弓形虫排泄分泌抗原对B16F10黑素瘤小鼠CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋T细胞和NK细胞的影响

目的探讨弓形虫排泄分泌抗原（ESA）对B16F10黑素瘤小鼠CD4＋CD25＋Foxp3＋T细胞和NK细胞数量和功能的影响,观察ESA对肿瘤生长的作用。方法将传代培养的B16F10黑素瘤细胞接种于C57BL/6小鼠右腋窝皮下,建立荷瘤动物模型。采用ESA腹腔注射进行干预,将实验小鼠分为4组：PBS组、B16F10组、PBS＋ESA组、B16F10＋ESA组,分别于ESA干预后2、4、6d取脾,流式细胞术检测各组小鼠脾脏CD4＋CD25＋Foxp3＋T细胞和NK细胞占脾细胞的比例;WST-8法检测各组小鼠CD4＋CD25＋T细胞对CD4＋CD25-T细胞增殖的抑制功能;LDH法检测NK细胞杀伤B16F10功能;观测荷瘤鼠肿瘤体积动态变化。结果 ESA干预4、6d后,荷瘤鼠脾脏CD4＋CD25＋Foxp3＋T细胞占脾细胞的比例分别为（1.65±0.18）%和（1.56±0.17）%,与荷瘤对照组[分别为（2.47±0.10）%和（2.82±0.12）%]比较差异均有统计学意义（P均〈0.05）;ESA干预可使CD4＋CD25＋T细胞对CD4＋CD25-T细胞的抑制功能下降。抑制作用以干预后4、6d较明显,抑制率分别为50.03%和50.00%,低于荷瘤对照组的75.03%和78.14%（P均〈0.05）;荷瘤鼠脾脏NK细胞占脾细胞的比例[（3.58±0.07）%]在ESA干预后6d显著高于荷瘤对照组的（2.61±0.13）%（P〈0.05）。同时NK细胞杀伤B16F10细胞功能也增强,不同效靶细胞比（5∶1、10∶1、20∶1）下分别为26.51%、35.25%、60.19%,明显高于荷瘤对照组的16.81%、24.63%、45.62%（P均〈0.05）;ESA干预后,瘤体出现延缓生长,平均出瘤时间较对照组延迟6d,实验终点荷瘤第35天ESA干预组瘤体体积[（6208.34±443.64）mm3]明显小于荷瘤对照组[（9027.46±1362.01）mm3]（P〈0.05）。结论弓形虫ESA可通过下调荷瘤鼠CD4＋CD25＋Foxp3＋T细胞比例并抑制其功能和上调NK细胞比例并增强其杀伤功能,发挥抗肿瘤作用。     

日本血吸虫可溶性虫卵抗原诱导 小鼠巨噬细胞凋亡机制

目的　观察日本血吸虫感染过程中巨噬细胞数量及其凋亡动态变化,并探讨血吸虫可溶性虫卵抗原（SEA）诱导巨噬细胞凋亡的可能机制。方法　将C57BL/6小鼠（6～8周龄）随机分为4组,其中3组作为实验组,另1组作为正常对照组。实验组每只小鼠均经腹部皮肤感染（12 ± 1）条日本血吸虫尾蚴,于感染后3、5周和8周各处死1组小鼠;正常对照组小鼠不感染血吸虫,于实验组小鼠感染当天处死。取各组小鼠肝组织和腹腔渗出细胞,检测肝脏和腹腔巨噬细胞数量及其凋亡动态变化。此外,体外用SEA、PBS及卵清蛋白（ovalbumin,OVA）处理纯化的小鼠腹腔巨噬细胞,流式细胞术检测巨噬细胞凋亡;以实时定量PCR和Western blotting技术检测巨噬细胞中BCL⁃2家族成员mRNA和蛋白表达水平;以流式细胞术和Western blotting技术检测caspase 3活化水平。同时,体外在caspase抑制剂、H2O2或N⁃乙酰⁃L⁃半胱氨酸（NAC）存在时用SEA处理巨噬细胞,以流式细胞术检测巨噬细胞凋亡水平。结果　感染日本血吸虫尾蚴后3、5周和8周,小鼠肝脏[（0.873 ± 0.106）× 106、（2.737 ± 0.460）× 106个和（3.107 ± 0.367） × 106个;F = 81.900,P < 0.01]和腹腔中巨噬细胞总数[（5.282 ± 1.136） × 105、（7.500 ± 1.200） × 105个和（12.800 ± 0.800） × 105个;F = 55.720,P < 0.01]不断增加,且感染小鼠肝脏[（0.092 ± 0.018） × 106、（0.186 ± 0.025） × 106 个和（0.173 ± 0.027）× 106 个;F = 57.780,P < 0.000 1]和腹腔中凋亡的巨噬细胞数量[（0.335 ± 0.022）× 105、（0.771 ± 0.099） × 105个和（1.094 ± 0.051） × 105个;F = 49.460,P < 0.01]亦不断增加。经SEA体外处理的巨噬细胞凋亡比例[（24.330 ± 0.784）%]高于PBS [（18.500 ± 1.077）%]及OVA[（18.900 ± 1.350）%]处理组（P均 < 0.01)。经SEA和PBS处理的巨噬细胞中,Bcl⁃2 [（1.662 ± 0.943） vs. （1.00 ± 0.00）;t = 1.215,P > 0.05]、Bax [（0.711 ± 0.200） vs. （1.00 ± 0.00）;t = 2.507,P > 0.05]、Bak [（1.255 ± 0.049） vs. （1.00 ± 0.00）;t = 0.897,P > 0.05]、BCL⁃2 [（0.068 ± 0.004） vs. （0.070 ± 0.005）;t = 0.699,P > 0.05]、BAX [（0.089 ± 0.005） vs. （0.097 ± 0.003）;t = 2.232, P > 0.05]、BAK [（0.439 ± 0.048） vs. （0.571 ± 0.091） ; t = 2.231,P > 0.05]表达水平差异均无统计学意义。在caspase抑制剂存在时,SEA仍能诱导巨噬细胞凋亡（F = 0.411,P > 0.05）;而在H2O2或NAC存在时,SEA不能诱导巨噬细胞凋亡（F = 11.880、9.897,P均< 0.05）。结论　在日本血吸虫感染过程中,SEA可能通过促进活性氧表达而诱导巨噬细胞凋亡。     

