福建省肺非结核分枝杆菌临床分离株的菌种鉴定

目的 对2005-2011年间,福建省福州市胸科医院分离获得的非结核分枝杆菌临床菌株进行菌种鉴定.方法 分别使用传统鉴别培养基法和多位点PCR、hsp65-PRA与rpoB-PRA,以及hsp65、rpoB、16s rRNA和ITS基因测序等分子生物学方法,对全部菌株进行菌种鉴定.结果 450株被初步鉴定为非结核分枝杆菌的临床分离菌株中,有45株被鉴定为结核分枝杆菌,其余405株被鉴定为23种不同的非结核分枝杆菌和1株支气管戈登菌.结论 在该地区有多种非结核分枝杆菌传播和流行,其中,6种非结核分枝杆菌和支气管戈登菌为在福建省内首次发现.     

湖南省51株疑似非结核分枝杆菌临床分离株的菌种鉴定

目的对2011年湖南51株非结核分枝杆菌(NTM)临床分离株进行菌种鉴定。方法从湖南省结核病防治所接收到分枝杆菌临床分离株后,通过罗氏培养基(L-J)、对硝基苯甲酸(p-nitrobenzoic acid,PNB)和噻吩-2-羧酸肼(2-thiophene carboxylic acid hydrazide,TCH)鉴别培养基和多位点PCR方法鉴别出非结核分枝杆菌后,对其进行基于rpoB基因的限制性酶切片段长度多态性(PRA)和基因测序方法的鉴定。结果从2011年湖南省51份临床分离菌株中培养出51份抗酸杆菌,通过初步鉴别(即L-J、PNB/TCH鉴别培养基培养)鉴别出NTM有51株,经rpoB-PRA及进一步的测序鉴别出50株(98.04%)NTM,分别为胞内分枝杆菌(Mycobacterium intracellμlare)22株(43.14%),鸟分枝杆菌(M.avium)13株(25.49%),脓肿分枝杆菌(M.abscessus)6株(11.76%),偶发分枝杆菌(M.fortuitum),戈登分枝杆菌(M.gordonae),新产色分枝杆菌(M.neoaurum)各2株(均占3.92%),堪萨斯分枝杆菌(M.kansasii),马赛分枝杆菌(M.massiliense),福西亚分枝杆菌(M.phocaicum)各1株(分别占1.96%);以及鼻疽诺卡菌(Nocardia farcinica)1株(1.96%)。结论抗酸染色阳性、PNB/TCH鉴定为非结核分枝杆菌临床分离株中包含不同种类的非结核分枝杆菌和诺卡菌。湖南非结核分枝杆菌病的病原至少有9种。使用分子生物学方法能够快速、准确地对其鉴别。     

结核分枝杆菌对异烟肼和利福平的耐药水平与其耐药基因突变的相关性研究

目的 探讨Mtb耐药相关基因katG、inhA、oxyR-ahpC突变与对INH的耐药水平及rpoB突变与对RFP的耐药水平的关系。 方法 采用微孔板Alamar blue显色法分别检测59株耐INH的Mtb临床分离株对INH和30株耐RFP菌株对RFP的最低抑菌浓度（the minimum inhibitory concentration,MIC）,同时用直接测序法检测对INH耐药菌株katG、inhA、oxyR-ahpC和对RFP耐药菌株rpoB的突变情况。 结果 INH MIC为0.2500~1.0000 μg/ml（低水平耐药菌株）和 MIC≥2.0000 μg/ml（高水平耐药菌株）的INH耐药株,inhA启动子突变率前者高于后者［53.8% (7/13),4.3% (2/46)］,katG 315突变率前者低于后者［15.4% (2/13),76.1% (35/46)］,χ²值分别为15.57和13.48,P值均为0.000。RFP MIC为0.5000～16.0000 μg/ml和MIC≥32 0000 μg/ml的RFP耐药株,rpoB 531和526位总突变率前者低于后者［62.5% (5/8),95.5%(21/22)］,P_确切概率＝0.048。 结论 INH耐药菌株inhA启动子突变与INH低水平耐药有关,katG 315突变与INH高水平耐药有关;rpoB 531和526位突变与RFP高水平耐药有关。     

