睾酮对衰老心肌细胞的干预作用及其机制

目的探讨不同剂量睾酮对衰老心肌细胞的干预作用及其可能机制。方法将心肌细胞随机分为正常组、衰老组、1μmol/L睾酮组、100 nmol/L睾酮组、10 nmol/L睾酮组,检测各组心肌细胞周期分布,去磷酸化视网膜母细胞瘤蛋白(RB)表达,细胞内活性氧水平以及细胞线粒体DNA突变率。结果衰老组心肌细胞G_0/G_1期比例较正常组明显升高,而1μmol/L睾酮组、100 nmol/L睾酮组、10 nmol/L睾酮组G_0/G_1期比例较衰老组明显降低(P<0.05)。除10 nmol/L睾酮组对RB表达无明显影响外,睾酮干预可下调去磷酸化RB表达,降低细胞内活性氧水平,降低线粒体DNA突变率(P<0.05,P<0.01)。结论睾酮可抑制小鼠心肌细胞衰老,这一作用部分是通过下调去磷酸化RB表达,降低细胞内活性氧水平,降低线粒体DNA突变率来实现的。     

脱氢表雄酮对氧化应激诱导的血管平滑肌细胞单核细胞趋化蛋白-1 mRNA表达的影响

目的观察脱氢表雄酮(DHEA)对氧化应激诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1) mRNA达的影响。方法贴块法培养雄性Wistar大鼠胸主动脉VSMC,实验分A组(对照组)、B组(50μmol/L H_2O_2处理6h)、C组(50μmol/L H_2O_2+1nmol/L DHEA处理6h)和D组(50μmol/L H_2O_2+10nmol/L DHEA处理6h)。逆转录聚合酶链式反应检测MCP-1的mRNA表达;比色法检测细胞丙二醛(MDA)含量。结果B组VSMC的MCP-1 mRNA表达及细胞MDA的含量显著高于A组;与B组比较,C组和D组VSMC的MCP-1 mRNA表达及细胞MDA含量显著降低,其中D组降低更为明显。结论DHEA能显著抑制H_2O_2引起VSMC的MCP-1 mRNA表达的上调,从而减轻氧化应激对VSMC的损伤,这部分是通过DHEA的直接抗氧化作用达到的。     

整合素αvβ3在血管紧张素Ⅱ诱导人脐静脉内皮细胞衰老中的变化

目的观察整合素αvβ3在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)衰老中的变化。方法体外培养HUVECs,采用CCK-8法检测细胞存活率,用AngⅡ(终浓度10-6mol/L)干预,分为实验对照组、AngⅡ诱导组。以衰老相关β-半乳糖苷酶活性和细胞增殖能力两种衰老标志物为主要观察指标。其中衰老相关β-半乳糖苷酶活性采用免疫化学染色方法,流式细胞术检测细胞周期来反应细胞的增殖能力;利用Western印迹法分析AngⅡ诱导HUVECs 0、12、24、36、48 h的整合素αvβ3表达的时间效应关系。结果与对照组相比,10-6 mol/L AngⅡ诱导组存活的细胞数为对照组的(77.15±6.83)%;(81.80±0.92)%的细胞呈现β-半乳糖苷酶阳性染色,流式细胞仪检测细胞周期停滞于G0～G1,证实细胞衰老;AngⅡ呈时间依赖性上调整合素αvβ3表达。结论 AngⅡ可以诱导HUVECs衰老,其机制可能与上调衰老细胞整合素αvβ3表达有关。     

