男女腹部皮下和网膜脂肪中脂联素、肿瘤坏死因子α、过氧化物酶体增殖物激活受体γ2 mRNA表达的比较

目的比较男女腹部皮下脂肪组织、网膜脂肪组织中脂联素、肿瘤坏死因子-a（TNF-a）、过氧化物酶体增殖物激活受体γ2（PPARγ2）mRNA表达。方法选择30例择期外科手术患者，男15例，女15例，用RT-PCR法检测腹部皮下脂肪组织和网膜脂肪组织中脂联素、TNF-a、PPARγ2 mRNA表达。结果（1）男性皮下脂肪组织中脂联素mRNA显著低于女性，网膜脂肪组织中TNF-a mRNA显著高于女性（均P〈0．05）。（2）女性皮下脂肪组织中脂联素mRNA表达高于其网膜脂肪组织，男女网膜脂肪组织中TNF-a mRNA均高于各自的皮下脂肪组织（P〈0．05～0．01）。（3）男女间皮下脂肪组织和网膜脂肪组织中PPARγ2 mRNA表达差异无统计学意义（P〉0．05）。结论人腹部皮下脂肪组织和网膜脂肪组织中脂联素、TNF-a mRNA的表达可能存在性别差异，而PPARγ2 mRNA表达的性别差异则不明显。     

肿瘤坏死因子α对人脂联素3T3-L1细胞PPARγ2 mRNA表达的影响

目的探讨肿瘤坏死因子α（TNF-α）对稳定表达人脂联素3T3-L1细胞过氧化物酶体增殖物激活受体（PPAR）γ2 mRNA表达的影响，为进一步研究脂联素功能提供了实验基础。方法重组脂联素真核表达质粒（pcDNA3．1^＋-hADPN）脂质体法稳定转染3T3-L1细胞。用TNF-α（100ng／m1）处理未转染、转染空载载体、转染pcDNA3．1^＋-hADPN的3T3-L1细胞，RT-PCR检测PPARγ2 mRNA的表达量。结果（1）稳定转染了pcDNA3．1^＋-hADPN的未分化和已分化3T3-L1细胞中，PPARγ2表达量较未转染组明显增加（P〈0.01）。（2）TNF-α可明显抑制PPARγ2 mRNA的表达（P〈0.05）。（3）稳定转染pcDNA3．1^＋-hADPN可改善TNF-α抑制作用（P〈0.05）。结论稳定转染pcDNA3．1^＋-hADPN可明显增加未分化和已分化的3T3-L1细胞PPARγ2 mRNA表达。TNF-α抑制PPAR-γ2 mRNA表达，而转染pcDNA3．1^＋-hADPN可改善TNF-α抑制作用。     

TNF-α对3T3-L1脂肪细胞PPAR-γ2 mRNA表达及脂联素分泌的影响

用肿瘤坏死因子α（TNF-α）分别处理未分化、已分化的3T3-L1细胞，检测培养细胞过氧化物酶体增殖物激活受体γ2（PPAR-γ2）mRNA的表达和脂联素的分泌。结果表明TNF-α可明显抑制3T3-L1脂肪细胞的PPAR-γ2 mRNA表达和脂联素的分泌（P〈0.05或P〈0.01），提示TNF-α可能通过PPAR-γ影响脂联素的分泌。     

血管紧张素Ⅱ受体阻滞剂对PPAR-γ的激活作用

目的通过观察血管紧张素Ⅱ受体阻滞剂（ARB）对过氧化物酶体增殖物激活受体（PPAR）的作用,探讨其改善糖脂代谢的机制。方法用双荧光素酶基因报告系统构建PPARs配体筛选系统检测荧光素酶活性,以反映厄贝沙坦及替米沙坦对PPAR启动子激活程度。应用RT-PCR测定厄贝沙坦及替米沙坦PPAR-γmRNA表达活性。结果厄贝沙坦及替米沙坦均可呈剂量及时间依赖性增强COS-7细胞PPAR-γ启动子表达活性,呈剂量依赖性增强3T3-L1细胞PPAR-γmRNA表达。结论可能为PPAR-γ激动剂通过激活PPARs系统来发挥其改善代谢的作用。     

