和胃降逆方对非糜烂性胃食管反流病大鼠5-HT3/5-HT4受体表达的影响(二)

目的:观察和胃降逆方对非糜烂性胃食管反流病大鼠5-羟色胺受体表达的影响。方法:将SPF级SD大鼠随机分为空白组、模型组、奥美拉唑组、和胃降逆方高剂量组、和胃降逆方中剂量组、和胃降逆方低剂量组,采用基础致敏联合酸灌注的方法建立内脏高敏感NERD模型;干预2周后取食管组织;Western Blot与RTPCR法测定5-HT3R与5-HT4R的蛋白与基因表达水平。结果:奥美拉唑组、和胃降逆方高、中、低剂量组大鼠食管5-HT3R蛋白表达量均低于模型组(P0.05);奥美拉唑组、和胃降逆方高、中、低剂量组大鼠食管5-HT4R蛋白表达量与模型组比较,差异均无统计学意义(P0.05);和胃降逆方中、低剂量组大鼠食管5-HT3RmRNA表达量明显低于模型组(P0.01或P0.05);奥美拉唑组、和胃降逆方高、中、低剂量组食管5-HT4RmRNA表达量与模型组比较,差异均无统计学意义(P0.05)。结论:和胃降逆方可降低非糜烂性胃食管反流病大鼠5-HT3R的表达量,调节食管-内脏高敏感性。     

疏肝和胃降逆汤对反流性食管炎大鼠食管组织IL-23/IL-17轴的影响

目的 观察疏肝和胃降逆汤对反流性食管炎大鼠食管黏膜病理改变及IL-23p19、IL-17表达的影响,探讨疏肝和胃降逆汤治疗反流性食管炎(RE)的作用机制.方法 50只SD大鼠随机分为5组:正常对照组、假手术组、模型组、奥美拉唑组、疏肝和胃降逆汤组.通过半幽门结扎联合贲门肌切开术制备反流性食管炎模型,造模后继续喂养1周,然后灌胃给药,连续给药28 d后处死大鼠,检测各组大鼠食管组织组织学损伤评分,实时荧光定量RT-PCR 检测食管组织IL-23p19的mRNA 表达,ELISA法检测食管组织IL-17蛋白含量.结果 正常对照组、疏肝和胃降逆汤组、奥美拉唑组和假手术组大鼠食管黏膜组织学评损伤评分明显低于模型组(P＜0.05); 模型组食管组织IL-23p19mRNA表达水平和IL-17蛋白水平明显高于正常对照组、假手术组、疏肝和胃降逆汤组(P＜0.05),而与奥美拉唑组相比则无显著性差异(P＞0.05);正常对照组、假手术组和疏肝和胃降逆汤组3者之间无统计学意义.结论 疏肝和胃降逆汤可能通过非选择性抑制食管组织IL-23p19、IL-17的表达来抑制反流性食管炎大鼠的炎症反应,效果强于奥美拉唑.     

和胃降逆方对非糜烂性胃食管反流病大鼠5-羟色胺及其受体表达的影响(一)

目的:观察和胃降逆方对非糜烂性胃食管反流病(NERD)大鼠5-羟色胺(5-hydroxy tryptamine,5-HT)及其受体表达的影响,探讨和胃降逆方对非糜烂性胃食管反流病大鼠的作用机制。方法:将SPF级SD大鼠随机分为空白组、模型组、奥美拉唑组、和胃降逆方高剂量组、和胃降逆方中剂量组、和胃降逆方低剂量组,采用基础致敏联合酸灌注的方法建立内脏高敏感NERD模型;干预2周后取血清与食管组织;ELISA法测定大鼠血清及食管中5-HT的含量,HE染色评价大鼠食管病理改变情况,免疫组织化学法测定5-HT3R与5-HT4R的表达水平。结果:和胃降逆方中、低剂量组、奥美拉唑组大鼠血清5-HT含量均低于模型组(P0.05);和胃降逆方中剂量组、奥美拉唑组大鼠食管5-HT含量低于模型组(P0.05);和胃降逆方高、中剂量组大鼠食管5-HT3R表达量明显低于模型组(P0.05)。结论:和胃降逆方可降低NERD大鼠血清及食管5-HT水平,其作用机制可能与降低食管5-HT3R的表达有关。     

