复方中药糖耐康对高糖诱导大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响

目的 探讨复方中药糖耐康对高糖环境下大鼠肾小球系膜细胞(mesangial cells,MCs)增殖的抑制作用.方法 以30mM葡萄糖刺激体外培养的大鼠MCs增殖,加入不同浓度的中药糖耐康,采用MTT比色法分别观察24 h、48 h、72 h系膜细胞的增殖情况.结果 高浓度葡萄糖(30mM)对系膜细胞的增殖效应最佳时点为24 h前后,在72 h时增殖作用不明显.中药糖耐康有抑制高糖所致的MCs增殖的作用.结论 高糖在一定时段内有刺激大鼠系膜细胞增殖的效应,一定浓度的中药糖耐康对高糖所致MCs增殖具有抑制作用.     

复方中药糖耐康对高糖诱导大鼠系膜细胞外基质的影响，

目的观察复方中药糖耐康对高糖环境下大鼠系膜细胞外基质的纤维连接蛋白（FN）、Ⅳ型胶原蛋白（IV—C）及转化生长因子TGF-β1。含量的影响。方法大鼠肾小球系膜细胞按1×10^5孔接种24孔板,实验分为6组：正常葡萄糖组、高糖对照组、中药糖耐康高、中、低浓度干预组、西药吡格列酮组。每组设平行孔4孔,培养24h后检测指标。采用双抗夹心酶联免疫吸附（ELISA）法检测FN、IV-C及TGF-β1,含量。结果与空白对照组比较,高糖模型组MCs的上清中的FN、IV-C、TGF-β1含量均显著升高,差异有统计学意义（P均〈0．05）;与高糖组比较,治疗组FN、IV-C、TGF-β1,含量均显著降低,差异有统计学意义（P〈0．01）;与吡格列酮组比较,糖耐康中、低剂量组FN、IV-C、TGF-β1。含量差异有统计学意义（P〈0．01）,而糖耐康高剂量组各指标差异无统计学意义（P〉0．05）。结论糖耐康对糖尿病肾病肾脏的保护作用之一,是通过抑制系膜细胞外基质中FN、IV-C、TGF-β,的分泌、产生,从而抑制了系膜细胞的增值,起到保护糖尿病患者。肾脏的作用。     

芪药消渴胶囊对高糖诱导肾小球系膜细胞增殖的抑制作用

目的观察芪药消渴胶囊对高糖诱导肾小球系膜细胞(GMCs)增殖的抑制作用。方法通过GMCs体外培养技术,采用含药血清药理学的方法,制备不同浓度芪药消渴胶囊的含药血清,筛选最佳葡萄糖浓度,在葡萄糖的诱导下,通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测并观察不同时间、不同浓度下GMCs增殖情况。结果在不同时间点,空白组细胞生长最为缓慢。与空白组比较,在相同培养条件下,0.4 g/L葡萄糖组及0.5 g/L葡萄糖组在48 h、72 h对GMCs增殖有刺激作用(P<0.05,P<0.01),0.6 g/L葡萄糖组0.7 g/L葡萄糖组、0.8 g/L葡萄糖组在24 h、48 h、72 h对GMCs增殖有明显刺激作用(P<0.05,P<0.01),其中0.6 g/L葡萄糖组在48 h、72 h对GMCs增殖刺激作用较强(P<0.01)。提示0.6 g/L葡萄糖为GMCs增殖的最佳刺激浓度。与空白对照组比较,高糖组细胞生长迅速(P<0.05,P<0.01);与高糖组比较,芪药消渴胶囊含药血清各组细胞在48 h、72 h生长缓慢(P<0.05),提示芪药消渴胶囊对高糖诱导的GMCs增殖的抑制作用。结论芪药消渴胶囊具有抑制GMCs增殖作用。     

