CD47及其配体在孕期弓形虫感染小鼠中的表达

目的　观察孕早期弓形虫感染小鼠中分化簇CD47及其配体信号调节蛋白α（SIRPα）和血小板反应蛋白1（TSP⁃1）在孕中、晚期的动态表达。方法　以C57BL/6J小鼠（6～8周龄）构建孕早期弓形虫感染小鼠模型,将孕鼠随机分成正常对照组和感染组,每组10只。感染组孕鼠于孕6.5 d（Gd6.5）时腹腔注射150个弓形虫速殖子,正常对照组孕鼠同一时间腹腔注射等体积生理盐水。于Gd12.5、Gd18.5时,收集各组孕鼠子宫和胎盘组织,并记录妊娠状态结局。通过苏木精⁃伊红（HE）染色观察两组孕鼠子宫、胎盘组织Gd12.5和Gd18.5时病理损伤,采用实时荧光定量PCR（qPCR）检测各组孕鼠子宫、胎盘组织中CD47、SIRPα、TSP⁃1、主要表面抗原1（SAG1）及γ干扰素（IFN⁃γ）、白细胞介素2（IL⁃2）、IL⁃4和IL⁃13 mRNA表达水平,采用免疫组织化学技术检测CD47、SIRPα和TSP⁃1在孕鼠子宫、胎盘组织中的表达水平。结果 　与正常对照组相比,感染组孕鼠孕期出现弓背、耸毛、颤栗和精神萎靡状态,个别出现阴道流血和流产等现象。HE染色结果显示,感染组孕鼠子宫、胎盘组织均出现不同程度炎症细胞浸润、淤血和坏死等病理损伤。Gd12.5和Gd18.5时,感染组孕鼠流产率均较对照组升高（[χ2] = 20.405、28.644,P 均< 0.001）。qPCR检测结果显示,Gd12.5和Gd18.5时正常对照组和感染组孕鼠胎盘组织中 CD47、SIRPα、TSP⁃1、SAG1、INF⁃γ、IL⁃2、IL⁃4和IL⁃13表达水平差异均有统计学意义[F′（F）= 37.511、29.337、97.343、53.755、67.188、21.145、8.658、13.930,P均< 0.001];与对照组相比,Gd12.5时感染组孕鼠胎盘组织中CD47、SIRPα和TSP⁃1表达水平升高（P 均< 0.01）,而Gd18.5时表达降低（P 均< 0.001）;Gd12.5和Gd18.5时感染组孕鼠胎盘组织中均有SAG1 表达（P 均< 0.01）;此外,Gd12.5和Gd18.5时感染组孕鼠胎盘组织中INF⁃γ和IL⁃2表达水平均升高（P 均< 0.001）,IL⁃4和IL⁃13表达下降（P 均< 0.001）。Gd12.5和Gd18.5时正常对照组和感染组孕鼠子宫组织中 CD47、TSP⁃1、SAG1、INF⁃γ、IL⁃2、IL⁃4和IL⁃13表达水平差异均有统计学意义[H （F′、F）= 14.951、25.977、18.711、48.595、39.318、14.248、15.468,P 均< 0.01];与正常对照组相比,Gd12.5和Gd18.5时感染组孕鼠子宫组织中CD47和TSP⁃1表达水平均升高（P 均< 0.01）,但SIRPα表达无变化（P > 0.05）;Gd12.5和Gd18.5时感染组孕鼠子宫组织中均有SAG1 表达（P 均< 0.01）;Gd12.5和Gd18.5时感染组孕鼠子宫组织中INF⁃γ和IL⁃2表达水平均升高（P 均< 0.001）,IL⁃4和IL⁃13 表达水平下降（P 均< 0.001）。相关性分析显示,Gd12.5时感染组孕鼠胎盘组织中CD47表达水平与IFN⁃γ（rs = 0.735）、IL⁃2（rs = 0.655）表达水平呈正相关（P 均< 0.05）,与IL⁃4（rs = -0.689）、IL⁃13达水平（rs = -0.795）表呈负相关（P 均< 0.05）;Gd18.5时胎盘组织中CD47表达水平与IFN⁃γ表达水平（rs = -0.745）、IL⁃2（rs = -0.816）呈负相关（P 均< 0.05）,与IL⁃4（rs = 0.704）、IL⁃13表达水平（rs = 0.802）呈正相关（P均< 0.05）。免疫组织化学染色结果显示,Gd12.5和Gd18.5时正常对照组孕鼠子宫、胎盘组织中CD47、SIRPα和TSP⁃1均呈弱表达;Gd12.5时感染组孕鼠胎盘组织中CD47、SIRPα和TSP⁃1呈强表达,子宫组织中CD47和TSP⁃1呈强表达。结论　孕早期弓形虫感染可致小鼠孕中、晚期母胎界面出现CD47及其配体SIRPα和TSP⁃1异常表达,可能与虫体在母胎界面免疫逃逸有关。     