内蒙古自治区结核分枝杆菌Spoligotyping分型及北京家族分析

目的 了解内蒙古自治区结核分枝杆菌临床分离株的基因型构成,及该地区北京家族菌株的分布特征。 方法 从内蒙古自治区结核病防治研究所收集2011年全年临床分离的372株结核分枝杆菌菌株及其372例来源患者的背景资料,采用间隔区寡核苷酸分型（Spoligotyping）方法和BioNumerics 5.0软件进行基因分型分析,将372株临床菌株Spoligotyping分型结果与SpolDB 4.0数据库进行比对。另外,采用NTF及LSP 对北京家族菌株进行分析。来源患者中汉族和蒙古族分别为282例及84例,其他为回族4例,维吾尔族和满族各1例,例数过少,因此仅分析主要民族与北京家族的易感性。以SPSS 13.0 软件进行统计学分析,χ²检验分析不同民族与北京家族易感性。 结果372株临床菌株共分为48种基因型,其中24种基因型为新的型别。85.48%（318/372）为北京家族,同时存在T家族（仅次于北京家族的主要流行基因型）占4.84% （18/372）、H家族（Haarlem）0.81%（3/372）、MANU家族(2004年最先于印度Delhi发现)0.27%（1/372）和LAM家族（Latin American and Mediterranean,拉丁美洲和地中海家族）0.27%（1/372）。汉族北京家族菌株占87.94%(248/282),非北京家族菌株占12.06% (34/282),蒙古族北京家族菌株79.76%(67/84),非北京家族菌株20.24% (17/84),差异无统计学意义（χ²=3.612, P=0.057）。 结论 内蒙古自治区结核分枝杆菌临床分离株基因具有多态性,且北京基因型为该地区主要流行株,而北京家族菌株与民族易感性间无关联。     

内蒙古地区结核分枝杆菌串联重复序列基因多态性分析

目的 了解内蒙古地区结核分枝杆菌临床分离株的串联重复序列(variable number tandem repeat,VNTR)基因多态性和VNTR基因型构成,及不同VNTR位点在该地区结核分枝杆菌基因分型中的应用。 方法 从内蒙古自治区结核病防治研究所收集临床分离的结核分枝杆菌菌株及其病例背景资料,采用多位点串联重复序列分析(MLVA)对收集的菌株进行22个VNTR 位点分析,计算Hunter-Gaston 指数(HGDI),分析各个位点的分辨率, 同时用BioNumerics 软件对VNTR结果进行聚类分析。且统计学分析民族与主要基因型间的关系。 结果 372株菌共分为308个基因型,47簇,261个独特基因型,成簇率为17.20%。22个VNTR位点的基因多态性存在较大的差异,位点VNTR3820(HGDI 0.838)的分型分辨能力最高,MIRU23(HGDI 0.068)和MIRU27(HGDI 0.083)分型分辨能力较差。随着VNTR 位点的增加,分型的分辨能力也有所提高。Ⅰ群基因型菌株与民族易感性的分析表明,汉族与蒙古族间Ⅰ群基因型菌株分布差异无统计学意义(χ2=0.337, P=0.561>0.05)。 结论 内蒙古地区结核分枝杆菌临床分离株基因具有多态性,不同VNTR位点在内蒙古地区结核分枝杆菌中具有不同的分辨能力。且Ⅰ群基因型为该地区主要流行株,而Ⅰ群基因型菌株与民族易感性间无关联。     

多位点PCR技术用于四川267株分枝杆菌临床分离株的鉴定

目的 初步了解四川省肺结核患者分枝杆菌菌种类型。 方法 收集267株分枝杆菌临床菌株,经PNB/TCH鉴别培养基进行培养鉴定后,采用聚合酶链反应(PCR)对16S rRNA、Rv0577、IS1561、Rv1510、Rv1970、Rv3877/8和Rv3120 基因位点进行扩增,鉴定至种,再经PRA-rpoB、hsp65基因测序进行验证。 结果 267株分枝杆菌临床分离株多位点PCR结果显示结核分枝杆菌262株,非洲分枝杆菌Ⅰ型3株,非结核分枝杆菌2株。PNB/TCH鉴别培养基培养鉴定结果为结核分枝杆菌复合群266株,非结核分枝杆菌1株。2株非结核分枝杆菌分别为鸟分枝杆菌(M. avium)和脓毒分枝杆菌(M. septicum)。多位点PCR结果与rpoB-PRA、hsp65基因测序结果一致。 结论 多位点PCR技术鉴定分枝杆菌菌种结果准确可靠,且具有简便和快速等优点,有较大的分子流行病学应用价值,且对于临床诊断和治疗都具有重要意义。     

中国首例脓毒分枝杆菌感染肺病报告

目的 分析脓毒分枝杆菌感染肺病的临床和细菌学特征,探讨其鉴别诊断方法。 方法 分析脓毒分枝杆菌感染肺病患者的临床表现极其相关实验室检查结果。对其临床分离株采用L-J,TCH/PNB鉴别培养基和多位点PCR初步鉴别,rpoB/hsp65基因PCR-测序鉴定出菌种。 结果 该患者痰涂片和培养检测为阳性。L-J,TCH/PNB鉴别培养基和多位点PCR鉴别为非结核分枝杆菌。rpoB/hsp65基因PCR-测序,经BLAST比对,与脓毒分枝杆菌(ATCC 700731)同源性均为99%。药物敏感性检测证实本病例分离到的菌株对大多数药物(包括四种一线抗结核药物)耐药,而对阿米卡星、环丙沙星、氧氟沙星、左氧氟沙星、卡那霉素和新诺明等药物敏感。 结论 在中国首次鉴定、确诊脓毒分枝杆菌感染肺病。