胰腺癌分泌型凋亡相关蛋白2基因第一外显子区甲基化模式及意义

目的 研究胰腺癌分泌型凋亡相关蛋白2(SARP2)基因第一外显子区CpG岛甲基化模式及其与临床生物学特征的关系,为胰腺癌早期诊断及预后判断奠定基础.方法 收集23例胰腺癌及相应癌旁组织、6例慢性胰腺炎和7例正常胰腺组织作为研究对象.抽提上述标本DNA进行亚硫酸氢盐修饰,聚合酶链反应扩增SARP2基因第一外显子区CpG岛区域,测序明确该区域CpG位点甲基化情况,并分析与临床生物学特征的关系.结果 胰腺癌SARP2基因CpG位点甲基化率(37.9%)显著高于正常胰腺(0.0%)、慢性胰腺炎(2.5%)及癌旁组织(15.2%),差异有统计学意义(P值均<0.05).SARP2基因CpG岛1区甲基化具有较好的胰腺癌特异性.胰腺癌SARP2基因CpG岛1区CpG位点甲基化与性别、年龄、诱因、肿瘤大小、肿瘤分级、分期、转移无关(P值均>0.05),但肿瘤直径较大者及分化程度较高者具有SARP2基因高甲基化趋势.结论 胰腺癌SARP2基因第一外显子区基因CpG岛甲基化分布具有不均衡性,部分CpG位点高甲基化具有胰腺癌特异性,可作为胰腺癌基因诊断的靶点,且与一些临床生物学特征有关,可能对胰腺癌预后评估有一定价值.     

胰腺癌细胞系BxPC3及胰腺癌组织Ras相关区域家族1A启动子CpG岛的甲基化状态

目的 检测Ras相关区域家族1A(Ras association domain family 1A,RASSF1A)在胰腺癌细胞株BxPC3及胰腺癌组织中的甲基化状态,探讨其启动子异常甲基化在胰腺癌发病机制中的可能作用.方法 采用结合重亚硫酸盐的限制性内切酶法(combined bisulfite restriction analysis,COBRA)检测胰腺癌细胞株BxPC3、5例正常胰腺组织、13对胰腺癌及相应癌旁正常胰腺组织中RASSF1A启动子CpG岛的甲基化状态,计算其甲基化率.以甲基化酶抑制剂5-Aza-dC(5-Aza-2-deoxycitydine)处理BxPC3,观察处理前后甲基化率变化情况及RASSF1A mRNA表达变化.结果 在BxPC3细胞株中,RASSF1A启动子的CpG岛甲基化率为62.90%;正常胰腺、癌旁及癌组织中平均分别为9.14%、53.79%和55.82%.与正常胰腺组织相比,胰腺癌旁及癌组织的RASSF1A启动子甲基化率明显增高(P值<0.01),而癌旁及癌组织之间无明显差异(P>0.05).BxPC3经5-Aza-dC处理后,RASSF1A的CpG岛甲基化率显著下降至42.50%(P<0.05),同时RASSF1A mRNA表达增强.结论 RASSF1A启动子CpG岛异常甲基化是胰腺癌发生发展中的早期事件,可能参与胰腺癌的发病过程.     

特异性PCR法检测胰腺癌p16基因甲基化改变

目的探讨胰腺癌 p16基因启动子区5'CpG岛甲基化改变的特点及其与临床病理特征的关系.方法应用甲基化特异性PCR法进行甲基化检测.结果 14/36例胰腺癌标本的p16基因启动子区5'CpG岛检测到甲基化,甲基化频率为38.9%,5例癌旁组织、1例正常胰腺组织、7例慢性胰腺炎及2例胰腺粘液性囊腺瘤未发现相应区域的甲基化.结论 p16基因启动子区5'CpG岛甲基化是胰腺癌p16基因失活的机制之一,是胰腺癌细胞区别与正常细胞的分子事件.检测p16基因甲基化可能有助于胰腺癌的诊断及鉴别诊断.     

