蛴螬对激光损伤兔血-视网膜屏障后视网膜TekA、p75NTR表达的影响

目的:探讨蛴螬促进激光损伤兔血-视网膜屏障后的修复作用及机理。方法:30只成年健康有色家兔随机分为正常对照组、模型对照组、蛴螬组。采用激光损伤血-视网膜屏障动物模型,在屏障损伤后1周及2周2个时相,观察蛴螬对兔血-视网膜屏障损伤修复情况、血-视网膜屏障组织形态结构及神经营养因子受体TrkA、p75NTR表达及影响。结果:蛴螬能促进损伤的血-视网膜屏障修复,减轻激光导致的视网膜组织及细胞形态学损伤,促进TrkA、p75NTR的表达,抑制视网膜细胞增殖与变性,从而改善视网膜功能。结论:蛴螬可能通过改善视网膜组织能量代谢,清除氧自由基,促进神经营养因子受体的表达,抑制视细胞增殖,从而起到保护血-视网膜屏障组织结构,促进损伤后功能恢复的作用。     

枸杞丹参对RCS大鼠视网膜组织中Bcl-2、Bid表达的影响＊

目的 观察枸杞加丹参对视网膜色素变性大鼠视网膜Bcl-2、Bid表达的影响。方法 实验对象分五组。空白组：RCS（rdy+/+,p+/+）大鼠，8只，雌雄均4只，（n = 8），灌胃生理盐水；将RCS（rdy-/-,p-/-）雌性及雄性大鼠均随机分为4组，分别为：模型组、枸杞组、丹参组和枸杞加丹参组（杞参组），每组雌雄均4只，每组8只，分别给予灌胃生理盐水、生理盐水、枸杞、丹参、枸杞加丹参。灌胃28天后，免疫组化、Real-time PCR、WB检测各组RCS大鼠视网膜Bcl-2、Bid的相对表达量。结果 ①免疫组化检测显示：RCS（rdy-/-,p-/-）杞参组大鼠视网膜上Bcl-2蛋白阳性表达较RCS（rdy-/-,p-/-）大鼠模型组明显增多；RCS（rdy-/-,p-/-）杞参组大鼠视网膜上Bid蛋白阳性表达较RCS（rdy-/-,p-/-）大鼠模型组明显减少，但较RCS（rdy+/+,p+/+）大鼠空白组多。②RT-qPCR检测显示：RCS（rdy-/-,p-/-）杞参组Bcl-2 mRNA相对表达量明显高于RCS（rdy-/-,p-/-）模型组，差异有统计学意义（P < 0.05），且接近RCS（rdy+/+,p+/+）大鼠空白对照组。RCS（rdy-/-,p-/-）杞参组Bid mRNA相对表达量明显低于RCS（rdy-/-,p-/-）模型组，差异有统计学意义（P < 0.05），且接近RCS（rdy+/+,p+/+）大鼠空白对照组。③WB检测显示：RCS（rdy-/-,p-/-）杞参组Bcl-2蛋白相对表达量明显高于RCS（rdy-/-,p-/-）模型组，差异有统计学意义（P < 0.05），且接近RCS（rdy+/+,p+/+）大鼠空白对照组。RCS（rdy-/-,p-/-）杞参组Bid蛋白相对表达量明显低于RCS（rdy-/-,p-/-）模型组，差异有统计学意义（P < 0.05），且接近RCS（rdy+/+,p+/+）大鼠空白对照组。结论 视网膜色素变性经典动物模型RCS(rdy-/-,p-/-）大鼠视网膜组织中Bcl-2表达下降、Bid表达上升；枸杞加丹参灌胃促进RCS(rdy-/-,p-/-）大鼠视网膜抗凋亡因子Bcl-2表达上调，同时，下调促凋亡因子Bid表达，在抗线粒体凋亡途径上减轻视网膜色素变性大鼠的视网膜细胞凋亡，从而保护视功能。     

