结核性胸膜炎患者胸腔积液分枝杆菌检测结果分析

目的 :通过分析结核性胸膜炎患者胸腔积液分枝杆菌检测结果,探讨提高其阳性检出率的方法。方法 :采集267例临床诊断为结核性胸膜炎患者的胸腔积液,离心后弃上清,用氢氧化钠(Na OH)消化处理,磷酸盐缓冲液(PBS)中和离心,取沉淀涂片抗酸染色镜检,接种MGIT960系统培养管和罗氏培养基,分析培养和涂片镜检结果 ,采用χ~2检验比较抗酸杆菌涂片与分枝杆菌培养阳性率的差异,BACTEC MGIT 960系统与罗氏培养阳性率的差异。结果:267例结核性胸膜炎患者胸腔积液经消化处理后,抗酸杆菌涂片阳性者81例,阳性率为30.6%,涂片1~8条/300个视野至1+以下者占涂片阳性的97.5%。罗氏培养233例,培养阳性39例,阳性率为16.7%,培养1+以下者为97.4%。MGIT960系统培养221例,培养阳性72例,阳性率为32.6%。消化后涂片法阳性率高于罗氏培养法(χ~2=7.92,P0.05)。结论:结核性胸膜炎患者胸腔积液中抗酸杆菌菌量少。胸腔积液经消化集菌可显著提高抗酸杆菌涂片阳性率。相比罗氏培养,MGIT 960系统能显著提高分枝杆菌培养的阳性率。     

骨关节结核脓液中结核杆菌的复苏培养

目的探讨骨关节结核脓液中结核杆菌的复苏培养方法。方法应用含不同浓度复苏因子蛋白的7H9液体培养基培养标本，分别在第6天、第11天、第16天、第30天检测培养物的OD值、取10uL涂7H11平板培养、抗酸染色，并同时将标本进行罗氏培养和涂片抗酸染色。结果复苏培养阳性率高于涂片阳性率和罗氏培养阳性率．二者均有统计学显著差异（P〈0．05）；复苏培养平均在第10天进入对数生长期，其OD值与对照组比较有显著性差异（P〈0．01）。结论结核杆菌复苏因子能有效地促进骨关节结核脓液中结核杆菌的生长。     

脑脊液标本结核分枝杆菌的快速培养

目的建立结核性脑炎脑脊液中结核分枝杆菌快速培养的方法。方法在7H9液体培养基加入一定浓度的复苏因子蛋白,接种脑脊液后进行培养,并用不含复苏因子蛋白质的7H9培养做对照。分别在第0、6、11、16和30d检测培养物的吸光度(A)值;取培养物10μl涂7H11平板,培养后进行CFU计数、抗酸染色。同时将标本进行罗氏培养和涂片抗酸染色。结果结核分枝杆菌复苏培养阳性率、涂片阳性率分别为55.00%和30.00%,差异有统计学意义(P<0.05);复苏培养阳性率与罗氏培养阳性率35.00%比较,差异无统计学意义(P>0.05)。复苏培养的结核杆菌平均在第10d进入对数生长期,其A值与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论结核杆菌复苏因子能促进脑脊液中结核杆菌的生长。     

显微镜观察药物敏感度检测技术在肺外结核诊断中的应用

目的 探讨显微镜观察药物敏感度检测技术(MODS)对肺外结核的诊断价值.方法 采用24孔细胞培养板液体培养方法建立MODS.收集74份结核性胸膜炎患者的胸腔积液、63份结核性脑膜炎患者的脑脊液和18份非结核病患者胸腔积液和脑脊液标本,分别采用抗酸染色法、改良罗氏培养法和MODS进行结核分枝杆菌检测,对改良罗氏培养法和MODS培养获得的分枝杆菌采用免疫层析法鉴定,数据比较采用x2检验.结果 MODS、改良罗氏培养法和抗酸染色法 检测结核性胸膜炎的阳性率分别为58.1％(43/74)、18.9％(14/74)和6.8％(5/74);检测结核性脑膜炎的阳性率分别为54.0％(34/63)、20.6％(13/63)和4.8％(3/63).MODS检测结核性胸膜炎和结核性脑膜炎的阳性率均高于改良罗氏培养法,差异有统计学意义(x2=24.00,P＜0.01;x2=14.97,P＜0.01).所有改良罗氏培养法和MODS检测获得的分枝杆菌均为结核分枝杆菌.三种方法检测18份非结核病患者胸腔积液和脑脊液结果均为阴性.MODS检测脑脊液和胸腔积液标本的阳性检出中位时间分别为9d和14d,明显短于改良罗氏培养法所需的31d.结论 MODS与传统 病原学检测方法相比,具有敏感性好、检出时间短的优势,适用于肺外结核病的临床快速诊断.     