可诱导共刺激分子及相关细胞因子在细粒棘球蚴感染小鼠免疫调控中的作用

目的　探讨可诱导共刺激分子（inducible costimulatory molecule, ICOS）及相关细胞因子在细粒棘球蚴感染小鼠免疫调控中的作用。方法　80只BALB/c小鼠（体质量18 ~ 22 g）随机分为对照组和感染组，每组40只。按10 000个原头节/只腹腔注射制备细粒棘球蚴感染小鼠模型，腹腔接种2、8、30、60、180 d后，测定小鼠血清天冬氨酸氨基转移酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、碱性磷酸酶（ALP）含量，检测小鼠外周血细胞因子白细胞介素10（IL⁃10）和IL⁃4含量。取小鼠肝脏进行HE染色和免疫组织化学染色，应用实时定量PCR（qPCR）技术检测小鼠肝组织中ICOS表达水平。结果　细粒棘球蚴感染后2、8、30、60、180 d，小鼠血清ALT、AST和ALP水平差异均有统计学意义（F = 12.082、6.347、52.186，P均< 0.05）。感染后2 [（61.72 ± 9.89） vs. （50.65 ± 4.67） U/L]、30 d [（80.61 ± 23.71） vs. （67.75 ± 9.79） U/L]，感染组小鼠血清ALT水平显著高于对照组（P均< 0.05）；感染后2 [（181.06 ± 60.61） vs. （115.58 ± 17.66） U/L]、180 d [（137.84 ± 29.01） vs. （108.05 ± 10.33） U/L]，感染组小鼠血清AST水平显著高于对照组（P均< 0.05）；感染后2 [（162.90 ± 21.04） vs. （64.54 ± 5.99） U/L]、8 [（176.36 ± 24.56） vs. （62.70 ± 9.21） U/L]、30 d[（138.86 ± 13.59） vs. （58.60 ± 5.28） U/L]，感染组小鼠血清ALP水平显著高于对照组（P均< 0.05）。感染后30 d，感染组小鼠肝脏可见少量炎性细胞；感染后60 d，小鼠肝脏结构未见明显改变；感染后180 d，小鼠包囊浸润区肝脏可见大量上皮样细胞呈纤维化生长，生成角质层，在病灶区及肝细胞间隙有大量红细胞存在。感染组小鼠肝脏中ICOS呈阳性表达，阳性细胞主要位于肝细胞胞质中，ICOS表达水平随着感染时间延长而逐渐增强；ICOS mRNA在感染180 d后相对表达量为2.732 ± 0.094，明显高于感染后2 d（0.746 ± 0.049）。对照组小鼠血清IL⁃4、IL⁃10水平在细粒棘球蚴感染后不同时间点无显著变化；感染组小鼠血清IL⁃4、IL⁃10水平分别于感染后180 d和60 d达高峰。感染后8 [（22.50 ± 3.24） vs. （5.82 ± 0.49） pg/mL]、30 [（15.49 ± 4.73） vs. （5.10 ± 1.38） pg/mL]、60 [（36.93 ± 6.14） vs. （4.13 ± 1.19） pg/mL]、180 d [（198.35 ± 0.70） vs. （4.19 ± 0.98） pg/mL]，感染组小鼠血清IL⁃4水平均显著高于对照组（P均< 0.05）；感染后2 [（4.84 ± 1.91）vs.（2.11 ± 1.03） pg/mL]、8 [（44.72 ± 14.63）vs.（3.16 ± 0.60） pg/mL]、30 [（25.47 ± 8.00） vs. （3.83 ± 1.87） pg/mL]、60 [（187.16 ± 60.44） vs. （3.69 ± 1.05） pg/mL]、180 d [（85.40 ± 7.15） vs. （3.25 ± 0.93） pg/mL]，感染组小鼠血清IL⁃10水平均显著高于对照组（P均< 0.05）。结论　细粒棘球蚴感染小鼠肝脏出现ICOS高表达；随感染时间的延长，ICOS阳性表达逐渐增强，免疫活化水平逐渐升高，导致免疫炎症引起的肝细胞损伤逐渐加重。     