疏肝和胃方对非糜烂性胃食管反流病模型大鼠内脏敏感性外周机制的影响

目的:观察疏肝和胃方对非糜烂性胃食管反流病(NERD)模型大鼠食道内脏高敏感外周机制的影响。方法:将60只SD大鼠随机分为空白对照组,生理盐水对照组,模型组,奥美拉唑组,疏肝和胃方组。除空白对照组外其余各组用腹腔注射鸡卵清蛋白(OVA)基础致敏联合食管酸灌注的方法复制NERD大鼠模型,连续给药14天后,观察各组大鼠食管组织超微结构变化、食管组织P物质及CGRP的含量变化。结果:与模型组比较,奥美拉唑组及疏肝和胃方组均能降低NERD模型大鼠P物质及CGRP表达(P<0.05),电镜显示NERD中药组食管组织核仁清晰,染色均匀;细胞间隙均匀。结论:疏肝和胃方可改善NERD大鼠的超微结构变化,下调食管组织中P物质及CGRP的表达,达到降低食道内脏敏感性的目的。     

肠安Ⅰ号方对肝郁脾虚型腹泻型肠易激综合征模型大鼠内脏高敏感的影响

目的探讨肠安I号方对肝郁脾虚型腹泻型肠易激综合征(IBS-D)模型大鼠内脏敏感性的调节作用,及其对腰骶段背根神经节P物质(SP)、降钙素基因相关肽(CGRP)、蛋白酶激活受体-2(PAR-2)、瞬时受体电位香草酸受体1(TRPV1)蛋白表达的影响。方法将60只雄性SD大鼠随机分为正常组(10只)和模型组(50只),模型组采用新生母子分离叠加多重应激建立肝郁脾虚型IBS-D大鼠模型,模型评价后将模型大鼠按照体重随机区组分为模型组、肠安Ⅰ号方低剂量组、肠安Ⅰ号方中剂量组、肠安Ⅰ号方高剂量组及得舒特组,每组10只,连续灌胃14天,正常组给予蒸馏水灌胃。采用腹壁回撤反射(AWR)评分评估大鼠内脏敏感性,免疫组化方法检测脊髓背根神经节中SP、CGRP、PAR-2及TRPV1的表达,并通过实时荧光定量PCR检测腰骶段背根神经节中PAR-2 mRNA及TRPV1 mRNA水平。结果与正常组比较,模型大鼠体重下降,粪便含水量增多(P<0.05);与模型组比较,肠安Ⅰ号低、中、高剂量组体重增加,粪便含水量减少(P<0.05)。与正常组比较,模型大鼠内脏敏感性升高(P<0.05);与模型组比较,肠安Ⅰ号方中、高剂量组及得舒特组大鼠内脏敏感性降低(P<0.05),肠安Ⅰ号方各剂量组与得舒特组比较差异无统计学意义(P>0.05)。与正常组比较,模型大鼠腰骶段背根神经节PAR-2、TRPV1、SP、CGRP蛋白表达升高(P<0.05);与模型组比较,肠安Ⅰ号方低、中、高剂量组PAR-2、TRPV1、SP、CGRP蛋白表达降低(P<0.05);与正常组比较,模型组大鼠背根神经节PAR-2 mRNA和TRPV1 mRNA升高(P<0.05);肠安Ⅰ号方低、中、高剂量组及得舒特组PAR-2mRNA水平较模型组降低(P<0.05),肠安Ⅰ号方高剂量组TRPV1 mRNA水平较模型组降低,且低于得舒特组(P<0.05)。结论肝郁脾虚IBS-D模型大鼠内脏敏感性升高,肠安Ⅰ号方可改善模型大鼠内脏高敏感,其机制与下调背根神经节中SP、CGRP、PAR-2、TRPV1蛋白表达,及PAR-2 mRNA与TRPV1mRNA水平有关。     