结核分枝杆菌Rpf-DNA疫苗对Mtb感染小鼠免疫保护作用的研究

目的 评价Mtb复苏因子DNA疫苗（resuscitation-promoting factor DNA,Rpf-DNA）对Mtb感染宿主的免疫保护作用。 方法 构建复苏因子D(Rpf D-DNA)和复苏因子E(Rpf E-DNA)质粒疫苗,180只BALB/c小鼠（4周龄）分为6组,每组30只,分别用空质粒、Rpf D-DNA质粒、Rpf E-DNA质粒、BCG、生理盐水免疫,H37Rv标准株气溶胶感染。检测血清复苏因子（Rpf）抗体、IFN-γ;RpfD、E刺激淋巴细胞后进行淋巴细胞增殖、细胞杀伤实验;检测细胞上清IFN-γ、IL-12、IL-2;对肺组织进行病理学检测和细菌负荷（CFU）计数。 结果 （1）疫苗免疫组血清Rpf D、Rpf E抗体水平：Rpf D组0.32±0.1,Rpf E组0.39±0.1,BCG组0.02±0.01,空质粒组0.01±0.0,生理盐水组0.09±0.04,空白对照组0.03±0.01,RpfD组与RpfE组抗体水平与BCG组、空质粒组、生理盐水组、空白对照组比较差异有显著统计学意义,F值分别为Rpf D：45.6,43.2,45.1,45.7;Rpf E：51.6,53.6,51.0,52.2;P值均<0.01。血清IFN-γ：Rpf D组（43.9±24.8）pg/ml,Rpf E组（45.9±21.0）pg/ml,BCG组（21.0±11.0）pg/ml,空质粒组（7.9±4.9）pg/ml,生理盐水组（4.7±2.1）pg/ml,空白对照组（5.8±4.7）pg/ml,Rpf D、Rpf E质粒组与BCG组比较差异有统计学意义（F值分别为Rpf D：10.2;Rpf E：12.4;P值均<0.05）, 与空质粒组、生理盐水组、空白对照组比较差异有显著统计学意义,F值分别为Rpf D：15.6,17.8,17.3;Rpf E：17.5,21.1,20.7;P值均<0.01。（2）淋巴细胞增殖实验CCK-8：Rpf D组176.0±4.2,Rpf E组183.0±4.3,BCG组101.0±1.1,空质粒组100.0±6.8,生理盐水组104.0±8.4,空白对照组116.0±2.2,RpfD、RpfE质粒组与BCG组、空质粒组、生理盐水组、空白对照组比较差异有统计学意义,F值分别为Rpf D：9.5,10.1,10.0,9.0;Rpf E：11.2,12.9,11.7,10.3;P值均<0.05。细胞杀伤实验：Rpf D组32.0±3.2,Rpf E组30.0±4.2,BCG组16.0±5.9,空质粒组3.3±1.5,生理盐水组6.7±0.5,空白对照组7.3±3.5,Rpf D、Rpf E质粒组与BCG组、空质粒组、生理盐水组、空白对照组比较差异有统计学意义,F值分别为Rpf D：8.8,14.5,13.7,11.9;Rpf E：8.1,12.5,11.6,11.1;P值均<0.05。（3）Rpf D、Rpf E蛋白各自刺激淋巴细胞后上清细胞因子检测：IL-2：Rpf D组9.5±2.4,Rpf E组9.2±1.2,BCG组2.4±2.1,空质粒组1.2±0.3,生理盐水组1.8±1.0,空白对照组1.5±0.7,Rpf D、Rpf E质粒组与其他各组比较差异有统计学意义,F值分别为Rpf D：12.5,14.6,13.5,13.9;Rpf E：12.0,13.6,13.1,13.2;P值均<0.05。IFN-γ：Rpf D组22.2±5.7,Rpf E组28.7±14.4,BCG组16.1±10.1,空质粒组9.8±1.6,生理盐水组13.2±2.1,空白对照组15.7±2.9,RpfD、RpfE质粒组与其他各组比较差异有统计学意义,F值分别为Rpf D：7.8,12.6,8.7,8.3;Rpf E：11.3,16.4,14.7,14.2;P值均<0.05。 结论 实验表明复苏因子疫苗能诱导Mtb感染小鼠产生体液免疫和细胞免疫,有希望成为结核病候选疫苗之一。     