我国弓形虫Chinese 1优势基因型感染对小鼠脑组织铁代谢影响

目的　探讨我国弓形虫Chinese 1优势基因型感染对宿主脑组织铁代谢及脑损伤的影响。方法　将20只C57BL/6（体质量15～17 g）小鼠随机分为对照组和感染组，每组10只。感染组每只小鼠腹腔注射4 000个弓形虫Chinese 1优势基因型TgCtwh3虫株速殖子，对照组小鼠注射等量无菌PBS，饲养6 d后处死小鼠并取其脑组织。采用电感耦合等离子体质谱法（inductively coupled plasma mass spectrometry, ICP⁃MS）检测小鼠脑组织铁元素水平；采用RNA芯片检测两组小鼠脑组织差异基因数目并对功能基因表达情况进行基因本体论（Gene Ontology, GO）功能富集；采用实时荧光定量PCR（fluorescent quantitative real⁃time PCR, qPCR）技术检测小鼠脑组织中弓形虫表面抗原1（Toxoplasma gondii surface antigen 1，TgSAG1）基因及部分锌铁调控蛋白（Zrt⁃ and Irt⁃like protein, ZIP）家族mRNA表达水平；采用光镜和电镜观察小鼠脑组织海马齿轮回（dentate gyrus, DG）超微结构；采用Western blotting检测谷胱甘肽过氧化物酶4（glutathione peroxidase 4, GPx4）蛋白表达水平；采用硫代巴比妥酸（TBA）法检测丙二醛（malondialdehyde, MDA）水平；采用免疫组化检测血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）蛋白表达光密度（optical density, OD）值。结果　光镜下可见感染组小鼠脑组织海马DG区细胞坏死，电镜下见感染组小鼠脑组织海马区出现胞质空泡化、核皱缩坏死、线粒体嵴断裂消融、自噬小体增加等超微结构变化。与对照组相比，感染组小鼠脑组织中铁元素水平上调[（32.92 ± 0.90） µg/g vs.（37.72 ± 1.10） µg/g；t = 3.397, P < 0.01]；RNA芯片检测感染组小鼠脑组织发现721个基因上调、276个基因下调，差异表达基因在金属离子结合能力上有明显富集。与对照组相比，感染组小鼠脑组织金属元素转运体ZIP2 mRNA表达水平上调（t = 8.659，P < 0.05）、GPx4表达下降[（1.046 ± 0.025） vs. （0.720 ± 0.101）；t = 3.129，P < 0.01]）、MDA水平升高[（4.37 ± 0.33） nmol/mgprot vs.（5.93 ± 0.54） nmol/mgprot；t = 2.451，P < 0.05）]、VEGF蛋白平均OD值上调[（0.348 3 ± 0.017 8） vs. （0.490 6 ± 0.010 5）；t = 6.641，P < 0.01]。结论　Chinese 1优势基因型弓形虫感染后，小鼠脑组织中铁元素蓄积、抗氧化能力下调、氧化应激水平升高，提示弓形虫感染可影响宿主脑组织铁代谢而导致脑损伤。     