外周血SARP2基因甲基化检测对胰腺癌的诊断价值

目的 探讨胰腺癌患者外周血DNA中SARP2基因甲基化对胰腺癌的诊断价值.方法 收集12例原发性胰腺癌、10例慢性胰腺炎和6例健康志愿者外周静脉血,提取血清游离DNA,经亚硫酸氢盐修饰后,行SARP2基因第一外显子区域的BSP扩增和测序.结果 12例胰腺癌外周血DNA、10例慢性胰腺炎外周血DNA中分别有10例(83%)和4例(40%)检测出明显的SARP2基因甲基化改变.胰腺癌患者外周血中SARP2基因第一外显子区CpG位点甲基化率为16.8%;慢性胰腺炎患者的甲基化率为10.4%,健康志愿者为2.2%.3组间的SARP2 CpG岛甲基化率差别非常显著(P<0.01或P<0.05).结论 胰腺癌患者外周血DNA中可以检测到SARP2甲基化改变,SARP2甲基化的检测对胰腺癌的诊断可能有潜在的临床价值.     

IRX1在胰腺癌中的表达及其启动子区甲基化状态

目的 检测胰腺癌的易洛魁族同源盒基因(IRX1)的表达及其启动子区的甲基化状态,探讨两者间的相关性.方法 采用实时PCR法检测12例胰腺癌组织及6株胰腺癌细胞株的IRX1 mRNA 表达.基因序列分析IRX1基因启动子区结构.应用甲基化抑制剂5-氮杂-2＇-脱氧胞苷(5-Aza-dC)处理胰腺癌细胞,采用甲基化特异性PCR(MSP)、非甲基化特异性PCR (USP)及实时PCR检测处理前后IRX1启动子甲基化状态和IRX1 mRNA表达.结果 胰腺癌组织IRX1 mRNA的表达量为0.31±0.11,显著低于癌旁正常胰腺组织的1.05±0.32(P ＜0.01).胰腺癌细胞AsPCl、BxPC3、Capan-2、PANC1、PaTu8988和SW1990的IRX1 mRNA表达量分别为0.36±0.08、0.34±0.16、0.37±0.11、0.25±0.06、0.31±0.04、0.36±0.02,均显著低于人肾上皮293细胞的1.03±0.28(P＜0.05或＜0.01).IRX1基因启动子区富含CpG岛.各胰腺癌细胞株IRX1基因启动子CpG岛对应位点均有甲基化,经5-Aza-dC处理后甲基化状态得以逆转,IRX mRNA的表达也得以恢复.结论 胰腺癌的IRX1 mRNA表达下降,与其IRX1基因启动子区CpG岛高甲基化状态相关.     

胰液中人Hedgehog相互作用蛋白基因CpG岛甲基化状态及意义

结果 胰腺癌、CP及对照组患者胰液中HHIP基因CpG岛甲基化阳性率分别为54.8%(17/31)、2.8%(1/36)和6.7%(1/15),胰腺癌组的甲基化阳性率显著高于其他两组(P＜0.01).测序结果显示胰腺癌的HHIP基因有8个CpG位点发生甲基化,而CP及对照组的HHIP基因CpG位点未发生甲基化.结论 胰腺癌患者胰液中的HHIP基因CpG岛发生高甲基化,检测胰液中HHIP基因甲基化状态可能作为胰腺癌诊断的靶点.     

特异性PCR法检测胰腺癌p16基因甲基化改变

目的：探讨胰腺癌p16基因启动子区5'CpG岛甲基化改变的特点及其与临床病理特征的关系。方法：应用甲基化特异性PCR法进行甲基化检测。结果：14／36例胰腺癌标本的p16基因启动子区5'CpG岛检测到甲基化，甲基化频率为38．9％，5例癌旁组织、1例正常胰腺组织、7例慢性胰腺炎及2例胰腺粘液性囊腺瘤未发现相应区域的甲基化。结论：p16基因启动子区5'CpG岛甲基化是胰腺癌p16基因失活的机制之一，是胰腺癌细胞区别与正常细胞的分子事件。检则p16基因甲基化可能有助于胰腺癌的诊断及鉴别诊断。     