活血化瘀、益气补肾中药复方对高糖刺激下大鼠肾小球系膜细胞增殖及纤维连接蛋白表达的影响

目的 研究活血化瘀、益气补肾中药复方对高糖刺激下大鼠肾小球系膜细胞（RMCs）增殖及纤维连接蛋白（FN）表达的影响。方法 以大鼠RMCs为研究对象,用高糖和不同浓度的中药处理RMCs,分别作用24、48 h后,用噻唑蓝（MTT）法检测RMCs的增殖情况,实时定量PCR法检测FN mRNA表达,ELISA法检测FN蛋白表达。结果 处理24 h和48 h,与对照组比较,单纯高糖组细胞增殖明显升高（P<0.01, P<0.01）;FN mRNA表达及蛋白表达也明显升高（P<0.01）;与高糖组比较, 24 h时各浓度中药组RMCs增殖及FN蛋白及mRNA表达差异无统计学意义（P>0.05）;48 h时各浓度中药组RMCs增殖及FN蛋白及mRNA表达较高糖组明显下降（P<0.01, P<0.01）。结论 高糖能够刺激RMCs增殖及FN蛋白及mRNA表达,中药处理24 h对高糖刺激的RMCs增殖及FN蛋白及mRNA表达的作用不明显,中药处理48 h能够逆转高糖刺激下RMCs的增殖及降低FN 蛋白及mRNA 的表达。     

虫草肾茶胶囊对肾小球系膜细胞增殖的影响

目的：研究虫草肾茶胶囊对体外高糖环境下系膜细胞（HMC）增殖的影响,探讨其在糖尿病肾病（DN）防治中的意义。方法：将常规培养的人肾小球系膜细胞分为正常对照组、高糖组、虫草肾茶胶囊高、中、低剂量组及福辛普利组,分别于相应处理后24h,48h和72h收集细胞,用4-甲偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞增殖。结果：高糖有刺激HMC增殖的效应,48h上增殖最明显,而在72h时呈下降趋势。虫草肾茶胶囊及福辛普利两种药物血清对高糖刺激下的系膜细胞增殖有明显的抑制作用,其中虫草肾茶胶囊血清对HMC的抑制作用优于福辛普利血清。且随着虫草肾茶胶囊浓度、作用时间的增加作用更明显,呈一定的时间、剂量依赖性关系。结论：高糖可促进HMC增殖,虫草肾茶胶囊能明显抑制高糖条件下HMC增殖,从而发挥预防肾小球纤维化及硬化的发生、发展,进而延缓DN的进展。     

Inhibition of Qiyaoxiaoke capsule on the glomerular mesangial cell proliferation induced by high glucose

目的 观察芪药消渴胶囊对高糖诱导肾小球系膜细胞(GMCs)增殖的抑制作用.方法 通过GMCs体外培养技术,采用含药血清药理学的方法,制备不同浓度芪药消渴胶囊的含药血清,筛选最佳葡萄糖浓度,在葡萄糖的诱导下,通过四甲基偶氮唑蓝(M TT)比色法检测并观察不同时间、不同浓度下GMCs增殖情况.结果 在不同时间点,空白组细胞生长最为缓慢.与空白组比较,在相同培养条件下,0.4 g/L葡萄糖组及0.5 g/L葡萄糖组在48h、72h对GMCs增殖有刺激作用(P＜0.05,P＜0.01),0.6 g/L葡萄糖组0.7 g/L葡萄糖组、0.8 g/L葡萄糖组在24h、48h、72h对GMCs增殖有明显刺激作用(P＜0.05,P＜0.01),其中0.6 g/L萄萄糖组在48 h、72h对GMCs增殖刺激作用较强(P＜0.01).提示0.6 g/L葡萄糖为GMCs增殖的最佳刺激浓度.与空白对照组比较,高糖组细胞生长迅速(P＜0.05,P＜0.01);与高糖组比较,芪药消渴胶囊含药血清各组细胞在48 h、72 h生长缓慢(P＜0.05),提示芪药消渴胶囊对高糖诱导的GMC8增殖的抑制作用.结论 芪药消渴胶囊具有抑制GMCs增殖作用.     