骨关节结核各类标本进行结核分枝杆菌培养与PCR检测的阳性率结果分析

目的 比较骨关节结核病灶中脓液、干酪、肉芽及死骨组织的结核分枝杆菌培养阳性率,及结核分枝杆菌BACTEC MGIT 960（简称“MGIT 960”）培养、改良罗氏培养基培养、PCR检测的联合阳性率.方法 2011年6月至2012年5月首都医科大学附属北京胸科医院收治的经病理明确诊断为骨关节结核的患者50例,通过手术获取病灶中的脓液（50份）、干酪（42份）、肉芽（48份）及死骨组织标本（43份）,分别进行结核分枝杆菌MGIT 960培养及改良罗氏培养基培养,比较4种组织标本的培养阳性率,计算2种培养方法的联合阳性率;对脓液标本单独通过PCR方法进行了阳性率检测;计算脓液标本3种方法的联合阳性率.结果 4种标本MGIT 960培养的阳性率依次为：死骨组织（41.9％,18/43）＞脓液（40.0％,20/50）＞肉芽（33.3％,16/48）=干酪（33.3 ％,14/42）;4种标本改良罗氏培养阳性率依次为：肉芽（20.8％,10/48）＞脓液（20.0％,10/50）＞死骨组织（16.3 ％,7/43）＞干酪（14.3％,6/42）;脓液的PCR检测阳性率为48.0％（24/50）.MGIT 960和改良罗氏培养2种结核分枝杆菌培养方法的联合阳性率为50.0％（25/50）,而PCR检测、MGIT960和改良罗氏培养3种方法的联合阳性率为68.0（34/50）.结论 骨关节结核患者,应尽可能选择多种标本以提高培养阳性率.MGIT 960培养可以作为首选的细菌学诊断方法,但如果再联合使用改良罗氏培养和PCR扩增技术,能够进一步提高检出阳性率.     

昆明地区结核分枝杆菌标本培养检测及耐药情况分析

目的 了解昆明地区结核病患者和疑似结核病患者中Mtb培养检测情况和耐药情况。方法 收集1928例结核病患者和疑似结核病患者2046份标本,包括痰、支气管刷检物或肺泡灌洗液、胸腹腔积液、脑脊液、尿液、脓液、其他标本（淋巴液、心包积液、分泌物、穿刺液等）。使用BACTEC MGIT 960全自动分枝杆菌快速培养仪和中性罗氏培养基进行培养,分别记录初始抗酸涂片结果,BACTEC MGIT 960全自动分枝杆菌快速培养仪、中性罗氏培养基报告阳性后的涂片结果。分别对培养时间、培养阳性率、培养污染率及5种一线抗结核药物（S、INH、RFP、EMB和PZA）的耐药情况作统计分析。结果 BACTEC MGIT 960全自动分枝杆菌快速培养仪和中性罗氏培养基阳性率分别为38.2%（782/2046）和32.6%（666/2046）;结核诊断率37.3%（719/1928）;抗结核一线药耐药率为41.9%（212/506）,耐多药率（至少同时耐INH和RFP）为20.0%（101/506）。结论 昆明地区结核病患者对一线抗结核药物耐药情况严重。     

