不同浓度甘精胰岛素对人皮下前脂肪细胞分化和脂质代谢的影响

目的探讨不同浓度甘精胰岛素对人皮下前脂肪细胞分化和脂质代谢的影响及可能机制。方法术中取患者腹部皮下脂肪组织,原代培养前脂肪细胞,分别使用低浓度(125 nmol/L)、中浓度(250、500 nmol/L)、高浓度(1 000 nmol/L)的甘精胰岛素干预3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX)诱导的成脂分化。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测分化过程中促炎性脂肪因子[肿瘤坏死因子(TNF)-α、视黄醇结合蛋白(RBP)4]和抗炎脂肪因子(瘦素、脂联素)的分泌情况;比色法检测前脂肪细胞中三酰甘油含量及甘油释放量;qRT-PCR检测过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)-γ、促进结合蛋白(CEBP)α、RBP4、激素敏感性酯酶(LPL)转录情况。结果随着脂肪细胞逐渐分化成熟,瘦素、脂联素分泌量明显增加,TNF-α、RBP4分泌量明显减少。分化第7和14天时,不同浓度组瘦素、脂联素、TNF-α、RBP4分泌量差异均有统计学意义(均P0.05),中浓度甘精胰岛素对瘦素、脂联素分泌的促进作用,对TNF-α、RBP4分泌的抑制作用最明显。随着脂肪细胞逐渐分化成熟,胞内三酰甘油含量逐渐增加;中浓度甘精胰岛素组三酰甘油含量明显高于低、高浓度组(P0.05)。脂质合成的同时伴随脂质分解,胞内甘油释放量随分化时间的变化不明显,与甘精胰岛素的干预浓度呈正比,高浓度组甘油释放量明显高于低、中浓度组(P0.05)。随着脂肪细胞分化时间延长,各目的基因转录水平均逐渐增加,不同时间点PPAR-γ、CEBPα、RBP4、LPL mRNA相对表达量差异有统计学意义(P0.05)。结论甘精胰岛素可降低前脂肪细胞分化过程中促炎性脂肪因子分泌量,提升抗炎脂肪因子分泌量;中低浓度可促进脂质合成,高浓度可诱发脂质分解;PPAR-γ、CEBPα、RBP4、LPL基因表达水平可能参与脂质代谢的调控。     

TNF-α对3T3-L1脂肪细胞PPAR-γ2 mRNA表达及脂联素分泌的影响

用肿瘤坏死因子α（TNF-α）分别处理未分化、已分化的3T3-L1细胞，检测培养细胞过氧化物酶体增殖物激活受体γ2（PPAR-γ2）mRNA的表达和脂联素的分泌。结果表明TNF-α可明显抑制3T3-L1脂肪细胞的PPAR-γ2 mRNA表达和脂联素的分泌（P〈0.05或P〈0.01），提示TNF-α可能通过PPAR-γ影响脂联素的分泌。     

原代培养的人网膜前脂肪细胞分化过程中基因表达和脂肪因子分泌的特征

采用胶原酶消化法分离原代培养人网膜基质前脂肪细胞进行诱导分化.在诱导分化早期,前脂肪细胞因子1表达迅速降低,而脂蛋白脂酶、PPARγ2表达迅速增加,CAAT/增强子结合蛋白α(C/EBPα)在成熟阶段表达丰度最高.瘦素mRNA表达和分泌随分化逐渐增高,抵抗素mRNA仅在前脂肪细胞表达和分泌而脂联素mRNA仅在成熟脂肪细胞表达和分泌,胰岛素样生长因子I(IGF-I)在前脂肪细胞诱导分化前后均有分泌.     

