雌激素和他莫昔芬对大鼠动脉血管平滑肌细胞雌激素受体及表型蛋白的影响

目的 探讨雌激素(E2)和他莫昔芬(TAM)对血管平滑肌细胞(VSMC)雌激素受体(ERs)及表型蛋白的影响.方法 体外培养大鼠胸主动脉VSMC,应用浓度为10-9、10-8和10-7 mmol/L的17β-雌二醇和浓度为10-8、10-7和10-6 mmol/L的TAM作用于VSMC 24 h.RT-PCR法检测实验后VSMC ERα、ERβ、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和骨桥蛋白(OPN) mRNA表达情况.     

雷洛昔芬对去卵巢大鼠血压的影响

目的 探讨雷洛昔芬对去卵巢大鼠血压的影响.方法 40只12周龄雌性SD大鼠随机均分为5组去卵巢组、假手术对照组、雌激素组(倍美力,1 mg·kg-1·d-1)、小剂量雷洛昔芬组(易维特,1 mg·kg-1·d-1)和大剂量雷洛昔芬组(易维特,3 mg·kg-1·d-1),测量治疗前、后各组血压的变化.结果 去卵巢组血清雌二醇水平显著低于假手术对照组,雌激素或雷洛昔芬治疗后雌二醇水平都上升(P＜0.01).卵巢切除前5组大鼠之间的收缩压差异无统计学意义,3个月后去卵巢组收缩压明显升高,高于治疗前及治疗后其他各组收缩压的水平.雌激素或雷洛昔芬治疗后,收缩压水平下降,低于去卵巢组[治疗后去卵巢组(128.46±15.78)mm Hg,假手术对照组(104.48±15.03)mm Hg,雌激素组(106.83±13.52)mm Hg,小剂量雷洛昔芬组(109.55±11.23)mm Hg,大剂量雷洛昔芬组(107.57±17.56)mm Hg,P＜0.01].结论 雷洛昔芬可降低去卵巢大鼠收缩压水平,有助于降低绝经后的心血管危险.     

激素替代治疗对去卵巢大鼠动脉雌激素受体表达的影响

目的　研究雌、孕激素替代治疗时去卵巢大鼠动脉壁雌激素受体 (ER)的表达。　方法　将 40只成年雌性大鼠随机分为 4组 :假手术对照组、去卵巢组、去卵巢 雌激素治疗组、去卵巢 雌孕激素治疗组。给予正常饮食 ,2个月后处死大鼠。用放免法检测血清中雌二醇和孕酮浓度 ,用放射配体结合分析法检测大鼠主动脉ER的含量。　结果　 (1)正常雌性成年大鼠 (假手术对照组 )主动脉中存在ER ,解离常数 (Kd)为 (3 0± 0 7)× 10 -9,最大结合容量 (Bmax)为 (37 4± 7 9)pmol/g蛋白 ;(2 )去卵巢组大鼠动脉ER的Bmax〔(10 4± 5 9)pmol/g蛋白〕显著低于假手术组 (P <0 0 1) ;(3)去卵巢 雌激素治疗组与去卵巢 雌孕激素治疗组动脉ER的Bmax差别无显著性〔(分别为 (40 7± 7 5 )和(35 1± 4 5 )pmol/g蛋白〕 ,二者都显著高于去卵巢组 ;各组间Kd值差别无显著性。　结论　去卵巢2个月后大鼠主动脉的ER表达显著减少 ,补充雌激素或补充雌、孕激素能使去卵巢大鼠主动脉ER的含量维持在正常水平 ,这可能是雌激素对绝经后妇女心血管保护作用的机制之一。     

烯丙雌醇与戊酸雌二醇对反复流产患者子宫内膜雌孕激素受体的作用观察

用免疫组化方法检测57例不明原因反复流产患者的胚胎种植期子宫内膜雌孕激素情况,发现28例受体表达不良,其中孕激素受体缺乏19例,雌激素受体缺乏16例,雌孕激素受体均缺乏10例.进行烯丙雌醇与戊酸雌二醇联合治疗,治疗后复查28例患者中孕激素受体缺乏者6例,雌激素受体缺乏者5例,雌孕激素受体均缺乏者3例.治疗前后比较,P＜0.01.认为烯丙雌醇与戊酸雌二醇联合对反复流产患者胚胎种植期子宫内膜雌孕激素受体的诱导有明显作用.     