日本血吸虫感染过程中糖酵解途径对调节性T细胞产生的影响

目的 探索日本血吸虫感染过程中糖酵解途径对小鼠调节性T（Treg）细胞数量和功能的影响。方法 建立日本血吸虫感染小鼠模型,用糖酵解抑制剂2?Deoxy?D?glucose（2DG）或PBS对日本血吸虫感染小鼠进行6次腹腔注射后,分离脾脏细胞和肠系膜淋巴结,采用流式细胞术（FCM）检测分离得到的细胞中Glut1+CD4+ T细胞以及Treg细胞比例。结果 未感染组小鼠脾脏（43.58%±2.50% vs. 21.15%±0.96%;t = 8.834,P < 0.01）和肠系膜淋巴结中Glut1+CD4+ T细胞比例（38.97%±1.97% vs. 28.40%±2.11%;t = 3.662,P < 0.05）均显著高于感染日本血吸虫8周小鼠,但未感染组小鼠脾脏（6.83%±0.21% vs. 13.30%±0.35%;t = 15.65,P < 0.01）和肠系膜淋巴结中Treg细胞比例（8.26%±0.15% vs. 14.37%±0.44%;t = 13.14,P < 0.01）均显著低于感染组小鼠。感染小鼠给与2DG腹腔注射后,脾脏（15.50%± 0.76% vs. 13.07%±0.15%;t = 3.130,P < 0.05）和肠系膜淋巴结中Treg细胞比例（17.00%±0.41% vs. 13.83%±0.18%;t = 6.947,P < 0.01）显著高于给与PBS注射小鼠。结论 糖酵解途径抑制了日本血吸虫感染小鼠Treg细胞分化。     

TIGIT信号在日本血吸虫感染小鼠Th1/Th2 反应平衡中的作用研究

目的 研究TIGIT信号在日本血吸虫感染过程中Th1/Th2反应平衡中的作用。方法 C57BL/6小鼠感染日本血吸虫尾蚴,并以未感染小鼠作为正常对照。感染0、3、5、8、13周时取小鼠脾脏,采用流式细胞术检测小鼠脾脏淋巴细胞中TIGIT阳性细胞比例,以及TIGIT阴性和TIGIT阳性细胞上Ki67、IFN?γ、IL?4表达水平。结果 日本血吸虫感染组小鼠脾脏中TIGIT+细胞占CD4+ T细胞的比例显著高于正常对照组（29.30%±0.70% vs. 3.09%±0.50%;t = 29.09,P < 0.01）,但感染组和对照组小鼠脾脏中TIGIT+细胞占CD8+ T细胞的比例差异无统计学意义（3.61%±0.26% vs. 3.58%±0.16%;t = 0.108,P > 0.05）,且感染组和对照组小鼠脾脏中TIGIT+细胞占非T细胞的比例差异亦无统计学意义（1.86%±0.19% vs. 1.37%±0.17%;t = 1.931,P > 0.05）。进一步分析发现,Ki67在TIGIT+细胞上的表达比例（17.03%±0.64%）较其在TIGIT?细胞上表达的比例（6.59%±0.37%）显著升高（t = 14.09,P < 0.01）,而CD4+ TIGIT+细胞中Th2/Th1比值显著高于CD4+ TIGIT?细胞（39.28%±3.75% vs. 11.79%±1.64%;t = 6.721,P < 0.01）。结论 感染日本血吸虫后,CD4+ T细胞上TIGIT表达增加,且可能通过诱导Th2细胞增殖进而促进Th2细胞比例增加。     

IL—2在小鼠抗弓形虫作用的研究

目的分析IL—2的抗弓形虫作用,并探讨其机制。方法采用3H一尿嘧淀（3H—U）特异性标记弓形虫在小鼠腹腔巨噬细胞（MouseperitonealmacrophageMPM）内的增殖实验及125I-UdR标记的细胞毒实验,观察IL—2在小鼠抗弓形虫中的作用。结果体外应用IL—2对MPM抗弓形虫作用无影响,体内应用IL—2能明显延长急性弓形虫感染小鼠的生存时间（P＜0.05）。IL—2治疗组小鼠脾细胞杀伤肿瘤细胞及弓形虫感染自身靶细胞的能力,明显高于对照组（P＜O.001）;正常小鼠NK细胞及LAK细胞杀伤自身感染弓形虫靶细胞的能力,显著低于杀伤肿瘤细胞的能力（P＜0.001）;IL—2诱导的LAK细胞杀伤自身感染弓形上靶细胞的能力,明显高于NK细胞（P＜0.001）,且与LAK细胞杀伤肿瘤靶细胞的能力无明显差别。结论以上结果表明,IL—2体内应用提高弓形虫感染小鼠生存能力的机制,可能与提高体内LAK细胞杀伤自身感染弓形虫靶细胞的能力有关;NK细胞的抗弓形虫机制,可能在于激活NK细胞产生IFNγ和TNFα等细胞因子,间接作用于巨噬细胞而发挥作用。     