PD-1/PD-L1在弓形虫感染小鼠妊娠中晚期的表达及与IFN-γ的相互调节作用

目的　探讨程序性死亡蛋白（programmed death protein?1, PD?1）及其配体PD?L1在小鼠妊娠早期弓形虫感染后母胎界面的动态表达,及其与γ干扰素（interferon?γ,IFN?γ）的相互调节作用。方法　将20只孕0 d母鼠随机平均分为4组,即孕12 d对照组（12 dpn组）、孕12 d感染组（12 dpi组）和孕18 d对照组（18 dpn组）、感染组（18 dpi组）。在妊娠第6天时对12 dpi组、18 dpi组孕鼠给予150个弓形虫PRU株速殖子腹腔注射,12 dpn组、18 dpn组孕鼠则注射等量PBS。于小鼠妊娠第12天和第18天分别处死4组小鼠,计数胎盘、胎儿数量并称重。取各组孕鼠胎盘和子宫组织观察其组织病理变化,采用实时荧光定量聚合酶链反应（qPCR）检测胎盘、子宫组织中PD?1与PD?L1、弓形虫表面抗原SAG?1及细胞因子IFN?γ mRNA表达水平,并分析PD?1与IFN?γ表达的相关性。设置12 dpn、12 dpi、18 dpn、18 dpi组以及12 dpi PBS阴性对照组、18 dpi PBS阴性对照组,采用免疫组织化学染色检测孕鼠子宫、胎盘组织中PD?1表达水平。结果　 12 dpi组和18 dpi组孕鼠均出现胎盘和胎儿发育不良等不良妊娠结局,且胎盘重量和胎儿体质量均低于12 dpn组、18 dpn组 (t = 5.52、11.44、12.63、11.67,P 均< 0.01)。组织病理观察结果显示,12 dpi组和18 dpi组孕鼠胎盘组织蜕膜及连接区连接疏松,胎盘及子宫组织中均见大量炎性细胞浸润和淤血。经qPCR检测发现,12 dpn、12 dpi、18 dpn组和18 dpi组小鼠胎盘和子宫组织中PD?1、PD?L1、IFN?γ和SAG?1表达均存在差异（F = 22.48、51.23、9.61、47.49、16.08、21.52、28.66、238.90,P 均< 0.05）,其中12 dpi组小鼠胎盘（P均 < 0.05）及子宫组织中（P均 < 0.05）中PD?1、PD?L1、IFN?γ和SAG?1表达水平均较12 dpn组升高。与18 dpn组相比,18 dpi组小鼠胎盘组织中PD?1和PD?L1表达水平均下降（P 均< 0.05）,胎盘和子宫组织中IFN?γ和SAG?1表达水平均升高（P均< 0.05）。与12 dpi组相比,18 dpi组孕鼠胎盘和子宫中PD?1和PD?L1表达水平均下降（P均< 0.05）。免疫组化染色结果显示,PD?1在12 dpi组孕鼠胎盘组织中浸润的炎性细胞上有表达,在18 dpi组中表达不明显;PD?1在12dpi组孕鼠子宫上皮呈强阳性表达,而在18 dpi组呈弱阳性表达。相关分析结果显示,12 dpi组孕鼠胎盘（rs = 0.99,P ＜0.01）、子宫（rs = 0.97,P ＜0.01）,18 dpi组孕鼠胎盘（rs = 0.82,P ＜ 0.05）、子宫（rs = 0.81,P ＜0.05）中 IFN?γ与PD?1 mRNA表达水平均呈正相关。结论　小鼠妊娠早期感染弓形虫后,胎盘和子宫中PD?1/PD?L1表达呈孕中期显著上升、孕晚期下降的动态变化,且与同期 IFN?γ表达趋势一致,其中PD?1与IFN?γ表达呈正相关;故推测在孕鼠妊娠中、晚期,母胎界面PD?1/PD?L1通路与弓形虫感染所诱导的IFN?γ有相互调节关系。     

低氧对小鼠低氧诱导因子-1α和血管内皮生长因子表达的影响

目的 研究低氧时小鼠肺组织中低氧诱导因子-1α（HIF-1α）及血管内皮生长因子（VEGF）表达的变化，探讨低氧与血管新生的关系。方法将哈尔滨医科大学附属第二医院呼吸科2005年4月至6月实验用雄性昆明小鼠，分为低氧组与对照组，低氧仓浓度分别为10％，7％和5％。低氧时间分别为3d．6d和9d。用免疫组织化学技术检测小鼠在低氧条件下肺组织中的HIF—1α和VEGF蛋白表达的变化及微血管密度（MVD），用Westem blotting法检测HIF-1α和VEGF的表达。结果低氧组HIF-1α和VEGF蛋白表达均增加，并且随低氧时间的延长及低氧浓度的降低而增强，而对照组HIF-1α无表达，VEGF有少量表达，P〈0、05；低氧组的MVD也高于对照组；VEGF、MVD的表达均与HIF-1α表达呈正相关（r分别为0、730与0．691）。结论HIF-1α/VEGF通路在低氧致小鼠肺组织血管新生过程中起重要作用。     

子宫内膜异位症患者异位、在位子宫内膜组织中VEGF、sflt-1 mRNA表达变化

目的观察子宫内膜异位症患者异位、在位子宫内膜组织中VEGF、sflt-1 mRNA表达变化。方法收集46例子宫内膜异位症患者的异位子宫内膜组织46份为异位组,在位子宫内膜组织32份为在位组,另收集30例非子宫内膜异位症患者子宫内膜组织为对照组。采用实时荧光定量PCR法检测各组VEGF mRNA、sFlt-1 mRNA,采用比较阈值法（2-△△Ct法）计算VEGF mRNA、sflt-1 mRNA相对表达量。结果在位组VEGF mRNA表达量明显高于对照组和异位组（P均〈0.05）,对照组VEGFmRNA表达量高于异位组（P〈0.01）;在位组内膜VEGF活性指数高于异位组和对照组（P〈0.05）,异位组VEGF活性指数高于对照组,但差异无统计学意义;对照组内膜sflt-1mRNA表达量高于在位组和异位组（P〈0.05）,在位组sflt-1mRNA表达量高于异位组（P〈0.05）。结论子宫内膜异位症患者异位、在位子宫内膜组织中VEGF、sflt-1 mRNA表达异常。sflt-1可能参与了子宫内膜异位症的发病过程。     