雌激素对老年雌鼠阴道NOS及雌激素受体的影响

目的 研究雌激素对老年雌性大鼠阴道组织一氧化氮合酶(NOS)活性及雌激素受体(ER)亚型的影响,探讨雌激素作用于女性性功能的可能机制.方法 SD雌性大鼠分三组:青年组(3月龄)、老年组(20月龄)、苯甲酸雌二醇治疗组,比色法检测阴道组织NOS的活性,免疫组化法检测ER α和β的表达.结果 老年大鼠阴道NOS活性下降,而阴道上皮细胞ERα、平滑肌细胞ERα和ERβ表达增加,雌激素治疗能逆转这些变化.大鼠血清雌二醇浓度与阴道组织NOS活性呈正相关,两者均与阴道上皮细胞ERα、平滑肌细胞ERα和ERβ呈负相关,而与大鼠阴道上皮细胞ERβ、基质纤维细胞ERα和ERβ无相关性.结论 雌激素可以通过调节阴道NOS维持女性性功能,这一过程与阴道上皮细胞ERα、平滑肌细胞ERα和ERβ密切相关.     

雌激素替代治疗对绝经后妇女血管内皮舒张功能的影响

为了探讨雌激素抗动脉粥样硬化和降低冠心病发病危险的机制 ,采用无创性高分辨超声法观察雌激素替代治疗对绝经后妇女血管内皮依赖性舒张功能的影响 ,于治疗前后测量血清雌二醇、一氧化氮和血脂水平。结果发现 ,绝经后妇女较绝经前妇女血清雌二醇和一氧化氮下降 (P <0 .0 0 1) ,肱动脉血流介导的舒张反应较绝经前明显下降 (3.84 %± 2 .18%比 10 .0 5 %± 3.18% ,P <0 .0 0 1) ;短期雌激素替代治疗后雌二醇和一氧化氮水平较治疗前极显著升高 (P <0 .0 0 1) ,肱动脉血流介导的舒张反应也显著改善 (9.16 %± 3.0 2 % ,P <0 .0 0 1) ,而雌激素替代治疗并未使血脂发生明显改善 (P >0 .0 5 )。相关分析发现肱动脉血流介导的舒张反应与雌二醇和一氧化氮呈正相关(r值分别为 0 .5 6 4和 0 .72 9,P <0 .0 0 1) ,与总胆固醇呈负相关 (r为 - 0 .36 9,P <0 .0 5 )。结果提示短期雌激素替代治疗可明显改善绝经后妇女内皮依赖性舒血管功能障碍 ,且与血脂的改善无关 ,可能与雌激素的直接血管保护作用有关。     

雌激素通过雌激素受体上调载脂蛋白M表达

目的 研究雌激素对载脂蛋白M的影响.方法 采用RT-PCR法检测不同浓度、不同作用时间雌激素处理HepG2细胞以及雌激素和雌激素受体拮抗剂共同处理后,HepG2细胞载脂蛋白M mRNA的表达:将SD雌性大鼠分为5组:去卵巢组(0VX)；假手术组(Sham)；去卵巢+苯甲酸雌二醇(EB)组(OVX+EB)；正常大鼠组(对照组)；正常大鼠+EB组(EB组),术后给予不同剂量的EB.常规生化检测血液标本中血清甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇(LDL)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL),RT-PCR和Western印迹检测鼠apoM表达.结果 雌激素上调HepG2细胞载脂蛋白M的表达,这种效应呈剂量和时间依赖性,可以被ER拮抗剂抑制.术后第1个月,OVX+EB组和EB组大鼠apoM mRNA水平以及血清apoM 、HDL、总胆固醇、甘油三酯和LDL水平分别较OVX组和对照组大鼠有显著性升高(P＜0.05).结论 雌激素通过ER途径上调载脂蛋白M的表达.     