高糖诱导的人近端肾小管上皮细胞损伤及机制的研究

目的:观察高糖诱导人近端肾小管上皮细胞(HK-2)损伤及机制。方法:细胞生长融合至约80%时,用DMEM低糖培养基无血清同步化48 h,然后分为以下7组。①正常糖对照组(5.5 mM低糖DMEM培养基,NG);②高糖1组(15 mM高糖DMEM培养基,HG1);③高糖2组(30 mM高糖DMEM培养基,HG2);④高糖3组(45 mM高糖DMEM培养基,HG3);⑤高糖4组(60 mM高糖DMEM培养基,HG4);⑥等渗1组(30 mM甘露醇DMEM培养基,HM1);⑦等渗2组(45 mM甘露醇DMEM培养基,HM2)。观察不同糖浓度(5.5~45 mM)刺激HK-2细胞24 h,观察IκBα和p65蛋白表达规律。MTT比色法检测细胞活力。Western blot法检测IκBα和p65蛋白表达。结果:高糖2组、高糖3组、高糖4组浓度呈依赖性对HK-2活力存在显著的抑制作用(P0.05,P0.01);高糖2组、高糖3组浓度的甘露醇对HK-2活力没有明显的抑制作用(P0.05)。IκBα蛋白表达随着葡萄糖浓度的升高而依次降低,而p65蛋白表达呈浓度依赖性升高,高糖2组、高糖3组的葡萄糖与正常糖对照组比较,差异有显著性或非常显著性意义(P0.05,P0.01)。结论:高糖诱导的HK-2毒性损伤呈一定的浓度依赖关系,其机制与NF-κB通路的激活有关,与渗透压作用无明显关联。     

糖肾宝复方对高糖培养的小鼠肾小球系膜细胞Ets-1/MCP-1信号通路的影响

目的观察高糖环境下糖肾宝复方含药血清对小鼠肾小球系膜细胞(MCs)增殖及E26转录因子1(Ets-1)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、Ⅳ型胶原(ColⅣ)、纤黏蛋白(FN)表达的影响。方法分别将糖肾宝复方及蒸馏水对SPF小鼠进行灌胃,制备含药血清与正常血清。然后体外培养小鼠MCs,设计合成Ets-1-siRNA并转染小鼠MCs。实验分为6组:正常对照组、高糖组、高糖+糖肾宝血清组、Ets-1-siRNA组、Ets-1-siRNA+糖肾宝组、空转组。药物干预72 h后,采用实时荧光定量PCR和Western Blot法检测各组MCs中Ets-1、MCP-1、FN及ColⅣmRNA水平和蛋白表达;CCK-8法检测24、48、72、96、120 h各时间点MCs增殖情况。结果与正常对照组比较,高糖组及高糖+糖肾宝血清组MCs增殖显著升高(P0.01),且72 h达到峰值,96 h增殖速率趋于稳定(P0.01),同时高糖组及空转组Ets-1、MCP-1、FN及ColⅣmRNA水平和蛋白表达均显著升高(P0.01);与高糖组比较,高糖+糖肾宝血清组、Ets-1-siRNA组和Ets-1-siRNA+糖肾宝组MCs增殖,Ets-1、MCP-1、FN及ColⅣmRNA水平和蛋白表达均显著下降(P0.01);Ets-1-siRNA组和Ets-1-siRNA+糖肾宝组上述指标差异无统计学意义(P0.05)。结论糖肾宝复方能抑制高糖培养的MCs增殖及细胞基质(ColⅣ、FN)分泌,其机制可能与抑制Ets-1/MCP-1炎症信号通路的活化。     

