五脏温阳化瘀汤对血管性痴呆模型大鼠海马组织PI3K/Akt-mTOR信号通路的影响

目的探讨五脏温阳化瘀汤治疗血管性痴呆的可能作用机制。方法 55只大鼠随机选择8只为假手术组,剩余大鼠采用双侧颈总动脉永久性结扎法制备血管性痴呆模型。将造模成功的39只大鼠随机分为中药高剂量组10只,中药低剂量组10只,吡拉西坦组10只,模型组9只。中药高、低剂量组分别给予五脏温阳化瘀汤5、1. 25 g/(kg·d)灌胃,吡拉西坦组给予吡拉西坦分散片0. 15 g/(kg·d)灌胃,假手术组和模型组每日给予等量生理盐水灌胃。2周后用Morris水迷宫测试大鼠的学习记忆能力;分别采用RT-PCR法和Western blot法检测大鼠海马组织中的磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B (Akt)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR) mRNA及蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠逃避潜伏期延长,跨越平台次数减少,海马组织PI3K、Akt、mTOR蛋白及mRNA表达升高(P 0. 05或P 0. 01);与模型组比较,中药高剂量组、吡拉西坦组大鼠逃避潜伏期、跨越平台次数增加,海马组织PI3K、AKT、mTOR蛋白及mRNA表达升高(P 0. 05或P 0. 01);中药高剂量组与吡拉西坦组各指标比较差异均无统计学意义(P0. 05)。结论五脏温阳化瘀汤可以提高血管性痴呆模型大鼠的学习记忆能力,可能是通过调控海马组织PI3K/Akt-mTOR信号通路发挥作用。     

基于PI3K/AKT/mTOR通路研究杜仲总黄酮对多囊卵巢综合征大鼠性激素水平及卵巢组织自噬的影响

目的:探讨杜仲总黄酮基于磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠性激素水平及卵巢组织自噬的影响。方法:55只SD大鼠随机取10只作为正常对照组,其余建立PCOS大鼠模型,40只大鼠建模成功,随机分为模型对照组、PI3K抑制剂BKM120 40 mg/kg组、BKM120 40 mg/kg+杜仲总黄酮200 mg/kg组、杜仲总黄酮200 mg/kg组,各组灌胃生理盐水或相应药物,连续干预3 w。Elisa法检测血清促黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)、抗苗勒氏管激素(AMH)水平;HE染色观察卵巢病理学变化;流式细胞术检测卵巢组织颗粒细胞自噬率;Western blot检测卵巢组织中PI3K/AKT/mTOR通路相关蛋白及微管相关蛋白1轻链3 II(LC3 II)表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组大鼠AMH、LH、T含量显著升高,FSH含量显著降低P<0.01);大鼠卵巢组织颗粒细胞自噬率显著升高(P<0.01),p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR比值显著降低,LC3 II/LC3 I比值显著升高(P<0.01);与模型对照组比较,抑制剂组大鼠AMH、LH、T含量显著升高,FSH含量显著降低(P<0.01),卵巢组织颗粒细胞自噬率显著升高,p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR比值显著降低,LC3 II/LC3 I比值显著升高(P<0.01);杜仲总黄酮+抑制剂组、杜仲总黄酮组大鼠AMH、LH、T含量明显降低,FSH含量明显升高(P<0.05或P<0.01),卵巢组织颗粒细胞自噬率显著降低(P<0.01),p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR比值显著升高,LC3 II/LC3 I比值显著降低(P<0.01)。模型对照组卵巢表面苍白,黄体减少,出现多个囊状扩张卵泡;杜仲总黄酮+抑制剂组、杜仲总黄酮组卵巢体积减小,表面色泽较红,黄体有所增加,囊状扩张卵泡减少;抑制剂组卵巢体积更大、黄体更少,囊状扩张卵泡更多。结论:杜仲总黄酮可能通过激活PI3K/AKT/mTOR通路降低PCOS大鼠卵巢组织自噬水平,改善其性激素水平。     