MPB64抗原检测快速诊断结核分枝杆菌的临床价值

目的比较痰涂片抗酸染色、改良酸性罗氏培养、MPB64的免疫胶体金法用于检测结核分枝杆菌特异性的分泌蛋白质MPB64,评价MPB64的免疫胶体金法在结核分枝杆菌快速检测中的应用价值。方法选取438例确诊肺结核患者痰液,进行痰涂片抗酸染色、7H9液体培养基和改良酸性罗氏培养基培养、基于MPB64的免疫胶体金法检测,对结果进行比较分析。并选取痰涂片确认为阳性的标本33例,用米氏7H9液体培养和基于MPB64的免疫胶体金法进行检出时间对比。结果痰涂片阳性率为14.8%,罗氏培养阳性率为20.7%,7H9液体培养阳性率24.8%,MPB64的免疫胶体金法阳性率为25.1%。基于MPB64的免疫胶体金法在培养的第15天检出32例阳性;而单纯的7H9液体培养加抗酸染色检测法在第15天只检出11例阳性。结论7H9液体培养配合基于MPB64的免疫胶体金法可以作为一种较为敏感和特异的检测结核分枝杆菌感染的方法,并可以有效的区分结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌。     

联合检测VEGF、CEA、ADA对结核性与恶性胸腔积液的鉴别诊断价值

目的：探讨血管内皮生长因子（VEGF）、癌胚抗原（CEA）、腺苷脱氨酶（ADA）联合检测对结核性与恶性胸腔积液的鉴别诊断价值。方法：选择胸腔镜检查、并取活检病理确诊的96例胸腔积液患者,分别采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）、酶联免疫分析法（EIA）、比色分析法检测胸腔积液中VEGF、CEA、ADA的含量、并对统计结果进行分析。结果：恶性胸腔积液组中VEGF、CEA值分别为（307±132）pg／L、（16．3±7．8）μg／L,分别显著高于结核性胸腔积液组的（34±11．2）pg／L、（2．3±1．1）μg／L（均P〈0．01）。恶性胸腔积液组ADA含量为（12．46±4．61）U／L,低于结核性胸腔积液组（44．98±11．78）U／L,两者间差异有统计学意义（P〈0．05）。联合检测VEGF和CEA,对诊断恶性胸水的敏感性为95．4％,特异性为99．8％。结论：检测胸腔积液中VEGF、CEA及ADA对胸水的鉴别诊断有一定的价值,其联合检测综合诊断能提高恶性胸水与结核性胸膜炎的诊断准确率。     

结核分枝杆菌快速培养方法的建立及临床应用初步观察

目的 观察结核分枝杆菌在自制培养基上的生长情况，建立快速培养方法。方法将改良罗氏培养基的成分进行改进，自制5种培养基，每种3支，每支接种菌量10-3mg，观察结核分枝杆菌标准株生长情况。并以第5号培养基3种成分不同浓度做正交叉实验，得出最佳浓度。收集临床标本，在自制培养基上培养观察。结果 结核分枝杆菌标准株在5种自制培养基上，菌落开始生长天数及典型菌落出现天数均比改良罗氏培养基短，两者差异均具有显著性（P〈O．01）。第5号培养基以25％牛肉浸液，20％当归浸液，20％党参浸液的浓度最佳，结核分枝杆菌标准株接种后第3～5d开始生长，第7～9d出现典型的“菜花状”菌落。临床标本接种在改良罗氏及自制培养基上，阳性分离率差异无显著性（f—O．09，P〉O．05），两种培养基上典型菌落形成的平均天数差异有显著性（f一6．828，P〈O．001）。结论 结核分枝杆菌标准株在自制第5号培养基上生长快，培养时间短，为该菌培养提供了一种新的快速培养基，在临床上有一定的实用价值，值得进一步研究、推广。     

