头孢曲松钠他唑巴坦钠的含量测定

头孢曲松钠为半合成的第3代头孢菌素,对β内酰胺酶稳定.他唑巴坦是β-内酰胺酶抑制剂,能增强抗生素的抗菌活性,又可以扩大其抗菌谱,减少不良反应.酶抑制剂他唑巴坦钠的加入明显提高了头孢曲松钠对耐药菌的抗菌作用,使药理活性较单组分明显增加,且其毒副作用未较原组分增加,有效解决了近年来由于广泛大量选用头孢菌素、导致细菌对第3代头孢菌高度耐药的问题.现将头孢曲松钠他唑巴坦钠的含量测定方法介绍如下.     

p53基因生物制剂的研究进展

p53基因是声名显赫的抑癌基因.大约50%的人类肿瘤中都发现有异常的p53基因存在,包括有点突变、等位基因缺失、重排、插入、基因融合等.p53基因存在于人体正常细胞,在体内控制着与肿瘤生成和生长相关的多种不同基因的表达,并受Mdm2和p19-Arf等的调节控制.p53蛋白对细胞周期起负调控作用,抑制细胞从G1期到S期的进展,其对周期的调节有2种途径:一是"短期抑制",为细胞周期关卡调控因子,调节DNA复制过程;二是"长期抑制",发现DNA损伤时启动修复或是诱导其凋亡.     

缺氧诱导因子⁃1在弓形虫感染孕鼠中的表达

目的　探讨缺氧诱导因子⁃1（hypoxia⁃inducible factor⁃1, HIF⁃1）在小鼠妊娠早期感染弓形虫后母胎界面的表达及可能发挥的作用。方法　将20只妊娠C57BL/6小鼠（体质量为16～20 g）随机分为4组,即12 d对照组、12 d感染组和18 d对照组、18 d感染组。在小鼠孕6 d时,给予12 d感染组、18 d感染组小鼠腹腔注射弓形虫PRU株速殖子150个/只,孕12 d、孕18 d对照组孕鼠则注射等量PBS。于孕12 、18 d分别处死相应对照组和感染组小鼠,取各组孕鼠胎盘和子宫组织观察其组织病理变化;采用实时荧光定量PCR（qPCR）技术检测孕鼠胎盘和子宫中HIF⁃1α、HIF⁃1β及血管内皮生长因子（VEGF）mRNA表达水平,并分析HIF⁃1α和VEGF mRNA表达水平的相关性。此外,设置孕12 d感染组和孕18 d感染组PBS阴性对照组,采用免疫组化染色检测孕鼠胎盘和子宫组织中HIF⁃1α表达水平。结果　与孕12 d、孕18 d对照组相比,孕12 d、孕18 d感染组孕鼠出现畸胎、胎盘发育不良等不良妊娠结局。HE染色结果显示,与相应对照组相比,孕12 d、孕18 d感染组小鼠胎盘组织迷路区细胞分别出现肿胀和瘀血,且均出现血窦减少、炎性细胞浸润;两组小鼠子宫组织均有柱状上皮细胞损伤和炎性细胞浸润。qPCR检测结果显示,与同期对照组相比,孕12 d感染组小鼠胎盘组织中HIF⁃1α、HIF⁃1β mRNA表达水平显著上升（F ＝ 132.6、286.9,P 均＜0.05）,子宫组织中HIF⁃1α、HIF⁃1β mRNA表达水平显著下降（F ＝111.5、55.2,P均＜ 0.05）;孕18 d感染组小鼠胎盘和子宫组织中HIF⁃1α、HIF⁃1β mRNA表达水平均显著下降（F ＝ 215.8、418.9、156.8、200.1,P 均＜ 0.05）。与同期对照组相比,孕12 d感染组小鼠胎盘组织中VEGF⁃A、VEGF⁃B和VEGF⁃C mRNA表达水平均显著下降（F ＝426.2、104.6、566.9,P 均＜0.05）,子宫组织中VEGF⁃A、VEGF⁃B和VEGF⁃C mRNA表达水平显著上升（F ＝ 95.8、502.4、610.0,P均＜0.05）;孕18 d感染组小鼠胎盘组织和子宫组织中VEGF⁃A、VEGF⁃B和VEGF⁃C mRNA表达水平均显著上升（F ＝521.9、100.6、275.9、224.6、108.2、333.4,P均＜ 0.05）。免疫组化染色结果显示,与相应对照组相比,孕12 d、孕18 d感染组小鼠胎盘迷路区HIF⁃1α分别呈强阳性和弱阳性表达,子宫组织中HIF⁃1α均不表达。结论　小鼠孕早期感染弓形虫后,胎盘组织中HIF⁃1α表达呈现孕中期上升、孕晚期下降的趋势,且与VEGF⁃A、VEGF⁃B、VEGF⁃C表达变化趋势相反;推测HIF⁃1α通过抑制VEGF表达而抑制小鼠妊娠期间胎盘血管生成,导致不良妊娠结局。     