弓形虫感染对小鼠和人子宫自然杀伤细胞的影响

目的　观察弓形虫感染对小鼠和人子宫自然杀伤细胞（uterine natural killer cells, uNK cells）比例、数量、分化和功能的影响,探讨uNK细胞在弓形虫感染致早孕流产中的作用。方法　妊娠第6.5天给予孕鼠腹腔注射弓形虫速殖子,建立孕早期弓形虫感染致流产小鼠模型,妊娠第9.5天分离小鼠子宫淋巴细胞。取人正常妊娠孕早期流产新鲜蜕膜组织,分离人子宫淋巴细胞,与弓形虫RH株速殖子体外共培养48 h（弓形虫与子宫淋巴细胞比例分别为0.5∶1、1∶1、2∶1）。采用流式细胞术检测小鼠uNK细胞表型（CD122、NK1.1、DX5）、人uNK细胞表型（CD3、CD56、CD11b、CD27）及胞内细胞因子γ⁃干扰素（interferon⁃γ, IFN⁃γ）和肿瘤坏死因子⁃α（tumor necrosis factor⁃α, TNF⁃α）表达水平。磁珠分选小鼠和人uNK细胞,以小鼠YAC⁃1或人K562细胞作为靶细胞、以小鼠或人uNK细胞作为效应细胞,采用乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase, LDH）释放法检测效应细胞/靶细胞比例分别为1∶1、5∶1、10∶1、20∶1时uNK细胞的杀伤功能。结果　妊娠第9.5天,弓形虫感染组小鼠流产率较对照组显著上升（83.02% vs. 3.51%;[χ2] = 71.359,P < 0.001）。与对照组比较,弓形虫感染组小鼠uNK细胞绝对数量显著降低[（4 547 ± 1 610）个/只 vs.（8 978 ± 3 339）个/只;U = 2.000,P < 0.05]、细胞表面NK1.1表达水平显著下降[（74.53 ± 8.37）% vs.（93.00 ± 1.11）%;U = 0.000,P < 0.05]、NK1.1⁃DX5⁃细胞比例显著上升[（20.10 ± 8.03）% vs.（5.04 ± 0.68）%;U = 0.000,P < 0.05]、NK1.1+DX5+细胞比例显著下降[（21.70 ± 12.48）% vs.（45.75 ± 2.26）%;U = 0.000,P < 0.05]、IFN⁃γ表达水平显著升高[（16.74 ± 1.36）% vs.（8.13 ± 1.90）%;U = 0.000,P < 0.05],但TNF⁃α表达水平无显著改变[（67.98 ± 9.20）% vs.（52.93 ± 10.42）%;U = 2.000,P > 0.05]。弓形虫感染组小鼠uNK细胞表现出较强杀伤能力,且杀伤作用随着效应细胞/靶细胞比例升高逐渐增强;效应细胞/靶细胞比例为1∶1、5∶1、10∶1、20∶1时,感染组uNK细胞对YAC⁃1细胞的杀伤活性分别为2.30%、4.32%、8.12%和12.65%,对照组分别为1.21%、1.63%、2.51%和3.22%。将人子宫淋巴细胞与弓形虫RH株速殖子共培养48 h后,弓形虫感染组人uNK细胞在子宫淋巴细胞中所占比例较对照组显著降低[弓形虫2∶1组 vs. 对照组：（6.61 ± 1.75）% vs.（17.48 ± 4.81）%;F = 7.307,P < 0.01]、绝对数量显著减少[弓形虫2∶1组vs. 对照组：（12 104 ± 5 726）个/孔 vs.（65 285 ± 21 810）个/孔;H =11.540,P < 0.01]。弓形虫感染组uNK细胞中,CD56brightCD16⁃调节型NK细胞亚群比例较对照组减少（弓形虫2∶1组vs. 对照组：（25.25 ± 5.90）% vs.（36.03 ± 4.51）%;F = 3.213,P > 0.05]、CD56dimCD16+杀伤型NK细胞亚群比例增加[弓形虫2∶1组vs. 对照组：（11.15 ± 2.15）% vs.（7.09 ± 2.24）%,F = 2.992,P > 0.05],两者比值显著降低[弓形虫2∶1组vs. 对照组：（2.37 ± 0.92）vs.（5.58 ± 2.39）;H = 8.228,P < 0.05];CD11b+CD27⁃细胞比例显著上升[弓形虫2∶1组vs. 对照组：（30.28 ± 6.91）% vs.（17.48 ± 4.67）%;H = 6.556,P < 0.05],IFN⁃γ [弓形虫2∶1组vs. 对照组：（14.13 ± 1.28）% vs.（15.19 ± 1.64）%;F = 1.639,P > 0.05]、TNF⁃α表达水平无显著改变[弓形虫2∶1组vs. 对照组：（54.76 ± 10.02）% vs.（50.33 ±3.67）%;F = 0.415,P > 0.05]。弓形虫感染组人uNK细胞具有较强杀伤能力,且杀伤作用随着效应细胞/靶细胞比例升高逐渐增强;效应细胞/靶细胞比例为1∶1、5∶1、10∶1、20∶1时,感染组uNK细胞对K562细胞的杀伤活性分别为11.90%、28.11%、49.91%和73.35%,对照组分别为11.21%、21.63%、33.51%和48.22%。结论　弓形虫感染对小鼠和人uNK细胞分化和分泌功能产生了不同影响,但均可引起小鼠和人uNK细胞绝对数量减少、杀伤功能增强。     