临床分枝杆菌培养中同步筛检依赖利福平菌的应用价值探讨

目的 探讨分枝杆菌培养中同步筛检依赖利福平结核分枝杆菌（依R菌）的临床应用价值,以期为临床依R菌早期发现提供帮助。 方法 采用临床典型依R菌株在罗氏（L-J）培养基上的最佳生长利福平药物浓度100μg/ml（简称“L-J R100”）,建立临床依R菌初代筛检模式,即在临床分枝杆菌BD960快速分离培养中,平行接种L-J R100 管和罗氏空白对照管（L-J对照）培养;按照其模式对重庆市公共卫生医疗救治中心2011年3月7日至2012年2月15日期间共5362份临床标本平行培养结果进行统计分析（实验结果录入瑞美检验网络LIS系统）。 结果BD960、L-J R100和L-J对照管3种方法平行培养的总阳性检出率为43.92% (2355株/5362份),其中BD960阳性检出率39.56%（2121株/5362份）,L-J对照管阳性检出率25.57%（1371株/5362份）。BD960阴性但L-J对照管培养阳性者234份;L-J R100阳性703株,占检出阳性的29.85%(703株/2355株）;发现有依R菌现象的258株（合计221例,其中重复出现依R菌现象2次的33例、3次的1例、4次的3例,另外有14株L-J R100阳性而对照为阴性的绝对依赖株）,占L-J对照管阳性的18.82%（258株/1371株）,占L-J R100阳性的36.70%（258株/703株）。 结论 临床分枝杆菌培养中同步筛检依R菌能分离到绝对依赖株,可提早为临床提示分离阳性株是否为利福平依赖菌或耐药菌;同时可提高分枝杆菌培养阳性检出率;其方法简单易行,有较好的临床应用价值。     

手工MGIT系统在基层结核病实验室中检测分枝杆菌的效果评价

目的对手工MGIT液体培养系统（manual mycobacteria growth indicator tube system, M-MGIT）检测分枝杆菌的效果进行评价。方法收集2012年1月至2013年2月北京市朝阳区疾病预防控制中心结核病门诊初诊患者526例,收集首次痰标本526份,分别对同份标本进行罗氏（Lowenstein-Jensen,L-J）固体培养、全自动BACTEC MGIT 960 系统培养（A-MGIT）和M-MGIT系统培养,统计学分析采用χ²检验和t检验,以P<0.05 为差异有统计学意义。结果526份标本中,3种分离培养方法共分离出261株分枝杆菌菌株,检出率为49.6%;M-MGIT法、A-MGIT法和L-J法阳性检出率分别为48.7%（256/526）、49.0%（258/526）和41.3%（217/526）。M-MGIT和A-MGIT培养法检出率均高于L-J培养法,差异有统计学意义（χ²值分别为5.84、6.45,P值均<0.05),但M-MGIT和A-MGIT培养法检出率差异无统计学意义（χ²=0.02,P>0.05）。M-MGIT法、A-MGIT法和L-J法阳性菌株平均报告时间分别为13d［（13±6）d］、12d［（12±6）d］和24d［（24±9）d］,M-MGIT和A-MGIT法阳性报告时间明显短于L-J法,差异有统计学意义（t值分别为15.84、18.32,P值均<0.05）,M-MGIT和A-MGIT之间的差异无统计学意义（t=1.89,P>0.05）。M-MGIT法、A-MGIT法和L-J法污染率分别为4.6%（24/526）、4.9%（26/526）和4.1%（43/1052）,差异无统计学意义（χ²=0.64,P>0.05）。结论M-MGIT液体培养系统能快速检测分枝杆菌,检出率高,阳性报告时间短,成本低廉,适合基层结核病实验室应用。     

抗病毒治疗对慢性丙型肝炎CD4^＋CD25^＋调节性T细胞频率和功能的影响

目的研究抗病毒治疗前后慢性丙型肝炎患者CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（Treg）频率和功能的变化。方法筛选HLA—A2阳性慢性丙型肝炎患者31例，给予聚乙二醇化干扰素α-2a（相对分子质量为40000）180μg每周1次皮下注射，联合口服利巴韦林。分别在治疗前和治疗结束随访24周时应用流式细胞仪检测患者CD4^＋CD25^＋ Treg细胞占外周血CD4^＋T细胞的频率，应用液闪计数仪检测其对HCV特异性CD8^＋T细胞增殖的抑制作用，ELISA法检测细胞培养上清γ干扰素（IFN-γ）水平的变化情况。结果治疗结束随访24周，患者外周血CD4^＋CD25^＋ Treg细胞频率为（9．6±3．0）％，明显低于治疗前的（11．0±2．3）％（t=2．028，P〈0．05）；持续病毒学应答（SVR）组CD4^＋CD25^＋ Treg细胞频率为（8．9±2．7）％，明显低于未获得SVR患者组的（10．4±2．3）％（t=3．324，P〈0．01）。抗病毒治疗后CD4^＋CD25^＋ Treg细胞抑制HCV特异性CD8^＋T细胞增殖的作用减弱。治疗后患者IFN-γ水平为（3959±577）pg／ml，明显高于治疗前的（1965±326）pg／ml（t=16．1，P〈0．01）；获得SVR患者组IFN-γ（6824±568）pg／ml，明显高于未获得SVR患者组的（2219±286）pg／ml（t=29．853，P〈0．001）。结论慢性丙型肝炎患者随着HCV RNA水平的下降，CD4^＋CD25^＋Treg细胞频率降低，抑制HCV特异性CD8^＋T细胞增殖的作用减弱。     

