考来烯胺对胆汁酸合成的基因调节作用

目的研究考来烯胺促进肝内胆汁酸合成的基因调节机制。方法20只新西兰白兔分为考来烯胺组（考来烯胺每天1g/kg,灌胃2周）和对照组,每组10只。测定两组2周后的血清胆固醇水平、总胆汁酸水平、肝组织胆固醇7α-羟化酶（CYP7A1）活性及其mRNA、法尼酯衍生物X受体（FXR）的靶基因短异源二聚体伴侣受体（SHP）mRNA和胆盐输出泵（BSEP）mRNA、低密度脂蛋白受体（LDL-R）mRNA表达。结果考来烯胺组血清胆固醇水平较对照组下降10.25%,而血清总胆汁酸水平无明显改变;肝脏CYP7A1活性及其mRNA表达较对照组显著升高（P〈0.05）,FXR靶基因SHPmRNA和BSEPmRNA表达较对照组显著降低（P〈0.05）,LDL-RmRNA表达较对照组显著升高（P〈0.05）。结论考来烯胺通过抑制回肠胆汁酸重吸收,减少回流入肝脏的胆汁酸（FXR配体）,从而抑制肝内FXR,激活CYP7A1,促进肝内胆固醇转化为胆汁酸,继而维持体内胆汁酸池稳定,降低血清胆固醇水平。     

2型糖尿病大鼠肝胆汁酸代谢的变化

目的 探讨2型糖尿病大鼠肝胆汁酸代谢的变化.方法 35只SD雄性大鼠随机分为对照组15只和糖尿病组20只,分别喂以标准饲料和高脂饲料,8 w后通过口服糖耐量实验,胰岛素敏感指数(ISI),证实是否产生胰岛素抵抗.出现胰岛素抵抗的大鼠注射小剂量链脲佐菌素(STZ)以诱导2型糖尿病.成膜大鼠继续用高脂饲料喂养4 w,每组随机取10只大鼠,总胆管插管收集胆汁,股动脉采血,并留取部分肝组织.检测血生化指标,胆汁中胆汁酸、胆固醇和磷脂的浓度,RT-PCR检测胆汁酸代谢有关基因LXRα、CYP7A1、ABCG5和ABCG8 mRNA表达.结果 与对照组相比,糖尿病组大鼠空腹血糖、甘油三酯、胆固醇、胆汁酸以及胰岛素敏感指数明显升高(P＜0.01),体重明显增高(P＜0.05)；与对照组相比较,糖尿病组大鼠胆汁中胆汁酸和胆固醇含量均有明显增加(P＜0.01),磷脂含量也有一定增加(P＜0.05),但胆汁酸和磷脂浓度总和与胆固醇浓度比值下降(P＜0.01)；糖尿病组LXRα、CYP7A1、ABCG5和ABCG8 mRNA水平均明显高于对照组(P＜0.05或P＜0.01).结论 2型糖尿病状态下,肝胆汁酸合成增加,由肝细胞进入胆汁中的胆汁酸和胆固醇均增加,胆结石形成的可能性增大.     

法尼酯衍生物X受体与肝纤维化

法尼酯衍生物X受体(FXR)是一种在肝肠系统等组织器官表达的胆汁酸受体,属于激素核受体超家族的一员,在胆汁酸代谢及胆固醇代谢中发挥重要作用.当FXR配体与FXR羧基末端配体结合区(LBD)直接结合后,核受体空间构象发生改变并与视黄醛衍生物受体(RXR)形成异源二聚体,最后与靶基因特定FXR DNA反应元件结合从而调节靶基因的转录.初级胆汁酸鹅脱氧胆酸是FXR最有效的配体,次级胆汁酸石胆酸和脱氧胆酸也可以激活FXR.目前还有合成FXR配体(如6-ECDCA、GW4064等),其与FXR结合力比天然配体强数倍.FXR的主要靶基因包括胆盐输出泵(BSEP)、小异源二聚体伴侣受体(SHP)等,FXR通过和这些基因启动子上的FXR反应元件(FXRE)结合从而调控这些基因的表达.但如胆固醇7α羟化酶(CYP7α1)等主要FXR调控基因的启动子序列中没有典型FXR结合反应序列,FXR则是间接通过诱导转录抑制因子SHP表达,然后SHP与CYP7α1启动子肝受体同源物1(LRH-1)形成抑制性复合物,从而阻断CYP7α1和其它LRH-1靶基因转录.由于FXR在胆汁酸及胆固醇代谢中的重要作用,这将使其和肝脏相关疾病关系日益受到关注[1,2].     