疏肝和胃降逆颗粒对反流性食管炎大鼠食管黏膜增生的影响

目的观察疏肝和胃降逆颗粒对反流性食管炎大鼠胃和食管pH值、食管黏膜增生及PCNA表达的影响。方法 50只SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、疏肝和胃降逆颗粒组和奥美拉唑组,每组10只。用幽门半结扎加食管下括约肌切开法建立反流性食管炎大鼠模型,造模1周后给予药物干预,共28 d。治疗结束后处死动物,进行食管下段及胃pH值检测,取食管下段组织,分别进行常规HE染色观察黏膜增生和采用QRT-PCR技术法检测PCNA的表达。结果模型组食管下段和胃的pH值较正常组明显下降(P<0.05);模型组食管下段黏膜增生和PCNA的表达较正常组和假手术组均明显升高(P<0.05);疏肝和胃降逆颗粒组和奥美拉唑组食管下段和胃pH值均较模型组明显升高(P<0.05);疏肝和胃降逆颗粒组和奥美拉唑组食管下段黏膜增生和PCNA的表达较模型组均明显降低(P<0.05)。疏肝和胃降逆颗粒组和奥美拉唑组比较,上述各指标差异没有统计学意义(P(0.05)。结论疏肝和胃降逆颗粒对反流性食管炎大鼠胃和食管pH值、黏膜增生和PCNA的表达均有明显的抑制作用。     

PKA调控TRPV1敏化介导CGRP表达探讨疏肝健脾方防治肠易激综合征研究

目的:通过观察肠易激综合征(irritable bowels syndrome,IBS)大鼠结肠黏膜组织形态、超微结构及蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)、辣椒素受体(transient receptor potential vanilloid 1,TRPV1)、降钙素基因相关肽(caleitonin gene-relatedpeptide,CGRP)的表达变化,探讨疏肝健脾方治疗IBS可能机制。方法:72只清洁级雄性大鼠按体质量随机分为正常组,模型组,疏肝健脾方组(低、中、高剂量)和对照组;用辣素灌胃结合束缚应激刺激法复制IBS大鼠模型。正常组予同步饲养;疏肝健脾方组分别按低、中、高不同剂量给药;对照组予匹维溴胺;模型组予等剂量生理盐水;连续灌胃2周。末次给药后,处死所有大鼠,取结肠组织并应用HE染色法和醛品红-桔黄G法分别检测病理组织学改变及肥大细胞阳性表达情况;采用Western-blot技术和荧光定剂量PCR检测大鼠结肠PKA、TRPV1、CGRP的表达情况。结果:光镜下见各组黏膜及黏膜上皮绒毛完整,排列规则,可见少许炎症细胞,未见黏膜下血管扩张及弥漫性炎症浸润改变,腺体结构、排列正常;正常组除外,各组大鼠结肠组织黏膜间质或黏膜下层可见类圆形紫红至深紫色染色点。模型组大鼠结肠组织中PKA、TRPV1、CGRP基因和蛋白表达明显高于正常组(P"0.05)。高剂量组PKA、TRPV1、CGRP以及中剂量组CGRP基因表达和高剂量组PKA、CGRP蛋白表达均低于模型组(P"0.05),其余低、中剂量各组PKA、TRPV1及CGRP表达与模型组比较,差异均无统计学意义(P#0.05)。结论:疏肝健脾方可能通过PKA调节IBS大鼠TRPV1、CGRP的变化,是其发挥疗效的作用机制之一。     