雌激素通过受体介导的通路影响大鼠心脏心钠素表达

目的研究雌激素对卵巢切除大鼠心脏雌激素受体(ER)α和β的调控及对血压、心率、心肌细胞心钠素(ANP)基因表达、合成和释放的影响。方法成年雌性Wistar大鼠随机分成5组假手术组,卵巢切除组和卵巢切除不同剂量17β-雌二醇组(80、800、8000ng·g-1·d-1)。测量大鼠收缩期血压(SBP)、心率;采用半定量RT-PCR和Western印迹方法,探讨不同剂量的17β-雌二醇对卵巢切除大鼠心脏ERα和ERβmRNA、ER蛋白质的表达调控及对ANPmRNA表达的影响;放射免疫方法测定血浆和心房组织ANP含量。结果超生理剂量的17β-雌二醇能降低卵巢切除大鼠SBP,减慢心率;成年雌性大鼠心脏ERαmRNA高于ERβmRNA的表达水平,而心房ERαmRNA表达又明显超过心室;卵巢切除减少心房ERαmRNA和蛋白质的表达,下调ANPmRNA,使心房组织和血浆ANP含量明显降低[(121±19)ng/mg组织vs(184±12)ng/mg组织,(196±21)ng/Lvs(288±36)ng/L,P<0.01];生理剂量17β-雌二醇能逆转上述改变。随剂量增加,17β-雌二醇的这种作用在一定程度上呈剂量依赖性关系。但卵巢切除和17β-雌二醇替代并不影响心脏ERβmRNA、心室ERαmRNA表达。结论超生理剂量雌激素可降低卵巢切除大鼠SBP,心率;ERα的高水平表达说明ERα是雌激素对心脏调控的优势受体;雌激素对心脏作用的主要靶部位是心房;雌激素促进心房肌细胞ANPmRNA的表达、合成和释放,通过受体依赖的ANP介导的通路发挥作用。     

瘦素对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的探讨leptin对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞的增殖影响,并研究leptin b型受体在VSMC中的表达.方法本文主要采用培养的自发性高血压大鼠(SHR)血管平滑肌细胞(VSMC),研究Leptin受体b(OB-Rb)的mRNA的表达,以及对平滑肌细胞增殖的影响.结果 OB-Rb的mRNA仅在SHR大鼠的平滑肌细胞表达,而没有在正常对照大鼠(WKY)的平滑肌细胞中表达.Leptin仅仅可以刺激SHR大鼠VSMC的DNA合成率的增加,而对WKY大鼠的VSMC则无作用.同样,Leptin对VSMC细胞增殖的作用,也仅仅在SHR大鼠可以发现,而WKY大鼠则没有.结论上述研究的结果显示;高血压时,Leptin是一种对血管平滑肌细胞的增殖因子,也许在高血压的发生、发展过程中起重要的作用.     

更年甘露饮加小剂量雌激素对去势大鼠心血管系统的影响

目的通过观察更年甘露饮加小剂量雌激素对去势大鼠心血管系统的影响，探讨一种防治女性绝经后心血管疾病的新方法。方法雌性大鼠去势后预防用药3个月，检测各组大鼠血清激素水平、血脂水平，胸主动脉雌激系受体α、β的表达。结果小剂量雌激素无明显改善作用，更年甘露饮加小剂量雌激素、常量雌激素及单纯更年甘露饮均能改善血清激素及血脂水平，提高胸主动脉雌激系受体α、β的表达，其中更年甘露饮效果最弱。而常量雌激素使子宫内膜明显增生。结论更年甘露饮加小剂量雌激素改善去势大鼠血清激素及血脂水平，提高胸主动脉雌激素受体α、β的表达与常量雌激素相似，对子宫内膜无明显增生作用，可作为一种防治女性绝经期后心血管系统疾病的新方法。     