叔丁基过氧化氢体外诱导人肾小球系膜细胞的衰老

目的通过观察不同浓度叔丁基过氧化氢(t-BHP)作用不同时间后对人肾小球系膜细胞(HGMC)衰老指标的影响,探讨t-BHP在HGMC衰老过程中的作用。方法应用10、30、50、100μmol/L t BHP刺激细胞,每天刺激1 h,连续5 d,刺激结束后48 h检测细胞增殖情况、衰老相关β半乳糖苷酶(SAβ-gal)染色阳性细胞百分率、细胞周期变化及细胞形态改变确定t-BHP诱导HGMC衰老的最佳浓度。结果 30μmol/L t BHP刺激HGMC,每天1 h连续作用5次后可抑制HGMC增殖,且84%的HGMC SAβ-gal染色阳性,90%HGMC进入G0~G1期;光镜表现细胞体积增大、胞体扁平、胞质颗粒增多;电镜下细胞核膜内陷,染色质凝集、边集,细胞质空泡增多,出现髓样溶酶体。结论 30μmol/L t BHP刺激HGMC后每天1 h连续作用5次,可作为诱导HGMC发生衰老的刺激因素。     

血管平滑肌细胞的增殖及西洋参叶二醇组皂苷的干预作用

目的 观察西洋参叶二醇组皂苷(PQDS)对增殖的血管平滑肌细胞(VSMC)的干预作用,探讨PQDS干预VSMC的增殖作用及机制.方法 组织贴块法培养大鼠胸主动脉VSMC,用AngII诱导VSMC增殖.随机分为:空白对照组、AngⅡ模型组、AngⅡ+PQDS 100、50、25 mg/L不同剂量组.用MTT法、流式细胞术观察PQDS对细胞增殖、细胞周期、增殖指数的影响.结果 PQDS可减低VSMC的增殖能力,将增殖的VSMC抑制在G_0/G_1期.结论 PQDS能抑制VSMC增殖,其机制可能与将增殖的VSMC抑制在G_0/G_1期有关.     

血管紧张素Ⅱ诱导人脐静脉内皮细胞衰老及对炎症因子分泌的影响

目的 研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)衰老及对白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)分泌的影响,进一步探讨AngⅡ在动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)发生、发展过程中所发挥的作用. 方法 体外培养HUVECs,采用CCK-8法检测细胞存活率,用AngⅡ(终浓度10-6 mol/L)干预,分为实验对照组、AngⅡ诱导组.以衰老相关β-半乳糖苷酶活性和细胞的增殖能力2种衰老标志物为主要观察指标,其中衰老相关β-半乳糖苷酶活性采用免疫化学染色方法,流式细胞术检测细胞周期来反映细胞的增殖能力;酶联免疫吸附法(E LISA)检测培养液中IL-6、TNF-α浓度. 结果 与对照组相比,AngⅡ诱导组存活的细胞数为对照组的(77.15±6.83)％;(81.80±0.92)％的细胞呈现β-半乳糖苷酶阳性染色,流式细胞仪检测细胞周期停滞于G0-G1[(89.4±3.4)％],证实细胞衰老;IL-6、TNF-α分泌增加(P均＜0.01). 结论 AngⅡ可以诱导HUVECs衰老,其机制可能与IL-.6、TNF-α分泌增加有关.     

黄芪甲甙对衰老HELF细胞端粒酶活性及klotho表达的影响

目的 探讨黄芪甲甙对衰老人胚肺成纤维细胞(HELF)端粒酶活性及抗衰老基因klotho mRNA表达的影响.方法 体外培养 HELF,实验组从50代开始加入黄芪甲甙,倒置显微镜观察细胞形态,MTT方法检查细胞活力,Dimiri氏法检测β-半乳糖苷酶活性,TRAP-PCR银染法检测端粒酶活性,RT-PCR法检测klotho mRNA表达.结果 与青年组比较:衰老组细胞活力和klotho mRNA表达均降低(P<0.01)、β-半乳糖苷酶活性升高(P<0.01);与衰老组相比:黄芪甲甙可降低β-半乳糖苷酶活性(P<0.01)、提高细胞活力、端粒酶活性和klotho mRNA表达(P<0.01).结论 黄芪甲甙可以通过改变细胞端粒酶活性、klotho基因的表达而发挥其抗HELF细胞衰老的作用.     