补肾填精中药仙子益真胶囊对卵巢早衰模型小鼠卵巢PI3K/AKT通路的影响

目的研究补肾填精中药仙子益真胶囊对卵巢早衰小鼠磷酯酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、Ki67蛋白表达及各级卵泡数量的影响。方法选用动情周期规律的57只SPF级雌性C57BL/6J型小鼠随机分为空白对照组(7只)、模型组(50只)。模型组使用雷公藤多苷片造模,将成功造模的35只小鼠随机分为模型组、益真低剂量组[仙子益真胶囊0. 75 g/(kg·d)]、益真中剂量组[仙子益真胶囊1. 5 g/(kg·d)]、益真高剂量组[仙子益真胶囊3. 0 g/(kg·d)]和西药组[戊酸雌二醇片0. 15 mg/(kg·d)],每组7只。给予相应药物治疗,治疗21天后采用HE染色法检测卵巢组织的形态变化,计算各级卵泡数目,免疫组化方法检测Ki67蛋白表达,Western blot法检测小鼠卵巢AKT及PI3K蛋白表达。结果与空白对照组比较,模型组原始卵泡、次级卵泡、窦状卵泡百分比降低,Ki67表达、AKT及PI3K蛋白表达降低(P 0. 05,P 0. 01),闭锁卵泡百分比升高(P 0. 01)。与模型组比较,益真低、中、高剂量组及西药组原始卵泡、次级卵泡、窦状卵泡百分比升高,闭锁卵泡百分比降低(P 0. 05,P 0. 01),Ki67表达、AKT及PI3K蛋白表达增高(P 0. 05)。结论补肾填精中药仙子益真胶囊改善卵巢功能的机制可能与提高了卵巢细胞中PI3K/AKT通路活性及细胞增殖状态相关,从而增加了原始卵泡、次级卵泡、窦状卵泡的含量,降低了闭锁卵泡的含量。     

补肾活血法调控PI3K/AKT/mTOR通路修复卵巢颗粒细胞自噬损伤机制研究

目的:观察补肾活血法调控磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/AKT/mTOR)通路对体外培养大鼠卵巢颗粒细胞(OGCs)自噬损伤的影响。方法:将原代培养的大鼠卵巢颗粒细胞分为六组：空白对照组、模型组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组、果纳芬组。采用ELISA法检测各组中雌二醇(E₂)、孕酮(P)分泌量;Western blot法和免疫荧光法分别检测各组OGCs中PI3K、AKT、mTOR及自噬关键分子酵母Atg6同系物1(Beclin 1)、微管相关蛋1轻链3(LC3)、自噬受体蛋白p62的蛋白表达。结果:模型组E₂含量显著降低,中药各剂量组E₂含量均上升(均P<0.05),且中药高剂量组与果纳芬组E₂含量相当;各组对P的含量均没有影响(均P>0.05)。中药各剂量组及果纳芬组p-PI3K、p-AKT、p-mTOR水平和p62的表达上调,Beclin 1和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的表达下调,且中药高剂量组效果优于果纳芬组(均P<0.05)。结论:补肾...     

更年汤对肾阳虚围绝经期模型大鼠卵巢PI3K/AKT/mTOR蛋白表达的影响

目的:探讨肾阳虚围绝经期模型大鼠在自拟更年汤不同剂量干预下对卵巢PI3K/AKT/mTOR蛋白表达的影响。方法:选24只4～6月龄的青年大鼠作为对照组,构建肾阳虚模型。另采集阴道脱落细胞将10～12月龄雌性SD大鼠筛选出围绝经期模型,并将该模型大鼠随机分为模型组、利维爱组、更年汤低、中及高剂量共5组,每组24只。以上6组均给予相应药物灌胃,末次给药24 h后,检测卵巢组织中IGF-1、IGF-1R及PI3K/AKT/mTOR蛋白表达。结果:更年汤高剂量组、西药组IGF-1、IGF-1R及PI3K/AKT/mTOR蛋白表达均较高,与模型组比较均有统计学差异(P0.05)。结论:更年汤能改善肾阳虚型围绝经期模型大鼠卵巢组织中PI3K/AKT/mTOR蛋白表达,可能与能调节IGF-1及其受体的表达量有关。     