肺腺癌小鼠癌组织GLUT 1 mRNA和HIF-1α mRNA表达的定量分析及相关性研究

目的　探讨实验性肺腺癌小鼠癌组组织中GLUT1mRNA和HIF 1αmRNA的表达以及与转移的相关性。方法　应用荧光定量RT PCR技术检测GLUT1mRNA和HIF 1αmRNA在肺腺癌小鼠癌组织及正常肺组织中的表达 ,并分析肺癌转移瘤结节数与GLUT1mRNA和HIF 1αmRNA表达量的相关性。结果　肺腺癌小鼠癌组织GLUT1和HIF 1α基因的表达明显高于正常肺组织 (P <0 0 1 ) ;GLUT1mRNA的表达与HIF 1αmRNA的表达密切相关(r=0 631 3,P <0 0 1 ) ;GLUT1mRNA和HIF 1αmRNA的表达量与肺转移瘤结节数成正相关 (均P <0 0 1 )。结论　肺腺癌小鼠癌组织GLUT1mRNA和HIF 1αmRNA的表达有密切关系 ,HIF 1αmRNA和GLUT1mRNA的表达量与肿瘤的转移呈正相关。     

弓形虫感染对胎鼠铁含量和胎盘铁转运蛋白表达的影响

目的探讨刚地弓形虫感染孕鼠后对胎鼠体内铁(Fe)含量和胎盘铁转运蛋白表达的影响。方法孕8 dBALB/c小鼠经腹腔接种弓形虫速殖子,在孕10、12、14、16和18 d剖腹,取胎鼠,采用原子吸收分光光谱法测定胎鼠体内铁含量;用DAB增强的铁染色法观察胎鼠组织中铁分布;用免疫组织化学染色法检测胎盘膜铁转运蛋白(FP1)和铜蓝蛋白(Cp)的表达。结果在孕10 d,感染组胎鼠体内铁含量与对照组比较差异无统计学意义(P0.05);孕12~18d,铁含量均低于对照组(P0.05)。感染组胎鼠整体、胎肝及胎脑组织铁染色强度与对照组相比显著减弱。FP1和Cp主要表达于胎盘合体滋养层细胞(STB)基底侧,在孕10、12 d,感染组FP1和Cp与对照组比较差异无统计学意义(P0.05);在孕14、16和18 d,感染组FP1和Cp表达显著高于对照组(P0.05)。结论小鼠孕期感染弓形虫可使胚胎铁含量降低,并影响胚胎的生长发育;胎盘FP1和Cp高表达可能是胎鼠体内铁缺乏的代偿反应;胎盘FP1和Cp的表达可能受胎鼠体内铁浓度的调控。     

弓形虫感染对妊娠中期孕鼠血清中胎盘激素含量的影响

目的探讨妊娠中期弓形虫感染对BALB/c孕鼠血清绒毛膜促性腺激素（CG）、胎盘催乳素（PL）和雌三醇（E3）含量的影响。方法在妊娠第8 d,采用腹腔注射法建立弓形虫感染的BALB/c小鼠动物模型,于妊娠第12、14、16、18d分批摘眼球取血,处死孕鼠,采用放射免疫分析法（RIA）测定孕鼠血清CG、PL和E3含量。结果实验组和正常对照组孕鼠血清CG含量均随妊娠天数的增加而降低,PL和E3含量均随妊娠天数的增加而升高（CG：F对照组=19.306,F实验组=57.620;PL：F对照组=17.449,F实验组=46.720;E3：F对照组=239.546,F实验组=22.841,P均〈0.01）;妊娠第16 d和第18 d时3种激素含量实验组与正常对照组比较差异有统计学意义（CG：t16=4.351,t18=13.367;PL：t16=4.034,t18=2.875;E3：t16=4.265,t18=11.499,P均〈0.01）。结论妊娠中期弓形虫感染孕鼠血清中胎盘激素含量较正常对照组显著降低,这可能是虫体感染所致的胎盘组织病理损伤和滋养层细胞凋亡增加的结果,也可能是感染所致胎儿宫内发育迟缓、死产、流产等不良妊娠发生的原因。     

孕期弓形虫感染对胎鼠体内微量元素的影响

目的探讨刚地弓形虫感染孕鼠后对胎鼠体内微量元素锌（Zn）、铜（Cu）、铁（Fe）含量的影响。方法孕中期BALB/c孕鼠经腹腔接种弓形虫速殖子。分别于孕10、12、14、16和18 d剖杀,取胎盘,制作组织压片及病理切片,观察孕鼠胎盘组织的感染及损伤情况;取胎鼠组织,采用原子吸收分光光谱法测定Zn、Cu、Fe含量,采用DAB增强的Perl＇s铁染色观察胎鼠组织中Fe的分布。结果感染组孕鼠胎盘组织压片可见大量弓形虫速殖子,病理切片HE染色可见炎症细胞浸润及凋亡小体。感染组胎鼠在孕10 d时体内Zn和Fe含量与未感染组比较差异无统计学意义（P〉0.05）,在孕12-18 d均低于未感染对照组（P〈0.05）;Cu含量在孕10、12、14 d与未感染组比较差异无统计学意义（P〉0.05）,在孕161、8 d均低于未感染组（P〈0.05）。感染组胎鼠组织铁染色强度与未感染对照组相比明显减弱。结论孕期感染弓形虫可损伤胎盘组织,进而影响其转运功能,使胚胎体内Zn、Fe和Cu含量降低,影响胚胎的生长发育。     