人芽囊原虫感染致大鼠肠道紧密连接破坏的机制研究

目的　探讨大鼠感染人芽囊原虫后引起肠道屏障损伤的机制。方法　将30只SD大鼠随机分为对照组及感染1、3、6、9周组（感染组）,每组6只。各感染组大鼠经口感染人芽囊原虫2 × 108个/鼠,对照组大鼠经口灌胃等体积磷酸盐缓冲液。分别于感染后1、3、6、9周收集7 h大鼠尿液检测肠道通透性,随后采用颈椎脱臼法处死大鼠,取盲肠组织检测肠道细胞通透性。采用实时荧光定量PCR技术检测大鼠盲肠细胞紧密连接跨膜蛋白基因Occludin、Claudin?1及凋亡相关基因Bcl?2和Bax表达水平;以原位末端标记法（TdT?mediated dUTP nick?end labeling, TUNEL法）检测盲肠细胞凋亡。 结果　对照组及感染1、3、6、9周组大鼠尿液中乳果糖与甘露醇排出率比值中位数分别为0.29、0.72、0.44、0.46和0.38,差异有统计学意义（H = 12.09,P < 0.05）。感染组大鼠肠上皮细胞可见虫体入侵并出现上皮损伤,透射电镜下可见细胞间紧密连接破坏。对照组及感染1、3、6、9周组大鼠盲肠组织中Occludin基因相对表达量分别为1.04、0.62、0.71、0.68和0.96,Claudin?1基因相对表达量分别为1.03、0.61、0.63、0.76和0.86,Bcl?2基因相对表达量分别为1.08、0.70、0.75、0.74和1.03,Bax基因相对表达量分别为1.00、1.57、1.33、1.35和1.10,差异均有统计学意义（F = 2.86、2.85、3.37和4.45,P均< 0.05）;盲肠组织凋亡染色阳性细胞数中位数分别为1.00、13.00、9.00、3.50个和1.00个,差异有统计学意义（H = 22.95,P < 0.01）。结论　人芽囊原虫感染可能通过引发大鼠肠道上皮细胞凋亡而破坏细胞间紧密连接,导致肠道通透性增高,进而破坏肠道屏障功能。     

石墨炉原子吸收法测定药用空心胶囊中的微量铬

目的选择适合药用空心胶囊中微量铬离子测定的常规分析方法。方法在没有任何基体改进剂的条件下,采用横向加热平台石墨管(THGA),以直接测量不扣背景方式测定药用空心胶囊中的微量铬。结果本方法操作简便、快速,检测限低,线性范围宽,回收率高。结论石墨炉原子吸收光谱法适用于药用空心胶囊中微量铬元素的测定。     

