辛伐他汀抑制HepG2细胞增殖作用的机制

目的 体外观察辛伐他汀对人肝癌细胞HepG2增殖、细胞周期及细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子p21蛋白表达的影响.方法 采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法观察辛伐他汀对HepG2细胞增殖的影响,用流式细胞仪检测辛伐他汀对细胞周期的作用,用免疫细胞化学法观察辛伐他汀对细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子p2l蛋白表达的影响.对数据进行析因设计与单因素方差分析.结果 体外辛伐他汀可抑制HepG2细胞的增殖(F浓度=1264,P＜0.001 ;F时间=17.466,P＜0.001;F浓度*时间=35.053,P＜0.001).辛伐他汀处理组G0/G1期细胞增多,但细胞凋亡不明显;体外辛伐他汀可增强HepG2细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子p21蛋白的表达(F=512.133,P＜0.001).结论 体外辛伐他汀对HepG2细胞增殖有抑制作用,该作用可能与其使细胞生长阻滞于G0/G1期及增强细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子p21蛋白表达有关.     

中药淫羊藿苷逆转肝癌HepG2.2.15细胞恶性表型及诱导分化研究

目的: 探讨淫羊藿苷(ICA)诱导HepG2.2.15细胞分化凋亡的作用机制.方法:MTT法检测细胞增殖;流式细胞术(FACS)检测细胞周期分布;RT-PCR方法检测P27基因、FLIP基因mRNA表达水平的变化;AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测ICA处理后HepG2.2.15细胞凋亡的变化;电化学发光法和速率散射比浊法分别检测ICA处理后HepG2.2.15细胞上清液中甲胎蛋白(AFP)和转铁蛋白(Tf)水平变化.结果: ICA作用HepG2.2.15细胞增殖呈抑制作用, 具有时间依赖性. ICA处理后, HepG2.2.15细胞周期各时相分布与对照组相比发生变化, G0/G1期升高, S期减小, 与对照组相比有显著性差异(56.26±1.56% vs 49.68±1.34%, 19.95±1.24% vs 28.02±1.03%;P<0.01). ICA分别上调HepG2.2.15细胞P27和下调FLIP基因mRNA的表达水平(0.78 vs 0.27, 0.54 vs 0.90);HepG2.2.15细胞凋亡率增加, AFP下降, Tf水平升高, 与对照组相比均有显著性意义(7.09% vs 0.59%, 156±46 mg/L vs 285±58 mg/L, 152.1±26 mg/L vs 67.1±24 mg/L;P＜0.05).结论:ICA可能通过升高G0/G1期, 减少S期抑制HepG2.2.15细胞的增殖;上调P27 mRNA和Tf水平, 下调FLIP mRNA的表达和AFP合成的水平来诱导细胞分化.     

抑癌基因Smad4对HepG2生长的影响及其机制探讨

目的研究抑癌基因Smad4对人肝癌细胞株HepG2．生长的影响，并探讨其作用机制。方法采用脂质体瞬时转染法转染PFTX-5Smad4质粒至人肝癌细胞株HepG2（实验组），以转染空质粒PFTX-5的HepG2细胞为对照组，野生型HepG2细胞为空白组，利用免疫印迹（Westernblot）和逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测Smad4及血管内皮生长因子（VEGF）表达的变化；用MTT法检测细胞增殖及用FITC—AnnexinV、碘化吡啶（propidiumiodide，PI）双染后流式细胞仪（FCM）检测细胞周期和凋亡情况，Westernblot检测细胞周期素D1（CyclinD1）表达差异。结果PFTX-5Smad4瞬时转染到肝癌细胞后，实验组与对照组和空白组相比，Smad4mRNA和蛋白表达明显上升（P〈0．05），而VEGFmRNA和蛋白的表达显著降低（P〈0．05）。实验组细胞CyclinD1表达明显下降（P〈0．05），细胞周期时相分布出现合成前期（G。／G．期）阻滞。实验组细胞凋亡率明显升高（P〈0．01），增殖受到明显抑制。结论Smad4高表达可能通过降低肝癌细胞中VEGF的表达，抑制eyclinD1转录合成，并诱导强烈的G1期阻滞和细胞凋亡，对细胞的增殖有明显的抑制作用，为进-步研究肝癌生长增殖机制提供了实验基础。     