加减归肾丸对卵巢储备功能减退模型小鼠卵巢组织PI3K/AKT/mTOR信号通路的影响

目的探讨加减归肾丸治疗卵巢储备功能减退的可能作用机制。方法将90只ICR雌性小鼠随机分为空白对照组、模型组、雌二醇组和加减归肾丸低、中、高剂量组,每组15只。除空白对照组外,其余小鼠腹腔注射二氧化乙烯环己烯溶液160mg/(kg·d)连续15天建立卵巢储备功能减退小鼠模型。造模成功后加减归肾丸高、中、低剂量组分别灌服加减归肾丸混悬液57.0、28.5、14.3g/(kg·d),雌二醇组灌服戊酸雌二醇0.15mg/(kg·d),空白对照组和模型组每日灌服0.1ml/10g生理盐水,共干预30天。HE染色观察卵巢组织病理形态学变化,酶联免疫法检测血清促卵泡生成素(FSH)、促黄体生成素(LH)、雌二醇(E_2)、抗缪勒管激素(AMH)水平,Western Blot法检测小鼠卵巢组织中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)蛋白表达。结果病理结果显示,模型组较空白对照组始基卵泡、窦前卵泡、窦状卵泡数量明显减少,闭锁卵泡明显增多,黄体数量稀少。雌二醇组和加减归肾丸高剂量组卵泡数量较为丰富,可见到较多黄体。加减归肾丸中、低剂量组主要以闭锁卵泡为主,可见少量黄体。与空白对照组比较,模型组小鼠血清FSH、LH显著升高,AMH、E_2显著降低,卵巢组织PI3K、AKT、mTOR蛋白含量均降低(P0.05或P0.01)。与模型组比较,加减归肾丸中、高剂量组和雌二醇组血清FSH、LH显著降低,AMH显著升高,卵巢组织PI3K、AKT蛋白升高(P0.05或P0.01)。加减归肾丸高剂量组各指标与雌二醇组差异均无统计学意义(P0.05)。结论加减归肾丸可能通过影响卵巢组织PI3K/AKT/mTOR信号通路,从而改善卵巢功能,并且以高剂量效果更佳。     

补肾活血方通过调节PI3K/Akt/mTOR信号通路改善DOR大鼠卵巢储备功能

目的 观察补肾活血方调节磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/雷帕霉素靶蛋白（mTOR）通路相关因子改善卵巢储备功能下降（DOR）大鼠卵巢储备功能的作用机制。方法 运用Ataya法腹腔注射环磷酰胺复制60只DOR模型大鼠，将其随机分为模型组、戊酸雌二醇组（0.000 9 g·kg^-1），补肾活血方高、中、低剂量组（33，16.5，8.25 g·kg^-1），同时另设正常组，每组12只；各组相应药物治疗，正常组和模型组给予等体积生理盐水，连续灌胃14 d，每天1次。治疗结束后，苏木素-伊红（HE）染色卵巢组织，光镜观察初级卵泡数、成熟卵泡数、总卵泡数的变化；免疫组化检测卵巢组织中血管内皮生长因子（VEGF）的表达，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测卵巢组织中PI3K，Akt，mTOR，半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3（Caspase-3）蛋白表达；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）法检测卵巢组织中PI3K，Akt，mTOR mRNA表达。结果 与正常组比较，模型组卵巢组织中成熟卵泡数量、总卵泡数量明显减少（P<0.05，P<0.01），卵巢组织中VEGF，Caspase-3表达升高（P<0.05），PI3K，Akt，mTOR蛋白及mRNA表达水平降低（P<0.05，P<0.01）；与模型组比较，补肾活血方中、高剂量组成熟卵泡数量、总卵泡数量均有不同程度上升（P<0.05，P<0.01），VEGF补肾活血方中剂量组升高最为明显（P<0.05），补肾活血方低、中、高剂量组及戊酸雌二醇组Caspase-3下降，补肾活血方中、高剂量组PI3K，Akt，mTOR蛋白及mRNA表达水平均升高（P<0.05，P<0.01），且补肾活血方中剂量组更加接近于正常组。结论 补肾活血方可以有效地改善DOR大鼠卵巢储备功能，促进卵泡数量增加。作用机制可能与补肾活血方通过增加卵巢组织中VEGF的表达有关，进而激活PI3K/Akt/mTOR信号通路，从而调节Caspase-3的含量，最后促进卵泡数量的增加。     