淀粉样β蛋白25-35诱导兔主动脉平滑肌细胞凋亡的研究

目的探讨淀粉样β蛋白25-35(Aβ25-35)体外诱导主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡作用。方法取正常兔胸主动脉VSMC株,将其分为实验组和对照组。实验组为Aβ25-35与VSMC共培养,按Aβ25-35浓度再分为10、20、50及100μmol/L组;对照组为等渗盐水与VSMC共培养。每组分别培养1、3及10d。采用AnnexinV-FITC、碘化丙啶染色法定性检测细胞凋亡情况;借助流式细胞仪定量观察细胞凋亡情况。结果Aβ25-3510μmol/L组孵育3d时,VSMC凋亡率为(5.3±1.4)%,20μmol/L组为(25.9±5.8)%;Aβ25-35100μmol/L组孵育10d时,凋亡率为(94.0±14.4)%,3组比较差异均有统计学意义(P<0.05),凋亡率随Aβ25-35浓度、孵育时间的增加而增高。Aβ25-3520μmol/L组孵育1d后,即可观察到处于早期凋亡的细胞呈现绿色荧光标记;Aβ25-35100μmol/L组孵育10d,可观察到呈现绿色、红色两种荧光标记,为处于凋亡晚期或临近坏死的细胞。结论Aβ25-35可通过凋亡途径发挥对VSMC的毒性作用。     

血管紧张素Ⅱ诱导人脐静脉内皮细胞衰老及对细胞骨架的影响

目的观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)衰老及对细胞骨架的影响。方法体外培养HUVEC,采用CCK-8法检测细胞存活率,用AngⅡ干预,分为对照组、10mol/LAngⅡ诱导组(AngⅡ组)。主要观察衰老相关β-半乳糖苷酶活性和细胞的增殖能力。β-半乳糖苷酶活性采用免疫化学染色方法,流式细胞术检测细胞增殖能力;考马斯亮蓝染色显示内皮细胞骨架,利用Western blot印迹法分析波形蛋白表达的变化。结果与10~(-6)mol/L AngⅡ细胞存活率(77.15±6.83)%比较,10~(-5)mol/L AngⅡ存活率(55.61±7.92)%明显降低(P<0.01);AngⅡ组β-半乳糖苷酶阳性染色细胞数目明显增加(P<0.001),流式细胞仪检测细胞周期停滞于G0/G1期[(80.11±7.92)%];AngⅡ组细胞骨架及波形蛋白较对照组明显降解。结论 AngⅡ可以诱导HUVEC衰老,其分子机制可能与细胞骨架蛋白裂解有关。     

何首乌饮对D-半乳糖所致衰老大鼠下颌下腺β-半乳糖苷酶表达的影响

目的 通过观察何首乌饮干预的衰老大鼠下颌下腺β-半乳糖苷酶(β-gal)表达的改变,探讨何首乌饮的抗衰老作用.方法 用D-半乳糖制造衰老大鼠模型,何首乌饮的干预作用分治疗和预防两部分,检测β-半乳糖苷酶活性,观察下颌下腺衰老细胞数目改变.结果 预防性实验部分:模型组衰老细胞数目多于正常组和各预防性用药组;治疗性实验部分:用药各组与自然恢复组相比,衰老细胞数目明显减少,其中治疗中剂量组最低.结论 何首乌饮具有抗模型大鼠下颌下腺细胞衰老的作用.     