黄芪多糖对肝癌HepG2细胞的抑制作用及其机制

目的 研究黄芪多糖(APS)和5-氟尿嘧啶(5-fu)联合使用对肝癌HepG2细胞的生长抑制及其作用机制.方法 用RPMI1640培养液对低分化人肝癌细胞株HepG2进行传代培养,取对数生长期细胞, 分为5组:A组:对照组,不含药物,使用同体积的磷酸盐缓冲液(PBS);B组:APS组,只给予100 μg/mlAPS;C组:5-fu组,只给予100 μg/ml 5-fu;D组:5-fu+低浓度APS组,给予100 μg/ml 5-fu+100 μg/ml APS;E组:5-fu+高浓度APS组,给予100 μg/ml 5-fu+200 μg/ml APS.用噻唑蓝(MTT)法观察APS及5-fu对HepG2细胞增殖的影响;用流式细胞术方法测药物作用后细胞周期变化和细胞凋亡;western-blot检测凋亡相关蛋白表达.结果 APS和5-fu联合使用可抑制HepG2细胞的增殖,效应呈浓度和时间依赖性;APS和5-fu联合使用阻滞HepG2细胞周期于G1期;并可诱导HepG2细胞凋亡;APS和5-fu联合使用,可明显增高肝癌HepG2细胞中caspase-3、caspase-9蛋白的表达,同时检测到抑凋亡蛋白Bcl-2表达显著降低.在只使用5-fu的实验组细胞中均未检测到上述变化.结论 APS和5-fu联合使用能抑制肝癌HepG2细胞株的增殖,其机制之一是影响细胞周期使之阻滞于G1期,激活了细胞凋亡系统,从而诱导细胞凋亡.     

PHB1对人肝癌细胞增殖的影响及其作用机制

目的探讨抗增殖蛋白1(prohibitin1,PHB1)对人肝癌细胞增殖的影响及其作用机制。方法构建PHB1真核表达重组质粒(pEGFP-PHB1)和PHB1靶向siRNA质粒(shRNA-PHB1)转染人肝癌细胞HepG2和SMMC-7721,诱导PHB1在人肝癌细胞中表达上调和下调,采用MTT、流式细胞学、荧光定量PCR和免疫印迹等技术检测人肝癌细胞增殖、细胞周期,以及细胞周期关键调控分子的表达情况。结果高表达PHB1可阻滞HepG2和SMMC-7721细胞于G0/G1期[(67.28±2.94)%比(56.71±2.56)%,t=6.64,P=0.00;(69.48±3.82)%比(60.43±2.59)%,t=4.80,P=0.00],使S期比例下降[(14.74±1.45)%比(24.13±1.92)%,t=9.54,P=0.00;(13.73±1.26)%比(25.50±2.30)%,t=10.99,P=0.00],抑制细胞增殖;周期调控分子p53和p21CIP1mRNA和蛋白质水平显著升高,而Cyclin A2、Cyclin E1和CDK2 mRNA和蛋白质水平显著降低(P0.01)。低表达PHB1可促使HepG2和SMMC-7721细胞趋于S期[(31.65±2.71)%比(24.68±1.28)%,t=5.69,P=0.00;(31.02±2.49)%比(25.88±2.40)%,t=3.64,P=0.005],促进细胞增殖;p53、p21CIP1、Cyclin A2、Cyclin E1、CDK2 mRNA和蛋白质水平与PHB1高表达时相反(P0.01)。结论高表达PHB1可以阻滞人肝癌细胞周期于G0/G1期,进而抑制细胞增殖,其作用机制可能与p53介导的G0/G1期相关细胞周期蛋白有关。     