1,25二羟维生素D_3对人脂肪细胞脂联素、瘦素分泌的影响

目的研究1,25二羟维生素D3对人脂肪细胞脂联素、瘦素分泌的影响。方法原代分离培养人大网膜前脂肪细胞,前脂肪细胞诱导分化为脂肪细胞,应用免疫细胞化学法检测脂联素、瘦素的表达。结果成功培养人前脂肪细胞并诱导人前脂肪细胞分化为脂肪细胞。分化组脂联素及瘦素表达水平明显高于未分化组,加入不同浓度1,25二羟维生素D3后分化的脂肪细胞脂联素及瘦素表达水平均降低（P〈0.05）。结论 12,5二羟维生素D3对人脂肪细胞脂联素、瘦素的分泌有抑制作用。     

性激素对脂肪细胞瘦素和脂联素分泌的影响

目的 观察性激素对前脂肪细胞增殖与分化及脂肪细胞瘦素脂联素分泌的影响.方法 原代培养人大网膜前脂肪细胞,观察其增殖、分化过程.性激素作用前脂肪细胞增殖和分化过程,检测瘦素、脂联素分泌及mRNA水平.结果 成功地培养出人大网膜前脂肪细胞.雌二醇促进前脂肪细胞增殖(0.823±0.059对0.276±0.032,P＜0.05)、抑制分化(P＜0.05);睾酮对前脂肪细胞增殖无明显作用,但抑制分化(P＜0.05).前脂肪细胞增殖及分化期均分泌瘦素.雌二醇促进瘦素分泌,而睾酮抑制(均P＜0.05).脂联素仅在分化期分泌,且性激素抑制其分泌.雌二醇促进瘦素mRNA表达但抑制脂联素mRNA表达;睾酮抑制瘦素、脂联素mRNA表达(均P＜0.05).结论 雌二醇促进脂肪细胞瘦素分泌及mRNA表达,抑制脂联素分泌及mRNA表达;睾酮抑制二者分泌及mRNA表达.     

罗格列酮联合甘精胰岛素对骨髓基质细胞的影响

目的 观察胰岛素增敏剂罗格列酮联合甘精胰岛素对骨髓基质细胞成脂分化和脂质过氧化物体（PPAR-γ）基因表达水平的影响.方法 将大鼠骨髓基质细胞分离、传代培养后分组以不同浓度药物处理,在显微镜下观察细胞形态,用油红O染色测定比色值,并用RT-PCR法检测PPAR-γ基因的表达水平.结果 用药6天,各用药组与对照组相比,均明显促进成脂分化（P〈0.05）,除甘精胰岛素10-8 mol/L组外,其他各组光密度（OD）值均明显高于成脂诱导剂组（P〈0.05）,提示高浓度甘精胰岛素和罗格列酮及其联用,均有显著的促成脂作用.各组均表达PPARγ基因,其中罗格列酮10 μmol/L组＋甘精胰岛素10-7 μmol/L组PPARγ基因表达明显增多.结论 罗格列酮与甘精胰岛素单独应用均能明显促进骨髓基质细胞的成脂分化,两者联用有协同作用.     

脂联素与非酒精性脂肪肝相关性的研究进展

脂联素（adiponectin）是脂肪细胞所分泌的肽类激素，血浓度为5．30mg／L，约占人体血浆总蛋白的0．01％，其单体在脂肪组织中含量最为丰富。Viengchareun等田发现脂联素不仅能由白色脂肪分泌．分化的棕色脂肪组织细胞如T37i细胞中也有脂联素表达。众多研究证实脂联素具有增强胰岛素敏感性、抗高血糖、抗动脉粥样硬化等效应。脂联素水平降低与胰岛素抵抗（insulin resistance）、     

脂肪因子与妊娠糖尿病

人体脂肪细胞可分泌多种具有生物活性的脂肪因子,且在妊娠糖尿病(GDM)患者中存在分泌失调的现象.研究发现,妊娠早期瘦素的增加和脂联素的下降可能预示着GDM的发生;脂联素通过影响胰岛素信号转导改变胰岛素敏感性,调节血糖和胰岛素水平;视黄醇结合蛋白4(RBP4)可能通过调节血脂间接调节血糖;内脂素和vaspin的表达受多种因素影响,可能是发生胰岛素抵抗的中心环节;抵抗素基因多态性亦在不同方面对人体产生影响.综上,脂肪因子作用机制复杂,其分泌失调与GDM患者胰岛素抵抗及糖、脂代谢密切相关,并影响其病理生理学变化及预后.     