健脾化痰中药联合有氧运动对肥胖型PCOS大鼠胰岛素抵抗及胰岛素信号通路的影响

目的:建立多囊卵巢综合征伴胰岛素抵抗(PCOS-IR)动物模型,观察健脾化痰中药联合有氧运动对PCOS-IR大鼠胰岛素、性激素及卵巢组织PI3K/PKB/mTOR蛋白表达的影响。方法:大鼠造模成功后随机分为有氧运动组、中药加有氧运动组、模型对照组,经不同干预治疗28天后,检测大鼠体重、空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS),计算胰岛素抵抗指数(Homa IR);检测大鼠血清LH、FSH、T;Western Blot法检测大鼠卵巢组织PI3K/PKB/mTOR蛋白水平的表达。结果:中药加有氧运动组体重、FPG、FINS、胰岛素抵抗(IR)、LH、FSH、T、PI3K/PKB蛋白表达量较模型对照组显著升高(P0.05),mTOR蛋白表达量显著降低(P0.05)。中药加有氧运动组FINS、IR、T、mTOR蛋白表达量较有氧运动组显著下降(P0.05),PI3K/PKB蛋白表达量显著升高(P0.05)。结论:健脾化痰中药联合有氧运动能减轻肥胖型PCOS-IR大鼠体重,改善IR及性激素异常,其机制可能通过影响胰岛素信号通路PI3K/PKB/mTOR的活性来发挥作用。     

“秩边透水道”针法对子宫内膜异位症大鼠 PI3K/AKT/mTOR信号通路及血清指标的影响

目的 ：观察“秩边透水道”针法对子宫内膜异位症（endometriosis,EMs）大鼠PI3K/AKT/mTOR信号通路及血清EMAb、CA125及VEGF的影响,探讨“秩边透水道”针法治疗子宫内膜异位症的作用机制。方法 ：将36只采用自体移植术造模成功的健康清洁级雌性SD大鼠随机分为四组,加假手术组,各9只。分别予以秩边透水道针法、秩边透水道针法加自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤、自噬激动剂雷帕霉素进行干预。ELISA法测定各组血清EMAb、CA125及VEGF的含量,Western blot法检测 PI3K/AKT/mTOR 通路蛋白含量。结果 ：与假手术组比较,模型组血清中EMAb、CA125、VEGF水平以及内膜组织中PI3K、AKT、mTOR 的蛋白水平表达量显著升高(P<0.01);与模型组比较,针刺组、激动剂组、针刺加抑制剂组血清中EMAb、CA125、VEGF水平以及内膜组织中PI3K、AKT、mTOR蛋白水平表达量显著降低(P＜0.01);与针刺组比较,激动剂组血清中VEGF含量、内膜组织中PI3K、AKT、mTOR 的蛋白水平升高(P＜0.05),EMAb、CA125含量显著升高(P＜0.01),针刺加抑制剂组血清中EMAb、CA125、VEGF含量以及PI3K、AKT、mTOR水平显著增加(P＜0.01)。且针刺组效果较好。结论 ：针刺组可能通过抑制 PI3K/Akt/mTOR 信号通路进而诱导自噬改善EMs症状。     

更年汤含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞PI3K/Akt/m TOR通路的影响

目的研究更年汤对围绝经期模型大鼠颗粒细胞磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素蛋白(m TOR)信号通路的影响。方法 10～14月龄雌性SD大鼠150只,筛选出围绝经期模型大鼠,随机分为模型组、替勃龙组(0.22 mg/kg)和更年汤低、中、高剂量(1.0、2.0、4.0 g/kg)组,连续ig给药15 d,1次/d,第15天后采血,制备大鼠含药血清;3～4月龄雌性SD大鼠120只,筛选出动情前期老鼠,剔出卵巢行体外颗粒细胞原代培养,分别用各组含药血清培养液培养颗粒细胞,72～120h后用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测颗粒细胞中PI3K、Akt、m TOR、生长分化因子9(GDF9)、翼状螺旋转录因子2(FOXL2)mRNA表达水平;Western blotting法检测PI3K、Akt、mTOR、GDF9、FOXL2蛋白表达。结果与模型组比较,替勃龙组和更年汤各剂量组卵巢颗粒细胞中PI3K、m TORm RNA和蛋白表达水平均显著升高(P0.05、0.01),Akt mRNA和蛋白表达水平显著降低(P0.05、0.01),GDF9、FOXL2 mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P0.01)。结论更年汤含药血清在临床剂量上可提高卵巢颗粒细胞PI3K、mTOR的表达,抑制Akt及其下游的GDF9、FOXL2表达,从而推测更年汤可调节卵泡的生长发育,抑制卵泡闭锁、改善卵巢功能。     

