补阳还五汤通过上调SIRT1抑制脑微血管内皮细胞氧糖剥夺再灌注诱导氧化应激损伤

目的:通过建立氧糖剥夺再灌注模型,观察补阳还五汤对氧糖剥夺再灌注诱导脑微血管内皮细胞(r BMECs)氧化应激损伤的作用,并进一步探讨沉默调节蛋白1(Sirtuin type 1,SIRT1)是否是其发挥作用的靶点。方法:分离培养原代大鼠脑微血管内皮细胞,建立体外氧糖剥夺再灌注损伤模型,SD大鼠按15g/kg的剂量每日灌胃给药补阳还五汤1次,连续灌胃1周后分离得到血清,将细胞分为尼莫地平组、对照组、模型组、补阳还五汤含药血清低剂量组(10%),补阳还五汤含药血清高剂量组(20%),应用CCK-8法检测细胞存活率,测定补阳还五汤含药血清对r BMECs活力的影响,检测细胞中乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)及活性氧簇(ROS)含量,并采用Western blot、实时荧光定量聚合酶链式反应(q PCR)检测SIRT1表达水平。结果:与对照组相比,氧糖剥夺再灌注处理组的细胞存活率明显降低,LDH活性及ROS、MDA的含量升高,SIRT1蛋白、m RNA表达明显下降;与损伤组相比,10%、20%的补阳还五汤含药血清能明显提高氧糖剥夺再灌注损伤后细胞的存活率,降低LDH、ROS、MDA的含量,提高SIRT1蛋白、m RNA的表达;尼莫地平组与补阳还五汤高低剂量组差异无显著。结论:补阳还五汤对脑微血管内皮细胞氧糖剥夺再灌注诱导的氧化应激损伤具有明显的保护作用,其作用机制可能是通过上调SIRT1表达水平实现的。     

加味四君子汤对脑缺血大鼠脑组织Occludin，ZO-1，Claudin-1蛋白及其mRNA表达的影响

目的:探讨加味四君子汤对脑缺血大鼠脑组织闭合蛋白(Occludin),密封蛋白-1(Claudin-1),闭锁连接蛋白-1(ZO-1)表达的影响,并探讨相关的作用机制。方法:将60只雄性SD大鼠随机分为假手术组,模型组,依达拉奉组(3.2×10~(-3)g·kg~(-1)),加味四君子汤加减低、中、高剂量组(4.77,9.54,19.08 g·kg~(-1))。采用线栓法制备大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,治疗7 d后处死,运用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠缺血侧脑皮质区Occludin,ZO-1,Claudin-1蛋白的表达,运用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测大鼠缺血侧脑皮质区Occludin,ZO-1,Claudin-1 mRNA表达。结果:与假手术组比较,模型组Occludin,Claudin-1,ZO-1蛋白显著减少(P0.01);与模型组比较,依达拉奉组、加味四君子汤各剂量组Occludin,Claudin-1,ZO-1蛋白均显著增高(P0.01)。与假手术组比较,模型组大鼠Occludin,Claudin-1,ZO-1 mRNA表达下调(P0.01);与模型组比较,依达拉奉组、加味四君子汤各剂量组大鼠Occludin,Claudin-1,ZO-1 mRNA表达上升(P0.01)。结论:加味四君子汤可能通过增加紧密连接蛋白Occludin,ZO-1,Claudin-1的表达,保护血脑屏障,减轻缺血性脑卒中大鼠脑水肿。     