Evaluation of endothelial cell culture as a model system of vascular ageing

The purpose of this study was to evaluate the relevance of long-term endothelial cell culture as a model system of vascular ageing. Micro- and macrovascular endothelial cells were serially passaged until replicative senescence and their ability to form tube-like structures when cultured on Matrigel was assessed throughout their lifespan. For both cell types low passage cultures adopted a homogeneous cobblestone morphology, while senescent cultures were extremely heterogeneous. Furthermore, both cell types showed a reduction in tube formation ability with in vitro ageing, which is in accordance with the reduction in angiogenic potential observed with ageing in vivo. Examination of senescence associated β-galactosidase activity revealed an increased activity in cells forming tubes as compared to cells cultured on plastic, which could be attributed to an increased lysosomal content of cells undergoing tube formation. As this increased senescence associated β-galactosidase activity was unrelated to the replicative age of the cells, senescence associated β-galactosidase activity may not be a relevant senescence marker for differentiating endothelial cells. The age-related reduction in tube formation ability suggested that long-term culture of endothelial cells may be a valid model system of vascular ageing, which makes it an ideal platform for high throughput screening of compounds influencing angiogenesis.     

瑞舒伐他汀对血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶2表达和细胞迁移的影响

目的 观察瑞舒伐他汀对同型半胱氨酸(Hcy)诱导大鼠血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶2(MMP 2)表达以及对血管平滑肌迁移的影响,探讨Hcy致动脉粥样硬化以及他汀药物逆转的可能机制.方法 体外培养大鼠主动脉平滑肌细胞,加入不同浓度的Hcy分别作用 24 h、48 h和72 h,在1000 μmol/L Hcy浓度下分别加入不同浓度的瑞舒伐他汀干预,采用免疫印迹法和明胶酶谱法检测细胞培养上清液中MMP 2的表达及酶的活性.在Transwell小室外室中加入1000 μmol/L浓度的Hcy,内室加入定量的大鼠平滑肌细胞悬液,培养48 h,观察Hcy对平滑肌细胞迁移侵袭力的影响;同时加入不同浓度瑞舒伐他汀溶液,分别培养24 h、48 h和72 h,观察瑞舒伐他汀对Hcy诱导平滑肌细胞迁移侵袭力的影响.结果 Hcy浓度在50～5000 μmol/L时促进血管平滑肌细胞MMP 2蛋白的表达,Hcy浓度在50～1000 μmol/L时增强血管平滑肌细胞MMP 2的酶活性,浓度在5000 μmol/L时抑制MMP 2的活性(F值分别为9.31、6.44、5.97,均P＜0.05);瑞舒伐他汀浓度在10-9～10-5 mol/L时,能抑制Hcy对血管平滑肌MMP 2表达和酶活性的增强作用(F值分别为3.92、4.78、2.14,均P＜0.05).Hcy在50～5000 μmol/L浓度下能刺激血管平滑肌细胞迁移,Hcy浓度为0、50、100、500、1000、5000 μmol/L时平滑肌细胞迁移分别为(18.32±2.17)个、(32.68±4.34)个、(44.75±4.08)个、(61.39±5.21)个、(79.74±5.54)个 和(90.78±5.83)个(F=5.31,P＜0.05);而瑞舒伐他汀可以抑制Hcy对血管平滑肌细胞迁移的刺激作用,在瑞舒伐他汀浓度为10-9、10-8、10-7、10-6、10-5 mol/L时平滑肌细胞迁移分别为(79.74±5.54)个、(62.53±6.41)个、(48.37±5.66)个、(31.41±4.79)个、(19.27±3.62)个和(11.17±2.33)个(F=4.99,P＜0.05).结论 Hcy能影响血管平滑肌细胞MMP 2蛋白的表达,瑞舒伐他汀能抑制Hcy对血管平滑肌细胞MMP 2的表达和酶活性的增强作用,并能抑制Hcy对血管平滑肌细胞迁移的刺激作用,这可能是瑞舒伐他汀抗动脉粥样硬化的作用机制之一.