可诱导共刺激分子及相关细胞因子在细粒棘球蚴感染小鼠免疫调控中的作用

目的　探讨可诱导共刺激分子（inducible costimulatory molecule, ICOS）及相关细胞因子在细粒棘球蚴感染小鼠免疫调控中的作用。方法　80只BALB/c小鼠（体质量18 ~ 22 g）随机分为对照组和感染组，每组40只。按10 000个原头节/只腹腔注射制备细粒棘球蚴感染小鼠模型，腹腔接种2、8、30、60、180 d后，测定小鼠血清天冬氨酸氨基转移酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、碱性磷酸酶（ALP）含量，检测小鼠外周血细胞因子白细胞介素10（IL⁃10）和IL⁃4含量。取小鼠肝脏进行HE染色和免疫组织化学染色，应用实时定量PCR（qPCR）技术检测小鼠肝组织中ICOS表达水平。结果　细粒棘球蚴感染后2、8、30、60、180 d，小鼠血清ALT、AST和ALP水平差异均有统计学意义（F = 12.082、6.347、52.186，P均< 0.05）。感染后2 [（61.72 ± 9.89） vs. （50.65 ± 4.67） U/L]、30 d [（80.61 ± 23.71） vs. （67.75 ± 9.79） U/L]，感染组小鼠血清ALT水平显著高于对照组（P均< 0.05）；感染后2 [（181.06 ± 60.61） vs. （115.58 ± 17.66） U/L]、180 d [（137.84 ± 29.01） vs. （108.05 ± 10.33） U/L]，感染组小鼠血清AST水平显著高于对照组（P均< 0.05）；感染后2 [（162.90 ± 21.04） vs. （64.54 ± 5.99） U/L]、8 [（176.36 ± 24.56） vs. （62.70 ± 9.21） U/L]、30 d[（138.86 ± 13.59） vs. （58.60 ± 5.28） U/L]，感染组小鼠血清ALP水平显著高于对照组（P均< 0.05）。感染后30 d，感染组小鼠肝脏可见少量炎性细胞；感染后60 d，小鼠肝脏结构未见明显改变；感染后180 d，小鼠包囊浸润区肝脏可见大量上皮样细胞呈纤维化生长，生成角质层，在病灶区及肝细胞间隙有大量红细胞存在。感染组小鼠肝脏中ICOS呈阳性表达，阳性细胞主要位于肝细胞胞质中，ICOS表达水平随着感染时间延长而逐渐增强；ICOS mRNA在感染180 d后相对表达量为2.732 ± 0.094，明显高于感染后2 d（0.746 ± 0.049）。对照组小鼠血清IL⁃4、IL⁃10水平在细粒棘球蚴感染后不同时间点无显著变化；感染组小鼠血清IL⁃4、IL⁃10水平分别于感染后180 d和60 d达高峰。感染后8 [（22.50 ± 3.24） vs. （5.82 ± 0.49） pg/mL]、30 [（15.49 ± 4.73） vs. （5.10 ± 1.38） pg/mL]、60 [（36.93 ± 6.14） vs. （4.13 ± 1.19） pg/mL]、180 d [（198.35 ± 0.70） vs. （4.19 ± 0.98） pg/mL]，感染组小鼠血清IL⁃4水平均显著高于对照组（P均< 0.05）；感染后2 [（4.84 ± 1.91）vs.（2.11 ± 1.03） pg/mL]、8 [（44.72 ± 14.63）vs.（3.16 ± 0.60） pg/mL]、30 [（25.47 ± 8.00） vs. （3.83 ± 1.87） pg/mL]、60 [（187.16 ± 60.44） vs. （3.69 ± 1.05） pg/mL]、180 d [（85.40 ± 7.15） vs. （3.25 ± 0.93） pg/mL]，感染组小鼠血清IL⁃10水平均显著高于对照组（P均< 0.05）。结论　细粒棘球蚴感染小鼠肝脏出现ICOS高表达；随感染时间的延长，ICOS阳性表达逐渐增强，免疫活化水平逐渐升高，导致免疫炎症引起的肝细胞损伤逐渐加重。     

HIF-1α、CXCR4及VEGF在子宫内膜癌组织中的表达及意义

目的探究缺氧诱导因子(HIF)-1α及其下游基因趋化因子受体(CXCR)4、血管内皮生长因子(VEGF)在子宫内膜癌组织与正常子宫内膜组织中的表达及其意义。方法用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫组织化学技术检测94例子宫内膜癌组织和30例正常子宫内膜组织中HIF-1α、CXCR4、VEGF mRNA及蛋白的表达情况,并分析其与子宫内膜癌临床病理特征的关系。结果 HIF-1α、CXCR4、VEGF mRNA及蛋白在子宫内膜癌组织中存在高表达,而在正常子宫内膜组织中几乎无表达。HIF-1α、CXCR4蛋白表达在正常子宫内膜组织中的表达与子宫内膜癌组织比较差异有统计学意义(P<0.05)。HIF-1α和CXCR4蛋白的表达水平与子宫内膜癌的脉管浸润、临床分期及患者术后生存时间相关。结论 HIF-1α、CXCR4及VEGF在子宫内膜癌组织中表达水平增高,提示HIF-1α可能通过调控CXCR4及VEGF蛋白的转录,进而促进肿瘤组织新生血管生成而促进子宫内膜癌的发展。     