胆汁酸代谢主要调节核受体和相关基因在胆汁淤积孕鼠肝脏中的表达

目的 探讨法尼醇X受体(FXR)、过氧化物酶增殖体激活受体α(PPAR α)与胆固醇7 α羟化酶(CYP7A1)、胆固醇27 α羟化酶(CYP27A1)、胆固醇12 α羟化酶(CYP8B1)mRNA在妊娠期肝内胆汁淤积孕鼠肝脏中的表达及其意义.方法将60只清洁级SD大鼠自孕第13天均分为3组,对照组:皮下注射精制植物油2.0ml·kg-1·d-1;未治疗组:皮下注射17-α-乙炔雌二醇1.25 mg·kg-1·d-1;治疗组:皮下注射17-α-乙炔雌二醇1.25 mg·kg-1·d-1,孕第17天起给予非诺贝特50 mg·kg-1·d-1灌胃.3组孕鼠分别于妊娠第13、17、21天断尾采血2 ml检测血清生物化学指标,并于妊娠第21天处死,提取肝脏组织.应用酶联免疫吸附法检测3组孕鼠血清中的胆酸水平;用实时定量PCR技术检测各组PPARα、FXR、CYP7A1、CYP27A1、CYP8B1 mRNA的表达量.多组间的比较用方差分析,多组的两两间比较用Student-Newman-Keuls法检验,两组数据间比较用t检验.结果 妊娠第17天,对照组、未治疗组、治疗组的胆汁酸水平分别为(26.6±2.3)μmol/L、(68.7±4.2)μmol/L、(69.5±3.8)μmol/L,未治疗组和治疗组胆汁酸水平与对照组比较,t值分别为2.516、2.642,P值均＜0.05,差异均有统计学意义.治疗组与未治疗组之间胆汁酸水平比较,t=1.835,P＞0.05,差异无统计学意义;妊娠第21天,对照组、未治疗组、治疗组胆汁酸水平分别为(27.1±3.2) mol/L、(69.4±3.7)μmol/L、(48.5±4.8)μmol/L,3组比较,F=7.81,P＜0.05,差异有统计学意义.对照组、未治疗组、治疗组中CYP7A1 mRNA的相对表达量分别为0.75±0.02、1.55±0.03、1.25±0.01,FXR mRNA的相对表达量分别为1.25±0.03、1.75±0.02、1.65±0.05,CYP27A1 mRNA的相对表达量分别为0.65±0.03、2.45±0.01、1.65±0.02,CYP8B1 mRNA的相对表达量分别为1.50±0.02、2.15±0.01、1.75±0.03,PPARαmRNA的相对表达量分别为1.45±0.02、0.85±0.02、1.35±0.01.CYP7A1、FXR、CYP27A1、CYP8B1 mRNA在未治疗组中的表达量与对照组相比,q值分别为6.554、5.613、8.126和6.143,P值均＜0.05,差异均有统计学意义.未治疗组中PPAR α mRNA的表达量与对照组相比,q=6.126,P＜0.01,差异有统计学意义.治疗组中CYP27A1、PPAR α mRNA、CYP8B1 mRNA水平与未治疗组相比,q值分别为6.346、7.231和5.892,P值均＜0.05,差异均有统计学意义.结论胆汁酸的合成与代谢调节机制存在障碍,是导致妊娠期肝内胆汁淤积症发生的原因之一,用PPAR α的激动剂对其有一定疗效.     

小异二聚体伴侣与胆固醇7a-羟化酶在肝内胆汁淤积症孕鼠中的表达

目的 建立妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠模型,检测小异二聚体伴侣(SHP)及其靶基因胆固醇7a-羟化酶(CYP7A1)在肝脏的表达,探讨其在妊娠期肝内胆汁淤积症发病机制中的作用.方法 孕15d SD大鼠30只随机分为对照组和雌激素组,每组15只.用药前和用药后第5天分别检测血清中ALT、 AST、碱性磷酸酶、总胆汁酸、总胆红素、直接胆红素水平,同时观察肝脏形态学变化,并应用RT-PCR和Western blot分别检测肝脏SHP和CYP7A1的mRNA和蛋白质的表达.结果 雌激素组用药后ALT、 AST、碱性磷酸酶、总胆汁酸、总胆红素、直接胆红素比用药前明显升高(P<0.01);对照组用药前后各血清生物化学指标无明显变化(P>0.05).雌激素组孕鼠肝脏出现肝内胆汁淤积表现,对照组肝脏形态、结构正常.雌激素组和对照组SHP mRNA分别为0.4865±0.0237和0.3657±0.0317, CYP7A1 mRNA分别为0.4311±0.0157和0.3285±0.0123,差异均有统计学意义(P<0.01).雌激素组和对照组SHP蛋白表达分别为0.5033±0.0274和0.3762±0.0284, CYP7A1蛋白表达分别为0.4802±0.0217和0.3570±0.0175,差异均有统计学意义(P<0.01).结论 雌激素诱导的胆汁淤积促进肝脏SHP及其靶基因CYP7A1表达增加,导致胆汁酸合成进一步增加,从而引发胆汁淤积,这可能是妊娠期肝内胆汁淤积症发病机制之一.     