不同刺灸法对功能性便秘大鼠结肠组织肠神经相关蛋白表达的影响

目的:比较手针、电针和艾灸对功能性便秘大鼠结肠组织肠神经活动相关蛋白降钙素基因相关肽(CGRP)、瞬时感受器电位香草素受体1(TRPV 1)、蛋白酶激活受体-4(PAR-4)表达的影响。方法:60只SD大鼠随机分为空白对照组(8只)、模型组(11只)、西沙必利组(8只)、手针组(11只)、电针组(11只)和艾灸组(11只)。以盐酸洛哌丁胺混悬液连续灌胃6d制备功能性便秘模型。西沙必利组和3个刺灸干预组分别于每日灌胃后1h给予相应干预:西沙必利组予西沙必利混悬液3mg/kg灌胃;其余3组分别采用手针、电针和艾条温和灸的方法对大鼠"天枢""上巨虚"穴干预15min,连续6d。计量第6天24h粪便量,采用炭餐指示剂进行小肠推进率实验,分别采用实时荧光定量PCR法和Western blot技术检测结肠组织CGRP、TRPV 1、PAR-4mRNA及其蛋白的表达。结果:与空白对照组比较,模型组24h粪便量、小肠推进率显著降低(P0.01);与模型组比较,西沙必利组、手针组、电针组的粪便量和小肠推进率均升高(P0.05,P0.01),艾灸组小肠推进率也升高(P0.01);与西沙必利组及电针组比较,手针、艾灸两组的小肠推进率均降低(P0.01)。与空白对照组比较,模型组CGRP、TRPV 1、PAR-4蛋白及mRNA表达水平均升高(P0.01);与模型组比较,各治疗组蛋白及mRNA表达水平除艾灸组CGRP外其余均降低(P0.05,P0.01);与西沙必利组比较,艾灸组3种蛋白表达水平均升高(P0.05,P0.01),3个刺灸干预组PAR-4mRNA表达水平均升高(P0.01),手针组CGRP mRNA表达水平降低(P0.05)、TRPV 1mRNA表达水平升高(P0.05);3个刺灸干预组之间比较,手针、电针两组CGRP、TRPV 1蛋白及CGRP、PAR-4 mRNA表达均低于艾灸组(P0.05,P0.01),电针组TRPV 1mRNA表达低于手针组(P0.05)。结论:3种刺灸方法对功能性便秘大鼠结肠组织CGRP、TRPV 1、PAR-4蛋白及mRNA表达均有不同程度的降低作用。     

祛风宣肺方对咳嗽敏感性增高豚鼠TRPV1 通道相关蛋白的影响

目的 探讨祛风宣肺方对咳嗽敏感性增高豚鼠瞬时受体电位香草酸亚型 1（TRPV1）通道相关蛋白的作用，以期探讨其疗效机制。 方法 48 只 SPF 级豚鼠分为正常组（给予生理盐水）、模型组、西药组、中药组，每组 12 只，除正常组外，其余 3 组采用卵蛋白致敏的方法建立咳嗽敏感性增高豚鼠模型，模型组给予生理盐水，西药组给予辣椒平，中药组给予祛风宣肺方，干预 1 周后采用 ELISA 法测定血清中 IL-6、IL-20 水平、支气管肺泡灌洗液（BALF） 中 TRPV1、P 物质（SP）、降钙素基因相关肽（CGRP） 蛋白水平，WesternBlot 法测定肺组织中 TRPV1、神经激肽-1 受体（NK-1R）、CGRP 蛋白表达。 结果 与正常组比较，模型组血清 IL-6、IL-20、BALF 中 TRPV1、SP、CGRP 及肺组织中 TRPV1、NK-1R、CGRP 水平升高（P<0.01）；与模型组比较，西药组及中药组血清 IL-6、IL-20、BALF 中 TRPV1、SP、CGRP 水平降低（P<0.01），但中药组SP 水平与模型组比较，差异无统计学意义（P>0.05）；与西药组比较，中药组 BALF 中 TRPV1、SP、CGRP水平升高（P<0.05， P<0.01）。 与模型组比较，西药组、中药组肺组织中 TRPV1、NK-1R、CGRP 蛋白表达下降（P<0.05， P <0.01）；与西药组比较，中药组肺组织中 TRPV1、NK-1R、CGRP 表达升高（ P <0.01）。结论 抑制 TRPV1 通道进而降低气道神经源性炎症可能是祛风宣肺方的重要疗效机制之一。     