四逆散对抑郁大鼠BDNF/TrkB，5-HT/5-HT1AR及HPA轴的影响

目的 观察四逆散对抑郁大鼠脑神经营养因子（BDNF）/酪氨酸激酶受体B（TrkB），5-羟色胺（5-HT）/5-HT1A受体（5-HT1AR）及下丘脑-垂体-肾上腺（HPA）轴的影响，探讨四逆散基于BDNF/TrKB，5-HT/5-HT1AR及HPA轴的抗抑郁作用机制。方法 120只雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、四逆散低、中、高剂量组和氟西汀组，每组20只。除正常组外，其余5组连续21 d采用孤养结合慢性温和不可预知性刺激法（CUMS）制备抑郁大鼠模型。四逆散低、中、高剂量组分别灌胃（ig）四逆散（1.25，2.5，5）g·kg^-1，氟西汀组ig盐酸氟西汀0.01 g·kg^-1，正常组和模型组ig等体积生理盐水，每日1次，持续干预21 d。干预期间，各造模组大鼠均继续给予刺激。通过糖水偏好和旷场实验评估CUMS模型大鼠抑郁状态；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血浆促肾上腺皮质激素释放激素（CRH），促肾上腺皮质激素（ACTH），皮质酮（CORT）及海马匀浆中BDNF，5-HT水平；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测海马TrKB，5-HT1AR，糖皮质激素受体（GR）和盐皮质激素受体（MR）mRNA表达；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测海马TrKB，5-HT1AR，GR，MR蛋白表达水平；苏木素-伊红（HE）染色观察海马组织形态学变化。结果 与正常组比较，模型组大鼠糖水偏好率显著下降（P<0.01），旷场实验中水平得分和垂直得分显著降低（P<0.01），血浆CRH，ACTH，CORT含量显著升高（P<0.01），海马BDNF，5-HT含量显著降低（P<0.01），海马TrKB，5-HT1AR和GR mRNA及蛋白表达水平显著降低（P<0.01），MR mRNA及蛋白表达水平显著升高（P<0.01），HE染色结果显示海马神经元结构损伤。与模型组比较，四逆散低、中、高剂量组和氟西汀组糖水偏好率显著升高（P<0.01），旷场实验中水平得分和垂直得分明显升高（P<0.05，P<0.01），血浆CRH，ACTH，CORT含量明显降低（P<0.05，P<0.01），海马BDNF，5-HT含量明显升高（P<0.05，P<0.01），海马TrKB，5-HT1AR和GR mRNA及蛋白表达水平明显升高（P<0.05，P<0.01），MR mRNA及蛋白表达水平明显降低（P<0.05，P<0.01），HE染色结果显示海马神经元结构明显复原。结论 四逆散具有显著的抗抑郁作用，其机制可能与升高大鼠海马BDNF，5-HT含量，上调TrKB，5-HT1AR和GR mRNA及蛋白表达水平，下调MR mRNA及蛋白表达水平，抑制HPA轴亢进，增强海马组织神经元的再生和修复相关。     

大承气汤通过内源性抗菌肽mCRAMP对脓毒症小鼠肠屏障的保护作用及机制

目的 采用分子对接和体内动物实验探讨大承气汤对脓毒症小鼠肠屏障的保护作用及分子机制。方法 采用文本挖掘方法筛选大承气汤的活性成分，利用AutoDock Tools和Discovery Studio分子对接软件研究其关键活性成分与脓毒症主要作用靶点紧密连接蛋白-1（Claudin-1）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）、抗菌肽（mCRAMP）、Toll样受体4（TLR4）和髓样分化因子88（MyD88）的相互作用。动物实验采用C57BL/6小鼠50只，每组10只，随机分成5组，分别为假手术组、模型组、大承气汤低、高剂量（4、8 g?kg^-1）组和乌司他丁（50 000 U?kg^-1）组。造模前、手术当天和术后，各组给予相应的药物进行干预。除假手术组外，其余各组小鼠均采用盲肠结扎穿刺法（CLP）制备脓毒症模型。采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测小鼠血清D-乳酸水平，评估肠黏膜通透性；采用苏木素-伊红（HE）染色法观察回肠组织病理变化，评估肠黏膜损伤程度及炎症浸润；采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测小鼠回肠组织Claudin-1和Occludin蛋白表达水平，评估肠机械屏障功能；采用ELISA检测小鼠回肠组织TNF-α和IL-6水平，评估肠道炎症水平；采用免疫组化法（IHC）观察回肠组织mCRAMP蛋白表达；采用实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测小鼠回肠组织内mCRAMP、TLR4和MyD88的基因表达水平，探讨大承气汤对脓毒症小鼠肠屏障的保护机制。结果 分子对接结果表明，采用文本挖掘方法所筛选出的10个大承气汤活性成分中多数与脓毒症靶点具有结合活性，主要通过范德华力、氢键和其他共轭体系相连。动物实验结果表明，与模型组比较，大承气汤低、高剂量组小鼠血清D-乳酸水平显著降低（P<0.01）；回肠组织损伤、黏膜水肿减少，小肠绒毛完整性较好，炎症细胞浸润减少；回肠组织Claudin-1蛋白表达水平显著升高（P<0.01）；回肠组织IL-6水平显著降低（P<0.01）；回肠组织mCRAMP蛋白和mRNA表达水平显著升高（P<0.01）；回肠组织TLR4和MyD88 mRNA表达水平显著降低（P<0.01）；大承气汤高剂量组小鼠回肠组织TNF-α水平显著降低（P<0.01）和Occludin蛋白表达水平显著升高（P<0.01），大承气汤低剂量组小鼠回肠组织Occludin蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。结论 大承气汤对脓毒症小鼠肠屏障具有保护作用，其可减轻肠组织炎症水平，修复肠黏膜损伤，提高肠紧密连接蛋白水平，降低肠黏膜通透性，作用机制可能与内源性抗菌肽mCRAMP蛋白和基因表达的增加及其下游TLR4/MyD88炎症通路基因的下调有关。     