血胆固醇与脑胆固醇关系的研究

目的 研究血胆固醇（TC）对脑TC及脑β-淀粉样蛋白（A13）生成的影响。方法 给高TC血症的Wistar大鼠饲喂考来烯胺和邻苯二甲酸二异辛酯（diethylhexyl phthalate，DEHP）促进胆汁酸的合成，降低其血TC后，测定其脑1℃及AB的含量；以测定脑羟甲基戊二酰辅酶A还原酶HMG-COAR）和脑TC24S-羟化酶（CYP46）的mRNA表达水平，反映脑TC的合成水平和转出水平。结果 高TC血症大鼠脑AB含量明显增高（P〈0．05），脑TC以及脑HMG-COAR和CYP46的mRNA表达水平未变；考来烯胺饮食组大鼠血TC水平明显降低（P〈0．01），脑中AB含量和对照组一样保持在低水平，脑TC的含量有增高趋势，HMG-COAR mRNA表达增加（P〈0．05），CYP46mRNA表达无变化；DEHP饮食组血TC及脑中的AB无显著变化，脑1℃的含量明显增高（P〈0．05），脑HMG-COAR mRNA表达增加（P〈0.05），CYP46 mRNA表达降低（P〈0．01）。结论 脑TC的含量不受血TC的直接影响，而与其自身代谢有关；整体动物脑Aβ生成量增加与脑TC浓度无关。     

血管紧张素1-7对大鼠血脂及胆固醇逆转运相关因子表达的影响

目的 探讨血管紧张素1-7[Ang(1-7)]对大鼠血脂及胆固醇逆转运相关因子ATP结合盒转运子A1(ABCA1)、过氧化体增殖物激活型受体γ(PPARγ)、肝X受体α(LXRα)和视黄酸X受体α(RXRα)表达的影响.方法 将40只健康雄性SD大鼠随机分为正常对照组、高脂饲料组、Ang(1-7)组及Ang(1-7)+ A779组.通过植入式胶囊渗透压泵,经颈静脉插管持续给予Ang(1-7),28天后,检测各组大鼠血浆总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇及高密度脂蛋白胆固醇水平,定量实时聚合酶链反应及Western blot检测各组大鼠动脉组织中ABCA1、PPARγ、LXRα、RXRα基因表达的变化.结果 与正常对照组比较,高脂饲料组大鼠总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇均有所升高(P＜0.05),高密度脂蛋白胆固醇有所降低(P＜0.05);与高脂饲料组比较,Ang(1-7)组大鼠总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇均有所降低(P＜0.05),高密度脂蛋白胆固醇有所升高(P＜0.05);与Ang(1-7)组比较,Ang(1-7) +A779组大鼠总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇均有所升高(P＜0.05),高密度脂蛋白胆固醇有所降低(P＜0.05).与正常对照组比较,高脂饲料组大鼠ABCA1、PPARγ、LXRα、RXRα的mRNA和蛋白含量均有所降低(P＜0.05);与高脂饲料组比较,Ang(1-7)组大鼠ABCA1、PPARγ、LXRα、RXRα的mRNA和蛋白含量均有所升高(P＜0.05);与Ang(1-7)组比较,Ang(1-7)+ A779组大鼠ABCA1、PPARγ、LXRα、RXRα的mRNA和蛋白含量均有所降低(P＜0.05).结论 Ang(1-7)能够降低大鼠血浆中血脂水平,促进大鼠动脉组织中ABCA1、PPARγ、LXRα、RXRα的基因表达,对高脂血症有一定的治疗作用.     