胃癌RASSF1A基因启动子CpG岛甲基化与DNMT1表达的意义

目的探讨RAS相关区域家族1A（RASSF1A）基因启动子CpG岛甲基化和DNA甲基转移酶1（DN-MT1）的表达与胃癌发生的关系。方法运用甲基化特异性聚合酶链反应和免疫组织化学方法检测胃癌癌旁正常组织和癌组织RASSF1A基因启动子CpG岛甲基化发生率及DNMT1的表达情况。结果癌旁正常组织中RASSF1A基因启动子CpG岛甲基化发生率、DNMT1阳性表达率显著低于相应癌组织（P均〈0.01）。RASSF1A启动子CpG岛甲基化患者DNMT1阳性表达率与非甲基化患者比较无统计学差异（P〉0.05）。结论RASSF1A基因启动子区CpG岛甲基化和DNMT1的高表达可能与胃癌发生有一定关系。     

SOCS-3基因在结肠癌中的表达及其甲基化测定

目的通过对SOCS-3基因在结肠癌和癌旁组织中的表达及其启动子甲基化状态的测定,探讨其与结肠癌发生、发展和转移的关系。方法收集40例结肠癌患者的肿瘤标本、20例癌旁组织及10例正常结肠组织,运用甲基化特异性PCR测定SOCS-3基因CpG岛甲基化状态,同时运用实时定量PCR分析SOCS-3基因在结肠癌组织中的表达水平。结果40例结肠癌组织中有34例(85%)存在SOCS-3基因CpG岛的异常甲基化,癌旁组织中有2例(10%),而正常结肠组织中未检测到SOCS-3基因CpG岛的异常甲基化;结肠癌组织中SOCS-3基因CpG岛甲基化组与无甲基化组相比,其SOCS-3基因的相对表达量明显减少(P0.05),表明SOCS-3基因CpG岛甲基化可导致SOCS-3基因表达降低。SOCS-3基因CpG岛甲基化与性别、年龄无关(P0.05),而与肿瘤病理分级、TNM分期有关(P0.05)。结论结肠癌中存在SOCS-3基因CpG岛异常甲基化,且CpG岛的甲基化导致其基因表达降低。SOCS-3基因CpG岛甲基化可能参与了结肠癌的发生、发展和转移。     

人胃癌Runx3基因CpG岛甲基化的关键位点和演进

目的:研究人胃癌Runx3基因CpG岛甲基化的关键位点和演进.方法:应用MSP法和Western blot法分别检测26例人胃癌和相应的癌旁正常组织标本Runx3基因CpG岛从5'区向转录起始点方向连续6个位点的甲基化状态和Runx3蛋白的表达.结果:根据MSP的结果计算出上述连续6个位点的甲基化阳性率,结果随着向转录起始点方向的演进,各位点甲基化的阳性率逐渐降低,胃癌组和癌旁组从第3位点开始出现差异,至第5和第6位点差异显著(P＜0.05);按照胃癌分化程度分组,低分化组与高分化组在3-6位点差异显著(P＜0.05).胃癌组与癌旁组Runx3蛋白表达水平(0.499±0.106 vs 0.721±0.080)以及低分化组与高分化组(0.437±0.053 vs 0.617±0.073)Runx3蛋白表达水平均存在显著差异(P＜0.01).结论:人胃癌Runx3基因CpG岛的甲基化从5'区向转录起始点方向演进,甲基化的演进与肿瘤的分化程度有关;转录起始点部位可能为Runx3基因甲基化的关键位点.     