通络益肾方对高糖诱导肾小球系膜细胞GRP78 mRNA及JNK mRNA表达的影响

目的探讨通络益肾方治疗糖尿病肾病的可能作用机制。方法 35只SD大鼠随机分为空白组、西药组及中药大、中、小剂量组,每组7只。中药大、中、小剂量组小鼠每日分别给予6.20、3.10、1.55 g/ml的通络益肾方2 ml灌胃;西药组小鼠每日灌胃洛汀新(0.09 mg/ml)、糖适平(0.27 mg/ml)混合液2ml。每日1次,连续给药10天。于末次灌胃2 h后制备含药血清。大鼠肾小球系膜细胞株HBZY-1细胞分正常组、模型组、西药组及中药大、中、小剂量组,同步化24 h后,正常组加5.6 mmol/L低糖+10%的胎牛血清100μl,模型组加30 mmol/L高糖+10%的空白血清100μl,中药大、中、小剂量组加30 mmol/L高糖及10%的中药大、中、小剂量含药血清100μl,西药组加30 mmol/L高糖+10%的西药血清100μl。分别培养12 h、24 h、48 h和72 h后,采用流式细胞术检测系膜细胞凋亡情况,RT-PCR检测各组系膜细胞葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)mRNA的表达水平。结果与正常组同时间点比较,模型组系膜细胞在24 h、48 h和72 h凋亡率持续增加(P0.01)。与模型组同时间点比较,各给药组24 h、48 h和72 h时系膜细胞凋亡率均明显下降(P0.01);中药大、中、小剂量组在各时间点系膜细胞凋亡率随着药物剂量升高而降低,呈剂量依赖性(P0.01)。与正常组同时间点比较,模型组GRP78 mRNA在24 h、48 h持续升高,而72 h明显下降,JNK mRNA表达在48、72 h时明显增加(P0.05或P0.01)。与模型组同时间点比较,各给药组系膜细胞GRP78 mRNA、JNK mRNA在48 h、72 h时明显减低,且以中药大剂量组最低(P0.05或P0.01)。结论通络益肾方可抑制肾小球系膜细胞凋亡,其作用机制可能与延缓GRP78 mRNA增幅、下调JNK mRNA表达有关。     

中药糖痹康对高糖环境下大鼠雪旺细胞NGF表达的影响

目的:探讨中药糖痹康对高糖环境下大鼠雪旺细胞NGF表达的影响。方法:运用原代培养的方法,在高糖环境下建立大鼠SCs模型,以弥可保药物组作为对照,并使用Western blot检测糖痹康含药血清对高糖环境下大鼠坐骨神经雪旺细胞NGF蛋白的表达,Real-time PCR检测SCs中NGF mRNA的表达,ELISA检测各组雪旺细胞上清NGF的表达。结果:大鼠雪旺细胞在高糖的环境下培养,其增殖的能力受到显著抑制,同时雪旺细胞NGF的合成显著减少,与糖痹康含药血清培养后的细胞对比,经糖痹康组培养的雪旺细胞,其细胞NGF的表达、合成水平和增殖能力均显著提高。结论:中药糖痹康对高糖条件下大鼠雪旺细胞的增殖能力、NGF mRNA表达和NGF合成的抑制性变化具有显著改善作用。     

二甲双胍抑制高糖状态下大鼠肾小球系膜细胞增殖作用机制的进一步研究

目的探讨二甲双胍抑制高糖状态下大鼠肾小球系膜细胞增殖的作用机制。方法体外培养大鼠肾小球系膜细胞(HBZY-1)分为2组,AICAR组分为正常对照(NC)组(葡萄糖浓度5.6 mmol/L)、高糖(HG)组(葡萄糖浓度30 mmol/L)、HG+AICAR组(葡萄糖浓度30 mmol/L+AICAR浓度2.0 mmol/L)、HG+AICAR+二甲双胍组(葡萄糖浓度30 mmol/L+AICAR浓度2.0 mmol/L+二甲双胍浓度200 mmol/L)4个亚组,Compound C组分为NC组、HG组、HG+Compound C组(葡萄糖浓度30 mmol/L+Compound C浓度0.5 mmol/L)、HG+Compound C+二甲双胍组(葡萄糖浓度30 mmol/L+Compound C浓度0.5 mmol/L+二甲双胍浓度200 mmol/L)4个亚组,作用时间均为24 h,MTT法检测各组HBZY-1细胞增殖的情况;如上分组,作用12 h,用Western blot法检测各组细胞内p-单磷酸腺苷激活的蛋白激酶(p-AMPK)和AMPK蛋白表达的变化。结果①与NC组相比,高糖刺激24 h后HBZY-1增殖明显(P均0.01);与HG组相比,加AICAR干预后HBZY-1增殖明显抑制,加Compound C干预后系膜细胞进一步增殖,均有显著性差异(P均0.01);与HG+AICAR组相比,加二甲双胍干预后HBZY-1增殖进一步抑制,有显著性差异(P0.01);与HG+Compound C组相比,加二甲双胍干预后HBZY-1增殖明显抑制,有显著性差异(P0.01);②与NC组相比,高糖刺激24 h后HBZY-1细胞内p-AMPK表达水平明显下降(P均0.01);与HG组相比,加AICAR干预后p-AMPK表达水平明显升高,加Compound C干预后p-AMPK表达水平进一步下降,均有显著性差异(P均0.01);与HG+AICAR组相比,加二甲双胍干预后HBZY-1细胞内p-AMPK表达水平进一步升高,有显著性差异(P0.01);与HG+Compound C组相比,加二甲双胍干预后p-AMPK表达水平明显升高,有显著性差异(P0.01)。结论二甲双胍可能通过增加肾小球系膜细胞内p-AMPK的表达水平来抑制HBZY-1的增殖。     