百事乐胶囊对慢性应激抑郁大鼠海马磷脂酰肌醇-3激酶信号通路相关因子的影响

目的观察百事乐胶囊对慢性轻度不可预见性应激(CUMS)大鼠海马磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)信号通路关键因子表达的影响,探讨其抗抑郁的作用机制。方法将SD大鼠随机分为空白组、模型组、氟西汀组和百事乐胶囊高、中、低剂量组,每组10只。采用CUMS加孤养的方式建立抑郁模型,造模同时灌胃给药,连续21 d。采用新奇摄食实验和Open-field实验评价行为学变化,ELISA检测血清单胺神经递质,免疫荧光和Western blot检测大鼠海马PI3K、蛋白激酶B(AKT)、血清糖皮质激素调节蛋白激酶1(SGK1)表达。结果与空白组比较,模型组大鼠摄食潜伏期显著延长,水平和垂直活动次数明显减少(P0.01),血清单胺神经递质含量下降(P0.01),海马PI3K、AKT表达显著降低且SGK1表达显著升高(P0.05,P0.01);与模型组比较,百事乐胶囊高、中剂量组大鼠摄食潜伏期显著缩短(P0.05),水平和垂直活动次数显著增加(P0.01),血清单胺神经递质含量显著升高(P0.05,P0.01),海马PI3K、AKT显著增加且SGK1表达显著降低(P0.05,P0.01)。结论百事乐胶囊可通过缓解模型大鼠抑郁样行为,调控海马PI3K信号通路关键因子,发挥其抗抑郁的功效。     

抗纤灵方通过PI3K/AKT/mTOR信号通路干预肾纤维化机制研究

目的:研究抗纤灵方对PI3K/AKT/mTOR信号通路的影响及抗肾纤维化作用机制。方法:将60只C57小鼠,随机分为假手术组10只和手术组50只,手术组行5/6肾切除术。术后2周,手术组随机分为模型组、抗纤灵低、中、高剂量组及雷帕霉素阳性药组,各组10只。假手术组给予0.5 mL生理盐水ig,抗纤灵方低、中、高剂量组分别给予0.5 mL抗纤灵药物ig(0.1,0.2,0.4 mg·kg-1),阳性药组给予0.5 mL雷帕霉素ig(0.016μg·kg-1),ig 12周后处死小鼠,在处死小鼠前1 d收集24 h尿液检测24 h蛋白定量,眼眶采血测血肌酐、尿素氮,取残肾采用HE观察肾脏组织形态改变,PCR法检测肾组织中PI3K/AKT/mTOR mRNA表达。结果:与假手术组比较,模型组24 h尿蛋白定量,血肌酐,尿素氮,PI3K/AKT/mTOR mRNA表达均显著升高(P0.01),肾脏病理形态改变明显;与模型组比较,各治疗组24 h尿蛋白定量,血肌酐,尿素氮,PI3K/AKT/mTOR mRNA表达均下降(P0.05),肾脏组织学形态改善。结论:抗纤灵方能降低小鼠24 h尿蛋白定量,改善肾功能,延缓肾纤维化发生;其机制可能与抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路表达相关。     

电针对D-半乳糖诱导的阿尔茨海默病大鼠认知功能及海马神经元自噬的影响

目的:观察电针对阿尔茨海默病(AD)大鼠海马区自噬相关蛋白表达的影响,从神经元自噬的角度探讨电针"百会""肾俞"穴治疗AD的机制。方法:SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、电针组和假电针组,每组12只。除空白对照组外,其余各组予D-半乳糖连续腹腔注射6周建立AD大鼠模型。电针组大鼠于每日腹腔注射后给予电针"百会""肾俞"穴,假电针组仅刺入"百会""肾俞"穴区皮肤且电针仪不通电,每次20 min,1次/d,共6周。干预结束后,采用Morris水迷宫和开放旷场实验评估各组大鼠的学习记忆和认知能力,透射电镜观察海马区突触数密度,用免疫组织化学染色法观察海马区双螺旋细丝蛋白-1(PHF-1)表达水平,用Western blot法检测海马区自噬相关蛋白磷酸肌醇-3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、磷酸化AKT(p-AKT)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的相对表达量。结果:与空白对照组比较,模型组大鼠第2天至第5天逃避潜伏期增长,经过原平台象限时间比率减小(P0.01),旷场实验运动距离、直立次数、中心区域运动时间比率均减少(P0.01),海马区突触数密度降低(P0.01),PHF-1的阳性表达及PI3K、AKT、p-AKT、 mTOR相对表达量均增加(P0.01)。与模型组和假电针组比较,电针组大鼠第2天至第5天逃避潜伏期缩短,经过原平台象限时间比率升高(P0.01),旷场实验运动距离、直立次数、中心区域运动时间比率,以及海马区突触密度增高(P0.01),PHF-1的阳性表达及PI3K、AKT、p-AKT、mTOR相对表达量均减少(P0.01)。与模型组比较,假电针组PI3K表达降低(P0.05)。结论:电针能改善AD样大鼠的学习记忆和认知障碍,其机制可能是与调控PI3K/AKT/mTOR信号通路,诱导自噬,促进神经原纤维缠结清除有关。     