六味地黄丸通过RAGE/LRP1受体介导对SAMP8小鼠脑微血管的调节作用

目的 探讨六味地黄丸对SAMP8小鼠神经血管单元损伤的保护作用。方法 将75只6月龄SAMP8小鼠作为肾精不足证阿尔茨海默病（AD）动物模型，设模型组、盐酸多奈哌齐（0.747 mg·kg^-1·d^-1）组、六味地黄丸高、中、低剂量（2.700、1.350、0.675 g·kg^-1·d^-1）组，每组15只，以SAMR1小鼠15只作为正常组，连续给药2个月。采用Morris水迷宫检测小鼠空间记忆能力；苏木素-伊红（HE）观察脑组织海马和皮层病理变化；免疫组化（IHC）法检测脑组织海马和皮层中β淀粉样蛋白（Aβ）沉积情况及血管性血友病因子（vWF）和CD34表达情况；电镜观察脑微血管超微结构变化情况；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测脑组织海马和皮层中晚期糖基化终末产物受体（RAGE）、低密度脂蛋白相关蛋白1（LRP1）、血管内皮生长因子A（VEGF-A）和P-选择素（P-selection）蛋白表达水平。结果 与正常组比较，模型组小鼠逃避潜伏期、游泳路程显著延长（P<0.01），神经胶质细胞数量增多，神经细胞数量减少，脑微血管内皮细胞间隙紧密连接模糊或间隙变大，膜结构损伤较重，内皮细胞线粒体肿胀、膜破裂、嵴大部分溶解，海马和皮层组织中Aβ、vWF蛋白表达显著增加（P<0.01），CD34蛋白表达明显降低（P<0.05），皮层中RAGE和P-selection蛋白表达水平显著升高（P<0.01），LRP1和VEGF-A蛋白表达水平显著下降（P<0.01）；与模型组比较，六味地黄丸各剂量组小鼠逃避潜伏期、游泳路程均明显缩短（P<0.05），皮层和海马中神经胶质细胞数量减少明显，皮层中微血管数量增多明显，微血管内皮细胞间隙紧密连接双层膜结构较清晰，线粒体数量增多、膜完整、线粒嵴恢复，海马和皮层中Aβ、vWF、RAGE和P-selection蛋白表达明显降低（P<0.05），CD34、LRP1和VEGF-A蛋白表达明显升高（P<0.05）。结论 六味地黄丸能够通过RAGE/LRP1受体系统调节Aβ代谢，通过抑制vWF表达和增加VEGF-A和CD34促进脑微血管新生，改善SAMP8小鼠脑微血管损伤。     

麻黄连翘赤小豆汤对5-HT所致瘙痒模型大鼠与不同细胞系中5-HT1A及GRPR表达的影响＊

目的 通过建立大鼠瘙痒模型结合体外细胞培养，探讨麻黄连翘赤小豆汤止痒效果及对5-HT1a受体（5-羟色胺1a受体，Serotonin 1a receptor）、GRPR（胃泌素释放肽受体，Gastrin-releasing peptide receptor）表达的影响。方法 以40只雄性SD大鼠为研究对象，随机分为空白组、模型组、麻黄连翘赤小豆汤低、中、高剂量组，每组8只。除正常组外，其余各组均采取颈背部部皮下注射12%5-羟色胺（5-hydroxytryptamine，5-HT）溶液建立大鼠瘙痒模型。造模完成1天后，药物干预组大鼠分别用浓度为4.3 g·kg^-1、8.6 g·kg^-1、17.2 g·kg^-1的麻黄连翘赤小豆汤灌胃治疗14天，正常组和模型组灌胃等量等体积的生理盐水，观察并记录大鼠造模当天、治疗第7天、治疗第14天各组大鼠搔抓次数。治疗14天后取大鼠脊髓，采用蛋白免疫印迹法（Western Blot，WB）和免疫组化法检测5-HT1a受体和GRPR的表达水平及组织内分布情况。同时选用2种不同类型细胞系，分别分为空白组，对照组与干预组，对照组与干预组采用生理盐水与麻黄连翘赤小豆汤处理，48h后采用实时荧光定量PCR技术（Quantitative real-time PCR，qPCR）检测5-HT1a受体与GRPR mRNA的表达情况。结果 麻黄连翘赤小豆汤对瘙痒模型大鼠有止痒作用（P < 0.05），其抑制5-HT1a受体及GRPR的表达水平（P < 0.05），在细胞层面也下调5-HT1a受体及GRPR的表达。结论 麻黄连翘赤小豆汤可通过抑制5-HT1a与GPRP的表达进而达到止痒作用。     