Abstract：

Objective To observe the effects of rosuvastatin on the homocysteine (Hcy)-induced expression of matrix metalloproteinase 2 (MMP 2) and cell migration in rat vascular smooth muscle cells (VSMCs), and to explore the possible mechanism of Hcy-induced atherosclerosis and the role of statins in reversing atherosclerosis. Methods In one cell culture plate, the cultured rat VSMCs were incubated with different concentrations of Hcy (0, 50, 100, 500, 1000 μmol/L and 5000 μmol/L) in vitro for 24 h, 48 h and 72 h. And in another cell culture plate, the different concentrations of rosuvastatin (10-9, 10-8, 10-7, 10-6, 10-5 mol/L and 0 mol/L) were added to the cultured rat VSMCs (while the concentration of Hcy was 1000 μmol/L). The MMP 2 expression and enzyme activity were determined by gelatin zymography and Western blotting. The effects of Hcy and rosuvastatin on cell migration and invasiveness of VSMCs were observed. Results Hcy (50-5000 μmol/L) increased the protein expression, and Hcy (50-1000 μmol/L) increased enzyme activity of MMP 2 significantly. But Hcy (5000 μmol/L) inhibited activity of MMP 2 (F=9.31, 6.44 and 5.97, all P＜0.05). Rosuvastatin (10-9-10-5 mol/L) inhibited Hcy-induced expression and enzyme activity increasing of MMP 2. The counts of cell migration of VSMCs were 18.32±2.17, 32.68±4.34, 44.75±4.08, 61.39±5.21, 79.74±5.54 and 90.78±5.83, while the concentration of Hcy was 0, 50, 100, 500, 1000 μmol/L and 5000 μmol/L respectively (F=5.31, P＜0.05). The counts of cell migration of VSMCs were 79.74±5.54, 62.53±6.41, 48.37±5.66, 31.41±4.79, 19.27±3.62 and 11.17±2.33, while the concentration of rosuvastatin was 10-9, 10-8, 10-7, 10-6 and 10-5 mol/L respectively (F=4.99, P＜0.05). Rosuvastatin could decrease the stimulation of Hcy-induced migration of VSMCs. Conclusions Hcy can influence the MMP 2 protein expression/activity in VSMCs, and rosuvastatin can inhibit augmentation of Hcy-induced MMP 2 expression/activity and migration of VSMCs. It may be one of the multiple-effects of rosuvastatin reducing atherosclerosis.     

