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1.
目的了解结核分枝杆菌katG基因S315突变与异烟肼(isoniazid,INH)耐药相关性,建立快速简便的katG基因S315突变基因芯片检测方法。方法采用二倍稀释法检测123株结核分枝杆菌临床分离菌株对INH的耐药性。PCR及测序确定上述结核分枝杆菌katG基因S315位点突变率及突变类型。根据PCR及测序结果,设计Cy3荧光标记探针并制备katG基因S315位点突变检测基因芯片。基因芯片检测结果与PCR及测序结果进行对比分析。结果 123株结核分枝杆菌临床菌株中,39.0%(48/123)菌株对INH敏感,61.0%(75/123)菌株对INH耐药。结核分枝杆菌H37Rv株及所有临床菌株均能扩增出katG基因片段。75株INH耐药菌株中,69.3%(52/75)菌株katG基因出现S315位突变,其中25株突变类型为S315N(AGC→AAC)、12株为S315T(AGC→ACC)、7株为S315I(AGC→ATC)、各有3株分别为S315T(AGC→CGC)和S315R(AGC→AGA)、2株为S315G(AGC→GGC)。所制备的基因芯片对123株结核分枝杆菌katG基因S315野生型或突变型检测结果与PCR及测序结果完全一致。结论结核分枝杆菌katG基因S315突变与INH耐药密切相关。本研究中制备的基因芯片可快速、简便、准确、敏感和特异地检测结核分枝杆菌katG基因S315突变及其类型。  相似文献   

2.
异烟肼(isoniazid, INH)是一种重要的抗结核药物,其在细菌体内被过氧化氢酶-过氧化物酶KatG氧化为乙酰异烟肼自由基和活性氧自由基等活性物质,进而攻击结核分枝杆菌多个靶位点来发挥杀菌作用。Zhang等通过Southern印迹杂交(Southern blot)发现结核分枝杆菌katG基因缺失和异烟肼耐药相关。研究表明,异烟肼耐药与许多基因相关,发生频率最高的为katG编码区和inhA启动子区的突变,katG315位突变最常见,有30%~94%的耐药株发生该突变,但国内对于该基因其他位点的突变研究较少。本研究通过对河南省耐多药(multidrug resistant,MDR)结核分枝杆菌katG编码区全长突变进行分析,进一步分析异烟肼的耐药机制。  相似文献   

3.
目的阐明结核分枝杆菌耐异烟肼临床分离株katG基因突变特点以及Spoligotyping分型和结核病流行关系。方法对123株结核分枝杆菌临床分离株,其中有药敏结果的98株,(耐异烟肼菌株45株;异烟肼敏感株53株)的katG基因进行DNA片断扩增然后进行SSCP分析;同时对其中的121株菌株进行Spoligotyping分型。结果45株耐INH结核杆菌株中,27株(60%)第315位点突变,低耐药菌株(1mg/L)第315位点突变率显著高于高耐药菌株(10mg/L;53株敏感株中无KatG基因315位密码子突变。对121株临床株的Spoligotyping DNA指纹分析,1型,(北京型)103株占84%(103/121),其它基因型18株,分散在13种基因型中。结论本项研究进一步证实了结核分枝杆菌耐异烟肼与katG基因突变之间的关系;北京型感染是北京地区结核病流行的重要原因。  相似文献   

4.
目的 研究结核分枝杆菌(MTB)对异烟肼(INH)和丙硫异烟胺(Pto)的耐药情况,分析INH耐药相关基因(katG、inhA、ahpC、kasA)及与Pto交叉耐药相关基因的突变特点。方法 对233株INH耐药MTB临床分离株(37株对Pto同时耐药)的katG、inhA、ahpC、kasA基因进行扩增及序列分析。结果 耐异烟肼菌株中未发现katG完全缺失,223株 (96.5%)耐药株katG存在点突变、插入,其中 2个突变位点未见报道。195株 (83.6%)耐药株的第 315位点突变;189株 (81.1%)耐药株第463位点突变(R463L),其中166株 (71.2%)与第 315位点联合突变;在其他位点发生突变的菌株4株,包括D448G 1株、D419H 1株和2株同义突变。 11株(4.72%) INH耐药菌株中inhA点突变,包括S94A 1株、I194T 1株,C-15T 9株。37株Pto耐药的菌株中,8株点突变且均为inhA C-15T(4株为inhA单基因点突变C-15T,4株发生katG S315T和inhA C-15T的双基因联合突变)。全部耐药菌中有1株为ahpC基因突变,未发现有kasA基因突变。结论 进一步证实katG315和inhA-15基因位点突变与MTB对INH耐药密切相关;INH与Pto存在着交叉耐药,但耐药率较低,Pto耐药的发生与inhA-15位点突变密切相关。  相似文献   