补肾活血方通过调节PI3K/Akt/mTOR信号通路改善DOR大鼠卵巢储备功能

目的 观察补肾活血方调节磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/雷帕霉素靶蛋白（mTOR）通路相关因子改善卵巢储备功能下降（DOR）大鼠卵巢储备功能的作用机制。方法 运用Ataya法腹腔注射环磷酰胺复制60只DOR模型大鼠，将其随机分为模型组、戊酸雌二醇组（0.000 9 g·kg^-1），补肾活血方高、中、低剂量组（33，16.5，8.25 g·kg^-1），同时另设正常组，每组12只；各组相应药物治疗，正常组和模型组给予等体积生理盐水，连续灌胃14 d，每天1次。治疗结束后，苏木素-伊红（HE）染色卵巢组织，光镜观察初级卵泡数、成熟卵泡数、总卵泡数的变化；免疫组化检测卵巢组织中血管内皮生长因子（VEGF）的表达，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测卵巢组织中PI3K，Akt，mTOR，半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3（Caspase-3）蛋白表达；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）法检测卵巢组织中PI3K，Akt，mTOR mRNA表达。结果 与正常组比较，模型组卵巢组织中成熟卵泡数量、总卵泡数量明显减少（P<0.05，P<0.01），卵巢组织中VEGF，Caspase-3表达升高（P<0.05），PI3K，Akt，mTOR蛋白及mRNA表达水平降低（P<0.05，P<0.01）；与模型组比较，补肾活血方中、高剂量组成熟卵泡数量、总卵泡数量均有不同程度上升（P<0.05，P<0.01），VEGF补肾活血方中剂量组升高最为明显（P<0.05），补肾活血方低、中、高剂量组及戊酸雌二醇组Caspase-3下降，补肾活血方中、高剂量组PI3K，Akt，mTOR蛋白及mRNA表达水平均升高（P<0.05，P<0.01），且补肾活血方中剂量组更加接近于正常组。结论 补肾活血方可以有效地改善DOR大鼠卵巢储备功能，促进卵泡数量增加。作用机制可能与补肾活血方通过增加卵巢组织中VEGF的表达有关，进而激活PI3K/Akt/mTOR信号通路，从而调节Caspase-3的含量，最后促进卵泡数量的增加。     

基于TNF-α/TNFR1/RIPKs通路探讨二陈汤加味对COPD炎症的作用机制

目的 基于肿瘤坏死因子-α（TNF-α）/肿瘤坏死因子受体1（TNFR1）/受体相互作用蛋白激酶（RIPKs）信号通路,研究二陈汤加味对慢性阻塞性肺疾病（COPD）大鼠模型炎症的影响,探讨其作用机制。方法 SD大鼠60只,随机分为正常组、模型组、二陈汤加味高、中、低剂量组、消咳喘组,每组10只。采用香烟烟雾联合脂多糖（LPS）方法制备COPD大鼠模型,二陈汤加味高、中、低剂量组分别以20、10、5 g·kg^-1·d^-1灌胃,消咳喘以3.5 mL·kg^-1·d^-1灌胃,正常组与模型组灌胃等量生理盐水,持续干预21 d。酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测大鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）中TNF-α、TNFR1的含量;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测肺组织中受体相互作用蛋白激酶1（RIPK1）、受体相互作用蛋白激酶3（RIPK3）、混合系列激酶样结构域蛋白（MLKL） mRNA表达,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肺组织中RIPK1、RIPK3、MLKL蛋白表达,苏木素-伊红（HE）染色观察肺组织的病理变化。结果 与正常组比较,模型组大鼠BALF中TNF-α、TNFR1含量显著升高（P<0.01）,肺组织中RIPK1、RIPK3、MLKL mRNA及蛋白表达水平显著升高（P<0.01）。与模型组比较,二陈汤加味高、中、低剂量组及消咳喘组大鼠BALF中TNF-α、TNFR1含量显著降低（P<0.01）,肺组织中RIPK1、RIPK3、MLKL mRNA及蛋白表达水平有不同程度的降低（P<0.05,P<0.01）。结论 二陈汤加味能够有效改善COPD大鼠肺组织的炎症反应,其机制可能是通过抑制TNF-α/TNFR1/RIPKs信号通路。     