HIV感染与AIDS患者CD4^＋T淋巴细胞计数与肺结核主要症状体征的相关性研究

目的探讨HIV感染与AIDS患者CD4⁺ T淋巴细胞计数与肺结核主要临床症状、体征的相关性。方法选择2010年7月至2012年6月期间在广西CDC、广西龙潭医院、南宁市第四人民医院就诊登记的HIV感染与AIDS患者733例,采用液体培养和改良中性罗氏培养方法对患者痰标本进行结核分枝杆菌培养,采用流式细胞仪检测法对CD4⁺ T细胞进行检测,分析CD4⁺ T淋巴细胞计数与肺结核相关临床症状、体征的关系。结果HIV感染与AIDS患者结核分枝杆菌痰培养阳性率为16.1%（118/733）。CD4⁺ T淋巴细胞计数分级为1级的痰培养阳性率为12.3%（9/73）,2级为10.3%（6/58）,3级为17.0%（15/88）,4级为17.1%（88/514）,不同CD4⁺ T淋巴细胞计数级别的痰培养阳性率的差异无统计学意义（χ²趋势性=2.004,P=0.157）;不同级别CD4⁺ T淋巴细胞计数与结核分枝杆菌培养阳性率之间具有相关性（r=-0.048,P=0.035）。CD4⁺ T淋巴细胞计数与是否有咳嗽、咯痰＞2周症状有关,有咳嗽、咯痰＞2周症状的患者CD4⁺ T淋巴细胞计数（1.54±0.65）lg低于无该症状的患者（1.68±0.70）lg（t=-2.621,P=0.009）。结论HIV感染与AIDS患者CD4⁺ T淋巴细胞计数级别与结核分枝杆菌痰培养结果具有相关性,临床上对于咳嗽、咯痰＞2周的HIV感染与AIDS患者应予以重视,警惕合并肺结核的可能。     

发光二极管荧光显微镜检测结核分枝杆菌在基层实验室的应用评价

目的 评价发光二极管（light-emitting diodes,LED）荧光显微镜在基层实验室痰涂片中检测结核分枝杆菌的应用效果。 方法 收集2011年7月至2011年9月在青海省西宁市7个县（区）级结核病防治机构（简称“结防机构”）就诊的所有肺结核可疑症状者592例（1738份痰标本）。对每份痰标本涂片2张,分别进行萋-尼（Ziehl-Neelsen, Z-N）抗酸染色和金胺O（auramine O）荧光染色,然后以盲法用传统光学显微镜和LED荧光显微镜进行检测,以简单法固体罗氏培养（L-J）结果为金标准,比较两种显微镜阳性检出率的差异、诊断的准确性及检出时间的差异。 结果 LED荧光显微镜痰涂片阳性检出率为14.90%（259/1738）,比传统光学显微镜13.75%（239/1738）提高1.15%,差异有统计学意义（Z=5.88,P〈0.05）。以简单法固体罗氏培养结果为金标准,传统光学显微镜的敏感度为79.60%（199/250;95%CI=74.60％～84.60%）,特异度为97.31%（1446/1486;95%CI=96.49％～98.13%）;ROC曲线下面积为0.8878（95%CI=0.8623～0.9133）。LED荧光显微镜的敏感度为84.80%（212/250;95%CI=80.30%～89.25%）,特异度为96.84%（1439/1486;95%CI=95.95%～97.73%）,ROC曲线下面积为0.9118（95%CI=0.8890～0.9347）。传统光学显微镜的平均读片时间为（185.600±79.271）s,LED荧光显微镜的平均读片时间为（144.19±62.173）s,时间差异有统计学意义（t=15.32, P〈0.01）。 结论 应用LED荧光显微镜可明显提高痰涂片中结核分枝杆菌的阳性检出率,较传统光学显微镜有更高的敏感度,但特异度相当,诊断肺结核患者的价值更高,且能明显缩短读片时间。     