5.
目的:研究异烟肼耐药的结核分枝杆菌中katGS315T突变的发生情况,并探讨katGS315T突变与耐多药结核病(MDR—TB)患病率之间的相关性。设计:收集了从2001年到2004年间所有到大阪市呼吸与过敏性疾病医学中心就诊的新登记病人的临床分离株1655株,并进行了药物敏感性分析。对1655株菌株中的1629株(98.4%)应用插入序列(IS)6110-限制性片段长度多态性(RFLP)法进行了基因分型。对所有耐异烟肼的145个临床分离株,包括耐多药菌株,都进行了katGS315T的突变情况检测。结果:560(34.4%)株临床分离株有相同的RFLP图谱。在145个INH耐药的分离株中,18/48(37.5%)属于有katG$315T突变的RFLP簇,23/97(23.7%)没有发生此突变。在66个耐多药结核病病例中,18/29(62.1%)属于有katGS315T突变的RFLP簇,11/37(29.7%)没有发生此突变。在29例广泛耐药病例(XDR)中,17/21(80.9%)属于有katG$315T突变的RFLP簇,3/8(37.5%)没有发生此突变。结论:发生katGS315T突变的MDR-/XDR—TB分离株中应用IS—RFLP分析获得的成簇率非常高。我们的研究表明katG$315T突变与MDR—TB,尤其是XDR—TB的传播动力学高度相关。  相似文献   

6.
背景:利用现代分子生物学来帮助我们理解结核分枝杆菌的传播和流行病学机理。目的:分析耐药结核分枝杆菌分子流行病学和1995--2004年芬兰耐异烟肼及利福平相关突变菌株。设计:对3959株新结核分枝杆菌菌株进行了药物敏感性试验,如有必要,所有的耐药性表型菌株都进行了IS6110限制性片段长度多态性和间隔寡核苷酸分型分析。对耐异烟肼及利福平菌株分别进行了katG315位密码子和rpoB耐性基因测序。结果:在测试的3959(92.4%为培养阳性)株分离株中,183个(4.6%)对至少一种一线抗结核药耐药;14(0.4%)株为耐多药。37株(20.4%)耐性菌株属于17个簇,其中最大的簇包括4个分离株。北京家族占所有耐药菌株的8.8%(16株)。在异烟肼耐药菌株中,katG的Ser315Thr突变占46.7%(56株);在利福平耐药菌株中rpoB突变占85.7%(18株)。结论:耐药结核病在芬兰传染率很少,尤其在本地和外来人口间。如果存在产生耐多药的危险因素,筛查异烟肼和利福平耐药相关突变是可行的。  相似文献   

7.
目的建立可同步检测结核分枝杆菌katG和ropoB基因突变的等位基因特异性多重聚合酶链反应(MAS-PCR)的方法,以快速检测结核分枝杆菌对利福平(RFP)和异烟肼(INH)的耐药性。方法根据结核分枝杆菌katG和rpoB基因序列,分别设计特异性寡聚核苷酸引物,采用MAS-PCR技术,分别检测katG基因315位点和rpoB基因中531、526和516三个最常见的突变位点。结果19株INH敏感株中均未发现katG基因315位点的突变,耐药株中发现有79.2%(61/77)的菌株存在突变;15株RFP敏感株中未发现rpoB基因突变。MAS-PCR方法可检测出81.5%(66/81)的利福平耐药株。结论MAS-PCR方法对katG和rpoB基因的同步检测有较高的敏感性和特异性,有望用于耐药结核分枝杆菌的快速检测。  相似文献   