多房棘球蚴感染对巨噬细胞线粒体功能的影响

目的　观察多房棘球蚴感染后巨噬细胞线粒体代谢功能变化,为探索多房棘球蚴病发病机制提供依据。方法　根据处理方法不同设培养组和对照组,其中培养组按照500∶1比例将小鼠单核巨噬细胞白血病细胞（RAW264.7）与2 000个多房棘球蚴共培养,对照组RAW264.7细胞不做任何处理。根据培养时间不同,将对照组和培养组分为24 h 对照组、72 h对照组、24 h 培养组、72 h 培养组。采用MitoTracker® Deep Red FM 线粒体深红色荧光探针标记线粒体并应用Cytation5细胞成像微孔板检测系统检测细胞线粒体平均荧光强度,用实时荧光定量PCR检测线粒体DNA拷贝数（mitochondrial DNA copy number,mtDNA⁃CN）,采用Seahorse细胞能量代谢系统实时监测线粒体能量代谢功能,采用流式细胞术检测线粒体活性氧及线粒体膜电位。结果　24 h（15 341 ± 2 532 vs. 17 823 ± 3 429;t = 6.379,P < 0.01）、72 h（18 102 ± 3 505 vs. 21 511 ± 5 144;t = 17.680,P < 0.01）培养组线粒体平均荧光强度均较其相应对照组显著降低。72 h培养组mtDNA⁃CN（3.23 × 109 ± 1.78 × 107）较其对照组（4.39 × 109 ± 3.70 × 107）显著降低（t = 8.85,P < 0.001）。实时线粒体能量代谢功能分析结果示,24 h[（241.70 ± 73.13） pmol/min vs. （69.05 ± 52.30） pmol/min;t = 7.89,P < 0.01）]、48 h [（249.50 ± 42.06） pmol/min vs. （60.28 ± 40.66） pmol/min;t = 8.64,P < 0.01]培养组较相应对照组细胞耗氧率升高,且48 h培养组细胞外酸化率较其对照组增高[（111.60 ± 17.49） mpH/min vs.（35.05 ± 7.57） mpH/min;t = 16.90,P < 0.01];72 h培养组较其对照组线粒体活性氧平均荧光强度显著升高（58 264 ± 10 087 vs. 4 307 ± 97;t = 12.930,P < 0.01）、线粒体膜电位显著降低（9.833% ± 2.285% vs. 2.667% ± 0.208%;t = 6.645,P < 0.01）。结论　多房棘球蚴感染可损伤巨噬细胞线粒体功能、抑制巨噬细胞氧化磷酸化过程而使糖酵解增强,巨噬细胞代谢状态改变可能是多房棘球蚴病发生和发展的机制之一。     