肿瘤坏死因子α、吡格列酮对3T3-L1脂肪细胞脂联素mRNA表达的影响

目的观察吡格列酮（PIO）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）对3T3-L1脂肪细胞脂联素mRNA表达的影响。方法以不同浓度PIO和TNF-α于各时段处理3T3-L1细胞,用RT-PCR技术检测各条件下脂联素mRNA的表达。结果（1）3T3-L1前体脂肪细胞无脂联素mRNA表达。（2）TNF-α抑制分化及成熟的3T3-L1脂肪细胞脂联素mRNA表达。（3）PIO增强分化及成熟的3T3-L1脂肪细胞脂联素mRNA表达。（4）PIO能改善TNF-α对脂联素mRNA表达的抑制。结论在分化及成熟的脂肪细胞中,TNF-α抑制脂联素mRNA表达,而PIO增强其表达;PIO促进前体脂肪细胞分化及激活脂联素表达;PIO改善TNF-α对成熟脂肪细胞脂联素的抑制。     

甘精胰岛素、地特胰岛素、人胰岛素对3T3-L1脂肪细胞PPARγ2mRNA表达的影响

目的 探讨人胰岛素、甘精胰岛素、地特胰岛素对体外培养3T3-L1脂肪细胞中过氧化物酶体增殖物激活受体-γ2(PPARγ2)基因表达的影响及可能机制.方法 体外培养3T3-L1前脂肪细胞,在分化培养液分别加入100 nmol/L、500 nmol/L、1 000 nmol/L人、甘精、地特胰岛素培养10 d,用RT-PCR检测脂肪细胞中PPARγ2 mRNA表达水平的变化.结果 在细胞分化的过程中,胰岛素浓度的增高促进PPARγ2的表达;相同浓度下,人胰岛素促进PPARγ2 mRNA表达最强,甘精胰岛素次之,地特胰岛素最弱.结论 胰岛素通过上调PPARγ2基因表达促进前脂肪细胞的分化,不同胰岛素促分化能力不同.     

Exendin-4对脂肪细胞分化及糖脂代谢相关基因mRNA表达的影响

目的探讨Exendin-4对3T3-L1前脂肪细胞的分化及糖脂代谢相关基因mRNA表达的影响。方法体外培养3T3-L1前脂肪细胞,在脂肪细胞分化成熟过程中的不同时期分别用Exendin-4等干预,采用油红O染色,观察脂肪细胞分化及脂质积聚情况;采用荧光定量PCR检测脂肪细胞糖脂代谢标志基因GLUT-4、PPARγ、HSLmRNA表达水平。酶法测定脂肪细胞的甘油三酯含量。结果分化成熟的脂肪细胞经油红O染色可见细胞质内大片脂滴呈亮红色,而未分化细胞不被油红O染色。在脂肪细胞分化第0天和第6天用Exendin-4干预,脂肪细胞内TG的含量较空白组增加（P〈0．01）,GLUT-4、HSL、PPARγ mRNA的表达上调（P〈0．01）;在脂肪细胞分化的第12天干预,Exendin-4对肪细胞分化及相关基因mRNA的表达与空白组无明显差异。结论Exendin-4促进脂肪细胞的分化并上调糖脂代谢相关基因GLUT-4、PPARγ、HSL mRNA表达,可能为Exendin-4抗糖尿病的部分作用机制。     