8.
目的了解贵阳地区分离的结核分枝杆菌katG基因、inhA启动子和oxyR-aphc间隔区基因突变特征。方法对31株结核分枝杆菌临床分离株(异烟肼耐药株17株,异烟肼敏感株14株)的katG基因、inhA启动子和oxyRaphc间隔区进行DNA片段的PCR扩增,并进行测序分析。结果 17株异烟肼耐药菌株中有16株检出katG基因突变,其中70.5%(12/17)为315位密码子变异,且变异类型均为AGC→ACC,敏感株未发现315位点突变。11株敏感菌和4株耐药菌在463位密码子发生变异,变异类型均为CGG→TGG,变异率分别为78.6%(11/14)和23.5%(4/17),差异无统计学意义。有12株耐药株的变异类型为katG基因双重位点突变,其中10株为katG315(AGC→ACC)和463(CGG→TGG)位变异,463(CGG→TGG)和299(GGC→AGC)变异及463(CGG→TGG)和419(GAC→CAC)位变异各1株。2株异烟肼耐药菌检出oxyR-aphC启动区G32A突变,其中1株为联合katG463和299位突变。结论贵阳株结核杆菌菌株异烟肼耐药基因突变具有多态性,主要的变异类型为katG315位点突变。  相似文献   

9.
目的了解我国华东地区结核分枝杆菌中与异烟肼耐药相关的katG基因的变异情况,提供我国异烟肼耐药相关的基因谱。方法对429株结核杆菌行核酸抽提后先以限制性酶切片段多态性方法检测有无最常见的耐药相关S315T突变,对未发现S315T突变的异烟肼耐药株取部分行katG全基因测序以了解其他位点的变异情况。结果耐药结核分枝杆菌中76.9%(166/216)存在katG基因$315T突变。发现有2株异烟肼高度耐药株中存在katG基因片段的缺失。48株异烟肼耐药株测序结果发现katG基因突变特点如下:突变率较高的有315、463、234位点,其余突变位点较多而分散。315位密码子的突变中除S315T外,S315N突变形式也较常见,占8.7%。结论结核分枝杆菌耐药机制复杂,了解耐药相关基因的变异情况是建立可靠的耐药性分子检测方法的基础。  相似文献   

10.
目的 探讨Mtb耐药相关基因katG、inhA、oxyR-ahpC突变与对INH的耐药水平及rpoB突变与对RFP的耐药水平的关系。 方法 采用微孔板Alamar blue显色法分别检测59株耐INH的Mtb临床分离株对INH和30株耐RFP菌株对RFP的最低抑菌浓度(the minimum inhibitory concentration,MIC),同时用直接测序法检测对INH耐药菌株katG、inhA、oxyR-ahpC和对RFP耐药菌株rpoB的突变情况。 结果 INH MIC为0.2500~1.0000 μg/ml(低水平耐药菌株)和 MIC≥2.0000 μg/ml(高水平耐药菌株)的INH耐药株,inhA启动子突变率前者高于后者[53.8% (7/13),4.3% (2/46)],katG 315突变率前者低于后者[15.4% (2/13),76.1% (35/46)],χ2值分别为15.57和13.48,P值均为0.000。RFP MIC为0.5000~16.0000 μg/ml和MIC≥32 0000 μg/ml的RFP耐药株,rpoB 531和526位总突变率前者低于后者[62.5% (5/8),95.5%(21/22)],P确切概率=0.048。 结论 INH耐药菌株inhA启动子突变与INH低水平耐药有关,katG 315突变与INH高水平耐药有关;rpoB 531和526位突变与RFP高水平耐药有关。  相似文献   

