结核分枝杆菌异烟肼耐药基因katG的检测

目的探讨结核分枝杆菌异烟肼(INH)耐药的分子机制,建立快速检测结核分枝杆菌INH耐药性的方法。方法应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测105株结核分枝杆菌临床分离株的katG基因,运用DNA测序和生物信息分析比对进行验证。结果以H37Rv标准株为对照,34株敏感株中5株(14.7%)存在KatG基因异常,105株耐药株中55株(52.4%)存在KatG基因异常。结论结核分枝杆菌对INH耐药与KatG基因突变有关,PCR-RFLP技术可快速、准确地检测结核分枝杆菌对INH的耐药性。     

耐多药结核分支杆菌基因突变在老年结核病病人耐药性检测中的应用

目的探讨耐多药结核病(MDR-TB)临床分离株rPOB、KatG和rpsL基因突变在结核病耐药性检测中的应用价值。方法采用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)技术分析了同时耐异烟肼(INH)、利福平(RFP)、链霉素(SM)的多耐药临床分离株和35株药物敏感株的rPOB、KatG、rpsL基因突变。结果以结核分支杆菌H37RV为对照,35株药物敏感株的rPOB、rpsL基因SSCP图谱正常,其特异性为100%;KatG基因有2株图谱异常,特异性为94.3%。71株结核分支杆菌临床分离株均未发现rPOB、KatG、rpsL基因缺失,其PCR扩增产物SSCP分析结果表明36株多耐药临床分离株中,32株rPOB基因图谱异常;21株KatG基因图谱异常;26株rpsL基因图谱异常。其敏感性分别为rPOB(88.9%)、KatG(58.3%),rpsL(72.2%)。结论结核分支杆菌耐RFP、INH、SM耐药性的产生主要是由于rPOB、KatG和rpsL基因突变所致。PCR-SSCP技术有望成为结核分支杆菌耐药性检测的方法之一。     

PCR—SSCP技术快速检测结核分枝杆菌三种基因突变

聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)是快速检测基因突变的重要方式之一[1].应用此法对辽宁省90例涂阳患者痰标本分离结核分枝杆菌进行rpoB、rpsL、56例katG基因突变检测,与传统耐药结果比较分析,寻找结核分枝杆菌耐药性与基因突变的关系.     

结核分枝杆菌耐喹诺酮临床分离株gyrA基因突变的研究

目的 了解结核分枝杆菌喹诺酮(quinolones)耐药株耐药基因突变情况，评价其应用价值。方法 通过16S rRNA聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)技术分析77株分枝杆菌临床分离株；通过PCR-SSCP和直接测序技术分析结核分枝杆菌的gyrA基因突变的情况。结果 75株为结核分枝杆菌复合群。30株喹诺酮敏感株的gyrA基因的SSCP图谱中，11株与H37Rv相同，19株与卡介苗相同；与卡介苗gyrA基因的SSCP图谱相同的敏感株95位密码子为ACC，与H37Rv该图谱相同的敏感株95位密码子为AGC。45株喹诺酮耐药株中，34株(75．6％)gvrA基因SSCP图谱泳动异常，对25株泳动异常、出现频率较高耐药株测序证实15株(44．1％)为94位密码子GAC→GGC突变；10株(29．4％)为90位密码子GCG→GTG的突变。结论 结核分枝杆菌耐喹诺酮与gyrA基因突变有关，PCR-SSCP可能成为测定结核分枝杆菌耐喹诺酮类药基因型的快速、简便的方法。     

PCR-SSCP技术快速检测结核分枝杆菌三种基因突变

聚合酶链反应-单链构象多态性（PCR-SSCP）是快速检测基因突变的重要方式之一^[1]。应用此法对辽宁省90例涂阳患者痰标本分离结核分枝杆菌进行rpoB、rpsL、56例katG基因突变检测,与传统耐药结果比较分析,寻找结核分枝杆菌耐药性与基因突变的关系。     