肥胖小鼠脂肪组织缺氧对脂联素表达的转录抑制作用

目的观察缺氧对脂肪细胞脂联素mRNA和蛋白表达的影响,探讨肥胖小鼠脂肪组织缺氧导致脂肪组织脂联素表达下降的机制。方法采用实时定量聚合酶链反应（qRT—PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blotting）检测遗传型肥胖小鼠（ob／ob,12周）和高脂饮食肥胖小鼠（HFD,53周）的附睾旁脂肪中脂联素mRNA和蛋白的表达;用小鼠3T3-L1脂肪细胞系为模型,采用RT—PCR和荧光素酶报告基因方法检测缺氧处理后脂联素和过氧化物酶体增殖物激活受体（PPAR）-mRNA的表达和稳定性、脂联素启动子的活性;用Western blotting和荧光素酶报告基因检测缺氧对PPAR-γ在核蛋白中集聚以及PPAR-γ转录因子活性的影响。组间数据比较采用t检验。结果（1）缺氧时两种肥胖小鼠的脂肪组织中脂联素mRNA和蛋白的表达均显著下降（P〈0．01）;333-L1脂肪细胞系在缺氧8h和24h后,脂联素mRNA表达量分别下降至0．65±0．05和0．29±0．05,较对照组（1．00±0．04）明显降低,差异有统计学意义（t=11．548、24．893,均P〈0．01）,但缺氧对脂联素mRNA的稳定性并没有影响;荧光素酶报告基因方法表明,脂联素启动子的活性受到缺氧的抑制。（2）在两种肥胖小鼠的脂肪组织中,PPAR-γmRNA和蛋白的表达均明显下降（P〈0．01）;小鼠333-L1脂肪细胞系在缺氧8h和24h后,PPAR- γmRNA的表达量分别下降至0．72±0．09和0．54±0．07,与对照组（1．00±0．09）相比,差异有统计学意义（t：5．134、9．876,均P〈0．01）;PPAR一1蛋白的核转位以及PPAR一^y转录因子活性也受到缺氧的抑制。结论肥胖小鼠脂肪组织缺氧抑制了脂联素的表达,抑制作用可能发生在转录水平;其机制可能是通过抑制PPAR-γmRNA的表达和PPAR-γ转录因子的活性而实现的。     

过氧化物酶体增殖物激活受体-γ激动剂对高脂喂养SD大鼠血清视黄醇结合蛋白4水平的影响

目的 观察高脂喂养及吡咯列酮干预对SD大鼠视黄醇结合蛋白4（RBP4）水平的影响.方法 雄性SD大鼠随机分为3组,分别给予普通饮食（NC组）、高脂（F组）及高脂吡咯列酮（F＋Pio组）干预,第8、12周时行OGTT及胰岛素释放试验（ITT）,评价胰岛功能.检测FPG、血脂、肝功能及血清RBP4水平,并对肝脏、附睾脂肪和肾周脂肪称重,计算肝脏质量/体质量及脂肪质量/体质量.结果 8周后,F组FPG、血脂、胰岛素及OGTT血糖曲线下面积（AUCOGTT）、AUCITT均高于NC组（P＜0.05或P＜0.01）,血清RBP4水平升高（P＜0.01）;12周后,与F组相比,F＋Pio组FPG、胰岛素、TG、TC、AUCOOGTT、AUCITT、肝脏质量/体质量及脂肪质量/体质量和血清RBP4水平降低（P＜0.05或P＜0.01）.结论 PPAR-γ激动剂吡咯列酮能减轻糖脂毒性、改善IR并降低体内RBP4水平.     

胰升血糖素样肽1对3T3-L1前脂肪细胞增殖及分化的影响

目的探讨胰升血糖素样肽1（GLP-1）对3T3-L1前脂肪细胞增殖及分化的影响。方法在3T3-L1前脂肪细胞增殖和分化的不同阶段添加不同浓度梯度的GLP-1（7—36）,使用XTT比色法测定细胞增殖情况,油红O脂肪染色、异丙醇萃取法评价细胞分化情况,RT-PCR法测定不同分化阶段PPAR-ymRNA表达水平。结果高浓度GLP-1（10^-9～10^-7mool／L）能够减弱3T3-L1前脂肪细胞的增殖能力;GLP-1在10^-11～10^-8mmoL／浓度梯度均存在抑制3T3-L1前脂肪细胞向脂肪细胞分化的作用,但对分化过程中PPARymRNA的表达水平均未见显著影响。结论本研究发现GLP-1能够抑制3T3-L1前脂肪细胞增殖及分化,提示脂肪细胞可能也是GLP-1减轻体重作用的潜在靶点。     

醛固酮对脂肪细胞因子表达及活性氧簇生成的影响

目的 探讨醛固酮对3T3-L1脂肪细胞脂肪细胞因子表达、分泌,活性氧簇(ROS)生成水平的影响.方法 诱导分化成熟的3T3-L1脂肪细胞经醛固酮(1μmol/L)孵育4h、24h,实时定量PCR检测脂肪细胞因子脂联素、白细胞介素-6(IL-6)、纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)、单核细胞趋化蛋白-1( MCP-1...     