没药甾酮对人肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响

目的研究没药甾酮对人肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响。方法以正常人肝细胞L-02作为对照,采用3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑溴盐法观察不同浓度没药甾酮（5～100μmol/L）对人肝癌细胞HepG2和L-02细胞增殖的影响并观察细胞形态的变化;应用流式细胞术检测细胞周期变化和凋亡发生。结果不同浓度没药甾酮均可显著抑制人肝癌细胞HepG2生长,并呈时间、剂量依赖性,最大抑制率可达81.9%±1.92%（100μmol/L）;没药甾酮可使G0/G1期细胞比例增多,G2/M期细胞比例下降,可将细胞阻滞于G0/G1期;没药甾酮诱导人肝癌细胞HepG2发生凋亡,50μmol/L和75μmol/L没药甾酮早期细胞凋亡率分别为24.91%±2.41%、53.03%±2.28%,与对照组相比,差异均具有统计学意义（P〈0.05）。结论没药甾酮可抑制人肝癌细胞HepG2增殖并诱导凋亡,其作用可能与干扰细胞周期有关。     

磷脂酰肌醇蛋白多糖-3对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨shRNA干预磷脂酰肌醇蛋白多糖（GPC）-3基因转录对肝癌细胞增殖和凋亡的影响。方法将GPC-3-shRNA插入pGPU6／GFP／Neo质粒,转染人肝癌tlepG2细胞,以Western Blot和荧光定量PCR分别分析GPC-3蛋白和mRNA表达;以nTr法分析HepG2细胞增殖;以流式细胞术、Annexin—V—PE／7-AAD及细胞凋亡-DNA ladder等分析细胞周期及细胞凋亡率。结果shRNA1转染HepG2细胞,GPC-3mRNA沉默效率为89．3％,与GPC-3蛋白下调一致;以shRNA转染HepG2细胞,增殖抑制率为71．1％;细胞周期阻滞在G1期,细胞凋亡率达65．6％。结论资料显示shRNA干预GPC-3基因转录,可显著抑制肝癌细胞增殖,促进肝癌细胞凋亡。     

MS-275抑制肝癌细胞HepG2增殖及其相关信号传导机制的体外实验研究

目的研究组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂MS-275诱导人肝癌细胞株HepG2细胞周期阻滞作用,并对其信号传导机制进行初步探讨。方法体外培养人肝癌细胞株HepG2;应用MTT比色法观察MS-275对HepG2的生长抑制作用,应用流式细胞仪检测MS-275对细胞周期的影响;Western印迹分析细胞周期蛋白(Cyclin)D1、p21、p-p38MAPK三种蛋白表达的差异。结果HDAC抑制剂MS-275能抑制肝癌细胞生长,具有时间和剂量的依赖性。可以引起细胞周期G0-G1期阻滞。MS-275可以使HepG2细胞p21蛋白表达提高,CyclinD1蛋白表达降低,在SB203580组两蛋白的表达又恢复到对照组水平。p-p38MAPK蛋白在两组表达均提高。结论MS-275能诱导肝癌细胞株的细胞周期阻滞,这种作用可能是通过p38MAPK信号传导途径介导的,与下调CyclinD1的表达、上调p21的表达有关。     

反义细胞周期素D1基因对肝癌细胞株HepG2的作用

目的通过基因反义封闭技术体外抑制细胞周期素D1(cyclin D1)的表达,研究其对肝癌细胞cyclin D1蛋白表达和细胞增殖的影响。方法以肝癌细胞株HepG2为研究对象,通过转染可表达cyclin D1反义互补脱氧核苷酸(AScDNA)的质粒后,观察cyclin D1反义cDNA对HepG2细胞cyclin D1基因表达及体外增殖活性的影响。结果四甲基偶氮唑盐法检测细胞增殖活性显示转染表达反义cyclin D1的质粒后, HepG2细胞的增殖受到抑制,抑制作用在48 h左右最强;逆转录聚合酶链反应检测显示cyclin D1 mRNA基因的表达明显被抑制;免疫组织化学检测结果显示cyclin D1蛋白表达明显降低; 流式细胞仪检测结果显示G0/G1期的细胞比例增高,G2+M和S期的细胞比例下降,HepG2细胞周期在G1期被阻滞。结论cyclin D1反义cDNA可以特异性的抑制肝癌HepG2细胞株cyclin D1蛋白的表达,从而调控细胞周期,抑制肝癌细胞增殖。利用cyclin D1反义cDNA进行细胞周期调控对于肝细胞癌的生物治疗具有一定的应用前景。     