瘦素对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 探讨leptin对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞的增殖影响，并研究leptin b型受体在VSMC中的表达。方法 本文主要采用培养的自发性高血压大鼠（SHR）血管平滑肌细胞（VSMC），研究Leptin受体b(OB-Rb)的mRNA的表达，以及对平滑肌细胞增殖的影响。结果 OB－Rb的mRNA仅在SHR大鼠的平滑肌细胞表达，而没有在正常对照大鼠（WKY）的平滑肌细胞中表达。Leptin仅仅可以刺激SHR大鼠VSMC的DNA合成率的增加而对WKY大鼠的VSMC则无作用。同样，Leptin对VSMC细胞增殖的作用，也仅仅在SHR大鼠可以发现，而WKY大鼠则没有。结论 上述研究的结果显示；高血压时，Leptin是一种对血管平滑肌细胞的增殖因子，也许在高血压的发生，发展过程中起重要的作用。     

Dickkopf-1对SD大鼠血管平滑肌细胞增殖、迁移及表型转化的影响

目的观察Dickkopf(DKK)-1对SD大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖、迁移及表型转化的影响。方法取大鼠主动脉贴块培养VSMC,不同浓度外源DKK-1分别作用于VSMC,然后采用cck8和transwell试验分别检测DKK-1对大鼠VSMC增殖及迁移的影响。RT-PCR和Western印迹分别用于检测VSMC去分化表型标志基因骨桥蛋白(OPN)mRNA和蛋白表达。结果外源性DKK-1干预后,随着作用时间延长,DKK-1浓度增大,细胞增殖率降低,迁移能力减低;还可使VSMC发生表型转化,而在这个过程中OPN mRNA及蛋白表达水平明显降低。结论外源DKK-1能抑制大鼠VSMC增殖、迁移能力,并具有剂量和时间依赖性,此外,还可使VSMC从合成型向收缩型转化。     

雌激素替代治疗时大鼠动脉雌激素受体及一氧化氮合酶活性的变化

目的观察激素替代治疗时大鼠动脉雌激素受体(ER)的表达及一氧化氮合酶(NOS)的活性。方法建立大鼠雌激素替代治疗模型,用放射配体结合分析法检测主动脉ER的含量,血红蛋白还原酶法检测主动脉中NOS的活性：结果卵巢切除去势组大鼠动脉ER的结合容量及NOS活性显低于假手术组;切除卵巢后补充雌激素鼠动脉ER的结合容量及NOS活性都显高于单纯卵巢切除去势组。结论雌性大鼠去势2个月后,主动脉表达ER显减少,NOS活性显减低,补充适量雌激素能使去势大鼠动脉NOS的活性显增强,ER的含量维持在正常水平。这可能是雌激素对绝经后妇女心血管保护作用的重要机制。     

三羟异黄酮对去卵巢大鼠主动脉雌激素β受体和原癌基因c-fos表达的影响

目的观察三羟异黄酮(GST)对去卵巢大鼠主动脉雌激素β受体(ERβ)和原癌基因c-fos表达的影响。方法将成年雌性大鼠40只随机分为4组:假手术对照组(A组);去卵巢组(B组);去卵巢+雌二醇组(C组);去卵巢+GST组(D组)。给药8周后处死大鼠。免疫组化法检测主动脉中ERβ和原癌基因c-fos的表达。结果1)去卵巢手术大鼠主动脉ERβ的表达明显降低,GST与雌二醇明显增加去卵巢大鼠主动脉ERβ的表达。2)去卵巢手术增加大鼠主动脉原癌基因c-fos的表达,但GST与雌二醇能阻止c-fos表达增加。结论GST对血管ERβ的表达具有调节作用;GST可抑制血管平滑肌原癌基因c-fos的表达。这可能是植物雌激素防止动脉粥样硬化,发挥心血管保护作用的机理之一。     