山奈酚对小鼠日本血吸虫肝纤维化α-平滑肌动蛋白、组织金属蛋白酶抑制因子1及胶原表达的影响

目的 研究感染日本血吸虫的小鼠经吡喹酮杀虫治疗后,给予山奈酚治疗对小鼠肝组织虫卵肉芽肿和纤维化的影响. 方法 以日本血吸虫尾蚴感染BALB/c小鼠作为肝纤维化动物模型,将40只健康BALB/c小鼠随机分为6组：正常组和模型组各8只,山奈酚组设5、10、15、20 mg/（kg·d）等4个剂量组,每组6只.除正常组外,其余5组小鼠感染日本血吸虫后6周给予吡喹酮灌胃治疗,剂量为500mg/（kg·d）×2 d.吡喹酮治疗后,山奈酚组小鼠分别给予山奈酚5、10、15、20 mg/（kg·d）灌胃治疗6周,正常组和模型组给予等体积生理盐水灌胃6周.治疗结束后颈椎脱臼处死小鼠,取肝脏.用免疫组织化学法检测各组小鼠肝组织金属蛋白酶抑制因子（tissue inhibitor of metalloproteinase,TIMP）1、α-平滑肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）、Ⅰ型胶原（type Ⅰ collagen,COLⅠ）、Ⅲ型胶原（typeⅢcollagen,COLⅢ）蛋白的表达;用实时荧光定量RT-PCR检测各组小鼠肝组织α-SMA、TIMP1、COLⅢmRNA的表达. 结果 山奈酚20 mg/（kg·d）组小鼠肝组织α-SMA、TIMP1、COLⅢmRNA的表达量依次为：1.251 7±0.053 8、1.490 1±0.042 9、1.328 3±0.070 3.模型小鼠肝组织α-SMA、TIMP1、COLⅢmRNA的表达量依次为：2.141 7±0.038 6、4.281 7±0.089 1、5.218 3±0.121 6.与模型组相比,山奈酚各剂量组α-SMA、TIMP1、COLⅢ的mRNA的表达量降低,差异均有统计学意义（F=36.93、95.16、48.29,P＜0.05）;山奈酚4个剂量组之间,随用药剂量增大,α-SMA、TIMP1、COLⅢmRNA的表达量下降,差异均有统计学意义（F=70.62、290.51、407.25,P＜0.05）.与模型组相比,山奈酚各剂量组α-SMA、TIMP1、COL Ⅰ、COLⅢ蛋白表达量下降,差异有统计学意义（F=13.46、237.96、191.58、274.32,P＜0.05）;山奈酚4个剂量组之间,随用药剂量增大,α-SMA、TIMP1、COLⅠ、COLⅢ蛋白表达量下降,差异有统计学意义（F=210.92、77.41、186.33、53.18,P＜0.05）. 结     

妊娠期糖尿病胎盘组织缺氧诱导因子1α及血管内皮生长因子的表达与妊娠结局的关系

目的探讨缺氧诱导因子1α（HIF-1α）和血管内皮生长因子（VEGF）在妊娠期糖尿病（GDM）胎盘组织中的表达及其与胎盘组织形态学异常和妊娠结局的关系。方法选取2010年10月至2011年10月在青岛大学医学院附属医院住院的GDM患者44例,按空腹血糖是否≥5．8mmol／L分为血糖控制欠佳组（A组）10例和良好组（B组）34例,以同期健康孕妇37名为对照组（C组）。采用苏木精伊红（HE）染色法检测胎盘病理形态学,免疫组化和逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术测定HIF-1α和VEGFmRNA及蛋白在胎盘中的表达,并比较各组差别与妊娠结局关系。与胎盘组织HIF-1α、VEGF相关因素采用Pearson单因素相关分析,P〈0．05为差异有统计学意义。结果（1）A组出现妊娠期高血压、产后出血、羊水过多、早产儿、巨大儿、新生儿低血糖等例数明显高于其他两组;（2）GDM组（A＋B）患者绒毛成熟不良、干绒毛小动脉增厚和胎盘绒毛间质毛细血管充盈的发生比例[61．4％（27／44）、38．6％（17／44）、50．0％（22／44）]与C组[13．5％（5／37）、10．8％（4／37）、18．9％（7／37）]比较差异有统计学意义（X^2值分别为19．260、8．100、8．450,均P〈0．05）;（3）A、B、C3组患者胎盘HIF-1αmRNA表达水平分别为0．91±0．13、0．72±0．12、0．47±0．11;VEGF mRNA表达为0．96±0．23、0．75±0．27、0．43±0．14,差异有统计学意义（F=67．300、33．250,均P〈0．05）;（4）A、B、C3组患者胎盘HIF-1α蛋白阳性表达率分别为90．0％、82．4％、32．4％;VEGF蛋白阳性表达率分别为100％、88．2％、35．1％,差异有统计学意义（X^2=22．632、28．115,均P〈0．05）;（5）胎盘组织HIF-1α和VEGF蛋白与绒毛成熟不良（r=0．764、0．875）、干绒毛小动脉增厚（r=0．655、0．885）及毛细血管充盈（r=0．685、0．766）呈正相关（均P〈0．05）。结论GDM患者血糖控制状态与胎盘组织中HIF-1α和VEGFmRNA和蛋白高表达有关,可能导致胎盘组织病理形态学的异常,对妊娠结局产生不良影响。     