整合素β1基因沉默对支气管哮喘小鼠气道平滑肌功能的影响

目的 探讨整合素β1基因沉默对支气管哮喘(简称哮喘)小鼠气道平滑肌细胞(ASMC)增殖和分泌功能的影响.方法 原代培养正常及哮喘模型小鼠ASMC,分别取各自第5代ASMC进行实验,利用RNA干扰(RNAi)技术沉默ASMC的整合素β1基因,RT-PCR技术观察沉默前后ASMC整合素β1 mRNA表达水平变化,蛋白印迹检测沉默前后ASMC整合素β1蛋白含量变化;四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测整合素β1基因沉默前后ASMC细胞增殖变化;流式细胞仪测定整合素β1基因沉默前后ASMC细胞周期分布及细胞凋亡率变化情况;ELISA检测整合素β1 基因沉默前后ASMC分泌的白细胞介素(IL)-6及受激活调节正常T细胞表达和分泌因子(RANTES)的含量变化.结果 (1)哮喘PBS对照组RT-PCR显示整合素β1 mRNA(0.907±0.041)较正常PBS对照组(0.527±0.027)显著增高(t=24.632,P＜0.05),哮喘siRNA干预组(0.503±0.034)较哮喘PBS对照组明显减低(t=24.079,P＜0.05),正常siRNA干预组较正常PBS对照组无显著性变化(t=1.077,P＞0.05);(2)Western blot检测显示哮喘PBS对照组整合素β1蛋白表达(0.733±0.067)较正常PBS对照组(0.386±0.044)显著增高(t=13.622,P＜0.05),哮喘siRNA干预组(0.453±0.074)较哮喘PBS对照组显著减低(t=8.880,P＜0.05),正常siRNA干预组较正常PBS对照组无显著性变化(t=1.908,P＞0.05);(3)MTT实验显示3～5 d的吸光度(A)值哮喘PBS对照组较同期正常PBS对照组 显著增强(均P＜0.05),哮喘siRNA干预组的A值较同期哮喘PBS对照组显著降低(均P＜0.05),正常siRNA干预组与正常PBS对照组差异无统计学意义(均P＞0.05);(4)哮喘PBS对照组ASMC处于增殖状态的S期+G2/M期ASMC比例为[(49±4)%],明显高于正常PBS对照组[(34±4)%](t=8.035,P＜0.05),哮喘siRNA干预组ASMC的S期+G2/M期ASMC比例(42±7)%明显低于哮喘PBS对照组(t=2.212,P＜0.05),正常siRNA干预组与正常PBS对照组差异无统计学意义(t=0.699,P＞0.05);(5)哮喘PBS对照组的凋亡率[(3.9±1.4)%]较正常PBS对照组[(7.4±0.5)%]显著升高(t=7.465,P＜0.05),哮喘siRNA干预组凋亡率[(12.6±2.4)%]明显高于哮喘PBS对照组(t=9.839,P＜0.05),正常siRNA干预组凋亡率与正常PBS对照组相比差异无统计学意义(t=2.094,P＞0.05);(6)哮喘PBS对照组IL-6[(545±28)ng/L]、RANTES分泌值[(345±28)ng/L]高于正常PBS对照组[分别为(219±26)ng/L和(138±16)ng/L,均P＜0.05],哮喘siRNA干预组分泌量[分别为(348±26)ng/L和(250±24)ng/L]显著低于哮喘PBS对照组(t值分别为6.192和4.590,均P＜0.05),而正常siRNA干预组较正常PBS对照组差异无统计学意义(均P＞0.05).结论 靶向ASMC整合素β1基因沉默能抑制哮喘模型小鼠ASMC的增殖、降低分泌功能并促进ASMC凋亡.     

砷雌激素样效应及对HeLa细胞生长的影响

目的 观察砷雌激素样效应及对HeLa细胞体外生长的影响作用.方法 实验分为8组,RPMI1640培养液分别含雌二醇(E2,1 nmol/L)、三氧化二砷(A82O3,0.5、1.0、5.0 μmol/L)、雌二醇拮抗剂(ICI,500nmol/L)、E2(1 nmoL/L)+ICI(500 nmol/L)、As2O3(1.0μmol/L)+[CI(500 nmol/L)以及对照组,以含有不同处理因素的RPMI 1640培养液培养HeLa细胞24、48、72 h.光镜下观察72 h时HeLa细胞生长状况,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各时间点HeLa细胞存活率,流式细胞计量术检测48 h时HeLa细胞周期.结果 形态学观察E2组和0.5μmol/L As2O3组细胞数量明显多于对照组,长势旺盛.24、48、72 h E2组和0.5μmoL/L As2O3组对HeLa细胞的增殖促进率分别为6.35%、11.56%、38.33%及6.35%、8.50%、20.26%.两组作用效果相似,对细胞生长起到增殖促进作用.与对照组[(41.68±1.05)%]比较,E2组[(55.72±2.31)%]和0.5μmol/L As2O3组[(47.82±1.41)%]S期细胞有增多趋势,其他各组则减少,其中5.0 μmol/L As2O3组[(21.1l±4.99)%]、ICI组[(20.16±4.76)%]明显减少,组间比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 小剂量As2O3具有雌激素样效应,可促进HeLa细胞的生长.     