雌二醇和孕酮对人成骨细胞胰岛素受体底物基因表达的时间与剂量依赖性

目的观察雌二醇和孕酮对人成骨细胞和人成骨肉瘤MG63细胞胰岛素受体底物(IRS)mRNA表达的影响。探讨雌、孕激素参与骨代谢的作用机制。方法用半定量RTPCR检测人成骨细胞和人成骨肉瘤细胞IRS1、IRS2mRNA的表达量。结果雌二醇或孕酮均诱导MG63细胞IRS2mRNA的表达上调,具有剂量依赖性(P<0.05)和时效依赖性(P<0.05)。其中分别以10-8mol/L的雌二醇干预24h和10-8mol/L的孕酮干预12h作用最明显,分别为对照组的(421±68)%和(327±54)%(均P<0.01)。雌二醇或孕酮共同干预进一步促进MG63细胞和人成骨细胞IRS2mRNA表达的上调,分别为对照组的(496±54)%和(452±58)%(均为P<0.01)。雌二醇和孕酮不影响人成骨细胞和MG63细胞IRS1mRNA的表达(P>0.05)。结论雌二醇或孕酮均可使人成骨细胞和MG63细胞的IRS2mRNA表达上调,且存在剂量与时间依赖性;但不影响IRS1mRNA的表达。     

瘦素对大鼠主动脉血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨瘦素对大鼠主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和凋亡的影响。方法体外培养大鼠的主动脉VSMC,按照不同浓度瘦素的处理方法将细胞分为对照组、小剂量组(瘦素40μg/L)、中剂量组(瘦素80μg/L)、高剂量组(瘦素100μg/L)及联合组(瘦素100μg/L+脂联素30mg/L),对照组细胞不做任何处理。孵育24h检测VSMC活性、VSMC凋亡率及增殖细胞核抗原(PCNA)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)mRNA表达水平。结果与对照组比较,小、中、大剂量各组及联合组VSMC的增殖率与PCNA mRNA表达水平明显升高、VSMC凋亡率与caspase-3mRNA表达水平明显降低,差异有统计学意义(P0.05)。小、中、大剂量各组VSMC的增殖率和PCNA mRNA表达水平逐渐升高、VSMC凋亡率和caspase-3mRNA表达水平逐渐降低(P0.05)。中剂量组与大剂量组VSMC的增殖率明显高于联合组,VSMC凋亡率明显低于联合组,差异有统计学意义[(17.9±1.0)%和(19.3±1.0)%vs(16.9±4.0)%,(2.5±0.6)%和(1.5±0.4)%vs(4.0±0.4)%,P0.05]。Spearman相关分析显示,血清瘦素水平与VSMC的增殖呈正相关(r=0.37,P0.05),与VSMC的凋亡率呈负相关(r=-0.19,P0.05)。结论瘦素可以促进平滑肌细胞的增殖,抑制平滑肌细胞凋亡,这一作用可以被脂联素所抑制。     

通脉Ⅰ号对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞AngⅡ、AT1mRNA表达的影响

目的：通过观察通脉Ⅰ号对自发性高血压大鼠(SHR)血管平滑肌细胞(VSMC)AngⅡ、AT1mRNA表达的影响，探讨通脉Ⅰ号对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖的可能机制。方法：细胞培养、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及放射免疫等细胞、分子生物学方法。结果：通脉Ⅰ号较显著抑制VSMC的增殖；15mg／L浓度的通脉Ⅰ号可降低VSMC内AngⅡ的含量，并可显著抑制AngⅡ受体AT1mRNA的表达。结论：通脉Ⅰ号降低AngⅡ受体AT1mRNA的表达可能是其抑制SHR的VSMC增殖机制之一。     