高脂饮食诱导高胆汁酸通过下调干细胞功能损伤肠黏膜

背景:高脂饮食可破坏肠道黏膜屏障功能,但机制未明。高脂饮食可诱导胆汁酸产生增加。目的:探讨高脂饮食诱导的高胆汁酸通过下调小肠干细胞功能损伤肠黏膜。方法:将24只大鼠分为3组,分别给予常规饮食、高脂饮食、高脂饮食+考来烯胺,连续2周。采用ELISA法测定血清胆汁酸浓度,测量小肠直径,行HE染色观察小肠黏膜组织学表现,以RT-qPCR检测Lgr5基因表达。体外研究将常规饮食大鼠的回肠组织与脱氧胆酸(DCA)或DCA+考来烯胺共培养24 h,以RT-qPCR检测Lgr5基因表达。结果:与对照组相比,高脂饮食组血清胆汁酸浓度明显升高(P0.05),肠管直径明显降低(P0.05),肠道绒毛+隐窝长度明显降低(P0.05),Lgr5基因表达明显降低(P0.01);给予考来烯胺后,上述指标均明显改善(P0.05)。DCA组Lgr5基因表达显著降低(P0.01),而考来烯胺可明显上调Lgr5表达(P0.05)。结论:高脂饮食引起的循环高胆汁酸通过下调小肠干细胞功能破坏肠道黏膜,而考来烯胺可改善此病理过程。     

STZ大鼠心肌胆固醇转出相关基因mRNA表达的变化

目的 研究糖尿病大鼠心肌胆固醇转出相关基因表达的变化.方法 用STZ选择性破坏大鼠胰岛β细胞,建立实验性糖尿病大鼠模型,动态观察分析糖尿病不同病程中大鼠心肌胆固醇转出相关基因过氧化物酶体增殖物活化受体α(PPARα),肝X受体α(LXRα),ATP结合盒转动体A1(ABCA1) mRNA表达以及胆固醇含量的变化.结果 糖尿病12～17 w时大鼠心肌PPARα激活,LXRα、ABCA1 mRNA表达增加,但心肌胆固醇含量没有变化.结论 STZ诱导的糖尿病大鼠心肌随着PPARα的激活,LXRα、ABCA1 mRNA表达增加,PPARα、LXRα共同参与了胆固醇代谢.     

肝脏X受体α对肝细胞HepG2胆固醇代谢基因表达的调控

目的:研究肝细胞X受体α(liver X receptorα,LXRα)基因对HepG2肝细胞胆固醇代谢相关基因表达的调控作用。方法:将特异性LXRα小片段干扰RNA(siRNA)经脂质体Lipofectamine 2000介导转染人HepG2肝细胞,同时行HepG2肝细胞LXRα的激动(T0901317)实验,采用实时定量PCR方法分别测定干扰和激动前后的LXRα以及胆固醇代谢相关基因ATP结合盒(ABC)G5、ABCG8、ABCA1 mRNA的表达。结果:LXRαsiRNA干扰24h后,HepG2实验组LXRα mRNA相对表达量显著低于阴性对照组(P0.05)。HepG2加入激动剂(T0901317)48h后,实验组ABCG8和ABCA1基因表达均显著升高(P0.05)。结论:RNA干扰使HepG2肝细胞LXRα表达受抑制,继而有使靶基因ABCG5、ABCG8、ABCA1表达降低趋势;人工合成配体T0901317与LXRα结合,使其活性增加,上调了ABCG8、ABCA1和ABCG5 mRNA的表达。提示LXRα可调控HepG2肝细胞的胆固醇代谢基因。     

不同糖代谢状态下大鼠肝X受体的表达及其对肝糖代谢的影响

目的 观察肝X受体(LXR)在不同糖代谢状态下肝内表达的变化情况及其对肝糖代谢酶磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)mRNA和葡萄糖激酶(GCK)mRNA表达的调节,阐明LXR信号通路对糖代谢的影响机制.方法 SD雄鼠36只分为正常对照组、糖尿病组、肥胖组和肥胖伴糖尿病组.测定各组大鼠的体重、血糖、胆固醇和甘油三酯.采用实时PCR检测各组大鼠肝脏LXR mRNA、PEPCK mRNA和GCK mRNA的表达情况,应用Western印迹测定肝脏LXR蛋白质的表达.结果 各实验组大鼠肝LXRmRNA表达均显著高于对照组(P＜0.05).Western印迹结果示各组LXR蛋白表达量和转录水平一致.与对照组和肥胖组相比,肥胖伴糖尿病组和糖尿病组肝PEPCK mRNA表达均明显上调,GCK mRNA均明显下调;与对照组相比,肥胖组PEPCKmRNA表达明显下降,GCKmRNA明显上升(均P＜0.05).结论 在非糖尿病阶段,LXR可能作为糖代谢的保护性受体,通过调节肝糖代谢酶,使血糖保持稳态.进入糖尿病阶段后,LXR的保护作用并不能逆转因胰岛素不足所致的糖代谢相关酶的异常改变,血糖不能恢复正常.

Abstract：

Objective To investigate the mechanism of liver X receptor(LXR)signal pathway in regulating glucose metabolism by observing the variety of LXR expression and its impacts on regulating the mRNA expression of PEPCK and GCK, the key enzyme of hepatic glucose metabolism in various glucose metabolic status in rats. Methods SD rats were chosen and divided into four groups:the CON group, the induced DM group, the OB group, and the induced OB+DM group. For each group of rats, body weight, blood glucose, serum triglycerides, and cholesterol were measured. Then the rats were sacrificed and the livers were collected and studied. Real-time PGR was used to measure the expressions of LXR mRNA, PEPCK mRNA, and GCK mRNA in the livers. Finally, the Western Blot assay was used to measure the liver LXR protein expression. Results The expression of LXR mRNA was significantly higher in DM,OB, and OB+DM groups than in CON group(P＜0.05).The Western blot results showed that the levels of protein were in accordance with the mRNA expression. Comparing to the CON and the OB groups, the PEPCK mRNA expression of the OB+DM and the DM groups was significantly higher, while the GCK mRNA expression of these two groups was significantly lower(P＜0.05). Comparing to the CON group, the PEPCK mRNA expression of the OB group was significantly lower, while the GCK mRNA expression of OB group was significantly higher(P＜0.05).Conclusions During non-diabetic phase, LXR could act as a protective receptor for glucose metabolism and keep glucose homeostasis by regulating the key enzymes of the hepatic glucose metabolism. While in the diabetic phase, the protective receptor LXR failed to reverse the change of the related enzymes caused by insulin deficiency, and finally the plasma glucose level was raised.     

慢性乙型肝炎患者肝组织LXRα和CYP7A1基因水平变化及其与肝组织炎症和纤维化程度的关系研究*

目的 探讨慢性乙型肝炎(CHB)患者肝X受体α(LXRα)和细胞色素P450亚型7A1(CYP7A1)基因表达水平与肝组织病理学炎症和纤维化程度的关系。方法 2019年1月～2020年10月我院收治的CHB患者118例,均接受肝穿刺活检,将炎症活动度分级＞G2和肝纤维化分期＞S2定义为肝组织炎症或纤维化程度显著;采用免疫组织化学染色法检测肝组织LXRα和CYP7A1表达,采用RT-PCR法检测LXRα mRNA和CYP7A1 mRNA水平。结果 118例CHB患者肝组织LXRα和CYP7A1蛋白和/或其mRNA阳性分别为78.0%和73.7%;38例肝组织显著炎症组LXRα mRNA和其蛋白(AOD)水平分别为(0.6±0.2)和(0.3±0.1),显著高于80例非显著炎症患者[分别为(0.4±0.1)和(0.1±0.0),P<0.05],CYP7A1 mRNA和其蛋白(AOD)水平分别为(0.8±0.2)和(0.4±0.1),显著高于非显著炎症患者[分别为(0.3±0.1)和(0.1±0.0),P<0.05];48例显著肝纤维化组肝组织LXRα mRNA和其蛋白(AOD)水平分别为(0.7±0.2)和(0.3±0.1),显著高于70例非显著肝纤维化患者[分别为(0.3±0.1)和(0.1±0.1),P<0.05],CYP7A1 mRNA和其蛋白(AOD)水平分别为(0.7±0.2)和(0.3±0.1),显著高于非显著肝纤维化患者[分别为(0.4±0.2)和(0.2±0.1),P<0.05]。结论 LXRα和CYP7A1表达上调可能参与了CHB患者肝组织炎症和肝纤维化发生发展过程,其机制值得进一步研究。     