CD47及其配体在孕期弓形虫感染小鼠中的表达

目的　观察孕早期弓形虫感染小鼠中分化簇CD47及其配体信号调节蛋白α（SIRPα）和血小板反应蛋白1（TSP⁃1）在孕中、晚期的动态表达。方法　以C57BL/6J小鼠（6～8周龄）构建孕早期弓形虫感染小鼠模型,将孕鼠随机分成正常对照组和感染组,每组10只。感染组孕鼠于孕6.5 d（Gd6.5）时腹腔注射150个弓形虫速殖子,正常对照组孕鼠同一时间腹腔注射等体积生理盐水。于Gd12.5、Gd18.5时,收集各组孕鼠子宫和胎盘组织,并记录妊娠状态结局。通过苏木精⁃伊红（HE）染色观察两组孕鼠子宫、胎盘组织Gd12.5和Gd18.5时病理损伤,采用实时荧光定量PCR（qPCR）检测各组孕鼠子宫、胎盘组织中CD47、SIRPα、TSP⁃1、主要表面抗原1（SAG1）及γ干扰素（IFN⁃γ）、白细胞介素2（IL⁃2）、IL⁃4和IL⁃13 mRNA表达水平,采用免疫组织化学技术检测CD47、SIRPα和TSP⁃1在孕鼠子宫、胎盘组织中的表达水平。结果 　与正常对照组相比,感染组孕鼠孕期出现弓背、耸毛、颤栗和精神萎靡状态,个别出现阴道流血和流产等现象。HE染色结果显示,感染组孕鼠子宫、胎盘组织均出现不同程度炎症细胞浸润、淤血和坏死等病理损伤。Gd12.5和Gd18.5时,感染组孕鼠流产率均较对照组升高（[χ2] = 20.405、28.644,P 均< 0.001）。qPCR检测结果显示,Gd12.5和Gd18.5时正常对照组和感染组孕鼠胎盘组织中 CD47、SIRPα、TSP⁃1、SAG1、INF⁃γ、IL⁃2、IL⁃4和IL⁃13表达水平差异均有统计学意义[F′（F）= 37.511、29.337、97.343、53.755、67.188、21.145、8.658、13.930,P均< 0.001];与对照组相比,Gd12.5时感染组孕鼠胎盘组织中CD47、SIRPα和TSP⁃1表达水平升高（P 均< 0.01）,而Gd18.5时表达降低（P 均< 0.001）;Gd12.5和Gd18.5时感染组孕鼠胎盘组织中均有SAG1 表达（P 均< 0.01）;此外,Gd12.5和Gd18.5时感染组孕鼠胎盘组织中INF⁃γ和IL⁃2表达水平均升高（P 均< 0.001）,IL⁃4和IL⁃13表达下降（P 均< 0.001）。Gd12.5和Gd18.5时正常对照组和感染组孕鼠子宫组织中 CD47、TSP⁃1、SAG1、INF⁃γ、IL⁃2、IL⁃4和IL⁃13表达水平差异均有统计学意义[H （F′、F）= 14.951、25.977、18.711、48.595、39.318、14.248、15.468,P 均< 0.01];与正常对照组相比,Gd12.5和Gd18.5时感染组孕鼠子宫组织中CD47和TSP⁃1表达水平均升高（P 均< 0.01）,但SIRPα表达无变化（P > 0.05）;Gd12.5和Gd18.5时感染组孕鼠子宫组织中均有SAG1 表达（P 均< 0.01）;Gd12.5和Gd18.5时感染组孕鼠子宫组织中INF⁃γ和IL⁃2表达水平均升高（P 均< 0.001）,IL⁃4和IL⁃13 表达水平下降（P 均< 0.001）。相关性分析显示,Gd12.5时感染组孕鼠胎盘组织中CD47表达水平与IFN⁃γ（rs = 0.735）、IL⁃2（rs = 0.655）表达水平呈正相关（P 均< 0.05）,与IL⁃4（rs = -0.689）、IL⁃13达水平（rs = -0.795）表呈负相关（P 均< 0.05）;Gd18.5时胎盘组织中CD47表达水平与IFN⁃γ表达水平（rs = -0.745）、IL⁃2（rs = -0.816）呈负相关（P 均< 0.05）,与IL⁃4（rs = 0.704）、IL⁃13表达水平（rs = 0.802）呈正相关（P均< 0.05）。免疫组织化学染色结果显示,Gd12.5和Gd18.5时正常对照组孕鼠子宫、胎盘组织中CD47、SIRPα和TSP⁃1均呈弱表达;Gd12.5时感染组孕鼠胎盘组织中CD47、SIRPα和TSP⁃1呈强表达,子宫组织中CD47和TSP⁃1呈强表达。结论　孕早期弓形虫感染可致小鼠孕中、晚期母胎界面出现CD47及其配体SIRPα和TSP⁃1异常表达,可能与虫体在母胎界面免疫逃逸有关。     

人体刚地弓形虫感染对血脂水平的影响

目的　分析人体刚地弓形虫感染对血脂水平的影响。方法　以2017年1月至2019年12月某三级医院1 000例体检健康者作为研究对象,根据酶联免疫吸附试验（enzyme⁃linked immunosorbent assay, ELISA）是否检出血清抗弓形虫抗体分为感染组和对照组,检测并比较两组研究对象血清总胆固醇（total cholesterol, TC）、高密度脂蛋白（high⁃density lipoprotein, HDL）、低密度脂蛋白（low⁃density lipoprotein, LDL）和甘油三酯（triglyceride, TG）水平。结果　1 000例研究对象血清抗弓形虫抗体阳性率为8.40%,感染组和对照组研究对象性别（[χ2] = 1.29,P > 0.05）和年龄构成（[χ2] = 1.41,P > 0.05）差异均无统计学意义。感染组研究对象血清LDL和TC均值显著高于对照组（t = 3.89、3.81,P均< 0.05）,但两组研究对象血清TG和HDL差异均无统计学意义（t = 0.97、0.75,P均> 0.05）;感染组研究对象LDL和TC值不正常比例均显著高于对照组（[χ2] = 9.69、10.39,P均< 0.01）,但两组研究对象TG和HDL值不正常比例差异均无统计学意义（[χ2] = 0.02、0.11,P均> 0.05）。结论　人体刚地弓形虫感染影响血脂水平变化,血清抗弓形虫抗体阳性者平均LDL和TC值及TC和LDL值不正常比例均显著高于抗体阴性者。     