雷洛昔芬对去卵巢大鼠骨组织雌激素受体α表达水平的调节

目的探讨雷洛昔分对雌激素受体α(ER-α)mRNA基因表达的调节作用及其与骨密度(BMD)之间的关系。方法将50只3.5月龄雌性Wistar大鼠分为5组,每组10只。分别为假手术组(S组);双侧卵巢切除(OVX)组(O组);双侧卵巢切除+雌激素治疗组(E组);双侧卵巢切除+雷洛昔芬低剂量组(1.0mg/100g体质量RL组);双侧卵巢切除+雷洛昔芬高剂量组(10mg/100g体质量RH组)。采用灌胃给药。12周后处死动物,提取胫骨骨组织总RNA,以β-actin为内参,RT-PCR扩增检测OVX大鼠ER-α mRNA表达水平,并用双能X线骨密度仪(DEXA)测定股骨BMD。结果手术后12周与O组比较,E组、RL组股骨BMD升高,差异有统计学意义(均P0.01),与S组比较,O组、RH组股骨BMD降低,差异有统计学意义(均P0.01)。S组、E组和RL组大鼠骨组织ER-αmRNA表达水平较O组明显增高(P0.01),术后S组、E组和RL组表达水平差异无统计学意义(P0.05)。结论雷洛昔芬可能通过上调ER-α mRNA基因表达抑制破骨细胞骨吸收,减少骨量丢失。     

PDGF-AA对高血压血管平滑肌细胞钙信号的影响

目的　明确自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞 (SHR VSMC)增殖与血小板源生长因子 -AA(PDGF AA)、PDGF α受体表达的关系及钙信号在其中的作用。方法　在培养的血管平滑肌细胞模型中 ,采用免疫印迹 (Westernblot)、3 H TdR及3 H Leu掺入、荧光探针标记测定单细胞内钙浓度等方法 ,观察不同来源大鼠 (SHR/Wistar)VSMC ,PDGF AA、PDGF α受体和PDGF β受体表达的差异性以及在PDGF AA刺激下 ,VSMC增殖肥大反应、胞内 [Ca2 + ]i变化和钙离子阻断剂 (nimodipine)对其的影响。结果　与Wistar VSMC相比SHR VSMC中PDGF AA、PDGF α受体蛋白表达明显增加 ,而PDGF β受体蛋白表达在SHR VSMC与Wistar VSMC无明显变化。在PDGF AA刺激下 ,增殖细胞核抗原(PCNA)、3 H掺入率及胞内 [Ca2 + ]i浓度在SHR VSMC明显增强 ;钙离子阻断剂 (nimodipine)明显抑制PCNA表达及3 H掺入 ,胞内 [Ca2 + ]i浓度明显下降。结论　自发性高血压大鼠VSMCPDGF A链及其α受体的自发性增高 ,可能是导致SHR VSMC异常增殖、肥大 ,从而触发血管反应性和血管构型变化的重要原因之一 ;细胞膜钙通道在调控VSMC的钙内流时起主要作用     

β-雌二醇及其纳米粒对肝星状细胞TGF-β1和CTGF的影响

目的本研究首先观察纳米化后的β-雌二醇纳米粒是否和普通β-雌二醇一样对HSC增殖仍具有抑制作用；再比较β-雌二醇和β-雌二醇纳米粒对TGF-β1和其下游信号CTGF mRNA和蛋白表达的影响；进一步探讨β-雌二醇和β-雌二醇纳米粒抗肝纤维化的机制。方法①用不同浓度的β-雌二醇、β-雌二醇纳米粒干预HSCs，噻唑蓝（MTT）法检测不同时间点β-雌二醇、β-雌二醇纳米粒对HSCs增殖的影响。②用逆转录．聚合酶链式反应（RT-PCR）方法检测分析其对HSCs的TGF-β1、CTGF的mRNA表达的影响。③用免疫细胞化学方法分析其对HSCs的TGF-β1、CTGF蛋白的表达的影响。结果MTT法发现β-雌二醇、β雌二醇纳米粒都能抑制HSCs的增殖，下调HSCs TGF-β1mRNA、CTGF mRNA的表达，减少HSCs TGF-β1、CTGF蛋白表达量，且β-雌二醇纳米粒作用更强。结论β-雌二醇纳米粒和β-雌二醇一样具有抑制HSC增殖的作用，其抗肝纤维化的机制可能是通过抑制TGF-β1及其下游信号CTGF的mRNA和蛋白表达有关。