片法等进行介绍。结果与结论介导药物体外代谢酶系的研究是药物体外肝代谢的研究热点，其在新药研究与开发及正确指导临床合并用药有着巨大的推动作用。     

蛋白质组学在中医"证"实质研究中的应用

从中医证候和蛋白质组学的特点及研究方法着手,分析了蛋白质组学引入"证"实质研究的优势与可行性,认为蛋白质组的整体性、动态性、时空性、复杂性与同样具有整体性、动态性、时相性、复杂性等特点的中医"证"有着惊人的相似,其中可能存在某种内在联系和对应关系。因此,与"证"实质研究中一般的微观指标相比,蛋白质组学有着特殊的优势,也更加符合"证"自身的特点。文章将近几年中医证候蛋白质组学的有关研究成果从技术条件、思路方法以及具体证型与蛋白质组的相关性等几个方面进行综述归纳,展示了蛋白质组学在中医"证"实质研究中的美好前景。     

生物芯片技术及在中药研究中的应用展望

生物芯片是近几年来发展起来的一种尖端技术,可用于中药药理的分析,新药的研制开发、中药鉴定,毒理观察等方面,有利于在分子生物学水平上阐明中医药治病的机制,促进中药的现代化,具有重要的科学意义和广泛的应用前景。     

植物环烯醚萜类化合物生物活性研究进展

环烯醚萜类化合物是一类重要的植物次生代谢产物,具有广泛的生物活性,作者对此类化合物的分布、生物活性进行综述。总结了环烯醚萜类化合物在糖尿病治疗、保肝、抗炎、抗菌、抗肿瘤等方面的应用,为相关药用植物的开发及该类化合物在医药领域上的进一步应用提供参考。     

硫酸蒽酮法与硫酸苯酚法测定灵芝多糖含量比较

目的：比较硫酸蒽酮法与硫酸苯酚法测定灵芝多糖含量的差异。方法：分别采用上述两种方法利用紫外可见分光光度计测定灵芝中多糖的含量。结果：利用上述两种方法分别测定同一样品灵芝多糖的含量,硫酸蒽酮法测定结果高于硫酸苯酚法。结论：两种方法均操作简便,稳定可行,较之硫酸苯酚法,药典记载的硫酸蒽酮法更加科学合理。     

WWOX基因体外对肺癌细胞耐药的影响

目的通过体外实验观察WWOX对肺腺癌细胞耐药性影响,初步探讨WWOX逆转肺腺癌细胞耐药性及其作用机制。方法应用紫杉醇(TAXOL)诱导肺腺癌细胞株构建A549耐药细胞亚株(A549/T-)。采用腺病毒包装系统AdMax重组腺病毒Ad-WWOX-IRES-EGFP。感染Ad-WWOX-IRES-WWOX的A549/T细胞为A549/T+组,感染Ad-IRES-EGFP的A549/T细胞为A549/T-组,和非耐药A549细胞共3组。3组细胞分别经TAXOL、顺铂(DDP)作用12,24,48,72 h,检测3组细胞生长抑制率、药物的IC50值和细胞凋亡相关指标。结果在含3 g/L及30 g/L的TAXOL培养基中,0.25 g/L及2.5 g/L的顺铂(DDP)培养基中,A549/T+组24 h及48 h细胞生长抑制率与A549/T-组比较有显著性差异(P均<0.05);A549/T+组48 h细胞生长抑制率比较有显著性差异(P均<0.05)。A549/T+组24h及48 h细胞生长抑制率与A549组比较无显著性差异(P均>0.05)。A549/T+组细胞IC50较A549/T-组低,和A549组相比无显著性差异(P>0.05)。在3 g/L及30g/L TAXOL和0.25 g/L及2.5 g/L DDP培养基培养48 h后A549/T+细胞Bax相对值、Bax/Bcl-2比值均明显高于A549/T-组(P均<0.05);A549/T+细胞Bcl-2相对值比值均明显低于A549/T-(P<0.05);A549/T+细胞与A549细胞Bax相对值、Bcl-2相对值、Bax/Bcl-2比值比较无显著差异(P均>0.05)。结论WWOX显著诱导了肺腺癌A549/T+TAXOL耐药株的凋亡,提示WWOX有抑制肺癌细胞增殖和逆转肺癌细胞耐药的作用。     

灯盏花素大鼠在体肠吸收动力学研究

目的 研究灯盏花素在大鼠肠道的吸收动力学。方法 进行大鼠在体肠循环灌流肠吸收实验，HPLC法测定灯盏花乙素，研究灯盏花素在小肠和结肠的吸收情况，并分别考察不同质量浓度和不同pH对小肠吸收的影响。结果胆管结扎与胆管不结扎的实验组之间，吸收速率常数（ka）和吸收百分率均有显著性差异，在小肠和结肠的ka分别为（0．1071±0．013O）和（0．0707±0．0089）h^-1；灯盏花素在不同质量浓度下，未发现饱和现象，其ka几乎保持不变，在pH6．0～7．4，灯盏花素的吸收不受pH的影响。结论 灯盏花素在小肠的吸收多于在结肠的吸收，其吸收机制为被动扩散，吸收过程为一级动力学过程，提示灯盏花素可以被制成口服缓释剂型。