人参皂苷Rb1对术后疲劳综合征老年大鼠海马神经营养因子的影响

目的 研究术后疲劳综合征（POFS）老年大鼠海马神经营养因子（NTF）水平动态变化及人参皂苷Rb₁的抗疲劳机制。方法 将96只老年雄性SD大鼠,随机分为假手术组、模型组和人参皂苷Rb₁干预组,每组再按时间点分为术后6 h及术后1、3、7 d组。术后对应时间点进行旷场试验,并通过Real-time PCR检测大鼠海马神经生长因子（NGF）、脑源性神经营养因子（BDNF）的mRNA表达;放射免疫法检测NGF和BDNF蛋白表达;电镜观察海马CA1区超微结构变化。结果 模型组与假手术组比较,旷场试验中大鼠穿越格子数减少（P＜0.01）,休息时间延长（P＜0.01）;NGF和BDNF mRNA表达降低（P＜0.05、0.01）,其相应的蛋白表达也降低（P＜0.05）。人参皂苷Rb₁组与模型组比较,旷场试验中大鼠穿越格子数增多（P＜0.05）,NGF和 BDNF mRNA表达升高（P＜0.05、0.01）,其相应的蛋白表达也升高（P＜0.01）。电镜结果显示,模型组与假手术组比较,大鼠海马神经元超微结构受损,人参皂苷Rb₁组得到相应改善。结论 POFS老年大鼠海马NTF表达降低,神经元存在一定程度损伤,人参皂苷Rb₁对POFS老年大鼠有一定改善作用。     

冰片促灯盏乙素透体外血-视网膜内屏障的作用研究＊

目的 观察不同比例冰片对灯盏乙素在体外血-视网膜内屏障的促透作用。方法 完成高效液相色谱-串联质谱联用（HPLC-MS/MS）检测灯盏乙素药物浓度的方法学开发和验证；体外培养大鼠视网膜血管内皮细胞，并用Transwell建立视网膜内皮细胞屏障模型；在体外血-视网膜内屏障模型的上室中给予含有不同比例冰片的灯盏溶液，分时段提取透屏障后的HBSS液，采用HPLC-MS/MS检测透屏障的下室HBSS液中灯盏乙素浓度。结果 ①自建HPLC-MS/MS检测灯盏乙素的方法特异性好，准确度、灵敏度高，各项方法学验证均符合2015版《中国药典》第四部中《9012生物样品定量分析方法验证指导原则》的要求。②建立体外血-视网膜内屏障模型成功，在体外内皮细胞屏障模型中，上室灯盏乙素浓度为100 μg·mL^-1，在2 h后，上室中未添加冰片的下室灯盏乙素药物透过浓度为8.82 μg·mL^-1，上室添加冰片分别为60 μg·mL^-1、120 μg·mL^-1、240 μg·mL^-1、480 μg·mL^-1的下室中的灯盏乙素药物浓度分别为9.50 μg·mL^-1、9.57 μg·mL^-1、11.30 μg·mL^-1、12 μg·mL^-1。在冰片浓度为480 μg·mL^-1时，下室中灯盏乙素的能达到最大浓度为12 μg·mL^-1。结论 ①灯盏乙素在HBSS中的含量检测方法学验证成功；②冰片可能具备促进灯盏乙素透体外血-视网膜内屏障模型的作用；③在上室的冰片药物浓度达到480 μg·mL^-1时，本研究灯盏乙素透过体外血-视网膜内屏障模型达到最大药物浓度。     

伸筋易骨法调控家兔软骨细胞增殖减轻软骨变性的实验研究

[目的]研究伸筋易骨法影响调控甲状旁腺激素相关蛋白(PTHrP)促进兔软骨细胞增殖减轻软骨变性的作用。[方法]新西兰大耳白兔编号后随机分为正常组、假手术组、模型组、推拿组、玻璃酸钠组,每组各10只,改良Hulth法制备膝骨性关节炎(KOA)兔模型,推拿组采用伸筋易骨法治疗21 d,玻璃酸钠组采用关节腔玻璃酸钠注射治疗,每周1次,共治疗3周,取材后透射电镜观察细胞器情况,扫描电镜观察软骨组织表面的变性和修复情况,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测PTHrP mRNA的表达。[结果]RT-PCR法检测各组软骨组织PTHrP mRNA的表达,假手术组与正常组PTHrP mRNA的表达经统计学比较,无统计学意义(P>0.05),模型组与正常组比较,具有统计学意义(P<0.05),推拿组、玻璃酸钠组与模型组比较,具有统计学意义(P<0.05),推拿组与玻璃酸钠组相比,无统计学意义(P>0.05),推拿组、玻璃酸钠组与正常组相比,具有统计学意义(P<0.05)。扫描电镜检查显示,模型组软骨表面垄沟样明暗带明显紊乱,胶原纤维裸露;推拿组和玻璃酸钠组软骨表面有纤维爬过,提示软骨修复。透射电镜观察显示,模型组软骨细胞形态肥大,粗面内质网形态异常,核膜上多个膜孔,线粒体消失,胶原纤维断裂;推拿组和玻璃酸钠组软骨细胞细胞形态结构基本正常,细胞内可见多个自噬小体。[结论]伸筋易骨法能够调控软骨合成代谢关键蛋白PTHrP的表达,减缓软骨变性,促进软骨修复,减轻KOA症状。     