糖肾康中药复方含药血清对高糖环境下RMCs的增殖及TGF-β1/Smad2/3 信号通路的影响

目的研究糖肾康中药复方含药血清对高糖环境下大鼠肾系膜细胞(RMCs)增殖及TGF-β1/Smad2/3信号通路的影响。方法 12只SD大鼠采用随机数字法分为小剂量中药组、中剂量中药组、大剂量中药组,空白组,每组3只,灌胃7天后门静脉取血。分别用含中药血清和普通大鼠血清培养RMCs。采用4-甲偶氮唑蓝(MTT)法测定系膜细胞的增殖率,以确定最佳中药血清浓度;实时定量、PCR及酶联免疫吸附剂(ELISA)法测定TGF-β1mRNA及蛋白的表达,蛋白免疫印迹(Western blot)及免疫荧光方法测定Smad2/3蛋白表达及磷酸化水平。结果不同剂量的糖肾康中药含药血清均能抑制大鼠肾小球系膜细胞的增殖;中药血清可显著抑制高糖诱导的TGF-β1表达及Smad2/3磷酸化。结论糖肾康中药含药血清能抑制高糖刺激下的RMCs增殖,其作用机制可能与抑制TGF-β1/Smad2/3通路有关。     

银杏叶提取物对高糖环境下系膜细胞血小板源性生长因子-B表达的影响

目的:观察银杏叶提取物对高糖培养条件下系膜细胞外基质产生及血小板源性生长因子-B(PDGFB)表达的影响。方法:体外培养人肾小球系膜细胞,分为对照组(葡萄糖终浓度为5.5 mmol/L)、高糖组(葡萄糖终浓度为30 mmol/L)、银杏叶提取物干预组(12.5 mg/L、25 mg/L、50 mg/L、100 mg/L),采用实时定量PCR检测系膜细胞PDGF-B m RNA的表达、Western blot检测系膜细胞PDGF-B蛋白表达、ELISA检测上清液Ⅳ型胶原(ColⅣ)、纤维连接蛋白(Fn)含量。结果:高糖组刺激24 h后,细胞上清液中Fn、ColⅣ含量、系膜细胞PDGF-B m RNA及蛋白的表达均高于对照组(P0.05);银杏叶提取物干预组(25 mg/L、50 mg/L、100 mg/L)作用24 h后,细胞上清液Fn、ColⅣ含量均低于高糖组,系膜细胞PDGF-B m RNA及蛋白的表达均低于高糖组(P0.05);且银杏叶提取物浓度越高,该作用越明显。结论:银杏叶提取物可以呈浓度依赖性抑制系膜细胞PDGF-B的合成,从而达到减少细胞外基质聚集、保护肾脏的作用。     