血清脂联素与肥胖和非酒精性脂肪性肝病关系的研究

近年来，随着中国人生活方式和饮食习惯的改变，肥胖相关性疾病的发病率逐渐上升。非酒精性脂肪性肝病与肥胖密切相关。脂联素是近年来新发现的由脂肪细胞分泌的肽类激素，脂联素基因仅在白色脂肪组织中表达，其基因转录产物在脂肪组织中最为丰富，血中的浓度也是脂肪分泌蛋白中最高的，约占血浆蛋白的0．01％。     

叉头状转录因子O1与吡格列酮干预对肝癌HepG-2细胞葡萄糖消耗的影响

目的研究叉头状转录因子O1（FoxO1）及吡格列酮干预对高胰岛素诱导的肝癌HepG-2细胞葡萄糖消耗的影响及机制。方法1×10^-6mol／L胰岛素培养HepG．2细胞24h后,诱发培养基葡萄糖消耗减少建立细胞模型,将细胞分为对照组、空白质粒组、FoxOlsiRNA载体组、1×10^-5mol／L吡格列酮组。以普通培养基培养的细胞作为空白对照组。37℃、5％CO2培养箱中孵育24h,葡萄糖氧化酶法检测培养基中葡萄糖含量,逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测FoxO1mRNA和过氧化物酶体增殖物激活受体-γ（PPAR-γ）mRNA表达,Westernblot法检测PPAR-γ蛋白表达。将FoxO1mRNA、PPAR-γ mRNA、PPAR-γ蛋白表达与葡萄糖消耗量进行相关分析和曲线拟合。采用单因素方差分析及多样本均数两两比较进行统计学分析。结果高胰岛素培养24h较未诱导细胞培养基的葡萄糖消耗降低[分别为（1．36±0．03）和（2．93±0．05）mmol／L,P〈0．01],细胞Fox01mRNA升高（分别为0．513±0．016和0．425±0．011,P〈0．05）,PPAR-γmRNA降低（分别为0．260±0．025和0．441±0．012,P〈0．05）,PPAR-γ蛋白降低（分别为0．312±0．032和0．600±0．046,P〈0．05）。在抑制FoxO1和吡格列酮干预后此趋势有所缓解,逐渐接近于空白对照组。FoxO1mRNA、PPAR-γ mRNA和PPAR-γ蛋白表达与葡萄糖消耗量高度相关。结论FoxO1表达升高或降低对葡萄糖代谢产生不利影响;增强PPAR-γ表达可有效恢复高胰岛素诱导的高糖,增加肝细胞的胰岛素敏感性。     