坤泰胶囊对卵巢储备功能下降大鼠的影响

目的探讨坤泰胶囊对卵巢储备功能下降大鼠的影响。方法雌性SD大鼠随机分为正常组、模型组、坤泰胶囊组(0.5 g/kg)、西药组[戊酸雌二醇片(0.12 mg/kg)、黄体酮胶囊(18 mg/kg)]、中西药组,雷公藤多苷片(50 mg/kg)灌胃14 d建立卵巢储备功能下降模型。ELISA法检测抗苗勒氏管激素(AMH)、雌二醇(E2)、促黄体生成素(LH)、促卵泡生成素(FSH)水平,HE染色观察卵巢变化,Western blot、实时荧光定量PCR检测大鼠卵巢组织Smad2、Smad3、Smad7表达。结果与模型组比较,坤泰胶囊组、中西药组、西药组能显著提高E2、AMH水平及Smad2、Smad3表达,且显著降低Smad7表达(P<0.05);中西药组、西药组能显著降低FSH、LH水平(P<0.05)。药物干预后,各级卵泡发育,卵泡结构完整,卵泡外围包绕的颗粒细胞层数、黄体数量多于模型组,排列规则,发育尚可。结论坤泰胶囊可能通过调控卵巢组织Smad2/3/7表达,促进及维持卵泡发育,从而改善卵巢储备功能下降大鼠卵巢功能。     

不同蛋白提取方法对PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白表达量的影响

目的:探讨Ripa裂解液蛋白提取法和Invent离心管柱蛋白提取法对慢性应激模型大鼠海马组织PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白表达量的影响。方法:空白组和模型组大鼠各3只,取双侧海马组织,每个样品分别采用Ripa裂解液、Invent离心管柱蛋白提取法进行蛋白提取,分为空白+Invent组、空白+Ripa组、模型+Invent组、模型+Ripa组。采用Western Blot法检测PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白表达情况,析因设计方法分析各因素的效果。结果:大鼠海马PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR表达均受组别和提取方法的影响,组别和提取方法存在交互作用,运用Invent离心管柱蛋白提取法提取蛋白,模型组的PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR表达较空白组减少,差异有统计学意义(P0.05)。结论:慢性应激抑制大鼠海马PI3K/Akt/mTOR信号通路, Invent离心管柱蛋白提取法操作便捷,蛋白提取率高,尤其对信号通路中磷酸化蛋白的提取具有明显的优势。     

补肾活血方对血管性痴呆大鼠脑海马脑源性神经生长因子介导的PI3K/AKT信号通路的影响

目的:从脑源性神经生长因子(BDNF)介导的PI3K/AKT信号通路角度探讨补肾活血方对血管性痴呆(VD)大鼠脑海马经元保护机制。方法:将70只SD大鼠随机分为假手术组14只、模型组14只、补肾活血方组(10.14g/kg、5.07g/kg)28只、尼莫地平组(0.011g/kg)14只,除假手术组外,采用两血管阻断法制备大鼠VD模型,药物组分别以10.14g/kg和5.07g/kg灌服补肾活血方药液,阳性组以0.011g/kg灌服尼莫地平药液,假手术组、模型组均以10ml/kg体重灌服生理盐水,每日1次,给药30d天后,采用透射电子显微镜观察各组大鼠脑海马神经元超微结构变化;Tunel法检测细胞凋亡变化;采用实时荧光定量PCR(RT-q PCR)和Western-blot检测海马组织BDNF、酪氨酸蛋白激酶B(Trk B)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3-K)、丝氨酸-苏氨酸激酶(AKT)蛋白及基因表达的变化。结果:与假手术组比较,模型组大鼠脑海马组织BDNF、Trk B、PI3-K、AKT蛋白及基因表达水平均呈显著下降,脑海马神经元超微结构明显受损,细胞凋亡平均光度值显著升高,平均灰度值显著下降;与模型组比较,补肾活血方10.14g/kg和5.07g/kg剂量组均能显著提高脑海马组织BDNF、Trk B、PI3-K、AKT蛋白及基因表达,改善脑海马神经元超微结构,细胞凋亡平均光度值显著下降,平均灰度值显著升高。结论:补肾活血方可通过调控BDNF介导的PI3-K/AKT信号通路,发挥神经元保护作用。     