四君子汤含药血清上调c-Myc表达促进小肠上皮细胞迁移和增殖

目的:考察四君子汤含药血清(SJZ)对小肠上皮(IEC-6)细胞损伤后迁移、增殖及c-核蛋白类基因(c-Myc)mRNA和蛋白表达的影响,以探讨四君子汤促进胃肠黏膜损伤修复的作用机制。方法:采用大鼠制备四君子汤含药血清,Tips划痕法建立IEC-6细胞迁移模型,观察四君子汤药物血清对细胞迁移的影响;实时细胞分析仪(RTCA)检测四君子汤含药血清对IEC-6细胞增殖的影响;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)法检测c-Myc mRNA表达;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测c-Myc蛋白表达。结果:中体积浓度(10%)和高体积浓度(20%)的四君子汤含药血清可促进IEC-6细胞迁移(P0.01);细胞损伤后12 h,中体积浓度(10%)和高体积浓度(20%)的四君子汤含药血清可促进IEC-6细胞增殖(P0.01);细胞损伤后24 h和36 h,低(5%),中(10%),高(20%)体积浓度的四君子汤含药血清均可促进IEC-6细胞增殖(P0.05,P0.01);进一步研究发现,中体积浓度(10%)和高体积浓度(20%)的四君子汤含药血清可提高与胃肠黏膜损伤修复密切相关的c-Myc mRNA和蛋白表达(P0.01)。结论:四君子汤修复胃肠黏膜屏障损伤,促进溃疡愈合的作用可能与其提高c-Myc mRNA和蛋白表达,促进黏膜上皮细胞的迁移和增殖有关。     

伸筋易骨矫形手法对兔膝关节软骨细胞代谢及Sox9表达的影响

[目的]探讨伸筋易骨矫形手法对兔膝关节软骨细胞代谢及Sox9表达的影响。[方法]将膝骨关节炎(KOA)模型兔随机分为3组,治疗组采用伸筋易骨矫形手法治疗,对照组采用关节腔注射玻璃酸钠治疗,模型组不做干预,同条件饲养,取材后分离膝骨关节软骨细胞体外培养,镜下观察并通过四甲基偶氮唑盐比色法(MMT)对比3组软骨细胞增殖情况;通过蛋白免疫印迹分析3组软骨细胞Sox9的表达变化。[结果]镜下观察治疗组、对照组关节软骨的增殖速度均快于空白组,其中治疗组增殖速度最快,MMT法检测治疗组软骨细胞增殖能力高于对照组(P0.05),蛋白免疫印迹分析显示治疗组Sox9表达高于对照组(P0.05)。[结论]伸筋易骨矫形手法具有提高软骨细胞增殖速度,增强软骨细胞增殖能力,同时该手法可以提高损伤软骨组织Sox9的表达水平,从而促进软骨细胞的合成代谢。     

电针人中穴对脑梗死大鼠内源性神经干细胞分化的影响

[目的] 观察电针人中穴（GV26）对脑梗死（CI）后内源性神经干细胞增殖、分化的影响。[方法] Wistar大鼠随机分为电针组、模型组、假手术组、空白组,前3组每组24只,按干预和取材的时间分为1、3、7、14 d 4个亚组,空白组6只,采用神经功能缺损体征评分（NSS）评定各组大鼠神经功能缺损程度;苏木精-伊红（HE）染色法观察CI后内源性神经干细胞的形态改变;免疫组化、免疫荧光双标记法检测CI后内源性神经干细胞的增殖、分化。[结果] 神经功能方面,空白组、假手术组NSS评分无变化,神经功能正常,模型组、电针组CI大鼠随着时间的延长,两组大鼠在感觉、反射、肢体功能等方面均有改善,3、7、14 d时电针组NSS评分低于模型组,两组差异有统计学意义（P<0.05）;HE染色,空白组和假手术组脑组织形态未见明显异常,模型组和电针组均可见神经细胞的细胞核固缩、伴细胞空泡,随干预天数增加,逐渐有结缔组织、星形胶质细胞与正常细胞生成,电针组整体修复情况优于模型组;免疫组化,与空白组、假手术组比较,模型组大鼠各时相内源性神经干细胞（eNSPCs）特异性标识物齿状回巢蛋白（Nestin）目标蛋白平均光密度值（AOD）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP） AOD均明显升高（P<0.01）,与模型组比较,电针组各时相Nestin AOD均较高（P<0.05或P<0.01）,3、7、14 d时GFAP AOD均升高（P<0.05或P<0.01）;免疫荧光双标记,与空白组、假手术组比较,模型组大鼠Nestin及GFAP表达量均明显升高（P<0.01）,荧光信号强,与模型组比较,电针组各时相Nestin表达均升高（ P<0.05或P<0.01）,Nestin/5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）共标记信号强,3、7、14 d时GFAP表达升高（P<0.05或P<0.01）,GFAP/BrdU共标记信号强。[结论] 电针人中穴可明显改善CI大鼠神经功能损伤情况,促进内源性神经干细胞的增殖、分化为星形胶质细胞,从而有利于CI后神经功能网络的修复和功能的重建。     