杭州市糖尿病患者弓形虫感染血清流行病学调查

目的　了解杭州市糖尿病患者弓形虫感染情况。方法　以2017年3月至2020年5月杭州市收治的337例1型糖尿病患者、624例2型糖尿病患者和384例妊娠糖尿病患者作为调查对象,按1∶1的比例分别选择同期年龄和性别相匹配的健康体检者及无妊娠糖尿病孕妇作为对照。采用酶联免疫吸附试验检测糖尿病患者和对照者血清抗弓形虫IgG和IgM抗体,比较糖尿病患者及相应对照血清抗体阳性率差异。结果　杭州市1型糖尿病患者血清抗弓形虫抗体总体阳性率（18.10% vs. 4.45%,[χ2] = 31.38,P < 0.01）和IgG抗体阳性率（14.54% vs. 2.97%,[χ2] = 28.28,P < 0.01）均显著高于健康对照,但两者抗弓形虫IgM抗体阳性率差异无统计学意义（3.56% vs. 1.48%,[χ2] = 2.96,P > 0.05）。2型糖尿病患者血清抗弓形虫抗体总体阳性率（23.56% vs. 6.57%,[χ2] = 70.37,P < 0.01）和IgG抗体阳性率（21.15% vs. 5.45%,[χ2] = 66.73,P < 0.01）均显著高于健康对照,但两者抗弓形虫IgM抗体阳性率差异无统计学意义（2.40% vs. 1.12%,[χ2] = 2.96,P > 0.05）。妊娠糖尿病患者血清抗弓形虫抗体总体阳性率（26.30% vs. 19.53%,[χ2] = 4.98,P < 0.05）和IgG抗体阳性率（23.70% vs. 17.71%,[χ2] = 4.20,P < 0.05）均显著高于健康对照,但两者抗弓形虫IgM抗体阳性率差异无统计学意义（2.60% vs. 1.82%,[χ2] = 0.54,P > 0.05）。结论　杭州市糖尿病患者弓形虫感染血清学阳性率显著高于健康对照,应加强糖尿病患者弓形虫感染筛查和相关健康教育。     

缺氧诱导因子⁃1在弓形虫感染孕鼠中的表达

目的　探讨缺氧诱导因子⁃1（hypoxia⁃inducible factor⁃1, HIF⁃1）在小鼠妊娠早期感染弓形虫后母胎界面的表达及可能发挥的作用。方法　将20只妊娠C57BL/6小鼠（体质量为16～20 g）随机分为4组,即12 d对照组、12 d感染组和18 d对照组、18 d感染组。在小鼠孕6 d时,给予12 d感染组、18 d感染组小鼠腹腔注射弓形虫PRU株速殖子150个/只,孕12 d、孕18 d对照组孕鼠则注射等量PBS。于孕12 、18 d分别处死相应对照组和感染组小鼠,取各组孕鼠胎盘和子宫组织观察其组织病理变化;采用实时荧光定量PCR（qPCR）技术检测孕鼠胎盘和子宫中HIF⁃1α、HIF⁃1β及血管内皮生长因子（VEGF）mRNA表达水平,并分析HIF⁃1α和VEGF mRNA表达水平的相关性。此外,设置孕12 d感染组和孕18 d感染组PBS阴性对照组,采用免疫组化染色检测孕鼠胎盘和子宫组织中HIF⁃1α表达水平。结果　与孕12 d、孕18 d对照组相比,孕12 d、孕18 d感染组孕鼠出现畸胎、胎盘发育不良等不良妊娠结局。HE染色结果显示,与相应对照组相比,孕12 d、孕18 d感染组小鼠胎盘组织迷路区细胞分别出现肿胀和瘀血,且均出现血窦减少、炎性细胞浸润;两组小鼠子宫组织均有柱状上皮细胞损伤和炎性细胞浸润。qPCR检测结果显示,与同期对照组相比,孕12 d感染组小鼠胎盘组织中HIF⁃1α、HIF⁃1β mRNA表达水平显著上升（F ＝ 132.6、286.9,P 均＜0.05）,子宫组织中HIF⁃1α、HIF⁃1β mRNA表达水平显著下降（F ＝111.5、55.2,P均＜ 0.05）;孕18 d感染组小鼠胎盘和子宫组织中HIF⁃1α、HIF⁃1β mRNA表达水平均显著下降（F ＝ 215.8、418.9、156.8、200.1,P 均＜ 0.05）。与同期对照组相比,孕12 d感染组小鼠胎盘组织中VEGF⁃A、VEGF⁃B和VEGF⁃C mRNA表达水平均显著下降（F ＝426.2、104.6、566.9,P 均＜0.05）,子宫组织中VEGF⁃A、VEGF⁃B和VEGF⁃C mRNA表达水平显著上升（F ＝ 95.8、502.4、610.0,P均＜0.05）;孕18 d感染组小鼠胎盘组织和子宫组织中VEGF⁃A、VEGF⁃B和VEGF⁃C mRNA表达水平均显著上升（F ＝521.9、100.6、275.9、224.6、108.2、333.4,P均＜ 0.05）。免疫组化染色结果显示,与相应对照组相比,孕12 d、孕18 d感染组小鼠胎盘迷路区HIF⁃1α分别呈强阳性和弱阳性表达,子宫组织中HIF⁃1α均不表达。结论　小鼠孕早期感染弓形虫后,胎盘组织中HIF⁃1α表达呈现孕中期上升、孕晚期下降的趋势,且与VEGF⁃A、VEGF⁃B、VEGF⁃C表达变化趋势相反;推测HIF⁃1α通过抑制VEGF表达而抑制小鼠妊娠期间胎盘血管生成,导致不良妊娠结局。     