牛磺酸对离体肝星状细胞增殖及凋亡的影响

目的　观察牛磺酸对肝星状细胞增殖及凋亡的影响 ,并探讨其作用的可能机制。方法　用噻唑蓝 (MTT)法检测细胞增殖 ,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡 ,丫啶噔活体染色观察细胞凋亡形态 ,免疫细胞化学结合计算机图像分析系统检测c jun、c fos表达。 结果　在 5～ 5 0mmol/L浓度范围内 ,牛磺酸能剂量依赖性地抑制肝星状细胞增殖 ,可使G0 /G1期细胞增多 ,S期细胞减少 ,并能明显抑制c jun、c fos的表达 (P <0 .0 1)。此外 ,牛磺酸尚可抑制血小板源生长因子BB对肝星状细胞的促增殖作用 ,而牛磺酸对肝星状细胞凋亡无诱导作用。结论　牛磺酸可显著抑制肝星状细胞增殖 ,使肝星状细胞阻滞于G0 ～G1期 ;牛磺酸对肝星状细胞增殖的抑制作用与其抑制c jun、c fos的表达有关 ;牛磺酸不能诱导肝星状细胞凋亡。     

马鞭草总黄酮对肝癌HepG-2细胞凋亡的影响

目的探讨马鞭草总黄酮(TFV)对肝癌Hep G-2细胞增殖和凋亡的影响。方法 MTT法检测TFV对肝癌Hep G-2细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡水平,Western印迹法检测核因子(NF)-κB p65和IκB-α蛋白表达情况。结果与阴性对照组比较,不同浓度TFV能明显抑制Hep G-2细胞的生长(P0.01),呈浓度和时间依赖性。TFV作用于Hep G-2细胞24 h后,Hep G-2 G0/G1期细胞比例下降,S期和G2/M期细胞百分率增加(P0.05),诱导细胞凋亡效果明显(P0.01),能明显的降低NF-κBp65表达,升高IκB-α蛋白表达(P0.05)。结论 TFV能抑制Hep G-2细胞的增殖,诱导细胞凋亡,机制可能与促进IκB-α蛋白表达,下调NF-κBp65蛋白表达有关。     

NS-398对HepG2细胞增殖的抑制作用及机制探讨

目的探讨氮-2,环己氧-4,硝基苯—甲基磺胺（NS-398）对肝癌细胞株HepG2细胞的生长抑制作用及其机制。方法分别用100、200、300、400μmol/L的NS-398处理HepG2细胞,用MTT法测算肿瘤细胞抑制率,流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡率,用免疫组化和Westernblot检测细胞的血管生长因子（VEGF）。结果NS-398呈剂量依赖性的方式抑制HepG2细胞增殖,并诱导其凋亡,随着NS-398浓度增大,S期细胞明显减少,有G1期细胞累积现象,其24h半数有效剂量（IC50）为300μmol/L。NS-398浓度为200μmol/L以上时HepG2细胞VEGF的表达与对照组相比,P〈0.01。结论NS-398对肝癌细胞增殖有抑制作用,并诱导其凋亡,可能与G1阻滞以及VEGF的表达受抑制有关。     

丹参素对胃癌MGC803细胞周期的影响及凋亡诱导作用

目的研究丹参素的体外抗肿瘤细胞增殖作用及其分子机制。方法 MTT法检测丹参素对人肿瘤细胞的抗增殖作用,流式细胞术检测细胞周期分布的改变及细胞凋亡,Western blot检测细胞周期素CyclinB1蛋白的表达,比色法测定Caspase-3和Caspase-6的活性。结果丹参素可诱导MGC803细胞出现G2/M期阻滞并诱导细胞凋亡。细胞中CyclinB1蛋白表达下调,Caspase-3和Caspase-6的活性显著升高。结论丹参素具有抗肿瘤细胞增殖作用,通过抑制细胞周期素CyclinB1表达诱导细胞周期阻滞和细胞凋亡。     

丹参酮ⅡA诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的机制

目的探讨中药活性单体丹参酮ⅡA对人肝癌Hep G2细胞株增殖抑制和诱导凋亡的可能机制。方法用5、10、20、30、40、50μmol/L丹参酮ⅡA处理Hep G2细胞,应用MTT法分析细胞活力,MUSE细胞分析仪、PI染色等检测细胞增殖抑制、细胞周期以及凋亡情况。免疫蛋白印迹技术检测p53、Bax及Bcl-2等凋亡相关蛋白的表达。结果 5~50μmol/L丹参酮ⅡA显著降低细胞存活率(P0.01),形态学观察可见细胞凋亡改变,细胞发生G2/M期周期阻滞。免疫印迹结果显示丹参酮ⅡA上调p53、Bax蛋白的表达,下调Bcl-2蛋白的表达。结论丹参酮ⅡA对Hep G2细胞的增殖抑制作用可能部分通过诱导细胞G2/M周期阻滞和线粒体途径凋亡实现。     

曲古霉素A对人胃癌细胞的抑制作用及其机制探讨

背景：组蛋白去乙酰基酶抑制剂（HDACi）是一类新型抗肿瘤药物。曲古霉素A（TSA）是目前研究最为广泛的HDACi之一,已发现其对多种肿瘤细胞具有明显抑制作用,但关于TSA对胃癌作用的研究尚少。目的：观察TSA对人胃癌细胞增殖、凋亡、细胞周期以及相关基因表达的影响,探讨其抑制人胃癌细胞的可能作用机制。方法：以不同浓度TSA（0—1μmol／L）处理人胃癌细胞株AGS和HGC-27。CCK-8实验检测细胞增殖抑制情况,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期,realtimeRT-PCR和蛋白质印迹法检测细胞凋亡、细胞周期相关基因mRNA和蛋白水平的表达。结果：TSA能剂量依赖性地抑制AGS、HGC-27细胞增殖（P=0．000）,对两者的半数致死浓度分别约为0．25μmol／L和0．5μmol／L。TSA能诱导AGS、HGC-27细胞发生G0／G1期和G2／M期阻滞,以G0／G11期阻滞更为明显。TSA对AGS细胞的诱导凋亡作用强于HGC-27细胞（P〈0．05）。TSA尚能上调p21、p53、BaxmRNA和蛋白表达,下调Bel-2、CDK2、cyelinD1mRNA和蛋白表达,作用均呈时间依赖性（P〈0．05）。结论：TSA抑制人胃癌细胞增殖、诱导细胞凋亡的作用可能是通过调节细胞凋亡、细胞周期相关分子、激活多种肿瘤相关信号通路实现的。     

缺氧诱导P21表达上调抑制大鼠胚胎H9C2心肌细胞增殖

目的:探讨心肌梗死条件下抑制心肌细胞增殖的机制。方法:以缺氧环境培养的大鼠胚胎H9C2细胞为模型,研究心肌梗死和梗死后心肌细胞的增殖调控机制。结果:低氧培养诱导H9C2细胞内细胞周期调控蛋白P21表达上调,发生G1期细胞周期阻滞和细胞增殖抑制;恢复正常培养,则P21表达也回归正常水平,G1期细胞周期阻滞解除,细胞增殖恢复。采用si-RNA干扰P21表达,则解除了低氧诱导的G1期细胞周期阻滞,并显著缓解了低氧诱导的细胞增殖抑制。结论:P21是低氧诱导H9C2细胞增殖抑制的关键因子,抑制P21表达能促进急性心肌梗死后心肌功能恢复。     