依那普利抑制同型半胱氨酸致血管内皮损伤的保护作用

目的 探讨依那普利对同型半胱氨酸（Hcy）引起的血管内皮细胞损伤的保护作用。 方法 取大鼠主动脉内皮细胞，培养并传代备用，进行血管内皮细胞药物保护实验。分为正常对照组（正常组）:不加Hcy及依那普利；损伤组:给予Hcy 2000 μmol/L；干预组:在给予Hcy 2000 μmol/L的同时再给予依那普利，依那普利的浓度不同又分为干预A、B、C、D和E组，其依那普利的浓度依次为10，20,40,80和160 nmol/L。内皮细胞的鉴定利用因子VIII间接免疫荧光；利用光学仪器进行血管内皮细胞形态学观察；测定各组细胞乳酸脱氢酶（LDH）的活性；利用CCK8试剂检测各组血管内皮细胞活力；利用细胞计数板测定活细胞百分率。 结果 :① Hcy损伤组血管内皮细胞呈现出细胞损伤形态学改变；② 各组细胞LDH活性与正常对照组(100%)比较分别为:损伤组细胞LDH活性为（157 ± 17）%，干预C组（依那普利浓度40 nmol/L）细胞活性为（126 ± 7）%。干预C组较损伤组LDH活性显组降低（P<0.01）;③血管内皮细胞活力:正常组细胞活力定为 100%，损伤组为（52 ± 6）%，干预C组为（75 ± 6）%。干预C组细胞活力较损伤组相比细胞活力显著升高（P<0.01）；④ 活细胞百分率测定，与正常对照组[（98 ± 1）%]比较，损伤组活细胞比例[（72 ± 4）%]显著降低（P<0.01）；干预C组活细胞比例为(87 ± 3)% 较损伤组显著增加（P<0.01）。 结论 依那普利可改善Hcy对血管内皮细胞的损伤，具有保护作用。     

丁苯酞对大鼠骨髓间质干细胞氧化应激损伤的保护机制

目的 研究丁苯酞(dl-3-n-butylphthalide,NBP)对过氧化氢(hydrogen peroxide,H2O2)诱导的大鼠骨髓间质干细胞(rat bone marrow mesenchymal stem cell,rBMSC)氧化应激损伤的保护机制.方法 rBMSC分为对照组、H2O2组以及不同浓度N...     

蛹虫草（北冬虫夏草）提取物对高糖诱导的内皮细胞衰老和细胞内活性氧的影响

目的：探讨蛹虫草乙酸乙酯提取物（GSCME）对高糖诱导人脐静脉内皮细胞（HUVECs）的衰老和细胞内活性氧的影响。方法：体外培养HUVECs,分3组：对照组（D-葡萄糖5.5mmol/L）、高糖组（D-葡萄糖40mmol/L）、GSCME组（GSCME 50μg/ml＋D-葡萄糖40mmol/L）,检测各组细胞增殖情况,SA-β-gal阳性衰老细胞,周期分布和细胞内活性氧（ROS）含量。结果：与对照组相比,高糖干预24、48、72h后细胞增殖活性显著下降[OD：48h：（0.599±0.062）比（0.375±0.013）],P均〈0.01;高糖孵育48h后SA-β-gal阳性细胞率[（50.70±1.49）%比（89.63±0.69）%]、G0/G1期细胞百分率[（49.15±2.56）%比（76.59±3.58）%]、细胞内活性氧（ROS）水平[（1.03±0.15）比（3.60±0.36）]均明显增加,P均〈0.01。与高糖组相比,GSCME孵育48h、72hHUVECs增殖率显著上升[48h：（0.375±0.013）比（0.424±0.023）],P均〈0.05,孵育48h显著降低SA-β-gal阳性细胞率[（89.63±0.69）%比（65.81±1.50）%]、G0/G1期细胞百分率[（76.59±3.58）%比（52.70±5.64）%]及细胞内ROS水平[（3.60±0.36）比（1.67±0.21）],P〈0.05～0.01。结论：蛹虫草提取物可延缓高糖诱导的人脐静脉内皮细胞衰老进程,降低细胞内活性氧从而减轻细胞氧化损伤可能是其作用的机制之一。     