CD47及其配体在孕期弓形虫感染小鼠中的表达

目的　观察孕早期弓形虫感染小鼠中分化簇CD47及其配体信号调节蛋白α（SIRPα）和血小板反应蛋白1（TSP⁃1）在孕中、晚期的动态表达。方法　以C57BL/6J小鼠（6～8周龄）构建孕早期弓形虫感染小鼠模型,将孕鼠随机分成正常对照组和感染组,每组10只。感染组孕鼠于孕6.5 d（Gd6.5）时腹腔注射150个弓形虫速殖子,正常对照组孕鼠同一时间腹腔注射等体积生理盐水。于Gd12.5、Gd18.5时,收集各组孕鼠子宫和胎盘组织,并记录妊娠状态结局。通过苏木精⁃伊红（HE）染色观察两组孕鼠子宫、胎盘组织Gd12.5和Gd18.5时病理损伤,采用实时荧光定量PCR（qPCR）检测各组孕鼠子宫、胎盘组织中CD47、SIRPα、TSP⁃1、主要表面抗原1（SAG1）及γ干扰素（IFN⁃γ）、白细胞介素2（IL⁃2）、IL⁃4和IL⁃13 mRNA表达水平,采用免疫组织化学技术检测CD47、SIRPα和TSP⁃1在孕鼠子宫、胎盘组织中的表达水平。结果 　与正常对照组相比,感染组孕鼠孕期出现弓背、耸毛、颤栗和精神萎靡状态,个别出现阴道流血和流产等现象。HE染色结果显示,感染组孕鼠子宫、胎盘组织均出现不同程度炎症细胞浸润、淤血和坏死等病理损伤。Gd12.5和Gd18.5时,感染组孕鼠流产率均较对照组升高（[χ2] = 20.405、28.644,P 均< 0.001）。qPCR检测结果显示,Gd12.5和Gd18.5时正常对照组和感染组孕鼠胎盘组织中 CD47、SIRPα、TSP⁃1、SAG1、INF⁃γ、IL⁃2、IL⁃4和IL⁃13表达水平差异均有统计学意义[F′（F）= 37.511、29.337、97.343、53.755、67.188、21.145、8.658、13.930,P均< 0.001];与对照组相比,Gd12.5时感染组孕鼠胎盘组织中CD47、SIRPα和TSP⁃1表达水平升高（P 均< 0.01）,而Gd18.5时表达降低（P 均< 0.001）;Gd12.5和Gd18.5时感染组孕鼠胎盘组织中均有SAG1 表达（P 均< 0.01）;此外,Gd12.5和Gd18.5时感染组孕鼠胎盘组织中INF⁃γ和IL⁃2表达水平均升高（P 均< 0.001）,IL⁃4和IL⁃13表达下降（P 均< 0.001）。Gd12.5和Gd18.5时正常对照组和感染组孕鼠子宫组织中 CD47、TSP⁃1、SAG1、INF⁃γ、IL⁃2、IL⁃4和IL⁃13表达水平差异均有统计学意义[H （F′、F）= 14.951、25.977、18.711、48.595、39.318、14.248、15.468,P 均< 0.01];与正常对照组相比,Gd12.5和Gd18.5时感染组孕鼠子宫组织中CD47和TSP⁃1表达水平均升高（P 均< 0.01）,但SIRPα表达无变化（P > 0.05）;Gd12.5和Gd18.5时感染组孕鼠子宫组织中均有SAG1 表达（P 均< 0.01）;Gd12.5和Gd18.5时感染组孕鼠子宫组织中INF⁃γ和IL⁃2表达水平均升高（P 均< 0.001）,IL⁃4和IL⁃13 表达水平下降（P 均< 0.001）。相关性分析显示,Gd12.5时感染组孕鼠胎盘组织中CD47表达水平与IFN⁃γ（rs = 0.735）、IL⁃2（rs = 0.655）表达水平呈正相关（P 均< 0.05）,与IL⁃4（rs = -0.689）、IL⁃13达水平（rs = -0.795）表呈负相关（P 均< 0.05）;Gd18.5时胎盘组织中CD47表达水平与IFN⁃γ表达水平（rs = -0.745）、IL⁃2（rs = -0.816）呈负相关（P 均< 0.05）,与IL⁃4（rs = 0.704）、IL⁃13表达水平（rs = 0.802）呈正相关（P均< 0.05）。免疫组织化学染色结果显示,Gd12.5和Gd18.5时正常对照组孕鼠子宫、胎盘组织中CD47、SIRPα和TSP⁃1均呈弱表达;Gd12.5时感染组孕鼠胎盘组织中CD47、SIRPα和TSP⁃1呈强表达,子宫组织中CD47和TSP⁃1呈强表达。结论　孕早期弓形虫感染可致小鼠孕中、晚期母胎界面出现CD47及其配体SIRPα和TSP⁃1异常表达,可能与虫体在母胎界面免疫逃逸有关。     

注射用头孢哌酮钠舒巴坦钠的质量现状研究

目的:建立杂质控制指标,考察不同厂家生产的注射用头孢哌酮钠舒巴坦钠的杂质限度。方法:采用Phenomenex Luna C18(205×4.6mm,5μm)色谱柱,以0.005mol/L四丁基氢氧化铵(用1mol/L磷酸溶液调pH4.0)-乙腈(78:22)为流动相,检测波长为220nm,建立有关物质检测,采用交联葡聚糖凝胶SephadexG-10凝胶柱,以0.01mol/L的磷酸盐缓冲液为流动相,检测波长254nm,建立高分子杂质检测,并分析比较。结果:各厂家生产的注射用头孢哌酮舒巴坦的杂质均符合要求,质量无明显差异。结论:不同厂家的产品在质量上无明显差异,杂质均符合要求。     