过氧化物酶体增殖物激活受体γ激动剂对肥胖小鼠非肾上腺素能原代棕色脂肪功能和分化的影响

目的探索过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPAR-γ）激动剂吡格列酮（PGZ）对肥胖小鼠非肾上腺素能条件下原代棕色脂肪分化和功能的影响,为2型糖尿病和肥胖的治疗提供新依据。方法高脂饮食诱导的4周龄雄性C57BL／6J肥胖小鼠20只,取肩胛间区棕色脂肪组织,分离并培养C57小鼠原代棕色脂肪细胞,等量分人10个培养皿中,等分为对照组和PGZ干预组,每组5皿,使用PGZ干预细胞,建立PGZ干预的细胞模型,使用和PGZ溶液等量的生理盐水处理对照组细胞。实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测细胞模型的棕色脂肪基因：解偶联蛋白1（UCP-J）、超长链脂肪酸延长酶3（ELOVL3）、PPAR-γ共激活因子α和β（PGCI-α、PGCI-β）、PR包含域16区（PRDM16）、CCAAT增强子结合蛋白β（CEBP/β）、脂联素、脂肪细胞脂质结合蛋白2（AP2）、细胞色素C1氧化酶（CYC1）、线粒体转录因子A（TFAM）等表达水平;使用油红染色定量法检测细胞模型的棕色脂肪成脂功能;Western blotting法检测PGZ干预组UCP-1蛋白表达。2组间比较采用t检验,多组间比较采用方差分析和LSD检验。结果PGZ干预组细胞的棕色脂肪特异基因（UCP-1、ELOVL3、PGCI-α、PGCI-β）、成脂基因（AP2）、线粒体功能基因（CYCI、TFAM）和脂肪分化基因（PRDM16、CESP／β）表达量均显著高于对照组（相对表达量分别为：UCP-1：1100．0±612．0、2．0±0．4;ELOVL3：1461．0±617．0、2．0±1．2;PGCI-α：8．1±2．8、2．0±1．1;PGCI-β：8．3±2．8、2．0±1．3;脂联素：2．6±0．8、1．04±0．7;AP2：5．1±2．2、1．00±0．24;CYCI：3．1±0．8、1．0±0．4;TFAM：1．2±0．4、1．00±0．25;PRDM16：4．8±2．6、2．0±0．3;CEBP／β：6×10^8±5×10^8、2．0±0．6;t=2．45～5．22,均P〈0．05）;油红定量亦发现干预组成脂功能高于对照组（染色定量：1．2±0．2比1．0±0．1,t=2．45,P〈0．05）。Westernblotting检测PGZ干预组UCP-1表达高于对照组（灰度分析相对定量分别为1．24±0．25和1．00±0．14,t=2．63,P〈0．05）。结论PGZ可能通过增强棕色脂肪特异基因表达、促进细胞分化成脂、提高线粒体功能等方面增强棕色脂肪细胞功能,这可能是其改善机体代谢的原因之一。     

非酒精性脂肪肝患者胰岛素抵抗与脂联素基因表达的关系

目的探讨NAFLD患者胰岛素抵抗（IR）与脂肪组织脂联素基因表达的关系。方法用SYBR GreenI实时定量RT-PCR方法检测脂肪组织脂联素mRNA的表达水平，用稳态模型法计算IR指数。结果肥胖和非肥胖NAFLD患者及对照组IR指数分别为：3．0±0．8、2．8±0．9和2．0±0．6、1．2±0．5，其脂肪组织脂联素基因表达和血浆脂联素浓度较对照各组显著降低（P〈0．05），IR与脂联素基因表达（r=0．5，P〈0．05）和血浆脂联素浓度负相关（，=0．4，P〈0．05），与血清甘油三酯正相关（r=0．3，P〈0．05）。结论NAFLD患者的IR与脂肪组织脂联素基因低表达有关，脂联素基因低表达在IR和NAFLD发病中起了一定作用。     

肿瘤坏死因子α、吡格列酮对3T3-L1脂肪细胞脂联素mRNA表达的影响

目的观察吡格列酮（PIO）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）对3T3-L1脂肪细胞脂联素mRNA表达的影响。方法以不同浓度PIO和TNF-α于各时段处理3T3-L1细胞,用RT-PCR技术检测各条件下脂联素mRNA的表达。结果（1）3T3-L1前体脂肪细胞无脂联素mRNA表达。（2）TNF-α抑制分化及成熟的3T3-L1脂肪细胞脂联素mRNA表达。（3）PIO增强分化及成熟的3T3-L1脂肪细胞脂联素mRNA表达。（4）PIO能改善TNF-α对脂联素mRNA表达的抑制。结论在分化及成熟的脂肪细胞中,TNF-α抑制脂联素mRNA表达,而PIO增强其表达;PIO促进前体脂肪细胞分化及激活脂联素表达;PIO改善TNF-α对成熟脂肪细胞脂联素的抑制。     