实时荧光核酸恒温扩增检测技术在结核病诊断中的临床应用

目的 评估实时荧光核酸恒温扩增检测技术（simultaneous amplification and testing,SAT）在结核病患者的痰液、体液及病灶组织等标本中检测结核分枝杆菌的价值.方法 收集在广州市胸科医院就诊的疑似结核病患者的痰液734份、体液标本94份（包括68份胸腔积液、21份脑脊液、5份关节积液,以下统称“体液”）及病灶组织标本76份,共计904份标本.同时采用SAT法、改良罗氏培养法进行检测,培养阳性者进行基因芯片菌种鉴定.SAT法与改良罗氏培养法结果不相符的标本,用结核分枝杆菌聚合酶链（polymerase chain reaction technology for Mycobacterium tuberculosis,PCR-TB）荧光诊断试剂盒进行检测.采用x2检验比较SAT法与改良罗氏培养法对结核病患者的阳性检出率.结果 以改良罗氏培养结果为金标准,则SAT法在痰液、体液、病灶组织标本的敏感度、特异度、符合率分别为90.20％（230/255）、92.48％（443/479）、91.69％（673/734）;94.74％（18/19）、81.33％（61/75）、84.04％（79/94）;100.00％（14/14）、77.42％（48/62）、81.58％（62/76）.以扩大金标准（培养＋PCR法）比对,则SAT法在痰液、体液、病灶组织标本的敏感度、特异度、符合率分别为96.30％（260/270）、99.35％（461/464）、98.23％（721/734）;96.97％（32/33）、100.00％（61/61）、98.94％（93/94）;100.00％（27/27）、97.96％（48/49）、98.68％（75/76）.改良罗氏培养法和SAT法在痰液、体液、病灶组织标本的阳性检出率分别为34.74％（255/734）和36.24％（266/734）、20.21％（19/94）和34.04％（32/94）、18.42％（14/76）和36.84％（28/76）;痰标本两者的阳性率比较,差异没有统计学意义（x2=0.36,P＞0.05）.体液与病灶组织标本中,SAT法较改良罗氏培养法的阳性率高出13.83％和18.42％,差异有统计学意义（x2值分别为4.55、6.44,P值均＜0.05）.结论 SAT法检测痰液、体液及病灶组织标本中的结核分枝杆菌,具有快速、敏感度和特异度较高的优点,可提高结核分枝杆菌的检出率.     

高糖环境下美罗华对B淋巴细胞株Ramos增殖的抑制作用

目的探讨在高糖状态下美罗华对B淋巴细胞周期、增殖和凋亡的影响。方法体外培养人B淋巴细胞株Ramos,将细胞分别以单纯5．5、10．0、15．0、25．0mmol/L葡萄糖培养或另外分别加入10mg／L美罗华培养,即分为葡萄糖组和美罗华组。以上两组培养3—7d,检测细胞增殖、凋亡及其周期情况。细胞增殖和活性以台盼蓝染色法测定。细胞凋亡和周期采用流式细胞技术检测。两组间数据比较采用配对t检验。结果5．5、10．0、15．0、25．0mmol/L葡萄糖组B淋巴细胞数量分别为（1．96±0．41）×10^6、（3．49±0．51）×10^6、（3．44±0．67）×10^6、（3．04±0．52）×10^6,凋亡率分别为5．0％±0．9％、4．0％±0．8％、6．2％±1．8％、7．6％±1．3％,S期比例分别为32％±6％、41％±8％、40％±7％、36％±6％;美罗华组细胞数量分别为（1．23±0．23）×10^6、（1．52±0．29）×10^6、（1．38±0．23）××10^6、（1．06±0．23）×10^6,细胞凋亡率则分别23．1％±3．2％、21．2％±4．2％、24．4％±4．8％、26．9％±6．0％,S期细胞比例则分别22％±4％、28％±5％、26％±4％、20％±5％。与葡萄糖组比较,美罗华组B细胞增殖在不同糖浓度亚组均显著减少（t=9．19、5．52、9．75、14．22,均P〈0．01）,细胞凋亡率显著增加（t：16．62、12．51、11．53、9．12,均P〈0．01）,S期细胞比率显著减少（t=5．87、5．19、9．91、7．73,均P〈0．01）。两组细胞增殖数量和S期比率均在10．0mmol/L葡萄糖时最高;两组细胞凋亡率均在25．0mmol/L葡萄糖时最多。结论美罗华通过抑制细胞周期以及促进细胞凋亡实现对B淋巴细胞增殖的抑制作用,其抑制作用在高糖状态下更为明显。     