PD-1/PD-L1在弓形虫感染小鼠妊娠中晚期的表达及与IFN-γ的相互调节作用

目的　探讨程序性死亡蛋白（programmed death protein?1, PD?1）及其配体PD?L1在小鼠妊娠早期弓形虫感染后母胎界面的动态表达,及其与γ干扰素（interferon?γ,IFN?γ）的相互调节作用。方法　将20只孕0 d母鼠随机平均分为4组,即孕12 d对照组（12 dpn组）、孕12 d感染组（12 dpi组）和孕18 d对照组（18 dpn组）、感染组（18 dpi组）。在妊娠第6天时对12 dpi组、18 dpi组孕鼠给予150个弓形虫PRU株速殖子腹腔注射,12 dpn组、18 dpn组孕鼠则注射等量PBS。于小鼠妊娠第12天和第18天分别处死4组小鼠,计数胎盘、胎儿数量并称重。取各组孕鼠胎盘和子宫组织观察其组织病理变化,采用实时荧光定量聚合酶链反应（qPCR）检测胎盘、子宫组织中PD?1与PD?L1、弓形虫表面抗原SAG?1及细胞因子IFN?γ mRNA表达水平,并分析PD?1与IFN?γ表达的相关性。设置12 dpn、12 dpi、18 dpn、18 dpi组以及12 dpi PBS阴性对照组、18 dpi PBS阴性对照组,采用免疫组织化学染色检测孕鼠子宫、胎盘组织中PD?1表达水平。结果　 12 dpi组和18 dpi组孕鼠均出现胎盘和胎儿发育不良等不良妊娠结局,且胎盘重量和胎儿体质量均低于12 dpn组、18 dpn组 (t = 5.52、11.44、12.63、11.67,P 均< 0.01)。组织病理观察结果显示,12 dpi组和18 dpi组孕鼠胎盘组织蜕膜及连接区连接疏松,胎盘及子宫组织中均见大量炎性细胞浸润和淤血。经qPCR检测发现,12 dpn、12 dpi、18 dpn组和18 dpi组小鼠胎盘和子宫组织中PD?1、PD?L1、IFN?γ和SAG?1表达均存在差异（F = 22.48、51.23、9.61、47.49、16.08、21.52、28.66、238.90,P 均< 0.05）,其中12 dpi组小鼠胎盘（P均 < 0.05）及子宫组织中（P均 < 0.05）中PD?1、PD?L1、IFN?γ和SAG?1表达水平均较12 dpn组升高。与18 dpn组相比,18 dpi组小鼠胎盘组织中PD?1和PD?L1表达水平均下降（P 均< 0.05）,胎盘和子宫组织中IFN?γ和SAG?1表达水平均升高（P均< 0.05）。与12 dpi组相比,18 dpi组孕鼠胎盘和子宫中PD?1和PD?L1表达水平均下降（P均< 0.05）。免疫组化染色结果显示,PD?1在12 dpi组孕鼠胎盘组织中浸润的炎性细胞上有表达,在18 dpi组中表达不明显;PD?1在12dpi组孕鼠子宫上皮呈强阳性表达,而在18 dpi组呈弱阳性表达。相关分析结果显示,12 dpi组孕鼠胎盘（rs = 0.99,P ＜0.01）、子宫（rs = 0.97,P ＜0.01）,18 dpi组孕鼠胎盘（rs = 0.82,P ＜ 0.05）、子宫（rs = 0.81,P ＜0.05）中 IFN?γ与PD?1 mRNA表达水平均呈正相关。结论　小鼠妊娠早期感染弓形虫后,胎盘和子宫中PD?1/PD?L1表达呈孕中期显著上升、孕晚期下降的动态变化,且与同期 IFN?γ表达趋势一致,其中PD?1与IFN?γ表达呈正相关;故推测在孕鼠妊娠中、晚期,母胎界面PD?1/PD?L1通路与弓形虫感染所诱导的IFN?γ有相互调节关系。