我国弓形虫Chinese 1优势基因型感染对小鼠脑组织铁代谢影响

目的　探讨我国弓形虫Chinese 1优势基因型感染对宿主脑组织铁代谢及脑损伤的影响。方法　将20只C57BL/6（体质量15～17 g）小鼠随机分为对照组和感染组，每组10只。感染组每只小鼠腹腔注射4 000个弓形虫Chinese 1优势基因型TgCtwh3虫株速殖子，对照组小鼠注射等量无菌PBS，饲养6 d后处死小鼠并取其脑组织。采用电感耦合等离子体质谱法（inductively coupled plasma mass spectrometry, ICP⁃MS）检测小鼠脑组织铁元素水平；采用RNA芯片检测两组小鼠脑组织差异基因数目并对功能基因表达情况进行基因本体论（Gene Ontology, GO）功能富集；采用实时荧光定量PCR（fluorescent quantitative real⁃time PCR, qPCR）技术检测小鼠脑组织中弓形虫表面抗原1（Toxoplasma gondii surface antigen 1，TgSAG1）基因及部分锌铁调控蛋白（Zrt⁃ and Irt⁃like protein, ZIP）家族mRNA表达水平；采用光镜和电镜观察小鼠脑组织海马齿轮回（dentate gyrus, DG）超微结构；采用Western blotting检测谷胱甘肽过氧化物酶4（glutathione peroxidase 4, GPx4）蛋白表达水平；采用硫代巴比妥酸（TBA）法检测丙二醛（malondialdehyde, MDA）水平；采用免疫组化检测血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）蛋白表达光密度（optical density, OD）值。结果　光镜下可见感染组小鼠脑组织海马DG区细胞坏死，电镜下见感染组小鼠脑组织海马区出现胞质空泡化、核皱缩坏死、线粒体嵴断裂消融、自噬小体增加等超微结构变化。与对照组相比，感染组小鼠脑组织中铁元素水平上调[（32.92 ± 0.90） µg/g vs.（37.72 ± 1.10） µg/g；t = 3.397, P < 0.01]；RNA芯片检测感染组小鼠脑组织发现721个基因上调、276个基因下调，差异表达基因在金属离子结合能力上有明显富集。与对照组相比，感染组小鼠脑组织金属元素转运体ZIP2 mRNA表达水平上调（t = 8.659，P < 0.05）、GPx4表达下降[（1.046 ± 0.025） vs. （0.720 ± 0.101）；t = 3.129，P < 0.01]）、MDA水平升高[（4.37 ± 0.33） nmol/mgprot vs.（5.93 ± 0.54） nmol/mgprot；t = 2.451，P < 0.05）]、VEGF蛋白平均OD值上调[（0.348 3 ± 0.017 8） vs. （0.490 6 ± 0.010 5）；t = 6.641，P < 0.01]。结论　Chinese 1优势基因型弓形虫感染后，小鼠脑组织中铁元素蓄积、抗氧化能力下调、氧化应激水平升高，提示弓形虫感染可影响宿主脑组织铁代谢而导致脑损伤。     

肝外胆管癌组织中HIF-1α、VEGF的表达及其相关性

目的观察肝外胆管癌组织中缺氧诱导因子-1α（HIF—1α）与血管内皮生长因子（VEGF）的表达及其相关性。方法采用免疫组化SP法检测50例肝外胆管癌及20例正常肝外胆管组织中的HIF-1α及VEGF。结果肝外胆管癌组织中HIF—1α、VEGF表达均明显高于正常肝外胆管组织（P〈0．01）;二者表达与肝外胆管癌淋巴结转移有关（P〈0．05）;在肝外胆管癌组织中HIF—1α、VEGF的表达呈正相关（r=0．467,P=0．01）。结论HIF—1α、VEGF在肝外胆管癌组织中均呈高表达,两者对肝外胆管癌的发生、发展及转移有协同作用。     

缺氧诱导因子1α调控血管内皮生长因子对大鼠缺氧性肺动脉高压的作用

目的　研究大鼠缺氧性肺动脉高压 (HPH)肺血管壁缺氧诱导因子 1α(HIF 1α)和血管内皮生长因子 (VEGF)基因表达的动态变化。方法　 4 0只成年雄性Wistar大鼠随机分成对照组、缺氧 3、7、14和 2 1d组 ,每组 8只 ,测各组大鼠平均肺动脉压 (mPAP)、血管形态学指标、右室肥大指数(RVHI) ;原位杂交和免疫组化检测HIF 1α,VEGF基因表达。结果　缺氧 7d后 ,mPAP开始上升[(18 4 1± 0 37)mmHg],与对照组比较差异有显著性 (P <0 0 5 ) ,缺氧 14d达高水平并维持于此水平。肺血管重塑 ,RVHI改变在缺氧 14d后出现。HIF 1α蛋白在对照组表达不明显 ,各缺氧组肺血管内膜均为阳性 ;在中膜 ,HIF 1α蛋白缺氧 3d始增高 (0 178± 0 0 17) ,与对照组比较差异有显著性 (P <0 0 5 ) ,缺氧 7d达高峰 (0 2 2 1± 0 0 2 1,P <0 0 5 ) ,14d和 2 1d下降 ;HIF 1αmRNA对照组 ,缺氧 3d和 7d组均不明显 ,缺氧 14d增高 (0 2 0 3± 0 0 2 4 ,P <0 0 5 ) ,并维持于高水平。VEGF蛋白在缺氧 7d增高(0 0 74± 0 0 2 2 ,P <0 0 5 ) ,14d达高峰 (0 14 7± 0 0 17,P <0 0 5 )并持续于高水平 ;VEGFmRNA对照组和缺氧 3d组不明显 ,缺氧 7d增高达高峰 (0 138± 0 0 10 ,P <0 0 5 ) ,之后持续于高水平。VEGFmRNA于中膜和内膜、V     