持续激活的Akt减少了 3T3-L1脂肪细胞脂联素蛋白的表达

目的 研究蛋白激酶B（Akt／PKB）的持续激活与灭活对3T3-L1脂肪细胞内脂联素蛋白表达的影响。方法 通过腺病毒表达系统将持续激活的Akt（myrAkt）和无酶活性的Akt（Akt-AA）导入3T3-L1脂肪细胞内，应用免疫印迹法检测3T3-L1脂肪细胞脂联素蛋白的表达。结果 表达myrAkt的3T3-L1脂肪细胞中脂联素明显减少，表达Akt-AA的3T3-L1脂肪细胞中脂联素无明显变化。结论Akt的激活抑制了3T3-L1脂肪细胞中脂联素蛋白的表达，且Akt的激活是影响脂联素的充分条件，而不是必要条件。     

Exendin-4对脂肪细胞分化及糖脂代谢相关基因mRNA表达的影响

目的探讨Exendin-4对3T3-L1前脂肪细胞的分化及糖脂代谢相关基因mRNA表达的影响。方法体外培养3T3-L1前脂肪细胞,在脂肪细胞分化成熟过程中的不同时期分别用Exendin-4等干预,采用油红O染色,观察脂肪细胞分化及脂质积聚情况;采用荧光定量PCR检测脂肪细胞糖脂代谢标志基因GLUT-4、PPARγ、HSLmRNA表达水平。酶法测定脂肪细胞的甘油三酯含量。结果分化成熟的脂肪细胞经油红O染色可见细胞质内大片脂滴呈亮红色,而未分化细胞不被油红O染色。在脂肪细胞分化第0天和第6天用Exendin-4干预,脂肪细胞内TG的含量较空白组增加（P〈0．01）,GLUT-4、HSL、PPARγ mRNA的表达上调（P〈0．01）;在脂肪细胞分化的第12天干预,Exendin-4对肪细胞分化及相关基因mRNA的表达与空白组无明显差异。结论Exendin-4促进脂肪细胞的分化并上调糖脂代谢相关基因GLUT-4、PPARγ、HSL mRNA表达,可能为Exendin-4抗糖尿病的部分作用机制。     

甘精胰岛素对体外培养的人脂肪细胞脂肪因子分泌及脂质合成与分解的影响

目的 探讨甘精胰岛素对体外培养的人脂肪细胞脂肪因子分泌及脂质合成与分解的影响.方法 原代培养人皮下前脂肪细胞,采用不同浓度的甘精胰岛素（20、200、500、1 000、1 500nmol/L）干预其分化过程,酶联免疫吸附法检测分化过程中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、瘦素、脂联素、视黄醇结合蛋白4（RBP4）的分泌情况,比色法检测细胞内甘油三酯（TG）合成及培养基中甘油的释放量,实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测脂肪分化标志基因：过氧化物酶体增殖物活化受体γ（PPAR-γ）、CCAAT促进结合蛋白α（C/EBPα）以及脂联素、RBP4、脂质代谢基因脂肪细胞脂肪酸结合蛋白（aP2）、激素敏感性酯酶（LPL）转录情况.组内比较采用配对t检验,组间比较采用.结果（1）人脂肪组织可分离出前脂肪细胞,并诱导分化为成熟的脂肪细胞,随着细胞的分化成熟,TNF-α、瘦素、脂联素、RBP4的分泌逐渐增加.（2）随着细胞的分化,细胞内TG含量逐渐增加,分化第15天时达峰值[（12.16±0.19）比（0.02 ±0.00） mmol·L-1·g-1,t=11.20,P＜0.001];培养基中甘油含量与甘精胰岛素浓度呈正相关,1 500比500nmol/L组增高[21 d：（961±15）比（611±10） μmol/L,t =3.70,P＜0.01],与分化时间无关.（3）RT-PCR结果：PPAR-γ、C/EBPα、脂联素、RBP4、aP2、LPL基因转录水平随着分化时间的延长逐渐增加,在第15 ～21天达峰值,与分化前比较,差异均有统计学意义（均P＜0.01）.结论 甘精胰岛素可诱导体外培养的人前脂肪细胞的分化,促进多种脂肪细胞因子的分泌,中低浓度促进脂质合成,高浓度可诱导脂质分解.     