弓形虫排泄分泌抗原对Lewis肺癌小鼠瘤体生长的抑制作用

目的　探讨弓形虫排泄分泌抗原（ESA）对Lewis肺癌小鼠CD4+CD25+ Foxp3+ T（Treg）细胞亚群的影响，观察弓形虫ESA对肿瘤生长的抑制作用。方法　将C57BL/6小鼠随机分成PBS组（14只）和Lewis组（34只）。Lewis组小鼠右腋窝皮下接种Lewis肺癌细胞2 × 105个，PBS组注射等量无菌PBS。接种后第7 天（D7），将PBS组小鼠分成PBS2组、PBS2 + ESA组，每组7只；将Lewis组分成Lewis2组和Lewis2 + ESA组，每组17只； PBS2 + ESA组及Lewis2 + ESA组小鼠腹腔注射100 μL弓形虫 ESA。ESA干预后7 d计算各组小鼠脾脏系数，检测Treg细胞数量变化，同时观察荷瘤鼠长期瘤体生长情况。结果　ESA干预后7 d，PBS2 + ESA组[（0.66 ± 0.09）%]和Lewis2 + ESA组[（0.69 ± 0.07）%]脾脏明显增大，脾脏系数与PBS2组[（0.30 ± 0.02）%]和Lewis2组[（0.33 ± 0.03）%]比较，差异均有统计学意义（P 均 < 0.05）。PBS2 + ESA组[（1.28 ± 0.14）%]和Lewis2 + ESA组[（1.58 ± 0.14）%]脾脏Treg细胞占脾细胞的比例均下降，与PBS2组[（2.06 ± 0.07）%]和Lewis2组[（2.44 ± 0.23）%]比较差异均有统计学意义（P 均< 0.05）。ESA干预后，瘤体生长延缓，在实验终点时，Lewis2 + ESA组小鼠瘤体明显小于Lewis2组（P < 0.05）。结论　ESA可下调荷瘤鼠脾脏Treg细胞占脾细胞的比例，抑制瘤体生长。     

弓形虫排泄分泌抗原对Lewis肺癌小鼠瘤体生长的抑制作用

目的　探讨弓形虫排泄分泌抗原（ESA）对Lewis肺癌小鼠CD4+CD25+ Foxp3+ T（Treg）细胞亚群的影响,观察弓形虫ESA对肿瘤生长的抑制作用。方法　将C57BL/6小鼠随机分成PBS组（14只）和Lewis组（34只）。Lewis组小鼠右腋窝皮下接种Lewis肺癌细胞2 × 105个,PBS组注射等量无菌PBS。接种后第7 天（D7）,将PBS组小鼠分成PBS2组、PBS2 + ESA组,每组7只;将Lewis组分成Lewis2组和Lewis2 + ESA组,每组17只; PBS2 + ESA组及Lewis2 + ESA组小鼠腹腔注射100 μL弓形虫 ESA。ESA干预后7 d计算各组小鼠脾脏系数,检测Treg细胞数量变化,同时观察荷瘤鼠长期瘤体生长情况。结果　ESA干预后7 d,PBS2 + ESA组[（0.66 ± 0.09）%]和Lewis2 + ESA组[（0.69 ± 0.07）%]脾脏明显增大,脾脏系数与PBS2组[（0.30 ± 0.02）%]和Lewis2组[（0.33 ± 0.03）%]比较,差异均有统计学意义（P 均 < 0.05）。PBS2 + ESA组[（1.28 ± 0.14）%]和Lewis2 + ESA组[（1.58 ± 0.14）%]脾脏Treg细胞占脾细胞的比例均下降,与PBS2组[（2.06 ± 0.07）%]和Lewis2组[（2.44 ± 0.23）%]比较差异均有统计学意义（P 均< 0.05）。ESA干预后,瘤体生长延缓,在实验终点时,Lewis2 + ESA组小鼠瘤体明显小于Lewis2组（P < 0.05）。结论　ESA可下调荷瘤鼠脾脏Treg细胞占脾细胞的比例,抑制瘤体生长。