扎里奴思方对脑缺血再灌注损伤后大鼠脑内NGF表达的影响

目的：观察扎里奴思方对脑缺血再灌注损伤后大鼠脑内神经生长因子（NGF）表达的影响。方法：线栓法制备局灶性脑缺血再灌注大鼠模型。实验动物随机分为假手术组、模型组、扎里奴思方组、尼莫地平组。取材前进行神经功能评分。术后各组分别在1,3,7,14 d各个时间点取材,HE染色法观察大鼠脑组织病理学改变;免疫组织化学法测定大鼠脑内NGF 的表达。结果：模型组大鼠神经功能评分降低,神经元数量减少,大小不均,病理损伤显著;与模型组比较,尼莫地平和扎里奴思方组神经评分增高,神经元数量增多,脑组织病理损伤减轻明显,NGF表达增高（P<0.01,P<0.05）;与尼莫地平组比较,扎里奴思方14 d组神经功能评分和NGF表达明显升高（P<0.05）。结论：扎里奴思方可对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑组织神经元起保护作用,扎里奴思方14天组的脑保护作用更强,其脑保护作用机制可能与调节大鼠脑组织 NGF 表达有关。     

针刺手法对家兔穴区组织损伤的形态学观察

[目的]观察针刺治疗中3种基本操作手法(提插、捻转、提插捻转复合手法)对家兔穴区组织造成损伤形态计量学影响。[方法]36只家兔随机分入提插组,捻转组,提插捻转组和对照组,每组9只。对家兔足三里穴分别施3种操作手法,每日操作1次,行针时间1 min,共10次。计数穴区炎细胞数量;观察组织苏木精-伊红素(HE)染色和Masson染色后组织形态学变化。[结果]3组针刺组炎细胞数量差异无统计学意义,病理组织形态学结果显示提插组神经损伤最轻,捻转组和提插捻转组出现的神经损伤较重。[结论]在不影响针感的前提下,在有神经干分布的穴位上针刺操作时采用单一提插法,可以减轻对神经组织的损伤。     

骨痛灵方对肺癌骨癌痛模型小鼠的疼痛行为学以及脊髓MCP-1和NGF的影响

  目的：观察骨痛灵方对肺癌骨癌痛模型小鼠脊髓单核细胞趋化因子(MCP-1)和神经生长因子(NGF)表达的影响,探讨骨痛灵方治疗骨癌痛的潜在作用机制。  方法：在C57小鼠左后肢胫骨骨髓腔注射Lewis肺癌细胞建立骨癌痛模型。50只小鼠随机分为假手术组、模型组、中药组、西药组和中西药组,每组10只。中药组小鼠以骨痛灵方煎剂灌胃,西药组予以唑来膦酸腹腔注射,中西药组则两药联合运用。用Von Frey纤维及热痛测试仪分别于造模前,造模后第6(7)天、13(14)、20(21)天观察小鼠机械性缩足反射阈值(PWMT)和热痛觉缩足潜伏期(PWTL)的变化,酶联免疫吸附反应(ELISA)检测脊髓MCP-1和NGF蛋白的表达情况。  结果：3周后,3个治疗组的PWMT和PWTL均明显高于模型组(均P<0.05),中西药组的PWMT比中药组和西药组均增高,差异有统计学意义(均P<0.05)。与模型组比较,中药组、西药组和中西药组的MCP-1蛋白表达均明显降低(均P<0.05);NGF则均显著升高(均P<0.05)。  结论：骨痛灵方可能通过减少脊髓MCP-1蛋白的表达,抑制中枢敏化,同时促进NGF蛋白的表达,修复中枢敏化中受损的神经元而发挥止痛作用。     