地龙成分对高糖刺激下人肾小球系膜细胞转化生长因子β1和结缔组织生长因子表达的研究

目的:研究地龙成分含药血清对高糖刺激下人肾小球系膜细胞(HMC)增殖、分泌转化生长因子β1(TGF-β1)和结缔组织生长因子(CTGF)的影响,并探讨其对糖尿病.肾脏疾病的可能防治机制.方法:以HMC为研究对象,将培养的HMC分为空白对照组、高糖刺激组、地龙成分低、中、高剂量组和福辛普利组,用家兔的含药血清给药,分别给予相应处理24h、48 h和72 h后,采用4-甲偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,48 h的上清液采用ELISA法检测FGF-β1和CTGF的表达.结果:在同一时间点内,地龙低、中、高剂量组对HMC增殖的抑制作用不断增加,福辛普利组对HMC增殖的抑制作用和地龙中剂量组相当,在24 h、48 h和72 h内,各药物干预组对HMC增殖的抑制作用也不断增大,以地龙高剂量组最佳;与空白对照组比较,高糖刺激组上清液中TGF-β1和CTGF的含量明显增多;与高糖刺激组比较,地龙成分低、中、高剂量组随着药物浓度的增加,TGF-β1和CTGF的含量减少,福辛普利组上清液中TGF-β1和CTGF的含量与地龙成分中剂量组相当,但高于高剂量组,都具有统计学意义.结论:地龙成分对HMC增殖的抑制作用在一定范围内呈浓度、时间依赖关系,能够降低TGF-β1和CTGF的含量,以高剂量组最佳,优于福辛普利组,提示地龙成分可能通过抑制HMc的异常增殖和下调TGF-β1和CTGF的表达而发挥对糖尿病肾病的保护作用.     

大黄酸对高糖所致肾小球系膜细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响探讨

目的 观察高糖对人肾小球系膜细胞(HMC) Wnt/β-catenin信号通路的影响及大黄酸的干预作用.方法 体外培养人肾小球系膜细胞,同步化后采用加有高浓度葡萄糖(30 mmol/l)联合不同浓度大黄酸的无血清培养基培养.应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)测量高糖(HG组)及大黄酸高浓度组(高糖十大黄酸10-4 mol/L,HG+R1组)、大黄酸中浓度组(高糖+大黄酸10-5 mol/L,HG+R2组)、大黄酸低浓度组(高糖十大黄酸10-6 mol/L,HG+R3组)干预后肾小球系膜细胞增殖活力.应用RT-PCR法检测正常培养及高糖作用后人肾小球系膜细胞Wnt/β-catenin基因的表达及大黄酸对其表达的影响.结果 ①对系膜细胞的抑制作用:与正常对照组(NG)组24h、48 h、72 h (OD值分别为0.169±0.051、0.228±0.074、0.285±0.075)比较,HG组(OD值分别为0.307±0.074、0.507±0.038、0.711±0.075)、HG+R1组(OD值分别为0.241±0.027、0334±0.015、0.499±0.063)、HG+R2组(OD值分别为0.244±0.081、0.386±0.033、0.531±0.011)、HG+R3组(OD值分别为0.277±0.036、0.407±0.057、0.594±0.042)细胞增殖均明显上升,差异均有统计学意义(P＜0.05、P＜0.01);与HG组各时点相比,HG+R1组、HG+R2组、HG+R3组在24 h呈下降趋势,48 h、72 h下降趋势显著,表现为时间、浓度依赖性(P＜0.05、P＜0.01).②在基础状态下,系膜细胞表达一定量的Wnt/β-catenin经高糖刺激后,Wnt/β-catenin基因表达上调(P＜0.05),HG+R1组、HG+R2组、HG+R3组均可明显下调高糖刺激引起的系膜细胞Wnt/β-catenin基因表达(P＜0.05).结论 大黄酸可能通过下调Wnt/β-catenin基因的表达抑制高糖引起的HMC增殖.     

益肾通络方对体外大鼠肾小球系膜细胞增殖的抑制作用

目的:观察益肾通络方对体外大鼠肾小球系膜细胞(MC)增殖的抑制作用.方法:制备益肾通络方大鼠血清,以脂多糖(LPS)为刺激因子,将体外大鼠肾小球系膜细胞分为5组,即空白组、脂多糖组(模型组)、益肾通络方低、中、高剂量组(含药血清各组).以甲基偶氮唑盐法检测系膜细胞增殖情况.结果:24h后,含药血清各组对增殖有明显的抑制作用(P<0.05,P<0.01);48h后含药血清各组对增殖的抑制作用持续;24h和48h均以高剂量含药血清抑制效果最为明显(P<0.01).结论:益肾通络方大鼠血清对LPS诱导的MC增殖有明显的抑制作用,且存在量效关系和时效关系.     