健脾理气方对功能性消化不良模型大鼠CGRP和SP表达的影响

目的:研究健脾理气方对功能性消化不良(FD)大鼠胃窦黏膜降钙素基因相关肽(CGRP)和P物质(SP)的影响,探讨该方调节胃肠感觉过敏的机制。方法:72只SPF级Wistar大鼠共分为6组,分别为空白对照组、模型组(空白组)、健脾理气方低、中、高剂量组及莫沙必利组,每组12只;健脾理气方高、中、低剂量组分别为80、48、16g/kg;莫沙必利组予莫沙必利0.005g/kg;空白对照组及模型组以等体积生理盐水灌胃,每天给药1次,从造模后第7d开始用药,持续给药14d。用免疫组化法观察健脾理气方对FD大鼠胃窦黏膜CGRP和SP表达的影响。结果:模型组大鼠胃窦黏膜CGRP和SP阳性神经元表达明显减少(P<0.01),差异有显著性意义。健脾理气方各剂量组均可不程度地降低模型大鼠胃窦组织中CGRP和SP的表达(P<0.05或P<0.01),且高剂量组与莫沙必利组作用无显著性差异。结论:改善FD大鼠胃肠感觉过敏,提高感觉阈值是健脾理气方治疗FD的作用机制之一。     

针刺合募配穴对肠易激综合征大鼠结肠内脏高敏相关因子的影响

目的:观察针刺合募配穴对肠易激综合征(IBS)大鼠结肠组织中类胰蛋白酶(Try)、蛋白酶活化受体2(PAR-2)、瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV 1)、P物质(SP)和降钙素基因相关肽(CGRP)表达的影响,探讨针刺合募配穴治疗IBS的机制。方法:雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、药物组和合募针刺组,每组10只。采用慢性应激结合束缚方法建立IBS大鼠模型。合募针刺组针刺"上巨虚""天枢"穴,30min/d,药物组予匹维溴胺(15mg·kg~(-1)·d~(-1))灌胃,均治疗14d。观察大鼠体质量,检测大鼠结直肠扩张(CRD)容量阈值和腹壁回撤反射(AWR)评分,甲苯胺兰染色法观察结肠组织肥大细胞(MC)计数,免疫组化法检测结肠组织Try表达水平,Western blot法检测结肠组织中PAR-2、TRVP 1、SP、CGRP的表达水平。结果:与空白组相比,模型组大鼠体质量显著降低(P0.01),在CRD检测中腹部抬高和臀部抬高容量阈值明显降低(P0.01),AWR评分、结肠组织MC计数及Try、PAR-2、TRVP 1、SP、CGRP表达水平均显著升高(P0.01)。与模型组比较,药物组、合募针刺组大鼠体质量显著升高(P0.01,P0.05),在CRD检测中腹部抬高和臀部抬高容量阈值明显升高(P0.05,P0.01),AWR评分、结肠组织MC计数及Try、PAR-2、TRVP 1、SP、CGRP表达水平均显著降低(P0.01)。合募针刺组结肠组织PAR-2、TRVP 1、SP、CGRP表达水平较药物组降低更显著(P0.05)。结论:针刺合募配穴可降低IBS大鼠结肠组织中Try、PAR-2、TRVP 1、SP和CGRP的表达水平,减轻IBS的高敏反应。     

疏肝健脾方对腹泻型肠易激综合征结肠黏膜TRPV1、SP、CGRP的影响

目的：观察治疗前、后腹泻型肠易激综合征患者结肠黏膜TRPV1、SP、CGRP表达,探讨疏肝健脾方防治肠易激综合征的可能机制.方法：30例符合诊断标准、纳入标准、排除标准的肠易激综合征患者,予疏肝健脾方治疗4周,记录0周、2周、4周症状变化;应用荧光定量PCR技术及免疫组化检测结肠黏膜TRPV1、SP、CGRP表达变化.结果：治疗前,IBS-D患者腹痛、腹部不适明显,伴见大便次数增多;予疏肝健脾方干预14d、28d后,患者腹痛、腹部不适缓解,排便次数恢复正常,与治疗前比较,有统计学意义（P＜0.05）.治疗前,IBS-D患者结肠黏膜TRPV1、SP、CGRP呈高表达变化;治疗后,结肠黏膜TRPV1、SP表达下降,有统计学意义（P＜0.05）.但是,治疗后结肠黏膜CGRP表达较治疗前无明显差异（P＞0.05）.结论：疏肝健脾方具有明确缓解腹泻型肠易激综合征效用,其疗效可能与下调TRPV1表达、减少SP释放有关.     

清肝祛风通络方对偏头痛模型细胞增殖及CGRP、SP蛋白表达的影响

目的探讨清肝祛风通络方(苗药)对偏头痛模型细胞的增殖及CGRP、SP蛋白表达的影响。方法原代培养大鼠大脑皮质神经细胞,硝酸甘油诱导偏头痛模型。实验分为6组:正常空白组(不造模),模型对照组(硝酸甘油处理),高、中、低剂量苗药给药组(硝酸甘油处理+苗药含药血清处理),阳性对照组(硝酸甘油处理+盐酸氟桂利嗪处理)。MTT法检测大鼠大脑皮质神经细胞存活率;Western Blot检测大鼠大脑皮质神经细胞内降钙素基因相关肽(CGRP)与P物质(SP)蛋白表达。结果模型对照组细胞存活率(55.71±2.00)%,低于正常空白组,差异有统计学意义(t=6.858,P<0.001),高、中剂量苗药给药组大鼠大脑皮质神经细胞存活率分别为(77.99±3.20)%与(70.12±2.56)%,高于模型对照组,差异有统计学意义(t=4.164,2.694,P=0.002,0.023)。CGRP、SP蛋白在正常空白组的表达最低,在模型对照组的表达最高;苗药给药组中CGRP、SP蛋白表达随苗药浓度的增加而降低,与模型对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论清肝祛风通络方对硝酸甘油诱导的大鼠大脑皮质神经细胞凋亡具有明显的抑制作用,其机制可能与抑制CGRP、SP蛋白的表达有关。     

疏肝和胃降逆汤对胃食管反流病肝胃不和证患者食管黏膜蛋白酶激活受体-2及环氧合酶-2蛋白表达的影响

目的:探讨疏肝和胃降逆汤对胃食管反流病(GERD)肝胃不和证患者食管黏膜蛋白酶激活受体-2(PAR-2)及环氧合酶-2(COX-2)蛋白表达的影响。方法:选取2015年1月至2016年1月辽宁中医药大学附属医院收治GERD患者178例作为研究对象,以随机数表法分为观察组和对照组,每组89例。2组均给予奥美拉唑肠溶片治疗,观察组在此基础上给予疏肝健脾和胃方治疗。观察2组基线期和治疗后12周(治疗后)反流性疾病问卷(RDQ)症状积分及食管黏膜PAR-2及COX-2蛋白表达变化。结果:基线期,2组RDQ症状积分、食管黏膜PAR-2及COX-2蛋白表达基本相同,差异无统计学意义(P 0. 05);治疗后,观察组RDQ症状积分、食管黏膜PAR-2及COX-2蛋白表达显著低于对照组,差异有统计学意义(P 0. 05)。观察组RDQ症状积分与食管黏膜PAR-2及COX-2蛋白表达正相关(P 0. 05),对照组RDQ症状积分与食管黏膜PAR-2及COX-2蛋白表达无明显相关性(P 0. 05)。结论:奥美拉唑肠溶片联合温阳活血汤治疗胃食管反流病肝胃不和证具有较好的疗效,其机制可能是通过降低患者食管黏膜PAR-2及COX-2蛋白表达而起治疗作用。     

祛风宣肺方通过背根神经反射降低咳嗽敏感性的作用机制研究

目的：探讨祛风宣肺方对咳嗽敏感性增高豚鼠背根神经节中瞬时受体电位香草酸亚型1（TRPV1）、P物质（SP）、降钙素基因相关肽（CGRP）蛋白及基因的作用，进一步研究祛风宣肺方在慢性咳嗽中的作用机制。方法：将48只SPF级雄性健康豚鼠随机分为正常对照组（生理盐水）、模型组（生理盐水）、西药组（Capsazepine）、中药组（祛风宣肺方），采用卵蛋白致敏的方法建立咳嗽敏感性增高豚鼠模型。药物干预1周后辣椒素雾化法测定各组豚鼠的咳嗽次数，实时PCR法测定背根节中TRPV1、SP、CGRP mRNA水平，蛋白印迹法测定背根节中TRPV1、NK1-R、CGRP蛋白表达。结果：与正常对照组比较，模型组咳嗽次数增加，背根节中TRPV1、SP、CGRP mRNA表达增加，TRPV1、NK-1R、CGRP蛋白表达升高（均P<0.01）。与模型组比较，西药组、中药组咳嗽次数降低（P<0.05），背根节中TRPV1、SP、CGRP mRNA表达下降（P<0.01），西药组背根节中TRPV1、NK-1R、CGRP蛋白表达下降（P<0.05），中药组背根节中NK-1R、CGRP蛋白表达下降（P<0.05），TRPV1蛋白表达与模型组比较，差异无统计学意义（P>0.05）。结论：抑制TRPV1通道，抑制背根神经反射进而降低气道神经源性炎症可能是祛风宣肺方的重要疗效机制之一。     

和胃降逆法对反流性食管炎患者食管黏膜环氧合酶-2、E-钙黏蛋白表达的影响

目的:通过观察和胃降逆法对反流性食管炎患者食管黏膜环氧合酶-2(COX-2)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达的影响,探讨和胃降逆法治疗反流性食管炎的作用机理。方法:选择120例反流性食管炎患者,分为中药治疗组、西药治疗组;中药治疗组以和胃降逆法治疗,选用和胃降逆方口服;西药治疗组以奥美拉唑胶囊治疗;治疗8周。患者治疗前后均行胃镜检查及食管黏膜病理活检,免疫组化法测定食管黏膜COX-2、E-cadherin的表达。结果:和胃降逆法能明显改善反流性食管炎患者的组织病理学积分,能明显降低反流性食管炎患者食管黏膜组织COX-2的表达、增强黏膜组织E-cadherin表达。结论:降低食管黏膜组织COX-2表达、升高黏膜组织E-cadherin表达是和胃降逆法治疗反流性食管炎的作用机理之一。     

痛泻要方对内脏高敏感大鼠肠道肥大细胞及细胞因子表达的影响

目的观察痛泻要方对内脏高敏感大鼠肠道肥大细胞（mast cell,MC）及细胞因子表达的影响,探讨痛泻要方治疗内脏高敏感的作用及其机制。方法采用随机数字表法将30只成年雄性SD大鼠随机分成空白对照组、模型组及中药治疗组,每组10只,模型组及中药治疗组以结直肠扩张联合束缚刺激建立大鼠内脏高敏感模型,以腹部收缩反射（abdominal withdrawal reflex,AWR）评估大鼠内脏敏感性,模型构建成功后第2日中药治疗组予痛泻要方4 g/（kg·d）灌胃4周,模型组予以等量生理盐水灌胃4周,空白对照组大鼠不予任何刺激。4周后采用甲苯胺蓝染色法计数回盲部结肠黏膜MC,采用E LISA法检测血清及肠黏膜IL-4、IL-9表达,Western blot法检测肠黏膜蛋白酶激活受体-2（PAR-2）蛋白表达。结果与空白对照组大鼠比较,模型组大鼠内脏敏感性升高,回盲部MC增多,血清及肠黏膜中IL-4、IL-9及PAR-2蛋白表达水平升高（P〈0.05）;与模型组比较,中药治疗组大鼠内脏敏感性显著降低,MC数量减少,肠黏膜PAR-2蛋白表达下降（均P〈0.05）,大鼠肠黏膜IL-4及血清IL-9表达水平亦明显降低（P〈0.05）。结论痛泻要方可能通过作用于MC相关细胞因子,减少MC脱颗粒,从而降低内脏高敏感。     

化浊解毒方对反流性食管炎大鼠一氧化氮、血管活性肠肽及P物质的影响

目的探讨化浊解毒方治疗反流性食管炎的作用机制。方法将60只Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、西药组、中药组,每组15只。除空白组外,其余3组采用"不全幽门结扎+贲门肌切开术"配合湿热环境加高脂高糖饮食的综合方法制备反流性食管炎大鼠模型。西药组给予奥美拉唑0.36 mg/100 g灌胃,中药组予化浊解毒方1.25 g/100 g灌胃,空白组、模型组予蒸馏水1 ml/100灌胃。治疗8周后观察大鼠食管黏膜的组织病理变化,检测食管组织一氧化氮(NO)浓度及食管黏膜血管活性肠肽(VIP)、P物质(SP)水平。结果中药组与西药组均能改善模型大鼠食管黏膜组织病理变化,与模型组比较差异有统计学意义(P0.05)。中药组NO水平降低,SP表达升高,与模型组、西药组比较,差异有统计学意义(P0.05)。中药组VIP表达降低,与模型组比较差异有统计学意义(P0.05),与西药组比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论化浊解毒方可能是通过升高SP表达,降低NO浓度及VIP表达,对反流性食管炎起到治疗作用。     

健脾清化颗粒对胃食管反流病脾虚湿热证病证结合大鼠食管黏膜肥大细胞活化的影响＊

目的 探讨健脾清化颗粒对胃食管反流病（Gastroesophageal reflux disease，GERD）脾虚湿热证大鼠食管黏膜肥大细胞（Mast cells， MCs）增殖活化的调节作用，及对类胰蛋白酶（mast cell tryptase，MCT）、蛋白酶激活受体-2（protease activated receptors-2，PAR2），瞬时受体电位香草酸受体1（transient receptor potential vanilloid1，TRPV1）表达的影响。方法 采用改良食管十二指肠侧侧吻合术叠加内外因湿热干预法建立GERD脾虚湿热证病证结合大鼠模型。将72只SD大鼠随机分为假手术组（12只）和模型组（60只），模型评价后将大鼠随机分为5组，分别是模型组、奥美拉唑组、健脾清化颗粒低剂量组、中剂量组、高剂量组，每组12只。各给药组连续灌胃14天，假手术组、模型组给予蒸馏水灌胃。采用HE染色观察大鼠食管黏膜的形态学改变；甲苯胺蓝染色观察大鼠食管黏膜MCs的形态和数量；免疫组化检测大鼠食管黏膜MCT、PAR2、TRPV1的表达情况。结果 与假手术组比，模型组大鼠体重、进食量下降（P<0.05），肛温、粪便含水量升高（P<0.01）；食管黏膜基底细胞增生，炎性细胞浸润，乳头肌延长；MCs数量增多（P<0.01）；免疫组化MCT、PAR2、TRPV1平均光密度值（mean optical density，MOD）增加（P<0.05）。与模型组比，健脾清化颗粒各组给药前后大鼠体重、进食量增加，肛温、粪便含水量下降（P<0.05或P<0.01），健脾清化颗粒各组食管黏膜MCs数量减少（P<0.01）；MCT、PAR2、TRPV1的表达减少（P<0.05或P<0.01）。结论 GERD脾虚湿热证模型大鼠食管黏膜MCs增殖活化，MCT、PAR2、TRPV1的表达增加。健脾清化颗粒能够改善大鼠食管黏膜MCs的增殖活化，下调MCT、PAR2、TRPV1的表达，对改善食管高敏感机制发挥一定的作用。     

和胃降逆法对反流性食管炎患者食管黏膜cyclin D_1、CDK_4表达的影响

目的:通过观察和胃降逆法对反流性食管炎患者食管黏膜cyclin D1(细胞周期蛋白1)、CDK4(细胞周期蛋白依赖性激酶)表达的影响,探讨和胃降逆法治疗反流性食管炎的作用机理。方法:选择120例反流性食管炎患者,分为中药治疗组、西药治疗组。中药治疗组以和胃降逆法治疗,选用和胃降逆方1包;西药治疗组予奥美拉唑胶囊20 mg;两组均1日2次,共8周。两组患者治疗前后均行胃镜检查及食管黏膜病理活检,观察临床疗效及食管黏膜病理学改变,免疫组化法测定食管黏膜cyclin D1、CDK4的表达。结果:和胃降逆法能明显改善反流性食管炎患者的临床症状及组织病理学积分,作用与西药相当;能明显降低反流性食管炎患者食管黏膜组织CDK4、cyclin D1的表达,其CDK4表达治疗后低于西药组,有统计学意义。结论:和胃降逆法能明显降低反流性食管炎患者食管黏膜组织CDK4、cyclin D1的表达,是其治疗反流性食管炎的作用机理之一。