MUC2基因甲基化在胰腺癌细胞株、胰腺癌患者外周血中的检测及意义

目的 检测MUC2基因在胰腺癌细胞株、胰腺癌患者外周血中的甲基化情况,探讨MUC2基因甲基化对胰腺癌早期诊断的价值.方法 收集长海医院消化内科实验室保存的人胰腺癌细胞系SW1990、ASPC、PANC1、BxPC3、PaTu8988、CFPAC1及40例胰腺癌、15例慢性胰腺炎患者和25例正常对照者外周血标本,应用甲基化敏感性限制性内切酶(methylation-sensitive restriction endonuelease,MS-RE)为基础的PCR法检测MUC2基因甲基化.结果 人胰腺癌细胞系PANC1、BxPC3、PaTu8988未发生MUC2基因甲基化;ASPC、CFPAC1、SW1990胰腺癌细胞系发生MUC2基因甲基化.外周血标本中,40例胰腺癌标本甲基化率为40.0%(16例),15例慢性胰腺炎无甲基化,25例正常对照甲基化率4.0%(1例).胰腺癌与慢性胰腺炎、正常对照之间的甲基化率有显著差异(P＜0.01).外周血标本MUC2基因启动子CpG岛甲基化检测诊断胰腺癌的敏感性为40%、特异性为97.5%、诊断准确性68.8%、阳性预测值94.1%、阴性预测值61.9%.结论 用甲基化限制性酶切PCR法对外周血进行MUC2基因启动子区高甲基化检测可望成为新的胰腺癌诊断的重要实验室辅助手段.     

Differential methylation landscape of pancreatic ductal adenocarcinoma and its precancerous lesions

Background: Pancreatic cancer is one of the most lethal diseases with an incidence almost equal to the mortality. In addition to having genetic causes, cancer can also be considered an epigenetic disease. DNA methylation is the premier epigenetic modification and patterns of aberrant DNA methylation are recognized to be a common hallmark of human tumor. In the multistage carcinogenesis of pancreas starting from precancerous lesions to pancreatic ductal adenocarcinoma(PDAC), the epigenetic changes play a significant role. Data sources: Relevant studies for this review were derived via an extensive literature search in Pub Med via using various keywords such as pancreatic ductal adenocarcinoma, precancerous lesions, methylation profile, epigenetic biomarkers that are relevant directly or closely associated with the concerned area of our interest. The literature search was intensively done considering a time frame of 20 years(1998–2018). Result: In this review we have highlighted the hypermethylation and hypomethylation of the precancerous PDAC lesions(pancreatic intra-epithelial neoplasia, intraductal papillary mucinous neoplasm, mucinous cystic neoplasm and chronic pancreatitis) and PDAC along with the potential biomarkers. We have also achieved the early epigenetic driver that leads to progression from precancerous lesions to PDAC. A bunch of epigenetic driver genes leads to progression of precancerous lesions to PDAC( pp ENK, APC, p14/5/16/17, h MLH1 and MGMT) are also documented. We summarized the importance of these observations in therapeutics and diagnosis of PDAC hence identifying the potential use of epigenetic biomarkers in epigenetic targeted therapy. Epigenetic inactivation occurs by hypermethylation of Cp G islands in the promoter regions of tumor suppressor genes. We listed all hyper-and hypomethylation of Cp G islands of several genes in PDAC including its precancerous lesions. Conclusions: The concept of the review would help to understand their biological effects, and to determine whether they may be successfully combined with other epigenetic drugs. However, we need to continue our research to develop more specific DNA-demethylating agents, which are the targets for hypermethylated Cp G methylation sites.     