电针对多囊卵巢综合征大鼠自噬相关因子的影响

目的:观察电针对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠PI3K/AKT通路介导的自噬及性激素的影响,探讨电针治疗PCOS排卵障碍性不孕的可能机制。方法:SD大鼠随机分成对照组、模型组、电针组,每组10只。使用来曲唑灌胃21 d制备PCOS大鼠模型。电针组电针大鼠双侧"三阴交""太冲",每次20 min,每天1次,连续14 d。HE染色观察卵巢形态结构,ELISA法检测血清雄激素(T)、促黄体生成素(LH)、抗缪勒氏管激素(AMH)水平,Western blot法检测卵巢组织磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、微管相关蛋白1轻链3(LC3)蛋白表达水平。结果:与对照组比较,模型组T、LH、AMH水平显著升高(P0.05),PI3K和AKT表达明显降低(P0.05),LC3Ⅱ/Ⅰ明显升高(P0.05)。与模型组比较,电针组T、LH、AMH水平显著降低(P0.05),PI3K和AKT表达水平明显升高(P0.05),LC3Ⅱ/Ⅰ明显降低(P0.05)。结论:电针可能通过上调PCOS大鼠卵巢组织中PI3K和AKT的蛋白表达进而降低卵巢组织自噬水平,从而改善其性激素水平及卵泡的生长发育状态,这可能是电针治疗PCOS排卵障碍性不孕的机制之一。     

基于BDNF/TrkB/PI3K/Akt信号通路的滋肾醒脑汤对阿尔茨海默病大鼠学习记忆能力的影响

目的基于BDNF/TrkB/PI3K/Akt信号通路观察滋肾醒脑汤对阿尔茨海默病(AD)大鼠学习记忆能力的影响,探讨其可能的作用机制。方法采用侧脑室注射β-淀粉样蛋白制备AD大鼠模型,假手术组注射等体积生理盐水,将成模大鼠随机分为模型组、中药组及阳性对照组,每组6只,中药组及阳性对照组分别予滋肾醒脑汤(16.74 g/kg)和盐酸多奈哌齐混悬液(0.45 mg/kg)灌胃,假手术组和模型组灌胃等体积蒸馏水,每日1次,连续4周。采用Morris水迷宫实验进行大鼠行为学检测,TUNEL染色检测海马组织神经细胞凋亡情况,Western blot检测海马组织脑源性神经营养因子(BDNF)、酪氨酸激酶受体B(TrkB)蛋白表达,免疫组化检测海马组织PI3K、Akt蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠逃避潜伏期明显延长,跨越平台次数减少,目标象限停留时间缩短(P<0.05,P<0.01),海马组织神经细胞凋亡率明显升高,BDNF、TrkB、PI3K、Akt蛋白表达明显降低(P<0.05);与模型组比较,中药组及阳性对照组大鼠逃避潜伏期明显缩短,跨越平台次数增加,目标象限停留时间延长(P<0.01,P<0.05),海马组织神经细胞凋亡率明显降低,BDNF、TrkB、PI3K、Akt蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01),中药组与阳性对照组差异无统计学意义(P>0.05)。结论滋肾醒脑汤可改善AD大鼠学习记忆能力,其机制可能与上调BDNF/TrkB/PI3K/Akt信号通路蛋白表达,减少神经细胞凋亡有关。     