矽肺结核分枝杆菌Km基因突变的临床研究

目的分析25株矽肺结核分枝杆菌耐卡那霉素和Km基因突变情况。方法通过传统梯度药敏试验,聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)和测序,分析临床耐药株Km基因的变化。结果矽肺结核药敏试验,卡那霉素耐药率为28%(7/25),25株临床分离株的16SrDNASSCP电泳图谱均与结核分枝杆菌标准相同,7株耐卡那霉素分离株中,2株29.6%(2/7)Km基因SSCP泳动异常。结论抗结核二线药中,卡那霉素已出现耐药,其部分耐药原因可能是由于分枝杆菌耐卡那霉素的Km基因突变所致。     

结核分枝杆菌Km基因突变与耐卡那霉素药物的研究

目的分析结核分枝杆菌(T.M)耐卡那霉素(KM)和(Km)基因突变情况。方法通过传统梯度药敏试验和聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)分析127株分枝杆菌临床分离株耐KM情况和Km基因的变化。结果药敏试验卡那霉素耐药率为35.4%(45/127),127株分枝杆菌临床分离株的16S rDNA SSCP电泳图谱均与结核分枝杆菌标准株相同。45株耐卡那霉素分离株中,12株(26.6%)Km基因SSCP泳动异常。结论T.M对抗结核二线药物中的KM药物已出现耐药,其部分耐药原因可能是由于T.M耐KM药物的Km基因突变所致。     

PCR-SSCP检测耐乙胺丁醇结核杆菌embB基因突变的价值

目的探讨应用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)技术检测结核分支杆菌耐乙胺丁醇(EMB)分离株embB基因突变情况,研究其应用价值。方法2000-06~2002-08对河南省结核病耐药监测项目收集的菌株及河南省各地市结核防治所收集的68株结核分支杆菌菌株采用PCR-SSCP分析68例结核菌株embB。结果以H37Rv标准株为对照,30株药物敏感株的embB基因SSCP泳动均正常,38株耐EMB分离株中25株embB基因SSCP泳动异常,异常检出率占66%。结论部分分支结核杆菌耐EMB是由于其embB基因突变引起,PCR-SSCP可成为检测部分结核杆菌耐EMB耐药基因的有效方法。     

结核分枝杆菌Km基因突变与耐卡那霉素药物的研究

目的　分析结核分枝杆菌(T.M)耐卡那霉素(KM)和(Km)基因突变情况。方法 通过传统梯度药敏试验和聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)分析127株分枝杆菌临床分离株耐KM情况和Km基因的变化。结果 药敏试验卡那霉素耐药率为35.4%(45/127),127株分枝杆菌临床分离株的16S rDNA SSCP电泳图谱均与结核分枝杆菌标准株相同。45株耐卡那霉素分离株中,12株(26.6%)Km基因SSCP泳动异常。结论 T.M对抗结核二线药物中的KM药物已出现耐药,其部分耐药原因可能是由于T.M耐KM药物的Km基因突变所致。     

应用PCR-RFLP分析结核分枝杆菌rpsL基因突变

目的 了解结核分枝杆菌链霉素(SM)耐药基因突变情况,建立快速检测耐药突变株的方法?方法 通过PCR-RFLP分析62株结核分枝杆菌临床分离株的rpsL基因突变的部位和性质?结果 以H37RV标准株为对照,13株敏感株的rpsL基因有MboⅡ酶切位点;37株耐SM分离株中,31株(838%)无MboⅡ酶切位点;12株耐其它抗结核药物株中,也有2株无MboⅡ酶切位点?结论 大多数结核分枝杆菌SM耐药分离株的核糖体S12蛋白编码基因(rpsL)第43位密码子有点突变?PCR-RFLP可能成为快速检测结核分枝杆菌耐药突变株的一种新方法?     

耐多药结核病耐药分子机制的研究

目的 研究耐多药结核分支杆菌耐药的分子机理，建立快速检测耐药基因的分子药敏试验方法。方法 通过ＰＣＲ和ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析结构分支杆菌耐多药临床分离株的ｒｐｏＢ、ｒｐｓＬ、ｋａｔＧ基因和ｉｎｈＡ调节序列。结果 ＰＣＲ分析耐药基因的敏感性为１－０ｐｇＤＮＡ；除ｒｐｏＢ基因引物ＰＣＲ扩增为属特异性外，余耐药基因引物ＰＣＲ扩增都具有较高的的特异性。２０株耐多药分离株中，９０％有２种以上耐药遗传标志改变，     