11.
应用基因芯片分析结核分枝杆菌常见耐药基因型的研究   总被引:14,自引:0,他引:14  
目的应用基因芯片快速检测结核分枝杆菌耐药基因型,建立一种新的分子药敏试验方法。方法以传统药敏试验和PCR-直接测序方法为对照,应用基因芯片快速检测157株结核分枝杆菌临床分离株异烟肼(INH)、利福平(RFP)、链霉素(SM)和乙胺丁醇(EMB)耐药基因(katG、rpoB、rpaL、rrs和embB)的带荧光素标记的PCR产物。结果PCR-直接测序和基因芯片检测36株结核分枝杆菌药物敏感株的5种耐药基因均为野生型。121株结核分枝杆菌耐药分离株中,56株耐INH分离株,katG基因突变率为62.5%,其中katG缺失率为7.5%,315位密码子突变率为55.4%,279位密码子突变率为1.8%;104株耐RFP株,rpoB基因突变率为94.2%,最常见的突变位点为531位和526位密码子(突变率分别为60.6%、15.4%),双位点突变率为5.8%,还发现511、513、515、516、517、518和533位密码子突变;62株耐SM分离株,rpsL和ITS总突变率为88.7%(两者分别为82.3%、6.5%),rpsL突变位于43位和88位密码子(突变率分别为77.4%、4.8%),rrs突变位于513位和516位碱基(突变分别为4.8%、1.6%);57株为耐EMB株,embB基因突变率为61.4%,均为306位密码子突变,最常见的突变为ATG→GTG或剐rA(突变率分别为35.1%、15.8%),还发现306位密码子ATG→ATC、ATT和CTG突变。通过基因芯片检出的突变与基因测序结果一致。结论应用基因芯片可分析大多数结核分枝杆菌耐药基因型,弥补传统药敏试验方法的不足,指导临床治疗。  相似文献   

12.
在中非共和国班吉,54株来自治疗失败或复发结核病患者的菌株经检测有40%是耐多药菌株(MDR)。通过MTBDRplus线性探针方法或是rpoB测序获得的结果有86%与利福平(RMP)耐药表型一致,与突变受阻扩增系统试验的一致性为71%。RMP敏感株中未发现存在突变。在耐多药菌株中,MTBDRplus与测序在发现katG基因中S315T突变的一致性是95%。50%的耐多药菌株通过pncA测序提示对吡嗪酰胺耐药。了解这些耐药情况有助于低收入国家实施治疗。  相似文献   

13.
目的 分析临床分离的结核分枝杆菌katG 和rpoB 基因的突变情况与耐药之间的关系,了解六安地区耐药结核分枝杆菌的基因突变特征。方法 采用比例法对六安地区65 株结核分枝杆菌临床分离株进行药敏试验;通过特异性引物,对目的基因片段katG 和rpoB 进行扩增、测序后进行分析。结果 60 株结核分枝杆菌中分别有有9 株耐异烟肼和14 株耐利福平,其中同时耐异烟肼和利福平的6株。9 株耐异烟肼菌株中,4 株katG 在315(A GC→ACC 或ACA)位点发生突变,占44.4%;14 株耐利福平菌株中,11 株rpoB 分别在516(GAC→GTC)、526(CAC→CGC 或TAC)和531(TCG→TTG)位点发生突变,占总耐药菌株的78.6%;6 株同时对利福平和异烟肼耐药,其中5 株katG 或rpoB 基因发生突变,占83.3%。结论 六安地区结核分枝杆菌耐异烟肼和耐利福平分别主要是由katG 和rpoB 基因突变引起,其中耐异烟肼主要在315(AGC→ACC 或ACA)位,而耐利福平在516(GAC→GTC)、526(CAC→CGC或TAC)和531(TCG→TTG)位,都发生了突变。  相似文献   

14.
目的对临床分离的耐多药结核分枝杆菌株进行基因突变分析。方法对耐多药结核分枝杆菌临床分离菌株进行耐药基因的PCR检测,利用基因序列测定方法分析耐药基因突变情况。结果从耐多药结核病(MDR-TB)患者临床分离菌株中快速检测到rpoB、katG、rpsL、embB基因及其突变。耐多药菌株、全耐及单耐利福平分离菌株均检测rpoB基因点突变,突变位点主要为第516、526和531常见密码子,1例MDR-TB出现第479位和第531位密码子同时突变。耐多药菌、全耐菌及单耐异烟肼的菌株均检测有katG基因点突变,突变位点均为第2066位碱基C突变为Go全耐菌和对乙胺丁醇(EMB)耐药的耐多药菌株均检测有embB基因点突变,突变位点均为第306位密码子ATG突变为ACG。全耐菌和对链霉素(SM)耐药的MDR-TB菌株均检测有rpsL基因点突变,突变密码子为CCT突变为CTT,其中从1株对SM敏感的MDR-TB中也检测到突变。全敏感株、标准株及利福平(RIF)、异烟肼(INH)或EMB敏感的耐药株均无rpoB、katG或embB基因突变。结论PCR及基因序列测定可快速检测耐多药结核基因,结核分枝杆菌耐多药性与多个基因突变相关。  相似文献   