益气解毒活络中药有效成分对高糖刺激人肾小球系膜细胞增殖分化及ColIV、MCP-1 mRNA和蛋白表达影响

目的:观察高糖刺激下人肾小球系膜细增殖分化及Col IV、MCP-1 mRNA和蛋白活性表达变化,探究益气解毒活络中药有效成分防治糖尿病肾病的分子机制,讨论正交配伍中最优药物组合。方法:以体外培养人肾小球系膜细胞株,传代3~5代后接种于96孔培养板,采用4因素3水平分为正常对照组,高糖模型组、中药1、2、3、4、5、6、7、8、9组,以相应药物对HMCs干预24、48、72 h。MTT法检测24、48、72 h各时间点HMCs增殖分化情况;以qRT-PCR法检测48 h Col IV、MCP-1 mRNA表达;以ELISA法检测48 h Col IV、MCP-1蛋白活性表达。结果:(1)高糖环境刺激作用下HMCs及胞外基质均能够显著增殖,且在48 h达到顶峰;(2)益气解毒活络中药有效成分药防治DN作用机制与通过下调高糖作用下HMCs Col IV、MCP-1 mRNA及蛋白活性表达,进而抑制高糖刺激HMCs增殖相关;(3)益气解毒活络中药有效,最佳配伍为黄芪甲苷低剂量、盐酸小檗碱低剂量、水蛭素低剂量、木犀草苷低剂量。     

葛根素对大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响

目的：探讨葛根素对大鼠肾小球系膜细胞（GMCs）增殖的影响。方法：体外培养大鼠肾小球系膜细胞，分空白对照组和葛根素组。葛根素组采用MTT法，观察12h、24h、48h和72h后GMcs的增殖水平。结果：随着葛根素浓度的提高及作用时间的延长，GMCs细胞的生长抑制率呈现上升趋势。结论：葛根素能抑制GMCs增殖，并与药物的浓度和作用时间呈明显正相关。     

牡丹皮多糖2b对高糖所致大鼠系膜细胞增生及活性氧产生的影响

目的探讨高糖对大鼠系膜细胞(MC)增生及活性氧产生的影响,以及牡丹皮多糖2b(PSM2b)对其的干预作用。方法采用MTT法和比色法,分别检测不同浓度PSM2b各组体外高糖培养的MC增生和细胞上清液中超氧化物歧化酶(SOD)的活力和丙二醛(MDA)的水平。结果PSM2b对高糖所致的MC增殖有显著的抑制作用,其抑制作用呈浓度依赖性,并且能够提高上清液中SOD活力,降低MDA含量。结论高糖可导致MC增生和活性氧产生增多,而PSM2b能进行有效的干预。     

温脾汤对LPS诱导的体外培养系膜细胞增殖影响的研究

目的:探讨温脾汤药物血清对原代培养大鼠系膜细胞增殖的影响.方法:分离培养原代大鼠肾小球系膜细胞,以LPS诱导系膜细胞增殖,设立正常对照组、大剂量含药血清组、uan中剂量含药血清组、小剂量含药血清组.分别以酶标仪和流式细胞仪检测细胞增殖和细胞周期情况.结果:不同浓度的LPS均能刺激大鼠系膜细胞体外增殖,在24h、48h、72h各时相均以LPS3(1μg/ml)刺激强度最高.同时加入温脾汤药理血清后,可见药理血清对LPS诱导的MC增殖具有不同程度的抑制作用,各时相点均以大剂量含药血清抑制效果最为明显.进一步的研究表明,温脾汤药物血清能够增加系膜细胞G1期细胞百分数,降低S期细胞百分数,表明药物作用可使细胞分裂停滞在S期.结论:温脾汤药物血清能够明显抑制LPS诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖.