MEK/ERK和PI3K/Akt通路对大鼠脉络膜新生血管中DDR2和MMP-13表达的调控作用

背景 研究表明盘状结构域受体2(DDR2)和基质金属蛋白酶-13(MMP-13)在肿瘤新生血管发生中具有重要作用,是相关疾病治疗的关键靶点,但DDR2和MMP-13在脉络膜新生血管(CNV)发生中的作用尚不清楚.目的 探讨DDR2和MMP-13在大鼠CNV中的表达特点以及MEK/ERK和PI3 K/Akt通路对DDR2及MMP-13表达的调控作用.方法 采用532 nm倍频激光视网膜光凝法制备棕色挪威(BN)大鼠CNV模型,将78只BN模型鼠按照随机数字表法分为正常对照组(n=7)、模型对照组(n=39)、PD98059(MEK1抑制剂)组(n=16)和LY294002(PI3K抑制剂)组(n=16),PD98059组和LY294002组大鼠分别于光凝后1d、7d玻璃体内注射5 mmol/L PD98059 3μl或5 mmol/L LY294002 3μl.分别于光凝前和光凝后1、3、7、14 d用过量麻醉法处死动物并制备样本和切片,采用Western blot法检测各组大鼠眼杯中ERK、p-ERK、Akt和p-Akt蛋白的表达变化,采用逆转录PCR(RT-PCR)法检测各组大鼠眼杯中DDR2 mRNA和MMP-13 mRNA的表达变化,采用组织病理学方法测定各组大鼠CNV厚度,采用免疫组织化学和免疫荧光染色法分别定位和测定大鼠CNV区域DDR2和MMP-13的表达.结果 光凝后3d,光凝局部细胞增生,光凝后7 d CNV形成,至光凝后14 d CNV趋于稳定.免疫组织化学染色结果显示,DDR2在正常大鼠视网膜血管内皮细胞层、视网膜神经节细胞(RGCs)层和内核层细胞中呈弱表达,但在CNV中呈强阳性表达;MMP-13在正常对照组大鼠视网膜内界膜层、光感受器层和巩膜层均呈强阳性表达,在模型对照组中呈强阳性表达.免疫荧光结果显示,CNV组织中DDR2和MMP-13共表达.RT-PCR结果显示,模型对照组光凝后1、3、7、14 d DDR2 mRNA相对表达水平分别为55.22±4.03、47.74±2.23、14.82±4.56和5.59±2.47,MMP-13 mRNA相对表达水平分别为25.54±3.83、43.51±4.36、10.90±4.00和5.23±3.23,与正常对照组相比,差异均有统计学意义(均P＜0.05).免疫荧光结果显示,模型对照组光凝后3、7、14 d大鼠CNV区DDR2相对荧光密度单位(RFU)值分别为2.73±0.53、5.21±0.31和3.22±0.33,MMP-13 RFU值分别为1.66±0.17、3.57±0.44和2.67±0.21,组间总体比较差异均有统计学意义(F=81.01,P＜0.05;F=40.31,P＜0.01);PD98059组和LY294002组光凝后14 d CNV区DDR2 RFU值分别为1.14±0.19和1.03±0.14,与模型对照组比较,差异均有统计学意义(均P＜0.05),MMP-13RFU值分别为1.37±0.25和1.24±0.20,与模型对照组比较,差异均有统计学意义(均P＜0.05).Western blot结果显示,模型对照组光凝后7d眼杯中p-ERK和p-Akt水平升高,与正常对照组大鼠相比差异均有统计学意义(均P＜0.05);至光凝后14 d恢复至近正常水平,与正常对照组比较差异均无统计学意义(均P＞0.05).PD98058组大鼠眼杯p-ERK水平明显下降,注射后7d、14 d PD98058组大鼠眼杯中p-ERK表达的抑制率分别为71.58％和65.21％,PD98058组7d与模型对照组7d比较、PD98058组14 d与模型对照组14 d比较,差异均有统计学意义(均P＜0.05).LY294002组大鼠眼杯中p-Akt表达水平明显下降,LY294002注射后7d、14d大鼠眼杯中p-Akt表达的抑制率分别为65.62％和67.04％,LY294002组7d与模型对照组7d比较、LY294002组14d与模型对照组14 d比较,差异均有统计学意义(均P＜0.05).各组眼杯中ERK和Akt的表达水平总体比较差异均无统计学意义(F=0.62,P＞0.05;F=0.81,P＞0.05).模型对照组、PD98059组和LY294002组光凝后14 d大鼠CNV厚度分别为(119.19±18.03)、(51.00±11.29)和(59.18±9.00) μm,总体比较差异有统计学意义(F=29.376,P＜0.05),与模型对照组比较,PD98059和LY294002注射后CNV厚度分别减少57.21％和50.34％,差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 DDR2和MMP-13在大鼠CNV中表达上调,参与CNV的形成;MEK/ERK和PI3K/Akt通路通过参与调控DDR2和MMP-13在CNV局部的表达而抑制CNV的发生和进展.     

