舒郁胶囊对大鼠海马原代培养神经元Ca~(2+)-CaM通路的作用

目的观察海马神经元内Ca2+浓度和CaM蛋白水平表达变化,探索复方舒郁胶囊治疗抑郁情绪的微观作用机制。方法采用孤养结合慢性温和刺激复制抑郁情绪大鼠模型,以调肝方药舒郁胶囊及其君药柴胡提取物进行干预,氟西汀作为阳性对照药,制备各组大鼠血清;运用原代无血清培养技术培养大鼠海马神经元,以制备的各组大鼠含药血清孵育神经元;采用荧光探针Fluo-3/AM染色和细胞免疫荧光技术,分别测定海马神经元胞内[Ca2+]i和CaM蛋白表达水平。结果与正常组相比,模型血清组细胞内[Ca2+]i和CaM蛋白表达水平明显降低(P<0.05);各含药血清组神经元胞内[Ca2+]i和CaM蛋白水平较模型血清组明显升高(P<0.05),与正常血清组差异无显著性。结论舒郁胶囊调控海马神经元胞内Ca2+-CaM体系的变化可能是其治疗抑郁情绪的作用机制之一。     

舒郁胶囊对原代大鼠海马神经元5-HT3A/3B受体表达的影响

目的:观察抑郁情绪模型组和模型治疗组大鼠血清对原代培养的大鼠海马神经元5 - HT3 A/3B受体(5-HT3A/3BR)蛋白水平表达的影响,探索复方舒郁胶囊治疗抑郁情绪的微观作用机制.方法:大鼠随机分为5组:正常组、模型组、舒郁胶囊治疗组(0.51g·kg-1)、柴胡治疗组(0.4 g·kg-1)和氟西汀治疗组(0.002 g·kg-1),采用孤养结合28 d慢性温和刺激(CMS)制备抑郁情绪大鼠模型,治疗组造模的同时灌胃给药,收集各组大鼠血清灭活除菌,干预神经元24 h后利用蛋白印迹技术( Western blot)和细胞免疫荧光技术(immunofluorescence,IF)分别测定神经元胞内5-HT3A/3BR蛋白表达.结果:与正常血清组相比,模型组血清海马神经元5-HT3A/3BR表达水平均显著升高(P ＜0.01,P＜0.05);与模型组比较,治疗组均显著下调5-HT3AR的异常升高状态(P＜0.01),但对5-HT3BR表达无明显改变.结论:大鼠海马神经元内5-HT3R表达与抑郁情绪关系密切,5-HT3A/3BR的表达变化可能是导致抑郁情绪的重要病因之一.舒郁胶囊及其君药柴胡含药血清对以上2种蛋白表达的调节趋势与氟西汀一致,对该病症的疗效显著,作用机制可能是调节海马神经元内5-HT3AR的异常表达.     

舒郁胶囊对大鼠海马神经元5-HT3R激活后Ca~(2+)的影响

目的:观察海马神经元内5-羟色胺3受体(5-HT3R)激活后信号通路中Ca2+浓度的变化,探索复方舒郁胶囊治疗抑郁情绪的微观作用机制。方法:培养大鼠海马神经元,在中药血清药理学指导下进行实验:于培养基中添加5-HT3R激动剂激活其介导的信号通路,再以一定浓度舒郁胶囊和柴胡提取物含药血清孵育神经元。采用荧光探针Fluo-3/AM标记结合激光共聚焦显微镜技术测定海马神经元胞内[Ca2+]i。结果:激动剂激活5-HT3R信号通路,神经元胞内[Ca2+]i显著升高(P0.01)。给予正常大鼠舒郁胶囊和柴胡提取物含药血清干预,再次激活信号通路,胞内[Ca2+]i与正常组相比无明显变化,较激动剂组显著降低(P0.05)。结论:舒郁胶囊通过5-HT3R调控海马神经元胞内[Ca2+]i的变化,可能是其治疗抑郁情绪的作用机制之一。     

舒郁胶囊含药血清对大鼠海马神经元 γ氨基丁酸B2受体蛋白表达的影响

目的:观察抑郁情绪大鼠模型给药血清对离体海马神经元γ氨基丁酸B2受体( GABAB R2)蛋白表达的影响,初步探讨舒郁胶囊及其君药柴胡对抑郁情绪的干预作用和机制.方法:35只Wistar大鼠随机分为5组:正常组、模型组、舒郁组(0.51 g·kg-1)、柴胡组(0.4 g·kg-1)和氟西汀组(0.002 g·kg-1),采用28 d慢性温和刺激(CMS)制备抑郁情绪大鼠模型,治疗组造模的同时灌胃给药,通过大鼠体重、糖水摄入量、旷场实验对模型进行评价,评定模型复制成功后,制备各组大鼠血清,采用血清药理学方法,通过抑郁情绪模型大鼠各组血清干预大鼠原代海马神经元,应用蛋白免疫印迹技术,检测海马神经元GABABR2的蛋白表达.结果:与正常组大鼠相比,模型组体质量、糖水实验的糖水摄入、旷场实验总分均显著减少(P＜0.01);而造模并分别给予舒郁、柴胡和氟西汀的大鼠较模型组大鼠体质量、糖水实验的糖水摄入、旷场实验总分显著增加(P ＜0.05,P＜0.01).蛋白免疫印迹结果显示,与正常组血清干预的海马神经元相比,模型血清组海马神经元GABABR2蛋白表达显著升高(P＜0.01);造模并给予舒郁胶囊血清组和氟西汀血清组干预的大鼠海马神经元GABA8 R2蛋白表达较模型血清组显著降低(P＜0.05),柴胡组有改善的趋势,但无显著性差异.结论:抑郁情绪模型大鼠血清可诱导大鼠海马神经元GABABR2蛋白表达上调,舒郁胶囊可能是通过降低海马神经元GABA8R2蛋白表达发挥抗抑郁作用.