胃癌TIMP3基因启动子甲基化及其蛋白表达的研究

目的:探讨组织金属蛋白酶抑制因子-3(tissue inhibitor of metalloproteinase 3,TIMP3)基因启动子甲基化与其蛋白表达的相关性,并分析 TIMP3基因CpG岛异常甲基化与胃腺癌及其临床病理特征的关联性．方法:应用甲基化特异性PCR(MSP)技术和免疫组织化学方法分别检测78例患者的胃正常黏膜组织、胃癌组织及转移淋巴结中,TIMP3 基因启动子甲基化和蛋白表达情况．结果:胃正常黏膜组织、早期、进展期胃癌组织和转移淋巴结中TIMP3基因启动子均有甲基化修饰,其阳性率分别为35．9％(28／78); 85．0％(17／20),89．7％(52／58);转移淋巴结 100％(78／78)．胃癌组TIMP3基因启动子甲基化率明显高于胃正常黏膜组(尸<0．05)．胃正常黏膜组织TIMP3蛋白表达全部为阳性(100％), 20例早期胃癌中,6例阳性(30％),58例进展期胃癌中,2例阳性(3．4％),在转移淋巴结中全部不表达(0％)．胃癌70例蛋白表达阴性的标本中,64例TIMP3基因启动子甲基化阳性 (91．4％),TIMP3蛋白表达与启动子甲基化呈明显负相关(P<0．01)．结论:启动子区CpG岛高甲基化是胃癌组织中TIMP3基因表达失活的主要机制,可能成为胃癌分子诊断与病期评估的标志之一．     

Mucin4在胰腺癌组织中的表达及其临床意义

目的研究胰腺癌组织中Mucin 4(MUC4)的表达及其与临床病理参数间的关系。方法(1)采用ABC免疫组织化学方法检测35例胰腺癌、12例胰腺良性肿瘤及5例慢性胰腺炎组织MUC4的表达。(2)通过RT-PCR方法检测12例胰腺癌组织、癌旁胰腺组织以及2株胰腺癌细胞株MUC4 mRNA的表达。结果 (1)35例胰腺癌组织中MUC4蛋白阳性表达24例,12例胰腺良性肿瘤中MUC4蛋白阳性表达2例,5例慢性胰腺炎组织中MUC4蛋白均为阴性。MUC4蛋白胰腺癌组织中阳性表达率显著高于胰腺良性肿瘤及慢性胰腺炎组织(P<0．05)。MUC4在胰腺癌组织中阳性表达率与肿瘤的部位、淋巴结转移、临床分期无关(P>0．05)。(2)12例胰腺癌组织中MUC4 mRNA表达阳性有6例,癌旁组织中无阳性表达,2株胰腺癌细胞株均呈阳性表达。MUC4 mRNA在胰腺癌组织中阳性表达率显著高于癌旁组织(P<0．05)。结论 MUC4在胰腺癌中有较高的表达率,检测其表达可能有助于胰腺癌的诊断,并可作为鉴别胰腺癌和慢性胰腺炎一个重要参考指标。     

High-resolution mapping of DNA hypermethylation and hypomethylation in lung cancer

Changes in DNA methylation patterns are an important characteristic of human cancer. Tumors have reduced levels of genomic DNA methylation and contain hypermethylated CpG islands, but the full extent and sequence context of DNA hypomethylation and hypermethylation is unknown. Here, we used methylated CpG island recovery assay-assisted high-resolution genomic tiling and CpG island arrays to analyze methylation patterns in lung squamous cell carcinomas and matched normal lung tissue. Normal tissues from different individuals showed overall very similar DNA methylation patterns. Each tumor contained several hundred hypermethylated CpG islands. We identified and confirmed 11 CpG islands that were methylated in 80-100% of the SCC tumors, and many hold promise as effective biomarkers for early detection of lung cancer. In addition, we find that extensive DNA hypomethylation in tumors occurs specifically at repetitive sequences, including short and long interspersed nuclear elements and LTR elements, segmental duplications, and subtelomeric regions, but single-copy sequences rarely become demethylated. The results are consistent with a specific defect in methylation of repetitive DNA sequences in human cancer.     