15.
目的分析南京市结核分枝杆菌(MTB)感染患者的耐药情况,评价荧光PCR熔解曲线法检测结核分枝杆菌对利福平(RFP)和异烟肼(INH)耐药性的临床价值,探究RFP和INH耐药相关基因突变的特征。方法对鉴定为MTB的780株菌株同时进行绝对浓度法药物敏感性试验和荧光PCR熔解曲线法检测对RFP和INH的耐药性。以绝对浓度法药物敏感性试验结果为标准,分析熔解曲线法检测RFP和INH的灵敏度、特异度、符合率和一致性(Kappa检验)。结果780株MTB中,22株(2.82%)为RFP单耐药,62株(7.95%)为INH单耐药,143株(18.33%)为耐多药。以绝对浓度法药敏试验结果为标准,荧光PCR熔解曲线法检测MTB对RFP和INH耐药性的灵敏度分别为98.18%和85.85%,特异度分别为95.28%和97.39%,符合率分别为95.90%和94.36%,Kappa值分别为0.88和0.85。RFP分子耐药菌株中全部检测出rpoB基因位点突变,其中以rpoB 529~533位点为最常见的突变(63.87%,122/191),突变位点为rpoB 507~512的20株菌株中只有7株表型耐药,rpoB基因双位点突变的18株菌株全部表型耐药;INH分子耐药菌株中最常见的突变为katG 315位点(66.49%,127/191),其次是inhA启动子区(17.80%,34/191),90%以上的INH分子耐药菌株为表型耐药。结论南京市结核耐药情况严重,以耐多药结核病为主。荧光PCR熔解曲线法与药敏试验结果高度一致,且弥补了药敏试验对于低度耐药突变株菌检测的局限性。耐药相关基因突变位点的检测有利于结核病的及时诊断和个体化治疗的实施。  相似文献   

16.
背景:结核分枝杆菌耐药株在全世界范围内呈现播散的趋势,对全球的公共卫生造成了严重威胁。然而,关于耐药突变在菌群中是否永久存在,或者说在没有药物压力下耐药突变是否会发生逆转,目前还没有定论。目的:为证实在1位耐多药结核(TB)病人身上发生了异烟肼(INH)复敏的情况,并研究与之相关的细菌生存能力的降低。设计:应用基因型分析和表型分析研究来自1位肺结核病人的耐异烟肼分离株发生异烟肼复敏的情况。应用全敏感株重新构建了与复敏发生前katG突变一致的细菌模型(H37 RvkatG:katGW300G),并测试了此菌株对INH的敏感性和对氧化压力的反应。结果:基因分型和药物敏感性试验显示在不应用INH治疗的情况下,同一基因型的结核分枝杆菌菌株发生了从INH耐药向INH敏感的转变。对这种现象的基因型基础也进行了分析,发现katG的第300位密码子发生了改变,从GGG(甘氨酸,G)回复到野生型密码子TGG(色氨酸,w)。菌株H37RvhatG::katGW300G对INH耐药,但是也同时显示出对氧化压力的反应性差。结论:此次研究证实,在没有INH药物压力的情况下,一些INH耐药突变株会转变成药物敏感的表型。此次发现对于研究异烟肼耐药的菌株和临床使用INH的时限可能有广泛的意义。  相似文献   

17.
目的 研究Mtb耐INH临床分离株katG基因、inhA基因、ahpC基因突变对其体外最小抑菌浓度(MIC)的影响。方法 对临床分离的耐INH的160株Mtb及对INH敏感的40株Mtb进行耐药基因芯片检测;并对所有标本进行INH MIC测定,比较不同变异株的MIC结果,其数据采用t检验进行比较,以P<0.05为差异有统计学意义。结果 Mtb耐INH株katG 315基因变异占68.8%(110/160),katG 315基因变异株的MIC为(20.20±19.46 μg/ml),高于inhA变异株(0.73±0.82 μg/ml)(t′=10.9171,t′α=1.9807,P<0.05);低于katG 315+inhA变异株(69.33±32.45 μg/ml),(t′= 7.164,t′α= 2.0627,P<0.05)。结论 Mtb耐INH基因有不同的突变模式,各模式存在不同的耐药程度,此可以给临床用药进一步提供参考。  相似文献   