五子衍宗方对衰老大鼠睾丸支持细胞紧密连接损伤的保护作用及机制

目的探究五子衍宗方对衰老大鼠睾丸支持细胞紧密连接损伤的保护作用及其分子机制。方法将30只16月龄SD雄性大鼠随机分为衰老模型组、五子衍宗方低剂量组(1 g/kg)和五子衍宗方高剂量组(4 g/kg),另取2月龄SD雄性大鼠作为青年对照组,每组10只。给予含药饲料或普通维持饲料喂养4个月后,麻醉处死大鼠,取睾丸组织,HE染色观察其形态,统计各组大鼠生精上皮厚度和生精小管直径,电镜观察大鼠睾丸支持细胞紧密连接超微结构,Western blot检测大鼠睾丸紧密连接相关蛋白ZO-1和Occludin(闭锁蛋白)蛋白表达,双标免疫荧光法观察大鼠睾丸支持细胞ZO-1、Occludin、Claudin-11(细胞紧密连接蛋白)、p-p38MAPK(磷酸化p38丝裂原活化蛋白酶)、MMP-9(基质金属蛋白酶9)、Occludin表达和共定位。结果 HE结果显示,五子衍宗方可改善衰老大鼠睾丸组织形态结构,升高衰老大鼠生精上皮厚度和生精小管直径。电镜结果显示,五子衍宗方可改善衰老大鼠紧密连接的超微结构。Western blot结果显示,五子衍宗方可上调衰老大鼠ZO-1、Occludin、Claudin-11蛋白表达。免疫荧光结果显示,五子衍宗方可上调衰老大鼠睾丸支持细胞ZO-1、Occludin、Claudin-11表达,下调p-p38MAPK、MMP-9表达,减少MMP-9和Occludin共定位。结论五子衍宗方可通过抑制p38MAPK/MMP-9通路来改善衰老大鼠睾丸支持细胞紧密连接损伤。     

补阳还五汤对气虚血瘀证小鼠脑片氧糖剥夺损伤的保护作用及作用机制

目的观察补阳还五汤对气虚血瘀证小鼠脑片氧糖剥夺损伤是否有保护作用,并探讨保护作用机制是否与激活Toll样受体3(Toll-like receptor 3,TLR3)下游Toll/IL-1受体结构域接头分子(Toll/IL-1 receptor domain containing adaptor inducing interferon-beta,TRIF)-IFN-β(interferon-β)信号转导通路有关。方法采用饥饿、劳累、高脂、饮食控制多因素复合制作出气虚血瘀证小鼠模型。使用气虚血瘀证小鼠离体脑片氧糖剥夺后复氧来模拟载体脑缺血复灌的病理模型。实验动物随机分为Control组、OGD组、Poly I:C(Polyinosinic polycytidylic acid)组、补阳还五汤低剂量组、补阳还五汤中剂量组、补阳还五汤高剂量组。用TTC染色、LDH检测来评价脑片损伤程度,用ELISA方法检测IL-6、TNF-α和IL-10、IFN-β细胞因子水平,用Western-blot技术检测TLR3、TRIF等蛋白表达。结果与OGD组相比,通过小鼠脑片TTC染色提示补阳还五汤各剂量组可以减少脑片氧糖剥夺复氧损伤面积,能显著降低LDH释放量,Poly I:C组、补阳还五汤组各剂量组TNF-α、IL-6蛋白含量显著下降,但可以明显提高IFN-β蛋白含量。与OGD组相比,Poly I:C组、补阳还五汤各剂量给药组TLR3表达量无显著性差异,但可以显著性升高TRIF含量。结论补阳还五汤对气虚血瘀证氧糖剥夺小鼠脑片有保护作用,保护机制与激动TLR3下游TRIF-IFN-β信号通路,进而增加抗炎因子分泌及减少致炎因子产生有关。     