Hedgehog通路中Ptchl基因在人胃癌中高甲基化状态分析

目的 研究Hedgehog通路中Ptchl基因表达及其甲基化状态在胃癌发生中的变化.方法 分别抽提10例胃癌组织及其癌旁＞3 cm组织和胃癌细胞株AGS的总RNA和基因组DNA.实时定量逆转录多聚酶链反应(QRT-PCR)检测Ptch基因的mRNA表达.应用软件分析Ptchl基因5'调控序列的CpG岛状态,亚硫酸氢盐测序PCR(BSP)分析甲基化水平.结果 对Ptchl mRNAla转录体转录起始位点(计为0点)上游-3950 bp和下游+2050 bp进行CpG岛分析,发现存在两个CpG岛,第1个为-1139 bp～+860 bp,第2个为+875 bp～+1692 bp.以第1个CpG岛的-870 bp～+229 bp区段内的19个CpG位点的BSP测序结果显示,胃癌细胞株AGS全部发生甲基化,胃癌组织中甲基化程度为16%～100%,平均64%±32%,癌旁组织甲基化程度为0%～42%,平均13%±14%,两组问差异有统计学意义(P＜0.05).Spearman秩相关分析发现,Ptchl基因甲基化同其表达呈负相关(r=-0.558,P=0.011).结论 Ptchl基因高甲基化参与胃癌的发生,可能为胃癌新的肿瘤标志物.     

胰腺导管腺癌、慢性胰腺炎及正常胰腺组织中胰腺上皮内瘤变的比较研究

目的探讨胰腺导管腺癌、慢性胰腺炎和正常胰腺组织中各级别PanIN的发生率以及与临床病理学参数间的关系。方法回顾性研究长海医院2001年1月-2003年12月间外科切除和同期尸检获得的250例胰腺标本中PanIN的发生情况,并联系临床病理指标进行相关分析。结果250例胰腺标本中,有156例存在PanIN病变,发生率62.4％。其中,胰腺导管腺癌、慢性胰腺炎和正常胰腺组织中PanIN的发生率分别为75.6％、46.0％和30.0％,胰腺导管腺癌PanIN发生率明显高于慢性胰腺炎及正常胰腺组织(P<0.01);慢性胰腺炎中高级别PanIN发生率明显高于正常胰腺组织(P<0.05)。PanIN-3仅在胰腺导管腺癌和慢性胰腺炎中见到。胰腺导管腺癌中,有烟酒嗜好和(或)糖尿病者高级别PanIN的发生率53.7％,明显高于对照组29.4％(P<0.01)。PanIN的发生率以61-70岁年龄组为最高。结论胰腺导管腺癌、慢性胰腺炎和正常胰腺组织中PanIN的发生率逐渐增加,程度逐渐加重,支持胰腺癌发生的分子模型。     

谐波造影增强内镜超声对胰腺癌与局灶型胰腺炎的鉴别诊断价值

目的 探讨谐波造影增强内镜超声（CH-EUS）对胰腺癌与局灶型胰腺炎鉴别诊断的价值.方法 选择上海长海医院经CH-EUS检查诊断为胰腺癌和局灶型胰腺炎患者,以内镜超声引导下细针穿刺术（EUS-FNA）或组织病理学及6个月以上随访结果作为最终诊断,评价CH-EUS对胰腺癌与局灶型胰腺炎的鉴别诊断效果,并分析两者的CH-EUS图像特征.结果 共有56例患者入选本研究,平均年龄（56±12）岁.最终诊断局灶型胰腺炎21例,胰腺癌35例.CH-EUS显示的正常胰腺组织增强时相与周围组织同步,达峰显著,呈均匀等增强.胰腺癌增强时相多数晚于正常胰腺组织,消退快,达峰不显著,94.3％ （33/35）的病灶内部呈不均匀低增强,1例高增强者为癌肿内部有较多高强化的分隔,1例均匀等增强者为慢性胰腺炎癌变.局灶型胰腺炎增强多数表现为与正常胰腺组织等时相,达峰显著,76.2％（16/21）呈均匀等增强.CH-EUS鉴别局灶型胰腺炎与胰腺癌的灵敏度为90.5％,特异度97.1％,准确率94.6％,阳性预测值95.0％,阴性预测值94.4％,阳性似然比31.7,阴性似然比0.1.结论 CH-EUS可以实时、清晰地显示胰腺肿瘤的血供情况,能对胰腺癌和胰腺局灶型炎症的鉴别诊断提供有力帮助,是一种有价值的临床诊断新方法.