Ox-LDL诱导血管平滑肌细胞胸腺基质淋巴细胞生成素表达

目的:观察氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)是否可以诱导血管平滑肌细胞(VSMCs)表达胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP),并探讨核因子-κB(NF-κB)信号通路在其中的作用。方法:原代培养VSMCs,分别用ox-LDL及ox-LDL联合NF-κB特异性抑制剂——吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)干预。采用免疫组织化学染色检测胞质中TSLP的表达,用ELISA法检测细胞培养上清液中TSLP的浓度,用电泳迁移率实验检测NF-κB的结合活性。结果:正常未经ox-LDL刺激的VSMCs几乎不表达TSLP,经ox-LDL刺激后胞质及上清液中的TSLP表达明显增加,并有浓度和时间依赖性。Ox-LDL刺激VSMCs表达TSLP的同时NF-κB信号通路激活,经PDTC预处理后TSLP表达量显著减少。结论:Ox-LDL能够诱导VSMCs表达TSLP,其作用机制可能为上调NF-κB的结合活性。     

AcSDKP体外抑制脂多糖诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞促炎功能研究*

目的 探讨N-乙酰-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸（AcSDKP）对小鼠RAW264.7巨噬细胞促炎功能的影响。方法 取小鼠RAW264.7巨噬细胞体外培养,分为对照组、脂多糖（LPS）组和LPS加不同浓度的AcSDKP（1 nmol/L、10 nmol/L和100 nmol/L）处理组。采用荧光定量PCR法检测细胞肿瘤坏死因子（TNF）-α、白细胞素（IL）-1β、IL-6和诱导型一氧化氮合成酶（iNOS）mRNA相对水平;使用Transwell小室检测RAW264.7细胞的趋化能力;采用Western blot法检测细胞iNOS、磷酸化的蛋白激酶复合体抑制物(p-IKK)、磷酸化的κB抑制蛋白(p-IκB)和磷酸化的P65（p-P65）蛋白表达水平。结果 LPS处理组TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA水平显著高于对照组【分别高出（41±2.1）倍、（1073±80.8）倍和（1726±110.2）倍,P<0.01】;AcSDKP（10 nmol/L和100 nmol/L）处理组TNF-α水平显著低于LPS处理组【分别降低19.0% 和39.3%,P<0.01】;AcSDKP（1 nmol/L、10 nmol/L和100 nmol/L）处理组IL-1β水平显著低于LPS处理组【分别降低22.08%、35.8%和38.2%,P<0.01】;AcSDKP（1 nmol/L、10 nmol/L和100 nmol/L）处理组IL-6水平显著低于LPS处理组【分别降低15.8%、35.7%和43.3%,P<0.01】;LPS处理组穿过小室的细胞数为（136±5.3）个/HP,显著高于对照组【（64±5.3）个/HP,P<0.01】,而AcSDKP处理组穿过小室的细胞数【分别为（105±4.8）、（85.3±5.0）和（73.7±5.6）个/HP】,显著低于LPS组【（136±5.3）个/HP,P<0.05】;LPS处理组iNOS mRNA和蛋白表达水平显著高于对照组【分别为（21±2.5）倍和（5.9±0.4）倍,P<0.01】,而AcSDKP处理组iNOS mRNA显著低于LPS处理组【分别降低37.8%、23.3%和33.1%,P<0.05】;在10 nmol/L和100 nmol/L浓度AcSDKP处理组,两种蛋白水平显著低于LPS处理组【分别降低27.0%和40.2%,P<0.05】;LPS处理组p-IKK、p-IκB和p-P65表达量均显著高于对照组【分别为（25.9±4.8）倍、（9.5±0.6）倍和（2.1±0.2）倍,P<0.01】,而AcSDKP（10 nmol/L）处理组三者水平较LPS处理组显著下降【分别为42.5%、17.8%和29.7%,P<0.05】。结论 AcSDKP可抑制LPS诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞的炎症反应,这一效应可能与阻断IKK/ IκB/NF-κB通路有关。