亚砷酸对肝癌BEL-7402细胞增殖、凋亡及其Bcl-2表达的影响

目的探讨亚砷酸（AA）对人肝癌BEL-7402细胞增殖、凋亡及其Bcl-2表达的影响。方法采用MTT比色法检测从作用后的BEL-7402细胞增殖抑制率,流式细胞术检测BEL-7402细胞周期及凋亡细胞,HE染色法观察凋亡细胞的形态,RT-PCR检测BEL．7402细胞的Bcl-2 mRNA,免疫组化法检测细胞的Bcl-2蛋白。结果1．0—8．0μmol／L的AA可使BEL-7402细胞增殖抑制率上升,能诱导BEL-7402细胞凋亡并阻滞细胞周期于S、G2／M期,呈剂量依赖性;8．0μmol／L的AA作用BEL-7402细胞48h后,细胞呈现明显的凋亡形态改变,其Bcl-2 mRNA及蛋白表达明显减弱。结论AA体外有抑制BEL-7402细胞增殖及诱导凋亡的作用,且呈时间、剂量依赖性,其作用机制可能与降低其Bcl-2表达有关。     

ERK1/2通路对Genistein与5-FU诱导的人肝癌细胞周期阻滞的影响

目的:探讨染料木黄酮(Genistein,Gen)与5氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)诱导人肝癌M H C C97-L细胞周期阻滞与细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinasesERK)1/2信号通路的关系.方法:MTS法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期;Western blot检测总ERK1/2和磷酸化ERK1/2蛋白表达.结果:Gen与5-FU单用及联用均能抑制肝癌MHCC97-L细胞增殖;Gen诱导细胞S期阻滞少量抑制ERK1/2磷酸化,ERK1/2抑制剂可促进Gen对MHCC97-L细胞的生长抑制作用,而对S期阻滞无明显影响;5-FU单用和二者联用组均阻滞S期细胞,并显著激活ERK1/2磷酸化ERK1/2抑制剂可促进两组药物对MHCC97-L细胞的生长抑制和诱导S期阻滞作用.结论:Gen与5-FU单用及联用均可通过阻滞细胞周期来发挥抗肝癌细胞增殖的作用;抑制ERK1/2通路可抵抗Gen诱导的肝癌细胞S期阻滞,而促进5-FU单用和二者联用组诱导肝癌细胞S期阻滞.     

蟾毒灵对人肝癌BEL-7402细胞增殖的影响

目的：研究蟾毒灵对人肝癌BEL-7402细胞增殖及细胞周期的影响。方法：采用MTT法观察蟾毒灵对人肝癌细胞增殖的抑制作用；光镜及透射电镜观察细胞形态及超微结构；流式细胞术分析细胞周期分布情况。结果：蟾毒灵对肝癌细胞生长抑制作用呈浓度-时间依赖性，24、48和72小时的半数抑制浓度分别为6．67、0．348和0．228μmol／L，蟾毒灵可将细胞周期阻滞于G2／M期，透射电镜观察到典型的细胞凋亡特征。结论：诱导肝癌细胞周期G2／M期阻滞可能是蟾毒灵抑制肝癌细胞增殖的机制之一。     

冬凌草甲素通过激活ATM蛋白诱导人肝癌HepG2细胞G_2/M细胞周期阻滞

目的研究冬凌草甲素诱导肝癌HepG2细胞G2/M细胞周期阻滞的机制。方法不同浓度的冬凌草甲素(16、32、64μmol/L)处理HepG2细胞48 h后,流式细胞仪检测冬凌草甲素诱导肝癌HepG2细胞的细胞周期。Western印迹检测不同浓度冬凌草甲素作用肝癌HepG2细胞后H2AX蛋白的磷酸化。免疫荧光实验检测Phos-S1981ATM和γ-H2AX焦点。结果彗星实验结果表明不同浓度的冬凌草甲素(16、32、64μmol/L)处理HepG2细胞48 h后,可发生G2/M细胞周期阻滞,并且随浓度增加细胞周期阻滞增加。Western印迹检测不同浓度冬凌草甲素作用肝癌HepG2细胞后,H2AX蛋白发生磷酸化,γ-H2AX随着浓度增加表达增大。免疫荧光实验发现Phos-S1981ATM和γ-H2AX焦点随着浓度增加表达量增加。结论冬凌草甲素可以诱导肝癌HepG2细胞G2/M细胞周期阻滞,H2AX蛋白发生磷酸化,诱导DNA损伤的发生。