不同灸法对免疫抑制兔脾脏、胸腺影响的组织学研究＊

目的 观察不同灸法对环磷酰胺所致免疫抑制兔脾脏指数、脾组织形态学、胸腺组织形态学的影响。方法 大耳白兔40只，随机分成空白组、模型组、隔药饼灸组和艾条灸组4组，每组10只。除去空白组，模型组、隔药饼灸组和艾条灸组均连续7天经腹腔注射环磷酰胺60 mg·kg^-1，制备免疫抑制模型。造模成功后，隔药饼灸组用六味地黄汤组方药物制成的药饼放置在“神阙”、“关元”、“足三里（双）”、“脾俞（双）”、“肾俞（双）”上，以线香点燃置于药饼上的制备好的艾炷，燃尽更换，每穴连灸5壮；艾条灸组施以艾条灸，将自制的与5壮艾炷量相等的小艾条放置于上述穴位，燃尽即止；均隔日灸，共灸10次。空白组、模型组相同时间均绑缚固定到兔台上，不予干预。干预结束后次日，对动物进行称重、麻醉，取动物脾脏、胸腺，常规HE染色，镜下观察，并计算脾脏指数。结果 与空白组比较，模型组动物脾脏指数明显升高（P < 0.01）；脾脏白髓面积缩小，红髓内有较多色素沉积；胸腺皮髓界限不清，皮质淋巴细胞减少。与模型组比，隔药饼灸组和艾条灸组的脾脏指数明显下降，其中隔药饼灸组（P < 0.01），艾条灸组（P < 0.05）；隔药饼灸组脾脏白髓面积增大，动脉周围淋巴鞘淋巴细胞增多，红髓内色素沉积较少；胸腺结构恢复，皮髓界限清楚，皮质淋巴细胞增多。艾条灸组部分脾脏的白髓面积增大，动脉周围淋巴鞘淋巴细胞较密集，红髓内有出血和色素沉积；胸腺皮质淋巴细胞较密集，皮髓界限清。结论 不同灸法都有调节免疫抑制兔脾脏指数的作用；还能改善因免疫抑制导致的脾组织、胸腺组织的受损情况，提高免疫抑制兔的免疫功能；且隔药饼灸组改善的效果要优于艾条灸组。     

冰敷和消肿散外敷对损伤骨骼肌IGF-1 mRNA表达及组织形态的影响

目的探讨冰敷和消肿散外敷对损伤骨骼肌IGF-1 mRNA表达及组织形态的影响。方法 86只SD大鼠,取6只作为空白对照组,其余80只随机分为损伤模型组、消肿散治疗组、冰敷组、冰敷消肿散联合组,并采用打击造模的方法造成急性骨骼肌损伤模型。观察损伤1 d、3 d、7 d、14 d损伤组织IGF-1的mRNA表达及组织形态的变化情况。结果各组之间损伤1 d后,无明显差异。损伤3 d、7 d、14 d后,消肿散组和冰敷消肿散联合组IGF-1的mRNA表达均高于损伤模型组(P0.05)。损伤1 d、3 d冰敷治疗组表现与损伤模型组患侧表现基本一致;消肿散和冰敷消肿散联合组组织水肿炎性细胞浸润程度稍轻于损伤模型组患侧。损伤14 d后:损伤模型组患侧腓肠肌局部血肿机化,瘢痕组织形成,横纹肌纤维再生;消肿散组损伤局部血管再生,瘢痕组织与肌管并存;冰敷治疗组肌纤维得到一定程度的修复,但肌小管和再生的横纹肌纤维排列不规则,间或有结缔组织填充;冰敷消肿散联合组水肿与炎症细胞吸收,肌管修复良好,出现排列较整齐致密的肌纤维组织,与正常组织较为接近。损伤后1 d、3 d、7 d、14 d,冰敷消肿散联合组及消肿散组损伤积分低于损伤模型组患侧(P0.05)及冰敷治疗组(P0.05)。结论消肿散能增加损伤组织IGF-1的mRNA表达,促进骨骼肌的修复。而冰敷并不能增加损伤组织IGF-1的mRNA表达。冰敷对于骨骼肌损伤的修复改善不明显,消肿散组损伤局部血管再生,能改善肌肉组织形态修复程度,冰敷消肿散联合组的肌肉修复与正常组织较为接近。     

复方通络救脑促进神经细胞突触可塑性

目的: 检测中药复方通络救脑及其主要成分三七总皂苷和京尼平苷对神经突触可塑性有无促进作用。 方法: 实验分为对照组和给药组,采取细胞活力检测法,即CCK-8检测法检测药物对稳转的过表达的瑞典型突变淀粉前体蛋白(swAPP)突变的人神经母细胞瘤(SY5Y)细胞的增殖曲线的影响;通过Western blotting检测药物对于神经细胞突触相关蛋白树突棘肌动蛋白结合蛋白(drebrin)和突触后密度蛋白-95(PSD-95)的表达的变化;用神经生长因子(NGF)诱导PC12细胞长出神经突起后,检测药物对于细胞突起的作用。 结果: 复方通络救脑及其主要组成成分京尼平苷和三七总皂苷不影响过表达的瑞典型突变淀粉样前体蛋白的神经母细胞瘤(swAPP-SY5Y)的细胞增殖曲线,且复方通络救脑中京尼平苷能够显著增加swAPP-SY5Y细胞drebrin和PSD-95的表达(P<0.01),显著增加PC12细胞总突起数(P<0.01);而三七总皂苷没有相应的作用。 结论: 复方通络救脑能促进神经细胞的突触可塑性,初步断定起主要作用的成分是京尼平苷而不是三七总皂苷。