罗格列酮对肥胖糖尿病小鼠脂肪组织中Perilipin基因表达的影响

目的观察罗格列酮（RGZ）对肥胖糖尿病小鼠脂肪组织中脂滴包被蛋白（Perilipin）表达的影响,并探讨其作用机制。方法36只雄性C57BL／6小鼠随机分为对照（Nc）组、糖尿病（DM）组及干预（RGZ）组,建立肥胖糖尿病小鼠模型,并应用RT—PCR检测各组小鼠脂肪组织中Perilipin基因的表达水平。结果与NC组比较,DM组小鼠脂肪组织中Perilipin基因表达水平明显下调（P〈0．01）。而经RGZ干预后,RGZ组小鼠脂肪组织中Perilipin基因表达水平明显高于DM组（P〈0．01）。结论RGZ能上调肥胖糖尿病小鼠脂肪组织中Perilipin基因表达,并调节脂代谢紊乱及改善胰岛素抵抗。     

Adipose tissue-specific dysregulation of angiotensinogen by oxidative stress in obesity

Adipose tissue expresses all components of the renin-angiotensin system including angiotensinogen (AGT). Recent studies have highlighted a potential role of AGT in adipose tissue function and homeostasis. However, some controversies surround the regulatory mechanisms of AGT in obese adipose tissue. In this context, we here demonstrated that the AGT messenger RNA (mRNA) level in human subcutaneous adipose tissue was significantly reduced in obese subjects as compared with nonobese subjects. Adipose tissue AGT mRNA level in obese mice was also lower as compared with their lean littermates; however, the hepatic AGT mRNA level remained unchanged. When 3T3-L1 adipocytes were cultured for a long period, the adipocytes became hypertrophic with a marked increase in the production of reactive oxygen species. Expression and secretion of AGT continued to decrease during the course of adipocyte hypertrophy. Treatment of the 3T3-L1 and primary adipocytes with reactive oxygen species (hydrogen peroxide) or tumor necrosis factor α caused a significant decrease in the expression and secretion of AGT. On the other hand, treatment with the antioxidant N-acetyl cysteine suppressed the decrease in the expression and secretion of AGT in the hypertrophied 3T3-L1 adipocytes. Finally, treatment of obese db/db mice with N-acetyl cysteine augmented the expression of AGT in the adipose tissue, but not in the liver. The present study demonstrates for the first time that oxidative stress dysregulates AGT in obese adipose tissue, providing a novel insight into the adipose tissue-specific interaction between the regulation of AGT and oxidative stress in the pathophysiology of obesity.     

胰升血糖素样肽1对3T3-L1前脂肪细胞增殖及分化的影响

目的探讨胰升血糖素样肽1（GLP-1）对3T3-L1前脂肪细胞增殖及分化的影响。方法在3T3-L1前脂肪细胞增殖和分化的不同阶段添加不同浓度梯度的GLP-1（7—36）,使用XTT比色法测定细胞增殖情况,油红O脂肪染色、异丙醇萃取法评价细胞分化情况,RT-PCR法测定不同分化阶段PPAR-ymRNA表达水平。结果高浓度GLP-1（10^-9～10^-7mool／L）能够减弱3T3-L1前脂肪细胞的增殖能力;GLP-1在10^-11～10^-8mmoL／浓度梯度均存在抑制3T3-L1前脂肪细胞向脂肪细胞分化的作用,但对分化过程中PPARymRNA的表达水平均未见显著影响。结论本研究发现GLP-1能够抑制3T3-L1前脂肪细胞增殖及分化,提示脂肪细胞可能也是GLP-1减轻体重作用的潜在靶点。