肠激安方对IBS-D大鼠肠道通透性的影响

目的:观察肠激安方对腹泻型肠易激综合征(IBS-D)大鼠肠道通透性的影响,探讨肠激安方治疗IBS-D的作用机制。方法:SD雄性乳鼠,随机分为5组,分别为正常组,模型组,匹维溴铵组(0.018 g·kg~(-1)),肠激安高、低剂量组(33.48,16.74 g·kg~(-1)),除正常组外,均采用"母婴分离+醋酸刺激+束缚应激"三因素结合的方法建立IBS-D模型。给药后,采用透射电镜观察大鼠肠黏膜超微结构;酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测大鼠血浆D-乳酸水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠结肠紧密连接蛋白闭锁蛋白(Occludin),闭合蛋白-1(Claudin-1)的表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测Occludin,Claudin-1,紧密连接蛋白-1(ZO-1)mRNA表达。结果:与正常组比较,IBS-D模型组大鼠肠黏膜上皮细胞损伤,微绒毛排列较稀疏,紧密连接间隙增宽,有的不甚明显;血浆D-乳酸水平明显升高(P0.05),结肠中Occludin,Claudin-1 mRNA及蛋白表达降低(P0.05),ZO-1 mRNA表达降低(P0.05)。药物治疗后,与模型组比较,各给药组大鼠肠黏膜细胞损伤修复;匹维溴铵组、肠激安方高剂量组血浆D-乳酸水平明显降低(P0.05),肠激安方低剂量组血浆D-乳酸水平有降低趋势,但不具有统计学差异。各给药组大鼠结肠中Occludin,Claudin-1 mRNA及蛋白表达水平,ZO-1 mRNA表达水平升高(P0.05)。结论:肠激安方对IBS-D的治疗作用可能是改善肠道通透性实现的。     

冰片增强依达拉奉对脑缺血再灌注损伤大鼠抗氧化作用研究

目的 探究冰片协同依达拉奉对脑缺血再灌注损伤大鼠的抗氧化作用的影响.方法 60只SD大鼠随机分为假手术组,脑缺血再灌注组,脑缺血再灌注加依达拉奉组,脑缺血再灌注加冰片组,脑缺血再灌注加依达拉奉加冰片组.I/R模型构建后观察神经功能缺损症状,检测脑组织水肿程度和脑梗死面积,氧化因子(MDA,SOD,GSH)水平,炎性细胞因子(IL-6,TNF-α,IL-1β)水平,血脑屏障紧密连接蛋白(ZO-1,Occludin,Claudin-5)表达.结果 I/R组大鼠出现神经功能评分增加,脑水肿程度和脑梗死面积增加.依达拉奉与冰片不同程度减轻以上病理改变,但仅有依达拉奉与冰片联合使用表现改善明显.I/R组大鼠氧化因子水平增加,抗氧化因子水平降低,且炎性细胞因子水平增加,依达拉奉与冰片联合使用抗氧化与抗炎效应最强,优于药物单用.I/R降低了大鼠脑组织中血脑屏障紧密连接蛋白表达,依达拉奉与冰片能够不同程度的增加ZO-1,Occludin,Claudin-5表达,依达拉奉与冰片联合使用能够恢复这些蛋白表达水平至基线.结论 依达拉奉与冰片能不同程度改善脑缺血再灌注后病理症状.冰片能够增强依达拉奉抗氧化、抗炎作用,机制可能与协同抑制缺血后ZO-1,Occludin,Claudin-5表达下调,保护血脑屏障有关.     

冰片增强依达拉奉对脑缺血再灌注损伤大鼠抗氧化作用研究

目的 探究冰片协同依达拉奉对脑缺血再灌注损伤大鼠的抗氧化作用的影响.方法 60只SD大鼠随机分为假手术组,脑缺血再灌注组,脑缺血再灌注加依达拉奉组,脑缺血再灌注加冰片组,脑缺血再灌注加依达拉奉加冰片组.I/R模型构建后观察神经功能缺损症状,检测脑组织水肿程度和脑梗死面积,氧化因子(MDA,SOD,GSH)水平,炎性细胞因子(IL-6,TNF-α,IL-1β)水平,血脑屏障紧密连接蛋白(ZO-1,Occludin,Claudin-5)表达.结果 I/R组大鼠出现神经功能评分增加,脑水肿程度和脑梗死面积增加.依达拉奉与冰片不同程度减轻以上病理改变,但仅有依达拉奉与冰片联合使用表现改善明显.I/R组大鼠氧化因子水平增加,抗氧化因子水平降低,且炎性细胞因子水平增加,依达拉奉与冰片联合使用抗氧化与抗炎效应最强,优于药物单用.I/R降低了大鼠脑组织中血脑屏障紧密连接蛋白表达,依达拉奉与冰片能够不同程度的增加ZO-1,Occludin,Claudin-5表达,依达拉奉与冰片联合使用能够恢复这些蛋白表达水平至基线.结论 依达拉奉与冰片能不同程度改善脑缺血再灌注后病理症状.冰片能够增强依达拉奉抗氧化、抗炎作用,机制可能与协同抑制缺血后ZO-1,Occludin,Claudin-5表达下调,保护血脑屏障有关.     

清开灵有效组分调控大鼠脑MVEC缺血再灌注损伤MMP-9mRNA表达的研究

目的:观察大鼠脑微血管内皮细胞缺血再灌注损伤MMP-9表达的影响,探讨清开灵有效组分保护血脑屏障阻抑脑缺血再灌注损伤的作用途径。方法:体外培养大鼠脑微血管内皮细胞,氧糖剥夺法模拟缺血再灌注损伤,采用RT-PCR方法半定量检测MMP-9mRNA的表达。结果:与正常组比较,模型组MMP-9mRNA表达明显增加(P<0.01);与模型组比,黄芩苷及新清开灵复方显著降低MMP-9mRNA的表达(P<0.05)。结论:清开灵有效组分可能通过减少血脑屏障内皮细胞MMP-9mRNA表达而阻抑脑缺血损伤炎症反应。     

青蒿琥酯对大鼠蛛网膜下腔出血后早期脑损伤的保护作用

目的:探讨青蒿琥酯对大鼠蛛网膜下腔出血后早期脑损伤的保护作用。方法:60只大鼠被随机分成对照组、模型组和治疗组,采用颅内动脉血管内穿刺法建立蛛网膜下腔出血模型(对照组为假手术处理)。造模1小时后,对照组和模型组大鼠给予腹腔注射生理盐水;治疗组大鼠接受腹腔注射青蒿琥酯治疗。分别评价三组大鼠神经功能损伤程度、脑水肿情况、血脑屏障(BBB)通透性以及内皮细胞紧密连接蛋白Occludin和ZO-1的表达水平。结果:与模型组相比,青蒿琥酯治疗显著提高了大鼠的神经功能评分,降低了大鼠脑水肿指数和BBB通透性,缓解了Occludin和ZO-1蛋白的表达下调。结论:青蒿琥酯减轻SAH后模型大鼠早期脑损伤的效果迅速而确切,机制可能与调节内皮细胞紧密连接蛋白Occludin和ZO-1的表达有关。     

蛭龙活血通瘀胶囊通过Rho/ROCK通路改善脑出血后脑水肿的实验研究

目的:研究蛭龙活血通瘀胶囊通过Ras同源基因/Rho相关螺旋卷曲蛋白激酶(Rho/ROCK)信号通路改善大鼠脑出血后脑水肿的分子机制。方法:将雄性SD大鼠随机分为模型对照组、蛭龙活血通瘀胶囊1.2 g/kg组、盐酸法舒地尔注射液12 mg/kg组,每组15只,自体血注入法复制脑出血模型,另设正常对照组,干预3 d后检测脑含水量及脑系数、血脑屏障通透性(EB含量)及超微结构,WB法检测脑组织闭锁小带蛋白(ZO-1)、咬合蛋白(Occludin)、RhoA、ROCK2、p-MLC蛋白表达,qRT-PCR法检测ZO-1、Occludin、RhoA、ROCK2 mRNA水平。结果:与正常对照组比较,模型对照组脑含水量及脑系数、脑组织EB含量、RhoA、ROCK2、p-MLC蛋白及RhoA、ROCK2 mRNA表达均明显升高(P<0.05或P<0.01),血脑屏障超微结构损坏明显,脑组织ZO-1、Occludin蛋白及mRNA表达均明显降低(P<0.05或P<0.01);与模型对照组比较,各药物组脑含水量及脑系数显著减少(P<0.01),脑组织EB含量显著降低(P<0.01),血脑屏障结构明显改善,ZO-1、Occludin蛋白表达显著上调(P<0.01),ZO-1、Occludin mRNA水平均明显上调(P<0.05),RhoA、ROCK2、p-MLC蛋白表达显著下调(P<0.01),RhoA、ROCK2 mRNA水平明显下调(P<0.05)。结论:蛭龙活血通瘀胶囊可能通过抑制Rho/ROCK通路调节血脑屏障功能,改善脑出血后脑水肿。     

补阳还五汤加味预防动脉粥样硬化形成机制

目的:探究补阳还五汤加味对动脉粥样硬化(AS)形成的预防及机制研究。方法:将30只雄性载脂蛋白E基因敲除小鼠(Apo E-/-小鼠)随机分为Apo E-/-小鼠组、模型组、补阳还五汤加味组和辛伐他汀组,另以正常雄性C57BL/6J小鼠设组。模型组、补阳还五汤加味组和辛伐他汀组采用高脂饮食造模。第4周后,补阳还五汤加味组和辛伐他汀组分别灌以补阳还五汤20 g·kg~(-1)+水蛭粉0.46 g·kg~(-1),辛伐他汀3 mg·kg~(-1)。第9周后,检测血清总胆固醇(TC),甘油三酯(TG),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)值,取动物主动脉根部经苏木素-伊红(HE)常规染色后观察组织形态变化并测量纤维帽厚度和内-中膜厚度、检测主动脉p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)和细胞外信号调节激酶5(ERK5)蛋白表达变化。结果:血脂水平,与C57BL/6J小鼠正常组比较,Apo E-/-小鼠组和模型组TC,TG,LDL-C均升高且HDL-C均降低(P0.01);与模型组比较,补阳还五汤加味组与辛伐他汀组均能降低Apo E-/-小鼠TC,TG,LDL-C水平,同时升高HDL-C(P0.05,P0.01)。HE染色,C57BL/6J小鼠正常组主动脉管壁无斑块形成,Apo E-/-小鼠组管壁有极少斑块形成,内-中膜略有增厚。模型组斑块形成明显,内-中膜明显增厚。补阳还五汤加味组与辛伐他汀组较模型组斑块减少,内-中膜厚度减少。蛋白表达,与C57BL/6J小鼠正常组比较,模型组主动脉组织中p38MAPK的蛋白表达量增多(P0.01),ERK5的蛋白表达量减少(P0.01);与模型组比较,补阳还五汤加味组和辛伐他汀组均能降低p38MAPK蛋白的表达量(P0.01),增加组织中ERK5蛋白的表达(P0.01)。结论:补阳还五汤加味与辛伐他汀均有预防AS的作用。补阳还五汤加味预防AS发生的机制可能与干预MAPK信号通路中的p38MAPK,ERK5途径有关。     