结核分枝杆菌链霉素耐药临床分离株rpsL基因突变特征分析

目的了解我国结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis,MTB）rpsL基因突变特征及其与链霉素耐药的相关性,并评价其应用价值。方法对302株结核分枝杆菌临床分离株的rpsL基因采用聚合酶链反应-直接测序（PCR-DS）进行检测。结果 59株对INH、RFP、SM、EMB和PAS全部敏感,rpsL基因没有突变,61株对SM敏感的耐药株有6株突变,SM敏感菌株突变率为5.00%（6/120）。182株SM耐药MTB,rpsL基因突变率为70.33%,其中43位密码子赖氨酸转变为精氨酸（Lys43Arg）突变率为52.20%;88位密码子有4种突变类型,突变率为17.58%;86位密码子精氨酸转变为谷氨酰胺（Arg86Gln）突变率为0.55%。SM耐药株的rpsL基因突变率明显高于SM敏感株的基因突变率,两者之间的差异有统计学意义,χ2=125.05,P〈0.05。结论 rpsL基因突变与结核分枝杆菌链霉素耐药高度相关,其中Lys43Arg突变是主要突变类型,PCR-DS检测rpsL基因突变可以用于临床结核菌链霉素耐药的快速检测。     

结核分支杆菌五种耐药基因检测的临床应用及评价

目的　检测结核分支杆菌rpoBkatG、rpsL、pncA和embB耐药基因 ,评价其临床应用价值。方法　采用聚合酶链反应 单链构象多态性 (PCR SSCP)分析和药敏试验 (比例法 ) ,了解 10 9例肺结核患者结核分支杆菌耐药情况 ,并分析、比较临床治疗效果。结果　 1/ 2以上的肺结核患者至少耐两种抗结核药物 ,对RFP、INH、SM、PZA和EB总耐药率分别为 80 7%、71 5 %、78 8%、5 7 7%和48 6%。rpoB、katG、rpsL、pncA和embB基因突变率分别为 76%、68%、71%、5 1%和 3 0 %。结核分支杆菌耐药基因突变率与耐药水平联系密切 ,多数结核分支杆菌耐药基因突变易发生在高耐药株 ,也有少数基因突变发生在低耐药株。根据药敏试验和耐药基因检测结果 ,6个月耐多药结核治愈率分别达到 5 4 8%和 62 8% ,治疗效果满意 ,两种方法差异无显著性 (P >0 0 5 )。结论　耐药基因检测指导治疗是一种新探索 ,PCR SSCP方法敏感、特异 ,可以快速检测结核分支杆菌rpoB、katG、rpsL、pncA和embB耐药基因突变 ,可能会成为临床指导用药的好方法     

分析老年矽肺结核病的耐药水平与临床治疗

目的分析老年矽肺结核病的耐药水平和7种耐药基因突变情况。方法 117例老年矽肺结核患者的临床分离株均做传统梯度药敏试验和聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)分析。结果被测菌株传统药敏试验耐药率82.1%。7种耐药基因[链霉素(rpsL)、利福平(rpoB)、异烟肼(katG)、乙胺丁醇(embB)、吡嗪酰胺(pncA)、喹诺酮(gyrA)、卡那霉素(km)]突变率分别为78.1%、65.6%、52%、33.3%、37.5%、54.1%、28.1%。结论传统梯度药敏试验与7种耐药基因联合检测,证实耐药基因突变与耐药水平和治疗关系密切。     

结核分支杆菌利用福平药物敏感性的直接快速检测

探讨利用分子生物 学方法直接快速检测临床标本结核分支杆菌利福平（ＲＦＰ）药物敏感性的可行性。方法自行设计针对ｒｐｏＢ基因特异扩增的引物（扩增产物为１８３ｂｐ片段）,运用聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）银染色法,检测４５株结核分支杆菌临床分离株,对其中部分菌株进行ｒｐｏＢ基因ＤＮＡ序列分析,运用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染色法对７０份结核病患痰标本进行直接快速检测,并与药敏试验结果做对照分     