应用免疫磁珠分离-改良罗氏培养技术检测痰结核分枝杆菌的研究

目的通过免疫磁珠分离技术(immunomagnetic beads separation techniques,IMBS)富集痰液中的结核分枝杆菌,提高痰液培养的阳性率,以期用于结核病的快速诊断。方法制备兔抗结核杆菌IgG抗体,并将其结合于免疫磁珠表面。采集71例确诊结核病患者的痰液标本,通过免疫磁珠分离技术捕获、富集吸附结核分枝杆菌后用改良罗氏培养基培养,并与传统改良罗氏(L-J)培养法和痰涂片抗酸染色法作比较。结果 71例结核病患者痰涂片抗酸染色检查阳性26例,阳性率36.6%;传统改良L-J培养阳性34例,阳性率47.9%;免疫磁珠分离技术捕获、富集结核分枝杆菌后进行改良L-J培养阳性48例,阳性率67.6%。三者阳性率差异有统计学意义(P<0.05),改良L-J培养和痰涂片检查阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。结论采用免疫磁珠分离技术捕获、富集痰液中的结核分枝杆菌后进行培养,可显著提高痰培养的阳性率,该方法可用于结核病的快速诊断。     

体液标本经消化液处理在结核病发现中应用评价

目的了解消化液处理标本抗酸染色在提高结核分枝杆菌检出率方面的价值。方法以BACTECMGIT960检出阳性样本为参照,消化液处理标本抗酸染色比较直接涂片抗酸染色和L—J培养这两种方法,对消化液处理标本抗酸染色的阳性检出率做出评价。结果MGIT960检出的阳性样本共635例,经消化液处理直接涂片的阳性检出率为48．03％（305／635）,与直接涂片抗酸染色阳性检出率（62．20％（395／635））比较,两者无统计学差异;较L—J培养管87．55％（556／635）的阳性检出率,两者有显著的统计学差异。结论消化液处珲后的抗酸涂片并不比多次直接涂片抗酸染色对结核分枝杆菌的阳性检出率高。     

不同痰标本处理方法对结核分枝杆菌罗氏培养检测结果的影响

目的 分析采用简单法和离心法处理痰标本,以及采用离心法处理痰标本时不同离心条件对罗氏培养检测结果的影响。方法 收集2010年9-11月北京市结核病胸部肿瘤研究所国家结核病临床实验室进行细菌学检查的疑似结核病患者痰标本198份,其中涂片阳性的痰标本99份,涂片阴性的痰标本99份。同时应用简单法和离心法对198份痰标本进行罗氏培养;离心法培养时分别采用5种不同的离心条件：3000×g离心15 min、3000×g离心8 min、3000×g离心25 min、2000×g离心15 min、5000×g离心15 min。结果 任何一种方法培养阳性即认定标本培养阳性,198份痰标本中共有126份培养阳性,其中97份来自涂阳痰标本,29份来自涂阴痰标本;简单法的阳性率为93.65%（118/126）,离心法最高的阳性率为96.03%（121/126）。简单法的平均初生长时间为（20±8.56） d,离心法（3000×g离心15 min）的平均初生长时间为（22±9.10）d,两者间差异有统计学意义（Z=-4.81, P<0.001）。在125份离心法培养阳性的标本中,3000×g离心15 min、3000×g离心8 min、3000×g离心25 min、2000×g离心15 min、5000×g离心15 min,5种不同离心条件下的培养阳性率分别为96.03%（121/126）、89.68%（113/126）、95.24%（120/126）、92.06%（116/126）和96.03%（121/126）。 结论 罗氏培养过程中,简单法的阳性率与离心法接近,但由于简单法操作简单、污染率较低,初生长时间较短,因而可能更符合临床的需要;应用离心法进行罗氏培养时,离心力或离心时间的变化可能会影响培养的阳性率。