弓形虫感染对妊娠中期小鼠胎盘组织中细胞凋亡相关蛋白表达的影响

目的观察弓形虫感染妊娠中期的BALB/c小鼠后,对胎盘组织中细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Fas、FasL及TNF-α表达的影响,探讨弓形虫感染导致细胞凋亡增加的可能机制。方法在妊娠第8d,实验组经腹腔无菌接种纯化的弓形虫速殖子100个,溶于0.2mL PBS;对照组注射等量无菌PBS(0.01mol/L,pH=7.4)。于妊娠第12、14、16、18d,随机处死实验组和对照组孕鼠各5只,采用免疫组织化学法(i mmunohistochemistry)检测胎盘组织中细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Fas、FasL及TNF-α的表达水平。结果免疫组化显示,细胞凋亡相关蛋白在胎盘绒毛和蜕膜组织中均有表达,以胎盘合体滋养细胞表达较多。Bax、Fas、FasL及TNF-α的表达量实验组和对照组均随着妊娠期的延长而增加,相同妊娠天数实验组的表达量均比对照组多。Bcl-2的表达量均随着妊娠期的延长而减少,相同妊娠天数实验组的表达量均比对照组少。结论弓形虫感染妊娠中期的小鼠,可引起胎盘组织中细胞凋亡相关蛋白表达量的改变,进而启动内、外源性的细胞凋亡途径,导致胎盘细胞凋亡增加。     

肝癌组织中HIF-1α与VEGF的表达及意义

目的探讨缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）、血管内皮生长因子（VEGF）在肝细胞肝癌（HCC）发生、发展中的作用。方法采用免疫组化法检测30份HCC组织（HCC组）和10份正常肝组织（对照组）标本中HIF-1α和VEGF蛋白表达。结果HCC组HIF．10r．阳性率为73．3％,对照组为0％（P〈0．05）。HCC有肝内转移者HIF-1α表达明显高于无肝内转移者（P〈0．05）。HCC组VEGF阳性率为60．0％,对照组为10．0％（P〈0．05）。HCC有肝内转移、癌栓形成者VEGF表达明显高于无肝内转移及癌栓形成者（P均〈0．05）。HCC中HIF-1α与VEGF的表达呈正相关（r=0．431,P〈0．05）。结论HIF-1α、VEGF在HCC中表达上调,且在HCC的发生、发展中起促进作用。     

低氧对小鼠低氧诱导因子-1α和血管内皮生长因子表达的影响

目的研究低氧时小鼠肺组织中低氧诱导因子-1α(HIF-1α)及血管内皮生长因子(VEGF)表达的变化,探讨低氧与血管新生的关系。方法将哈尔滨医科大学附属第二医院呼吸科2005年4月至6月实验用雄性昆明小鼠,分为低氧组与对照组,低氧仓浓度分别为10%,7%和5%。低氧时间分别为3d,6d和9d。用免疫组织化学技术检测小鼠在低氧条件下肺组织中的HIF-1α和VEGF蛋白表达的变化及微血管密度(MVD),用Western blotting法检测HIF-1α和VEGF的表达。结果低氧组HIF-1α和VEGF蛋白表达均增加,并且随低氧时间的延长及低氧浓度的降低而增强,而对照组HIF-1α无表达,VEGF有少量表达,P<0·05;低氧组的MVD也高于对照组;VEGF、MVD的表达均与HIF-1α表达呈正相关(r分别为0·730与0·691)。结论HIF-1α/VEGF通路在低氧致小鼠肺组织血管新生过程中起重要作用。     

妊高征孕妇胎盘组织中IGF-1、HIF—1α的表达变化及意义

目的观察妊高征孕妇胎盘组织中胰岛索样生长因子（IGF）-1及缺氧诱导因子（HIF）-1α的表达变化,并探讨其在妊高征发病中的作用。方法采用免疫组化SP法检测70例妊高征患者（观察组）及70例正常妊娠妇女（对照组）胎盘组织中的／GF-1及HIF-1α。结果胎盘组织中IGF-1阳性率观察组为48．6％（34／70）,对照组为82．8％（58／70）,两组比较P〈0．01;HIF-1α阳性率观察组为77．1％（54／70）,对照组为38．5％（27／70）,两组比较,P〈0．01;观察组患者胎盘组织中IGF-1与HIF-1α的表达呈负相关（r=-0．265,P〈0．01）。结论妊高征孕妇胎盘组织中IGF-1表达降低,HIF-1α表达上升。二者与妊高征发病及病情发展有关。