18.
耐异烟肼结核分枝杆菌临床分离株耐药相关基因突变研究   总被引:13,自引:0,他引:13  
目的阐明结核分枝杆菌耐异烟肼临床分离株katG、inhA、ahpC、kasA及oxyR基因突变特点。方法对144株结核分枝杆菌临床分离株(耐异烟肼菌株101株;异烟肼敏感株43株)的katG、inhA、kasA、ahpC及oxyR基因进行DNA片断扩增及DNA序列分析,与GeneBank中结核分枝杆菌标准序列进行比较。结果(1)耐异烟肼菌株中未发现katG完全缺失,81株耐药株(80.2%)katG存在点突变、缺失或插入,其中16个突变位点未见报道;39株(38.6%)耐药株第315位点突变,低耐药菌株(1μg/ml)第315位点突变率显著高于高耐药菌株(10μg/ml;χ2=9.31,P<0.05);58株(57.4%)耐药株第463位点突变。23株(53.3%)敏感株第463位点突变。(2)5株(4.9%)耐药株inhA发生突变。敏感株inhA无突变。(3)3株(2.9%)耐药株ahpC发生突变。敏感株ahpC无突变。(4)17株(16.8%)耐药株kasA发生突变。敏感株中3株菌株Gly312Ser突变。(5)在全部菌株中未发现oxyR基因突变。(6)综合本项研究中各基因的突变情况,共有91株耐异烟肼菌株发生与异烟肼耐药相关的突变。结论本项研究进一步证实了结核分枝杆菌耐异烟肼与katG、inhA、ahpC及kasA基因突变之间的关系,并且提示还有其他机制参与异烟肼耐药。  相似文献   

19.
摘要:目的 研究结核分枝杆菌katG基因Asn329Val突变导致异烟肼耐药的机制。方法 扩增含有突变位点和野生型的全长katG基因,经TA克隆、定向克隆构建表达载体,原核表达KatG蛋白,纯化后比较重组KatG酶活性。结果 获得了katG基因的高效表达。重组蛋白酶活性显示,Asn329Val突变导致重组KatG过氧化氢酶活性完全丧失,但仍保持一定的过氧化物酶活性;Ser315Thr突变导致重组KatG过氧化氢酶和过氧化物酶活性部分丧失;Arg463Leu突变对过氧化氢酶活性和过氧化物酶活性影响均不大。结论 katG Asn329Val突变引起了KatG过氧化氢酶活性的完全丧失,可能是导致菌株对异烟肼耐药的机制。  相似文献   

20.
目的 评价线性探针杂交技术(简称MTBDRplus技术)对福州地区耐药结核杆菌的检测效果,并了解该地区耐药结核分枝杆菌的耐药基因特征方法 选取246株临床结核分枝杆菌分离株,以传统罗氏药敏试验为金标准,评价MTBDRplus技术在临床上应用的检测效果,分析耐药基因突变分布频率结果 与传统罗氏药敏试验相比较,MTBDRplus检测利福平(RIF)和异烟肼(INH)耐药性灵敏度分别为91.7%(11/12)和83.3%(15/18),MTBDRplus检测RIF和INH耐药性特异度分别为99.6%(233/234)和95.2%(217/228)。12例rpoB基因存在突变的结核分枝杆菌中,58.3%rpoB基因S531L突变;26例katG和inhA基因存在突变的结核分枝杆菌中,57.7%(15/26)katG基因315突变;存在C15T位点突变的菌株仅9.1%(1/11)为INH耐药菌株结论 MTBDRplus技术是一个敏感、特异的快速诊断耐多药结核病的有效方法,该技术在福州地区具有较好的应用前景。福州市耐药结核分枝杆菌以rpoB S531L和katG S315T突变型为主。建议谨慎判断结核分枝杆菌inhA基因C15T位点突变引起的INH耐药。  相似文献   

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