神经干细胞迁移研究平台的建立及补阳还五汤的干预影响

目的:建立体外神经干细胞(neural stem cells,NSCs)迁移研究的平台,并通过经典名方补阳还五汤对此平台进行适用性验证。方法:分离、培养大鼠脑胚胎NSCs,利用NSCs放射性迁移、划痕修复动态检测以及Transwell趋化性迁移检测的方法,建立体外NSCs迁移研究平台。利用此平台评价经典名方补阳还五汤(300,600 mg·L~(-1)),有效单体川芎嗪(10,50 mg·L~(-1))以及阳性对照基质细胞衍生因子-1(stromal-derived factor 1,SDF-1)等对NSCs迁移的影响。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测放射性迁移系统及Transwell培养上清液中SDF-1及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的含量。结果:经过不同时间点的观察,放射性迁移、划痕修复动态检测以及Transwell趋化性迁移均可见不同程度的NSCs的迁移;与空白组比较,补阳还五汤及川芎嗪能够明显促进放射性迁移体系中NSCs的迁移,还能够显著增加向Transwell下室迁移的细胞数,且具有剂量依赖性(P0.05,P0.01),此外还可显著提高NSCs培养上清中SDF-1,VEGF的含量(P0.01),其中对SDF-1含量上调作用高于VEGF;给予AMD3100预处理后,600 mg·L~(-1)补阳还五汤及10,50 mg·L~(-1)川芎嗪促进Transwell向下室迁移的细胞数显著降低。结论:该研究建立的NSCs迁移研究平台动态、多维,能模拟不同临床病理生理过程,且经济实用、简便易行,可供中药复方和单体成分活性筛选之用。     

千叶素A对缺氧损伤下血脑屏障通透性的影响及其机制研究

目的 研究千叶素A对缺氧损伤下血脑屏障通透性的影响及其调控机制.方法 利用原代培养大鼠脑微血管内皮细胞(BMEC)建立体外血脑屏障模型,缺氧诱导损伤.荧光分光光度法检测千叶素A对BMEC异硫氰酸荧光素(FITC)-葡聚糖的荧光强度,观察其对体外血脑屏障模型通透性的影响;RT-PCR法检测千叶素A对BMEC紧密连接蛋白ZO-1、claudin-1基因表达的影响,Cell-Based ELISA法检测千叶素A对BMEC中ZO-1蛋白表达的影响.结果 缺氧使体外血脑屏障模型对FITC-葡聚糖的通透量明显增加,脑微血管内皮细胞ZO-1基因和蛋白表达下调;千叶素A能明显拮抗缺氧造成的上述损伤.结论 千叶素A对缺氧损伤体外血脑屏障具有保护作用,其机制与其影响ZO-1表达有关.     

基于PI3K/Akt/eNOS信号通路探讨补阳还五汤对大鼠蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛的影响

目的:探讨补阳还五汤改善蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛的相关分子机制。方法:将雄性SD大鼠80只随机分为假手术组、模型组、补阳还五汤低、高剂量组(13,26 g·kg~(-1)·d~(-1)),每组20只。按照10 mL·kg~(-1)每天灌胃给药2次,连续7 d。采用二次枕大池注血法制作蛛网膜下腔出血模型,评估各组大鼠1,3,5,7 d的神经功能评分,利用苏木素-伊红(HE)染色对各组大鼠基底动脉直径进行测量,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测基底动脉脑组织磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K),磷酸化蛋白激酶B(p-Akt),内皮型一氧化氮合酶(eNOS),神经型一氧化氮合酶(n NOS)蛋白的表达;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测大鼠脑脊液中一氧化氮(NO),内皮素-1(ET-1)的表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠神经功能评分明显下降(P 0. 05),基底动脉直径明显缩小(P 0. 05),基底动脉脑组织p-PI3K,p-Akt,eNOS,n NOS蛋白的表达明显降低(P 0. 05),脑脊液中NO明显减少(P 0. 05),ET-1明显升高(P 0. 05);与模型组比较,不同剂量补阳还五汤组(26,13 g·kg~(-1)·d~(-1))在治疗后3～5 d后大鼠神经功能评分均有不同程度升高,基底动脉直径明显增宽(P 0. 05),p-PI3K,p-Akt,eNOS蛋白的表达明显升高(P 0. 05),NO明显升高(P 0. 05),ET-1明显下降(P 0. 05);与低剂量组比较,经过7 d的补阳还五汤治疗后高剂量组神经功能评分明显升高(P 0. 05),基底动脉直径增宽更明显(P 0. 05),p-PI3K,p-Akt,eNOS蛋白的表达更高(P 0. 05),NO升高更明显(P 0. 05),ET-1下降更明显(P 0. 05)。结论:补阳还五汤对蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛的保护作用可能与上调PI3K/Akt/eNOS信号通路中的p-PI3K,p-Akt,eNOS的表达,从而增加NO产生有关。     