耐利福平核分支杆菌耐药分子机制的研究

目的 研究中国五省、市部分耐利福平（ＲＦＰ）或含ＲＦＰ的耐多药结核分支杆菌临床分离株ｒｐｏＢ基因突变的情况及抽提鉴定是否含有质粒,为评价耐ＲＦＰ的分子机制,进而为结核病基础和临床研究提供分子遗传学依据。方法 采用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术,对来自河南省、河北省、安徽省、北京市、上海市２６２株结核分支杆菌临床分离株（其中敏感株７４株,耐ＲＦＰ或含ＲＦＰ耐多药株１８８株）ｒｐｏＢ基因突变的发生率进行研究;同时,对７６株结核发支杆菌临床分离株按碱性溶菌法抽提分离并鉴定是否含有质粒。结果中国五省、市的部分耐ＲＦＰ或含ＲＦＰ耐多药结核分支杆菌临床分离株ｒｐｏＢ基因突变的发生率平均为９２％,而各地分别为：河南省９０％,河北省９１％,北京市９１％,上海市９２％,经统计学处理,五省、市之间差异无显性意义（ｘ＾２＝０．４２,Ｐ〉０     

聚合酶链反应-单链构象多态性技术检测耐多药结核分支杆菌rpoB、KatG、rpsL突变的研究

目的　应用PCRSSCP技术快速检测耐INH,RFP,SM结核分支杆菌分离株KatG、rpoB、rpsL基因突变,评价其在检测结核分支杆菌耐药性方面的价值。方法 32株耐INH、RFP、SM结核分支杆菌临床分离株及25株结核分支杆菌敏感分离株用PCRSSCP方法分别检测,rpoB、KatG、rpsL基因突变。结果 32株耐多药结核分支杆菌分离株中,rpoB、KatG、rpsL PCR扩增产物PCR-SSCP分别有28株(87.5%)rpoB基因,19株(59.3%)KatG基因和23株(71.9%)rpsL基因电泳条带与结核分支杆菌标准株H₃₇Rv电泳条带相比有明显差异,而25株结核分支杆菌敏感株的PCR-SSCP条带与结核分支杆菌H₃₇Rv相似,特异性为100%。结论 PCR-SSCP方法敏感、特异,可快速检测结核分支杆菌rpoB、KatG、rpsL耐药基因突变,有利于耐多药结核分支杆菌耐药性的快速检测。     

耐多药肺结核耐药基因突变与临床疗效探讨

目的　了解耐多药肺结核耐药基因的突变与临床疗效的关系,为耐多药肺结核的治疗提供参考依据。方法 108例病人痰标本用PCR-SSCP方法检测了五种耐药基因和传统的药敏试验,并与临床疗效进行比较分析。结果 耐多药肺结核耐药基因检测率分别是耐异烟肼的katG基因突变率为70.4%,耐利福平的rpoB基因突变率72.2%,耐链霉素的rpsL基因突变率71.9%,耐吡嗪酰胺的pncA基因突变率53.4%,耐乙胺丁醇的embB基因突变率31.7%,其中高浓度耐药菌的基因突变率远高于低浓度的突变率。根据药敏试验及耐药基因检测结果指导治疗,应用以KAOP为基础的化疗方案,配合患者过去未曾用过的1～2种抗结核药物,经过平均1.4年的治疗,108例耐多药病人74.1%的病人痰菌阴转,且67.5%的病人痰结核杆菌培养阴转,83.3%的病人病灶吸收好转,65.3%的空洞闭合,取得了临床上较为满意的疗效。结论 对耐多药肺结核进行耐药基因检测是一项重要工作,对指导治疗及预后判断有一定的参考价值。但尚需进行更多的观察。     

gidB mutations in streptomycin-resistant Mycobacterium tuberculosis clinical

目的　探索gidB基因突变在结核分枝杆菌链霉素耐药中的作用。方法 结核分枝杆菌临床分离株中,60株为链霉素耐药,30株敏感。同时进行链霉素MIC测定并采用DNA测序法分析gidB,rpsL和rrs基因突变。结果 20%的耐药株含有gidB单基因突变,80%的耐药株除gidB基因突变以外,还有rpsL或rrs基因突变。敏感株中也有gidB基因突变。gidB突变呈散在分布,未发现突变热点。结论 gidB基因突变在结核分枝杆菌链霉素耐药中的作用尚不能肯定。