丹皮酚调控ApoE－/－小鼠胆汁酸代谢发挥抗动脉粥样硬化作用

目的探究丹皮酚通过调控ApoE-/-小鼠胆汁酸代谢影响FXR-FGF15信号通路,从而影响脂质代谢发挥抗动脉粥样硬化的作用。方法采用高脂饲料喂养ApoE-/-小鼠20周建立动脉粥样硬化斑块模型,造模同时灌胃丹皮酚(200 mg/kg)。油红O染色观察主动脉大体和肝脏组织病理形态学变化;酶法检测血脂和肝脂水平;LC-MS/MS检测小鼠肠道胆汁酸组分变化;Western blot检测小鼠肝脏CYP7A1及回肠FXR、FGF15蛋白的表达。结果丹皮酚显著减轻动脉粥样硬化模型小鼠主动脉斑块面积,减少肝脏脂质沉积;明显降低血清和肝脏中甘油三酯、总胆固醇水平及肝脏系数;升高FXR拮抗剂TαMCA、TβMCA含量,降低FXR激动剂CDCA和LCA含量,抑制肠FXR-FGF15信号通路,诱导肝组织CYP7A1蛋白表达,增加粪便中总胆汁酸外排。结论丹皮酚可能通过影响胆汁酸代谢,抑制FXR-FGF15轴从而促进肝脏胆汁酸合成与排泄,减少胆固醇蓄积,进而实现其抗动脉粥样硬化的作用。     

二甲双胍对2型糖尿病大鼠胆固醇代谢途径的影响

目的探讨二甲双胍对2型糖尿病大鼠胆固醇代谢相关基因SREBP-2,HMGR,LDLR,CYPA7a1的影响及其作用机制。方法 60只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组(CON),2型糖尿病组(DM),二甲双胍治疗糖尿病组(DM+MET)。CON组给予标准饮食,DM组及DM+MET组高脂饮食8 w给予小剂量STZ腹腔注射,建立2型糖尿病模型。造模成功后,DM+MET组给予二甲双胍灌胃治疗(500 mg·kg-1·d-1)。12 w后检测各组大鼠FPG、FINS、TG、TC、LDL-C、HDL-C、TBA等血清生化学指标。HE染色观察各组大鼠肝脏形态变化。荧光实时定量PCR技术检测各组大鼠肝脏SREBP-2、HMGR、LDLR、CYP7a1 mRNA表达水平。结果 DM组与CON组比较FPG、FINS、TG、TC、LDL-C、TBAs表达升高(均P<0.05)。HE染色肝脏脂质沉积,脂肪空泡明显增多。CYP7a1 mRNA表达升高(P<0.05),SREBP-2、HMGR、LDLR mRNA表达降低(均P<0.05);DM+MET组与DM组比较FPG、FINS、TG、TC、LDL-C、TBAs表达降低(均P<0.05)。HE染色肝脏脂肪空泡明显减少。SREBP-2、HMGR、LDLR、CYP7a1 mRNA表达升高(P<0.001)。结论二甲双胍使糖尿病大鼠肝脏组织SREBP-2 mRNA及下游基因HMGR、LDLR表达上调,促进胆固醇合成和吸收,另一方面,二甲双胍可使CYP7a1 mRNA表达上调,促进胆固醇转变为胆汁酸,加速胆固醇降解,二甲双胍通过协调胆固醇的合成途径和转化途径促进胆固醇代谢,进而降低2型糖尿病大鼠血浆胆固醇水平。     

同型半胱氨酸对泡沫细胞中LXRα-ABCA1信号通路的影响

目的:探讨同型半胱氨酸(Hcy)通过影响脂代谢调控基因LXRα及其下游靶基因ABCA1和ABCG1的表达致人类急性单核细胞白血病细胞株(THP-1)源性巨噬细胞泡沫化在脂代谢紊乱中的作用。方法:培养THP-1单核细胞,佛波酯、氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)共同诱导,采用中性红对巨噬细胞染色,并应用流式细胞技术检测巨噬细胞表面CD14的表达,测定巨噬细胞的含量。分为5组,分别加入0、10、50、100、200μmol/L的Hcy培养24h;采用RT-PCR法检测LXRα、ABCA1、ABCG1的mRNA表达;采用Western Blot法检测LXRα、ABCA1、ABCG1的蛋白表达。结果:实验组(Hcy 10、50、100、200μmol/L)泡沫细胞计数阳性百分率均较对照组升高(均P0.05),其中以Hcy 100μmol/L组升高明显。在Hcy诱导浓度50μmol/L时巨噬细胞51.26%,CD14表达阳性率53.36%;诱导浓度100μmol/L时巨噬细胞98.5%,CD14表达阳性率73.37%。在不同浓度Hcy干预下,泡沫细胞内LXRα、ABCA1、ABCG1的mRNA及蛋白表达均低于对照组(均P0.05)。结论:Hcy可降低THP-1源性泡沫细胞内LXRα、ABCA1、ABCG1mRNA及蛋白水平的表达,LXRα可能是Hcy影响脂代谢LXRα-ABCA1信号通路中的靶基因。     