针刺通过调控PI3K/Akt/mTOR通路改善血管性痴呆大鼠认知功能的机制研究

目的:探讨针刺通过调控磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路改善血管性痴呆(VD)大鼠认知功能的机制。方法:Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、非穴组和针刺组,每组18只。采用永久性双侧颈动脉结扎法制备VD大鼠模型。针刺组针刺"百会"和双侧"足三里",非穴组针刺两个固定非穴点,均每天1次,针刺6 d,休息1 d,连续2周。Morris水迷宫实验检测各组大鼠学习和空间记忆能力;ELISA法检测各组大鼠海马组织中活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量以及乙酰胆碱脂酶(AChE)、乙酰胆碱转移酶(ChAT)活力;JC-1法检测各组大鼠海马组织线粒体膜电位(MMP)的水平;Western blot法检测各组大鼠海马组织中PI3K、p-Akt及mTOR表达水平。结果:与假手术组相比,模型组大鼠逃避潜伏期延长(P0.05),ROS和MDA含量以及AChE活力显著升高(P0.05),西南象限停留时间缩短(P0.05),SOD活性、ChAT活力、MMP以及PI3K、p-Akt和mTOR蛋白表达水平显著降低(P0.05)。与模型组和非穴组相比,针刺组大鼠逃避潜伏期缩短(P0.05),ROS和MDA含量以及AChE活力显著降低(P0.05),西南象限停留时间延长(P0.05),SOD活性、ChAT活力、MMP以及PI3K、p-Akt和mTOR蛋白表达水平显著升高(P0.05)。与模型组相比,非穴组大鼠各项指标差异无统计学意义(P0.05)。结论:针刺可能通过激活PI3K/Akt/mTOR信号通路,缓解VD大鼠海马组织的氧化应激及线粒体膜电位降低,提高VD大鼠的认知功能。     

不同剂量加减苍附导痰汤对肥胖型PCOS-IR大鼠胰岛素抵抗的影响

目的建立多囊卵巢综合征伴胰岛素抵抗(polycystic ovary syndrome with insulin resistance,PCOS-IR)动物模型,观察加减苍附导痰汤高、中、低剂量组对肥胖型多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)大鼠胰岛素抵抗和血清性激素水平的影响,以及卵巢组织及骨骼肌组织胰岛素信号通路磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(phosphatidylinositol-3-kinase/protein kinase B/mammalian target of rapamycin,PI3K/PKB/mTOR)蛋白表达水平的影响。方法选取2 1日龄SPF级SD雌性大鼠6 0只,其中1 2只为空白对照组,剩余48只利用经典Poresky造模方法联合高脂饲料诱导肥胖型PCOS-IR大鼠。造模成功后,随机分为模型对照组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组各12只,分别实施不同的干预措施。经治疗28天后,用葡萄糖氧化酶法检测空腹血糖(FPG),放射免疫法检测空腹胰岛素(FINS),计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),酶联免疫法检测大鼠血清中促黄体生成素(LH)、促卵泡生长素(FSH)、睾酮(T);Western Blot法检测大鼠卵巢组织中PI3K、PKB、mTOR蛋白水平的表达。结果 (1)与空白对照比较,模型对照组体重、FPG、FINS、IR、LH、FSH、T、mTOR蛋白表达水平显著升高(P0.05),PI3K/PKB蛋白表达水平显著降低(P0.05);(2)与模型对照组比较,中药中剂量组体重显著降低(P0.05),中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组FPG、FINS、IR、T值显著下降(P0.05);(3)在卵巢组织中,中药高剂量组PI3K/PKB蛋白表达比中药中剂量组、中药低剂量组显著升高(P0.05);(4)在骨骼肌组织中,中药高剂量组、中药中剂量组PI3K/PKB蛋白表达比中药低剂量组显著升高(P0.05),中药中剂量组、中药高剂量组mTOR蛋白表达水平比低剂量组显著降低(P0.05)。结论 (1)中药加减苍附导痰汤能够明显改善PCOS-IR大鼠体重、胰岛素抵抗情况及高雄状态。(2)中药上调PCOS大鼠卵巢组织及骨骼肌组织胰岛素信号通路PI3K/PKB/mTOR的活性,使蛋白PI3K/PKB相对表达量升高,mTOR蛋白相对表达量下降,具有浓度依赖性,推测中药改善肥胖型PCOS-IR大鼠胰岛素抵抗情况可能通过影响胰岛素信号通路PI3K/PKB/mTOR来起作用的。