替米沙坦上调内脏脂肪组织的脂联素表达并改善胰岛素抵抗

目的 探讨替米沙坦对体外原代培养的人前脂肪细胞和OLETF大鼠脂肪组织中脂联素表达以及胰岛素敏感性的影响.方法 提取人腹部皮下和内脏的前脂肪细胞,原代培养并传代后接种于无血清培养基,分为对照组（H-N）、吡格列酮组（H-P）和替米沙坦（H-T）组.葡萄糖消耗试验测定细胞的胰岛素敏感性,实时荧光定量PCR（RT-PCR）技术测定细胞脂联素mRNA的表达,放射免疫法测定培养基上清脂联素的分泌量.4周龄雄性OLETF大鼠28只,初始体重150～180 g.高脂喂养,分为对照组（O-HFD组,10只）、吡格列酮组（O-P组,8只）和替米沙坦组（O-T组,10只）.口服葡萄糖耐量实验和高胰岛素-正糖钳夹实验检测胰岛素抵抗指数和60 ～ 120 min葡萄糖输注速度以测定大鼠胰岛素抵抗水平,RT-PCR和Western blotting技术检测大鼠皮下和内脏脂肪组织脂联素的mRNA和蛋白表达.计量资料均数比较应用单因素方差分析.结果 H-T组和H-P组内脏前脂肪细胞的葡萄糖消耗量较之H-N组明显升高[分别为（5.6±1.6）、（4.4±1.6）、（2.0±0.8）mmol/L,F=20.240,P＜0.05].O-T和O-P组大鼠高胰岛素-正糖钳夹实验得到的60 ～ 120 min葡萄糖输注速度明显高于O-HFD组大鼠[分别为（18±5）、（20±4）、（10±3） mg·kg-1·min-1,F=8.136,P＜0.05].O-T和O-P组大鼠的HOMA胰岛素抵抗指数也显著低于O-HFD组大鼠（分别为10.0±8.6、5.5±2.0、17.8±10.1,F=5.784,P＜0.05）.替米沙坦可降低高脂饲养OLETF大鼠升高的腹围、内脏脂肪系数和血清游离脂肪酸水平,并改善大鼠的空腹高血糖,差别有统计学意义[分别为（24.0±2.0）比（26.5±2.7） cm、5.8％±2.4％比8.6％±2.4％、（2.8±0.7）比（5.3±1.8）μg/L、（10±6）比（15±7） mmoL/L,均P＜0.05].H-T较之H-N组原代培养人前脂肪细胞和O-T较之O-HFD组大鼠脂肪组织脂联素的mRNA表达和蛋白分泌量均明显上调（均P＜0.05）.H-T较之H-P组人内脏脂肪细胞和O-T较之O-P组大鼠内脏脂肪组织脂联素mRNA和蛋白表达水平均升高或有上升的趋势（分别为59.9±2.0比6.0±1.6、1.807±0.297比1.332±0.112、4.43±2.57比1.71±0.57、2.6±0.9比1.9±0.5,均P＜0.05）.结论 替米沙坦具有提高OLETF大鼠与人前脂肪细胞胰岛素敏感性、缓解大鼠的内脏性肥胖和改善大鼠糖脂代谢功能紊乱的作用,并很可能通过上调脂肪尤其是内脏脂肪的脂联素表达来完成.     