小陷胸汤合补阳还五汤治疗早期糖尿病肾病临床观察

目的:观察小陷胸汤合补阳还五汤治疗早期糖尿病肾病的临床疗效,并探讨其作用机制。方法:将86例患者随机分为治疗组和对照组,各43例,治疗组口服小陷胸汤合补阳还五汤,对照组口服替米沙坦40 mg/次,1次/d,两组疗程均为6个月。观察两组临床疗效、中医证候积分,并检测治疗前后尿白蛋白排泄率(UAER),血清肌酐(SCr),血尿素氮(BUN),空腹血糖(FBG),总胆固醇(TC),甘油三酯(TG),低密度脂蛋白(LDL)及高密度脂蛋白(HDL)。结果:治疗组总有效率(87.8%)优于对照组(62.7%)(P0.05);两组症状疗效改善率差异显著(P0.05,P0.01);治疗组治疗后UAER,SCr,BUN,FBG,TC,TG,LDL均明显低于治疗前(P0.05,P0.01),HDL较治疗前明显升高(P0.05);治疗组治疗后与对照组比较,UAER,SCr,BUN,FBG有降低趋势;TC,TG,LDL降低,HDL升高(P0.05)。结论:小陷胸汤合补阳还五汤结合西医基础治疗早期糖尿病肾病有较好的疗效。     

补阳还五汤对Cav^-1-/-小鼠脑缺血模型PI3K、Akt、PTEN表达的影响

目的观察补阳还五汤对Cav-1^-/-小鼠脑缺血模型PI3K、Akt、PTEN表达的影响,探讨其可能的作用机制。方法将野生型小鼠(WT)及Cav-1^-/-小鼠(KO)随机分为假手术组、模型组与补阳组。采用大脑中动脉栓塞法制备脑缺血模型,干预10 d后运用Ayelet Levy 14分评分法观察小鼠神经功能评分。免疫组化和qRT-PCR分别检测小鼠脑组织PI3K、Akt、PTEN蛋白和mRNA的表达。结果与假手术组比较,各模型组小鼠均出现明显神经功能障碍(P<0.01),且PI3K、Akt蛋白和mRNA表达明显升高(P<0.01),PTEN蛋白和mRNA表达明显降低(P<0.01),WT模型组小鼠脑组织PI3K、Akt、PTEN蛋白和mRNA表达更显著,且神经功能评分优于KO模型组(P<0.01,P<0.05);WT补阳组小鼠脑组织PI3K、Akt、PTEN蛋白和mRNA的调控程度及神经功能恢复程度均优于WT模型组和KO补阳组(P<0.01)。结论补阳还五汤可能通过Cav-1调控PI3K/Akt信号通路活性,发挥抗脑缺血损伤的作用。     