棕榈酸对EA.hy926细胞胆固醇代谢相关基因表达的影响及机制

目的研究棕榈酸(PA)对内皮细胞株EA.hy926胆固醇代谢的影响,检测胆固醇流出、胆固醇胞内转化、脂蛋白摄入以及信号通路相关基因表达的变化。方法体外培养内皮细胞株EA.hy926,分为白蛋白(ALB)对照组和PA处理组。采用实时荧光定量PCR法检测ATP结合盒转运体A1(ABCA1)、ABCG1、27-羟化酶、清道夫受体A1(SR-A1)、SR-B1、CD36、凝集素样氧化低密度脂蛋白受体1(LOX-1)、肝X受体α(LXRα)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的表达变化。结果和ALB对照组相比,10、20、30μmol/L PA处理组ABCG1 mRNA水平显著下降(P0.01),20、30μmol/L PA处理组CD36、LOX-1 mRNA水平显著升高(P0.05)。与ALB对照组相比,10、20、30μmol/L PA处理组LXRαmRNA水平显著下降(P0.001、P0.05、P0.001),10μmol/L PA处理组PPARγmRNA水平显著下降(P0.05)。而10、20、30μmol/L PA处理EA.hy926细胞未显著影响ABCA1、SR-A1、SR-B1、27-羟化酶的表达。结论 PA能够改变内皮细胞EA.hy926细胞胆固醇流出和脂蛋白摄入相关基因的表达,其机制与LXRα和PPARγ信号途径有关。     

二甲双胍调节糖尿病大鼠心房小电导钙激活钾通道亚型蛋白表达的信号通路

目的探讨蛋白激酶A(PKA)/钙调蛋白Ⅱ(CaMKⅡ)信号通路在二甲双胍(Met)调节2型糖尿病(T2DM)大鼠心房小电导钙激活钾通道亚型KCa2.2和KCa2.3蛋白表达中的作用。方法健康雄性Wistar大鼠40只,随机选8只喂普通饲料为对照组(Con组),另32只喂高脂高糖饲料联合腹腔注射小剂量链脲佐菌素构建T2DM大鼠模型后,再随机分为DM组、Met组、H-89组(腹腔注射PKA抑制剂H-89)和KN-93组(腹腔注射CaMKⅡ抑制剂KN-93),每组8只。用ELISA检测大鼠心房组织PKA活性,qRT-PCR检测CaMKⅡmRNA表达,Western blot和免疫组织化学检测KCa2.2、KCa2.3和磷酸化CaMKⅡ(p-CaMKⅡ)蛋白表达。结果 Con组、DM组、Met组和H-89组PKA活性分别为0.74±0.04、0.50±0.05、0.69±0.03和0.48±0.03。与DM组比较,Met组PKA活性明显提升(P<0.01);与Met组比较,H-89组显著抑制PKA活性(P<0.01)。Con组、DM组及Met组CaMKⅡmRNA分别为1.00±0.07、0.61±0.03和0.92±0.09。与Con组比较,DM组CaMKⅡmRNA表达明显降低(P<0.01);与DM组比较,Met组CaMKⅡmRNA表达明显增加(P<0.01)。与Con组比较,DM组心房组织p-CaMKⅡ和KCa2.2蛋白表达均明显降低,KCa2.3蛋白表达明显升高(P<0.01)。与DM组比较,Met组明显提升p-CaMKⅡ和KCa2.2蛋白表达,明显抑制KCa2.3蛋白表达(P<0.01)。与Met组比较,KN-93组和H-89组分别显著抑制p-CaMKⅡ蛋白表达和PKA活性,均显著下调KCa2.2蛋白表达,上调KCa2.3蛋白表达(P<0.01)。免疫组织化学染色显示,与Met组比较,KN-93组和H-89组均显著下调KCa2.2蛋白表达,上调KCa2.3蛋白表达(P<0.05,P<0.01),与Western blot检测结果一致。结论 Met通过激活PKA/CaMKⅡ信号通路部分修复T2DM大鼠心房KCa2.2蛋白下调和KCa2.3蛋白上调。     

普罗布考对体内巨噬细胞胆固醇逆转运的影响与机制

目的:测定不同剂量普罗布考干预后小鼠体内胆固醇逆转运效率,探讨普罗布考影响小鼠体内胆固醇逆转运的机制。方法:32只C57BL/6小鼠随机分为4组,给予不同剂量普罗布考(0,0.1%,0.5%,1%W/W)添加饲料饲养4周后,腹腔注射经ac-LDL及3 H-胆固醇处理过的RAW264.7小鼠巨噬细胞悬液,48h后测定粪便3 H-胆固醇含量。提取肝脏和小肠组织RNA及细胞膜蛋白,分别检测肝脏胆固醇7α羟化酶(CYP7α)、清道夫受体BI(SR-BI)和三磷酸腺苷结合盒转运体(ABCG)5及小肠ABCG5基因与蛋白的表达。结果:①普罗布考干预各组(0.1%,0.5%,1%)小鼠粪便中3 H的总含量显著增多;0.5%与1%普罗布考两组之间差异无统计学意义。②普罗布考干预后肝脏CYP7α、ABCG 5mRNA呈剂量依赖性地表达增多;肝脏、小肠ABCG 5mRNA及其蛋白呈剂量依赖性地表达增加;0.5%与1%普罗布考两组之间差异无统计学意义。③普罗布考干预后肝脏SRBI的mRNA与蛋白表达没有明显变化。结论:普罗布考剂量依赖性地促进小鼠体内巨噬细胞的胆固醇逆转运,其机制可能是通过上调CYP7α、肝脏和小肠ABCG5的表达而发挥作用的。     

非诺贝特对高脂模型大鼠过氧化物酶增殖物活化受体γ、肝X受体α和ABCA1 mRNA及其蛋白表达的影响

目的 研究非诺贝特对高脂模型大鼠肝脏和主动脉中过氧化物酶增殖物活化受体γ(PPARγ),肝X受体(LXRα)和ABCA1 mRNA及其蛋白表达的影响.方法 将30只雄性健康Wistar大鼠,随机分为正常对照组、高脂模型组、非诺贝特组,应用RT-PCR方法测量各组肝脏和血管中PPARγ mRNA,LXRα和ABCA1 mRNA的表达,应用Western印迹方法测量肝脏和血管中PPARγ,LXRα和ABCA1蛋白的表达.结果 高脂模型组肝脏、主动脉中PPARγ,LXRα和ABCA1 mRNA及蛋白表达水平与正常对照组相比升高,但差异无统计学意义(P＞0.05).非诺贝特药物干预后大鼠肝脏、主动脉的PPAR-γ mRNA与模型组比较虽有升高,但差异无统计学意义(P＞0.05)；LXRα和ABCA1 mRNA与模型组比较差异有统计学意义(P＜0.05)；它们蛋白表达变化趋势与mRNA的表达均趋势一致.结论 非诺贝特不仅降低血脂,而且能够升高LXRα的表达和促进ABCA1的释放,使ABCA1的含量升高,促进胆固醇的逆转运,发挥抗动脉粥样硬化的作用.     

热休克蛋白65对Jurkat细胞增殖和胆固醇流出的影响

目的探讨动脉粥样硬化中的重要炎性物质—热休克蛋白65(HSP65)诱导活化的Jurkat细胞发生增殖、免疫活化反应时胆固醇流出率的改变,并揭示其可能的分子机制。方法 Jurkat细胞经刀豆蛋白A(Con A)活化48 h后,与不同浓度HSP65孵育24 h,CCK-8检测细胞增殖能力,ELISA测定上清液中炎症因子干扰素γ(IFN-γ)和白细胞介素10(IL-10)含量,液闪计数仪检测Jurkat细胞胆固醇流出率;RT-PCR检测胆固醇相关转运蛋白,包括ATP结合盒转运体A1(ABCA1)和G1(ABCG1)、B族Ⅰ型清道夫受体(SR-BⅠ)、过氧化体增殖物激活型受体γ(PPARγ)、肝X受体α(LXRα)的表达。结果 5 mg/L Con A与Jurkat细胞孵育48 h后可显著促进细胞增殖,HSP65呈剂量依赖性促进Con A诱导的Jurkat细胞增殖(P0.001)。以0.5、1 mg/L HSP65分别处理Jurkat细胞后,Jurkat细胞胆固醇流出率和IL-10含量均呈浓度依赖性下降,IFN-γ含量则逐渐升高(P0.01),细胞ABCA1、ABCG1、SR-BⅠ、PPARγ、LXRα的mRNA表达水平呈剂量依赖性降低(P0.01)。结论在0.5~1 mg/L浓度范围内,HSP65不仅可促进T细胞增殖、加剧细胞免疫反应,还可引起胆固醇流出率降低,其机制可能与下调胆固醇转运相关蛋白ABCA1、ABCG1、SR-BⅠ、PPARγ、LXRα的基因表达相关。