过氧化物酶体增殖物激活受体γ激动剂对肥胖小鼠非肾上腺素能原代棕色脂肪功能和分化的影响

目的探索过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPAR-γ）激动剂吡格列酮（PGZ）对肥胖小鼠非肾上腺素能条件下原代棕色脂肪分化和功能的影响,为2型糖尿病和肥胖的治疗提供新依据。方法高脂饮食诱导的4周龄雄性C57BL／6J肥胖小鼠20只,取肩胛间区棕色脂肪组织,分离并培养C57小鼠原代棕色脂肪细胞,等量分人10个培养皿中,等分为对照组和PGZ干预组,每组5皿,使用PGZ干预细胞,建立PGZ干预的细胞模型,使用和PGZ溶液等量的生理盐水处理对照组细胞。实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测细胞模型的棕色脂肪基因：解偶联蛋白1（UCP-J）、超长链脂肪酸延长酶3（ELOVL3）、PPAR-γ共激活因子α和β（PGCI-α、PGCI-β）、PR包含域16区（PRDM16）、CCAAT增强子结合蛋白β（CEBP/β）、脂联素、脂肪细胞脂质结合蛋白2（AP2）、细胞色素C1氧化酶（CYC1）、线粒体转录因子A（TFAM）等表达水平;使用油红染色定量法检测细胞模型的棕色脂肪成脂功能;Western blotting法检测PGZ干预组UCP-1蛋白表达。2组间比较采用t检验,多组间比较采用方差分析和LSD检验。结果PGZ干预组细胞的棕色脂肪特异基因（UCP-1、ELOVL3、PGCI-α、PGCI-β）、成脂基因（AP2）、线粒体功能基因（CYCI、TFAM）和脂肪分化基因（PRDM16、CESP／β）表达量均显著高于对照组（相对表达量分别为：UCP-1：1100．0±612．0、2．0±0．4;ELOVL3：1461．0±617．0、2．0±1．2;PGCI-α：8．1±2．8、2．0±1．1;PGCI-β：8．3±2．8、2．0±1．3;脂联素：2．6±0．8、1．04±0．7;AP2：5．1±2．2、1．00±0．24;CYCI：3．1±0．8、1．0±0．4;TFAM：1．2±0．4、1．00±0．25;PRDM16：4．8±2．6、2．0±0．3;CEBP／β：6×10^8±5×10^8、2．0±0．6;t=2．45～5．22,均P〈0．05）;油红定量亦发现干预组成脂功能高于对照组（染色定量：1．2±0．2比1．0±0．1,t=2．45,P〈0．05）。Westernblotting检测PGZ干预组UCP-1表达高于对照组（灰度分析相对定量分别为1．24±0．25和1．00±0．14,t=2．63,P〈0．05）。结论PGZ可能通过增强棕色脂肪特异基因表达、促进细胞分化成脂、提高线粒体功能等方面增强棕色脂肪细胞功能,这可能是其改善机体代谢的原因之一。     

Effects of dihydrotestosterone on differentiation and proliferation of human mesenchymal stem cells and preadipocytes

The mechanisms by which androgens regulate fat mass are poorly understood. Although testosterone has been reported to increase lipolysis and inhibit lipid uptake, androgen effects on proliferation and differentiation of human mesenchymal stem cells (hMSCs) and preadipocytes have not been studied. Here, we investigated whether dihydrotestosterone (DHT) regulates proliferation, differentiation, or functional maturation of hMSCs and human preadipocytes from different fat depots. DHT (0-30 nM) dose-dependently inhibited lipid accumulation in adipocytes differentiated from hMSCs and downregulated expression of aP2, PPARgamma, leptin, and C/EBPalpha. Bicalutamide attenuated DHT's inhibitory effects on adipogenic differentiation of hMSCs. Adipocytes differentiated in presence of DHT accumulated smaller oil droplets suggesting reduced extent of maturation. DHT decreased the incorporation of labeled fatty acid into triglyceride, and downregulated acetyl CoA carboxylase and DGAT2 expression in adipocytes derived from hMSCs. DHT also inhibited lipid accumulation and downregulated aP2 and C/EBPalpha in human subcutaneous, mesenteric and omental preadipocytes. DHT stimulated forskolin-stimulated lipolysis in subcutaneous and mesenteric preadipocytes and inhibited incorporation of fatty acid into triglyceride in adipocytes differentiated from preadipocytes from all fat depots. CONCLUSIONS: DHT inhibits adipogenic differentiation of hMSCs and human preadipocytes through an AR-mediated pathway, but it does not affect the proliferation of either hMSCs or preadipocytes. Androgen effects on fat mass represent the combined effect of decreased differentiation of fat cell precursors, increased lipolysis, and reduced lipid accumulation.