补阳还五汤对急性脑缺血再灌注大鼠脑组织AKT和p-AKT蛋白表达的影响

目的:探讨补阳还五汤对急性脑缺血再灌注大鼠脑组织蛋白激酶B(AKT)和磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)蛋白表达的影响,分析其对脑缺血再灌注损伤的保护机制。方法:将SPF级SD大鼠随机分为假手术组、模型组、氯吡格雷组、补阳还五汤高、低剂量组,每组20只。氯吡格雷组,补阳还五汤高,低剂量组分别按照动物体表面积换算,灌胃给予氯吡格雷6.8mg·kg-1·d-1,补阳还五汤26,6.5g·kg-1·d-1,其余各组给予蒸馏水。连续给药14d后,采用双侧颈总动脉阻断诱导大鼠急性脑缺血再灌注模型,比较各组病理组织学、脑组织皮层和海马CA1区AKT和p-AKT的表达水平。结果:HE染色结果提示,与模型组比较,补阳还五汤高,低剂量组能明显改善急性脑缺血再灌注大鼠脑组织损伤程度,随剂量增大而逐渐增强;免疫组化结果显示,各组的皮层和海马CA1区胞核和胞浆均可见AKT和p-AKT的阳性表达。与模型组比较,氯吡格雷组、补阳还五汤高剂量组AKT的阳性表达明显增加(P<0.05);与假手术组相比,模型组p-AKT的阳性表达明显降低(P<0.01);与模型组比较,氯吡格雷组、补阳还五汤高剂量组p-AKT阳性表达明显增加(P<0.05)。结论:补阳还五汤对急性脑缺血再灌注损伤模型大鼠的脑保护作用机制可能与上调PI3K/AKT信号通路中AKT,p-AKT的表达,促进AKT的磷酸化有关。     

补阳还五汤对大鼠局灶性脑缺血损伤血脑屏障的影响

目的观察补阳还五汤对大鼠局灶性脑缺血损伤血脑屏障的保护作用,阐明该方抗脑缺血的机理。方法采用线栓法复制大鼠局灶性脑缺血模型。将SD大鼠随机分为假手术组、模型组和补阳还五汤组,造模后24 h给药,补阳还五汤组给予补阳还五汤灌胃,假手术组、模型组给予等量生理盐水灌胃。造模后7 d,评价各组大鼠神经功能并处死取材,四氮唑红染色观察大鼠脑组织梗死体积,HE染色观察大鼠脑微血管的一般形态,ELISA检测大鼠脑组织内基质金属蛋白酶(MMP)-9、MMP-2、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白水平及血清中血管性血友病因子(vWF)的表达。结果与模型组比较,补阳还五汤组能显著改善神经功能行为评分,减少脑梗死体积,降低MMP-9、MMP-2、VEGF、vWF水平。病理观察结果显示,补阳还五汤组脑组织病理变化较模型组减轻。结论补阳还五汤对大鼠局灶性脑缺血具有保护作用,其作用可能与保护血脑屏障,抑制MMP-9、MMP-2、VEGF、vWF的表达有关。     

大黄通过调控紧密连接蛋白治疗大鼠脓毒症

目的:探究大黄治疗脓毒症大鼠的分子机制。方法:100只Wistar大鼠随机分为假手术组,模型组,大黄高、中、低剂量组(150,100,50 mg·kg~(-1)),除假手术组只暴露盲肠,不进行结扎与穿孔,其余各组采用盲肠结扎法制作大鼠脓毒症模型,记录各组大鼠死亡情况,采用细菌16S rRNA实时荧光定量聚合酶链式反应(q PCR)检测大鼠结肠及肠系膜淋巴结、血液中金黄色葡萄球菌及大肠埃希菌数量,采用q PCR和蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测大鼠结肠紧密连接蛋白紧密连接相关蛋白-1(ZO-1)和闭锁蛋白(Occludin)水平。结果:与假手术组比较,脓毒症模型组大鼠病死率最高,不同标本的金黄色葡萄球菌及大肠埃希菌检出率和数量明显升高,ZO-1和Occludin mRNA及蛋白表达明显降低(P0.01);与模型组比较,大黄高、中剂量组大鼠病死率降低,大鼠不同标本的上述两细菌检出率和数量有所减低,细菌移位情况减少,大鼠结肠的ZO-1和Occludin mRNA及蛋白表达明显升高(P0.05,P0.01)。结论:大黄可调控结肠紧密连接蛋白表达保护肠黏膜屏障,从而抑制脓毒症大鼠细菌移位治疗脓毒症。