实验性脉络膜新生血管中环氧合酶-2、血管内皮生长因子和基质金属蛋白酶-2的表达

目的研究实验性脉络膜新生血管（CNV）大鼠中环氧合酶-2（COX-2）、血管内皮生长因子（VEGF）和基质金属蛋白酶-2（MMP-2）的表达,并进一步探讨其在CNV中的作用机制及相互关系。方法应用氪红激光光凝视网膜的方法诱导制作BN大鼠的CNV模型,分别选取并制作无任何干预的对照组和实验组光凝后第3、7、14、21、30天的＂最大CNV膜＂切片,采用免疫组织化学技术检测COX-2、VEGF和MMP-2在视网膜和CNV膜中的表达。应用HPIAS-1000型高清晰度彩色病理图文分析系统测定COX-2、VEGF和MMP-2阳性染色的平均灰度值。结果 COX-2、VEGF和MMP-2在正常视网膜和脉络膜中呈弱表达,视网膜光凝后,COX-2、VEGF和MMP-2在视网膜和CNV膜中的表达在7～14 d逐渐增强,21 d时三者的表达强度均达到高峰,之后略减弱。视网膜光凝后7、14、21、30 d,实验组COX-2、VEGF和MMP-2的免疫组织化学染色平均灰度值与对照组相比差异均有统计学意义（P〈0.05）。COX-2的表达强度与VEGF和MMP-2的变化均呈正相关（r=0.967,P=0.007;r=0.966,P=0.007）。结论激光诱导的实验性CNV中COX-2、VEGF及MMP-2的表达随着时间的延长呈动态变化,CNV局部炎症诱导的COX-2表达可能是VEGF和MMP-2的上游调节因子。     

基质金属蛋白酶抑制剂GM6001干预外伤性增生性玻璃体视网膜病变的研究

目的 观察外伤性增生性玻璃体视网膜病变(tPVR)和外伤后应用GM6001的大鼠视网膜组织基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-9及基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)、TIMP-2在病程中的表达变化.评价GM6001干预tPVR的效果.设计 实验研究.研究对象 SD大鼠108只.方法 将大鼠随机分为生理盐水(实验对照)组、tPVR组和外伤后应用GM6001组.分别于外伤后1、3、7、14、21、28天(d)对各组大鼠视网膜组织MMP-2、MMP-9及TIMP-1、TIMP-2的表达进行Western印迹法检测.主要指标 大鼠视网膜组织MMP-2、MMP.9及TIMP-1、TIMP-2的表达情况.结果 Western印迹法结果显示大鼠视网膜中的MMP-2在tPVR组外伤后3、7、14、21、28 d表达显著增高;外伤后14、21、28 d,应用GM6001组MMP-2表达明显低于tPVR组.MMP-9在tPVR组各个亚组表达显著增高;外伤后1、3、7、14、21 d,应用GM6001组与tPVR组比较,MMP-9表达明显降低.tPVR组大鼠视网膜中的MMP-2/TIMP-2比值在14、21、28 d增高,在外伤后应用GM6001组明显低于tPVR组.MMP-9/TIWP-1比值在tPVR组各个亚组均增高,在外伤后应用GM6001组均明显低于tPVR组.结论 MMP-2与TIMP-2、MMP-9与TIMP-1失衡参与了tPVR发生发展的病理过程,GM6001可促进其动态平衡重新建立,在干预tPVR的发生发展中起重要作用.     

塞来昔布与羊膜匀浆提取液对兔角膜热烧伤后角膜新生血管面积及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响

目的 比较塞来昔布与羊膜匀浆提取液对兔角膜热烧伤后角膜新生血管(comeal neovascularization,CNV)面积及基质金属蛋白酶-2(matrix metallo-proteinase-2,MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)表达的影响,为临床上塞来昔布治疗CNV提供理论依据.方法 建立36只兔角膜热烧伤动物模型,随机分为3组:阴性对照组、羊膜匀浆提取液组、塞来昔布组,每组12只,8只用于观察,4只用于取材.各组兔均于造模后第1天开始球结膜下注射,至造模后第14天;阴性对照组注入90g· L-1生理盐水0.1 mL,羊膜匀浆提取液组注入羊膜匀浆提取液0.1 mL,塞来昔布组注入8 mg·mL-塞来昔布溶液0.1 mL.对比热烧伤后4d、7d、14 d在裂隙灯显微镜下所观察到的各组角膜的组织形态及新生血管的生长状况,并测算CNV面积;各组均于热烧伤后第7天随机取4只兔完整角膜,行免疫组织化学染色并用计算机图像分析系统检测MMP-2、MMP-9的表达.结果 角膜热烧伤后第4天,阴性对照组、羊膜匀浆提取液组、塞来昔布组都可见不同程度的角膜水肿,角膜缘血管充血扩张,新生的小血管芽呈毛刷状,垂直角膜缘切线向内生长.热烧伤后4d、7d、14 d,CNV面积阴性对照组为(11.32±1.11)mm2、(38.49±4.64)mm2、(43.30±4.39) mm2;羊膜匀浆提取液组为(9.69±1.30) mm2、(31.15±4.85) mm2、(37.19±5.27) mm2;塞来昔布组为(8.47±1.20) mm2、(30.31±4.93) mm2、(36.69±3.54)mm2.热烧伤后4d、7d、14 d,阴性对照组的CNV面积均明显大于羊膜匀浆提取液组和塞来昔布组,差异均有统计学意义(均为P＜0.05);羊膜匀浆提取液组的CNV面积与塞来昔布组相比,差异均无统计学意义(均为P＞0.05).热烧伤后第7天MMP-2和MMP-9表达阴性对照组大于羊膜匀浆提取液组和塞来昔布组,差异均有统计学意义(均为P ＜0.05);羊膜匀浆提取液组与塞来昔布组相比,差异均无统计学意义(均为P ＞0.05).结论 塞来昔布与羊膜匀浆提取液均能有效抑制角膜热烧伤后新生血管的生长,可能与其抑制MMP-2、MMP-9在热烧伤后角膜中的表达有关.     

羊膜移植对大鼠角膜碱烧伤后基质金属蛋白酶的影响

目的探讨羊膜移植对大鼠角膜中度碱烧伤后角膜上皮细胞和基质成纤维细胞中基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase，MMP)变化的影响。方法将12只SD大鼠随机分成2组，每组6只，分别作为碱烧伤后1d组和14d组。在2组中，所有大鼠角膜建立中度碱烧伤模型，左眼行羊膜移植，右眼作为对照。应用免疫组化法，分别观察碱烧伤后1d和14d实验组与对照组中MMP-9和MMP-2表达的变化。结果碱烧伤后1d，实验组与对照组中，角膜上皮细胞内的MMP-9和MMP-2的表达与正常角膜上皮细胞内的MMP-9和MMP-2的表达相比明显升高，但两组间的表达差异无显著性；而2组成纤维细胞内的MMP-9和MMP-2的表达与正常成纤维细胞内的MMP-9和MMP-2的表达相比明显升高，两组间的表达差异无显著性。碱烧伤后14d，2组中角膜上皮细胞内的MMP-9和MMP-2的表达与碱烧伤后1d情况相似，两组间的表达差异无显著性；2组成纤维细胞内的MMP-9和MMP-2的表达与碱烧伤后1d组相比明显升高，并且实验组中的MMP-9和MMP-2的表达与对照组相比也有明显升高。结论碱烧伤后大鼠角膜上皮细胞和基质成纤维细胞中的MMP-9和MMP-2的表达都有升高。羊膜移植能增强MMP-9和MMP-2在成纤维细胞中的表达，提示羊膜在加快角膜碱烧伤后的重塑中起一定作用。     

脉络膜新生血管小鼠微小RNA对骨髓来源细胞表达基质金属蛋白酶的调控作用

背景 基质金属蛋白酶-2(MMP-2)/MMP-13在脉络膜新生血管(CNV)生成过程中发挥重要作用,但CNV原位细胞中MMP-2/MMP-13的表达有限.骨髓来源细胞(BMCs)参与CNV生成,可能是CNV中MMP-2/MMP-13的重要来源,而微小RNA188-5p(miR188-5p)可能是调控BMCs表达MMP-2/MMP-13的关键节点. 目的 探讨参与CNV生成的BMCs表达MMP-2/MMP-13的情况及BMCs表达的MMP-2/MMP-13是否受miR188-5p调控.方法 将表达绿色荧光蛋白(GFP)的转基因雌性小鼠的骨髓细胞移植到野生型雌性C57BL/6J小鼠以建立C57BL/6J.GFP嵌合体小鼠模型,流式细胞术检测嵌合度大于85％的42只小鼠纳入实验作为实验组,未进行骨髓细胞移植的野生型雌性C57BL/6J小鼠作为对照组.两组小鼠均以视网膜激光光凝法诱导CNV,两个组分别于光凝前及光凝后第1、3、5、7、10、14、28天各取3只小鼠分离视网膜脉络膜组织,采用ELISA法检测小鼠视网膜脉络膜组织匀浆中MMP-2/MMP-13质量浓度的变化;采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测上述时间点小鼠视网膜脉络膜组织中miR188-5p mRNA的相对表达量变化;采用免疫荧光染色和原位杂交技术观察上述时间点小鼠CNV区GFP阳性细胞中MMP-2/MMP-13和miR188-5p的表达情况,并进行定量分析.结果 实验组C57BL/6J.GFP嵌合体模型小鼠外周血单核细胞中表达GFP细胞所占比例平均为(90.67±3.02)％,符合实验要求.ELISA检测显示,对照组与实验组小鼠视网膜脉络膜匀浆中MMP-2/MMP-13的表达趋势一致,总体比较差异均无统计学意义(MMP-2:F=0.060,P=0.810;MMP-13:F=0.012,P=0.915).ELISA和免疫荧光均显示在诱导CNV后1d,实验组和对照组MMP-2表达均快速增加,3d时表达量最高,实验组占总表达量的64.21％,随后两组MMP-2表达均下降.两组MMP-13表达量在诱导CNV后1d缓慢增加,7d时表达量最高,实验组占总表达量的79.61％,随后MMP-13总体表达下降.靶基因预测结果可显示MMP-2和MMP-13的3'非编码区有miR188-5p的互补结合位点.RT-qPCR和原位杂交检测结果均显示在诱导CNV后1d,视网膜脉络膜中miR188-5p表达量快速下降,7d时表达量最低.小鼠CNV区BMCs中miR188-5p的动态表达与BMCs中MMP-13的动态表达呈负相关(r=-0.868,P＜0.05);CNV诱导后5d内BMCs中miR188-5p的动态表达与BMCs中MMP-2的动态表达呈负相关(r=-0.997,P＜0.05). 结论 在激光诱导的小鼠CNV模型中,MMP-2/MMP-13的表达随时间发生动态变化,BMCs对其表达的迅速上调起主要作用.CNV区BMCs中miR188-5p表达随时间变化的趋势与MMP-13相反,与在CNV形成早期MMP-2表达趋势相反.miR188-5p的调控靶基因是MMP-2/MMP-13,提示BMCs的MMP-2/MMP-13表达可能受miR188-5p调控.     

CD147在激光诱导的大鼠脉络膜新生血管中的表达

背景 脉络膜新生血管(CNV)是眼底多种疾病的共有病理改变,是造成中心视力严重损害的主要原因之一.基质金属蛋白酶(MMPs)诱导因子CD147能通过旁分泌作用刺激多种细胞MMPs表达,降解细胞间质和基底膜成分,具有促进血管新生作用. 目的 通过建立激光诱导的棕色挪威(BN)大鼠CNV动物模型,观察CD147和血管内皮生长因子(VEGF)在CNV形成过程中的动态表达. 方法 将30只清洁级BN大鼠按照随机数字表法分为正常对照组6只和激光光凝组24只,于光凝后1、7、14和21d通过荧光素眼底血管造影(FFA)观察CNV形成;采用Western blot法分别检测正常对照组和激光光凝后1、7、14和21 d组大鼠视网膜色素上皮(RPE)-脉络膜-巩膜复合物中CD147蛋白相对表达水平的变化;采用ELISA法检测各组大鼠玻璃体腔内VEGF质量浓度变化. 结果 FFA检查显示,激光光凝后7d开始出现盘状荧光素渗漏,激光光凝后14d形成CNV.正常对照组激光光凝前,光凝后1、7、14和21d,大鼠RPE-脉络膜-巩膜复合物中CD147蛋白的相对表达量分别为1.00±0.43、0.97±0.53、0.99±0.45、1.56±0.67和2.27±0.54,玻璃体腔内VEGF质量浓度分别为(72.96±29.95)、(79.36±10.46)、(103.82±32.94)、(166.05±21.54)和(195.64±39.90) pg/ml,总体比较差异均有统计学意义(CD147:F=10.95,P＜0.01;VEGF:F=304.50,P＜0.01);激光光凝后14 d和21 d,大鼠CD147蛋白和VEGF的相对表达量均较正常对照组明显升高,差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 CD147在激光诱导的大鼠CNV中进行性升高,与VEGF的表达趋势一致,CD147可能参与CNV的早期形成,在眼部血管新生中发挥重要作用.     

促红细胞生成素对光损伤后视网膜色素上皮层基质金属蛋白酶表达的影响

背景 近年来,随着眼科光学诊疗器械和显微手术应用的增多,各种器械的光源所导致的视网膜损伤等问题倍受关注,研究视网膜光损伤可为临床治疗相关疾病提供参考. 目的 研究小鼠光损伤后视网膜色素上皮(RPE)层基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9表达的变化,探讨促红细胞生成素(EPO)对小鼠视网膜光损伤的治疗作用及其相关机制.方法 将52只SPF级BALB/c小鼠采用抽签法随机分为正常对照组4只、单纯光照组24只和EPO预处理组24只,后两组小鼠在自制光照箱内用6000 lx弥散白光照射4h以建立光损伤动物模型.单纯光照组接受6000 lx白光照射4h,EPO预处理组小鼠腹腔注射rhEPO 5000 U/kg(商品单位)后,接受6000 lx白光照射4h.光照后6、12、36、72、96 h和7d采用免疫组织化学法检测各组小鼠RPE中MMP-2和MMP-9的表达.结果 单纯光照组小鼠视网膜组织病理学改变出现早且明显,光照后RPE细胞出现不同程度的水肿和结构紊乱,且随着光照后时间的延长,形态异常的细胞数增加,但EPO预处理组在光照后7d未发现类似改变.免疫组织化学法检测显示,正常BALB/c小鼠RPE层MMP-2低表达,单纯光照36 h后,RPE层可观察到大量MMP-2阳性表达细胞,但同一时间点EPO预处理组阳性表达量(A值)明显下降.3个组和不同时间点MMP-2的表达量差异均有统计学意义(F分组=3.68,P=0.04;F时间=9.13,P=0.00).MMP-9免疫组织化学法检测显示,正常RPE层中未见MMP-9的阳性表达,单纯光照6h后,MMP-9开始表达,12h时达高峰并维持高表达状态,96 h后表达量开始下降;EPO预处理组MMP-9表达趋势同单纯光照组,但各时间点MMP-9的表达量均较单纯光照组减少.3个组和不同时间点MMP-9的表达差异均有统计学意义(F分组=3.61,P=0.04;F时间=16.91,P=0.00). 结论 MMP-2、MMP-9在视网膜光损伤过程中发挥着重要作用,推测EPO可能通过抑制MMP-2、MMP-9的表达发挥对视网膜的保护作用.     

基质金属蛋白酶-2、基质金属蛋白酶-9和血管内皮生长因子在视网膜母细胞瘤中的表达及意义

目的:研究基质金属蛋白酶-2(Matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(Matrix metalloproteinase-9,MMP-9)和血管内皮生长因子(Vascular endothehal growth factor,VEGF)在视网膜母细胞瘤(Retinoblastoma,RB)中的表达及其与RB分化程度和视神经浸润的关系,探讨它们在RB浸润、转移过程中的作用和临床意义.方法:采用免疫组化方法检测40例RB中MMP-2、MMP-9和VEGF的表达.结果:40例RB中MMP-2、MMP-9和VEGF的阳性表达率分别为52.5%、57.5%和72.5%.未分化型RB中MMP-2、MMP-9和VEGF的阳性表达均高于分化型(P＜0.05);有视神经浸润的RB中MMP-2、MMP-9和VEGF的阳性水平均高于无视神经浸润的RB(P＜0.05).RB中MMP-2、MMP-9和VEGF的表达呈正相关关系(P＜0.05).结论:RB中MMP-2、MMP-9和VEGF高表达与RB的浸润和转移相关,且MMP-2、MMP-9表达与VEGF表达存在相关性.联合检测MMP-2、MMP-9和VEGF的表达可作为反映RB浸润、转移潜能的生物学指标,有助于筛选转移高危病例及评价患者预后.     

凉血化瘀中药与曲安奈德对脉络膜新生血管动物模型中MMP-9及TIMP-2表达的影响

目的:评价凉血化瘀中药及曲安奈德对氪激光诱导BN大鼠脉络膜新生血管(choroidal neovascularization CNV)中基质金属蛋白酶MMP-9和基质金属蛋白酶抑制剂TIMP-2表达的影响。方法:659nm激光诱导BN大鼠CNV模型,随机分成空白对照组(每日生理盐水灌胃)、中药组(每日中药灌胃)和曲安奈德组(激光后1d玻璃体腔注射曲安奈德5μL,0.2mg)各16只。分别在光凝后7,14,21,28d随机选取4只大鼠处死,摘除眼球,行病理切片及免疫组织化学检测MMP-9及TIMP-2蛋白在CNV组织中的表达。结果:空白对照组在光凝后7dMMP-9达到高峰,此后逐渐下降;中药组在光凝后14d达到高峰,但峰值低于空白对照组,此后逐渐下降;曲安奈德组在光凝后7d达到高峰,峰值介于空白对照组和中药组之间,此后逐渐下降,在14～21d出现平台期。空白对照组在光凝后14dTIMP-2达到高峰,此后逐渐下降;中药组在光凝后14d达到高峰,峰值高于空白对照组,此后逐渐下降;曲安奈德组在光凝后14d达到高峰,峰值介于空白对照组和中药组之间,此后下降。结论:在下调MMP-9、上调TIMP-2的表达进而抑制CNV形成方面,凉血化瘀中药的作用强于曲安奈德。     

MMP-2和MMP-9在视网膜母细胞瘤中的表达及意义

目的探讨视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,Rb)中基质金属蛋白酶-2(matrixmetalloproteinase-2,MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的表达及其与临床病程的关系。方法应用免疫组织化学SP法检测41例Rb组织中MMP-2和MMP-9的表达;用HMIAS-2000型全自动医学彩色图像分析系统测量其平均光密度值。统计学方法比较不同临床和病理阶段Rb表达MMP-2和MMP-9的差异。结果在41例Rb组织切片中均有MMP-2和MMP-9的表达。有视神经浸润的肿瘤MMP-2和MMP-9表达水平明显高于无视神经浸润的肿瘤(P<0.01),处于眼外期的肿瘤MMP-2和MMP-9的表达水平明显高于眼内期和青光眼期的肿瘤(P<0.01)。结论Rb细胞内有MMP-2和MMP-9的表达。MMP-2和MMP-9的表达水平与视神经浸润和临床分期存在密切的关系,提示其表达水平与该肿瘤的浸润与发展有关。     

Expression of MMP-2 and MMP-9 in retinoblastoma and their significance

AIM: To investigate the expression of matrix metallopr- oteinase-2 (MMP-2) and matrix metalloproteinase-9 (MMP-9) in retinoblastoma (Rb), and their relationships with tumor development stage. METHODS: Immunohistochemical technique was used to detect the expression of MMP-2 and MMP-9 in 41 cases of paraffin embedded Rb samples. Quantitative analysis of the expression of MMP-2 and MMP-9 was assessed by HMIAS-2000 Color Pathologic Analysis System. The differences of the expression of MMP-2 and MMP-9 in each clinical and pathological stage were analyzed statistically. RESULTS: In all the 41 Rb specimens, MMP-2 and MMP-9 expression was found in tumor cells. The expression of MMP-2 and MMP-9 was significantly higher in tumors with optic nerve invasion than in tumors without optic nerve invasion (P <0.05); the expression of MMP-2 and MMP-9 was significantly higher in tumors of extra-ocular stage than in tumors of glaucomatous stage or intra-ocular stage(P<0.05). CONCLUSION: MMP-2 and MMP-9 exist in retinoblastoma cells. The level of MMP-2 and MMP-9 is related to optic nerve invasion and clinical stage of Rb, which suggests the expression of MMP-2 and MMP-9 could be connected to the invasion and development of tumor cells. Further research is needed for deeper understanding of the biological behavior and better evaluation of the prognosis of Rb.     

MMP-2和MMP-14在视网膜母细胞瘤中的表达及意义

目的:探讨视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,Rb)中基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和MMP-14的表达及其与临床病程的关系。方法:应用免疫组织化学SP法检测50例Rb组织中MMP-2和MMP-14的表达;用HMIAS-2000型全自动医学彩色图像分析系统测量其平均光密度值。统计学方法比较不同临床和病理阶段Rb表达MMP-2和MMP-14的差异。结果:患者50例Rb组织切片中MMP-2阳性表达38例,占76%;MMP-14的阳性表达41例,占82%;有视神经浸润的肿瘤MMP-2和MMP-14表达水平明显高于无视神经浸润的肿瘤(P<0.01),处于眼外期的肿瘤MMP-2和MMP-14的表达水平明显高于眼内期和青光眼期的肿瘤(P<0.01);Rb中MMP-2和MMP-14的阳性表达水平呈密切相关(P<0.01)。结论:MMP-2和MMP-14的表达水平与视神经浸润和临床分期存在密切的关系,提示其表达水平与该肿瘤的浸润与发展有关。     

MMP-9、TIMP-3在小鼠脉络膜新生血管形成中的作用(英文)

目的:研究MMP-9及TIMP-3 mRNA在实验性小鼠CNV形成过程中的表达,探讨二者在CNV发生机制中的作用。方法:使用半导体二极管激光器(810nm)对C57BL/6J小鼠视网膜进行照射(120mW,75μm,0.1s)以诱导CNV形成,分别于激光后1,3d;1,2,4wk取出眼球,采用原位杂交技术及图象分析对MM-9、TIMP-3 mRNA的表达情况进行检测。结果:MMP-9、TIMP-3 mRNA表达在CNV形成过程中均有一动态过程,MMP-9 mRNA水平1,2,4wk>3d>1d(P<0.05),而TIMP-3mRNA表达3d;1,2,4wk>1d(P<0.05)。结论:MMP-9与TIMP-3 mRNA表达变化的失衡促使基质降解作用的发挥,在CNV的形成中可能发挥了一定作用。     

外源性视黄酸对鸡后巩膜基质MMP-2/TIMP-2表达作用的动态观察

目的探讨外源性视黄酸(RA)对小鸡后极部巩膜基质MMP-2表达的作用。方法新孵化来亨鸡90只随机分为三组,实验组右眼球后注射RA,隔日1次;左眼为自身对照;阴性对照组右眼球后注射生理盐水;正常对照组不做任何处理。于4、8、14 d时各组取10只测量眼轴和屈光度后摘取眼球,采用一步法逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR法)检测每组小鸡后极部巩膜MMP-2与TIMP-2 mRNA转录水平。结果实验组眼轴明显延长,屈光度增加,后极部巩膜MMP-2 mRNA转录明显增高,与正常组与阴性对照组比较,差异有显著性统计学意义(P<0.01)。注射后随时间延长眼轴及屈光度逐渐增加,组内不同时间差异有显著性统计学意义(P<0.01),MMP-2 mRNA转录上调,组内不同时间差异无显著性统计学意义(P>0.05)。TIMP-2 mRNA转录与之相反。自身对照组眼轴及屈光度均有增加,MMP-2 mRNA转录较同龄正常对照组有轻度上调,TIMP-2有下调,与正常组与阴性对照组比较,差异有显著性统计学意义(P<0.01)。结论外源性RA能够调节巩膜MMP-2/TIMP-2的转录,并可能通过这一途径促进眼轴及屈光度的增加。     

The role of MMP-9 and TIMP-3 in induction of choroidal neovascularization in a murine model

AIM: To examine the expression of MMP-9 and TIMP-3 mRNA during choroidal neovascularization (CNV) in a murine model and to investigate the role of them in the development of CNV. METHODS: CNV was induced in C57BL/6J mice by intensive diode laser (810nm) photocoagulation (120mW, 75μm, 0.1s) of the fundus whereafter eyes were enucleated at 1, 3days, 1, 2, and 4 weeks. The MMP-9 and TIMP-3 mRNA expressions were analyzed using in situ hybridization and image analysis system. RESULTS: Both expression of MMP-9 and TIMP-3 mRNA had dynamic changes. For MMP-9, the expression was 1, 2, 4 wk>3d>1d (P <0.05), whereas TIMP-3 mRNA, 3d, 1, 2, 4 wk>1d (P <0.05). CONCLUSION: The imbalance between the changes of MMP-9 and TIMP-3 may accelerate the degrading of extracelluar matrix, and then be involved in the pathogenesis of CNV.     

小鸡形觉剥夺性近视眼后极部巩膜MMP-2与TIMP-2 mRNA表达的动态变化

目的　探讨小鸡形觉剥夺性近视眼 (form deprivationmyopia,FDM )后极部巩膜基质金属蛋白酶 2 (matrixmetalloproteinase 2 ,MMP 2 )及其特异性组织抑制剂 (tissuein hibitorofmatrixmetalloproteinase 2 ,TIMP 2 )mRNA表达的时间动态性变化。方法　 5 0只 1d龄来亨雏鸡以半透明眼罩分别遮盖右眼 4、7、14、2 1、30d制备FDM动物模型 ,每组10只 ,未遮盖眼为自身对照眼 ,并随机选取同数目同龄小鸡作为正常对照眼。实验前及预定实验时间进行视网膜检影验光和眼轴长度测量。摘除眼球 ,提取后极部巩膜总RNA ,采用一步法逆转录 聚合酶链反应检测每组小鸡后极部巩膜MMP 2、TIMP 2mRNA表达水平。结果　与正常组、自身对照组相比 ,FDM后极部巩膜MMP 2mRNA显著增高 ,TIMP 2mRNA表达明显降低 ,组间差异非常显著 (P <0 .0 1)。随遮盖时间延长 ,MMP 2mRNA表达逐渐上调 ,7～ 2 1d达最高峰 ,以后轻度下降 ,但仍维持于一较高水平 ,不同遮盖时间组间差异显著 (P <0 .0 1) ,而TIMP 2mRNA表达与之相反。自身对照组MMP 2mRNA表达较同龄正常对照组有轻度上调趋势 ,TIMP 2有下调趋势 ,但组间均无统计学差异 (P >0 0 5 )。结论　MMP 2 /TIMP 2之间动态平衡失调极可能是启动小鸡FDM巩膜细胞外基质早期主动重塑的关键     

MMP-9、TIMP-3在小鼠脉络膜新生血管形成中的作用

目的：研究MMP-9及TIMP-3 mRNA在实验性小鼠CNV形成过程中的表达,探讨二者在CNV发生机制中的作用。 方法：使用半导体二极管激光器（810nm）对C57BL/6J小鼠视网膜进行照射（120mW,75μm,0.1s）以诱导CNV形成,分别于激光后1,3d;1,2,4wk取出眼球,采用原位杂交技术及图象分析对MM-9、TIMP-3 mRNA的表达情况进行检测。 结果：MMP-9、TIMP-3 mRNA表达在CNV形成过程中均有一动态过程,MMP-9 mRNA水平1,2,4wk〉3d〉1d（P〈0.05）,而TIMP-3mRNA表达3d;1,2,4wk〉1d（P〈0.05）。 结论：MMP-9与TIMP-3 mRNA表达变化的失衡促使基质降解作用的发挥,在CNV的形成中可能发挥了一定作用。     

MMP-2和VEGF在视网膜新生血管的表达

目的检测基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinases-2,MMP-2)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF)在视网膜新生血管中的表达,探讨两者的相互关系。方法 取7 d龄C57BL/6J小鼠40只,随机分为高氧组和对照组,每组各20只。建立高氧诱导的视网膜新生血管小鼠模型。采用ADP酶组织化学染色、HE染色和免疫组化方法分别观察2组视网膜血管的变化、计数突破视网膜内界膜的内皮细胞核数目和检测MMP-2、VEGF的表达。结果 高氧组视网膜铺片可见大量视网膜新生血管形成,对照组未见新生血管形成;高氧组突破视网膜内界膜内皮细胞核数目为14(14.230±5.388),与对照组数目0(0.110±0.386)相比差异有统计学意义(t=23.537,P<0.001);对照组和高氧组视网膜组织中VEGF的积分光密度值分别为36.81±14.60、60.85±24.55,差异有统计学意义(t=3.348,P<0.01);对照组和高氧组视网膜组织中MMP-2的积分光密度值分别为16.33±4.13、21.12±6.29,差异有统计学意义(t=3.160,P<0.01)。高氧组视网膜组织中MMP-2和VEGF的表达呈正相关(r=0.633,P<0.01)。结论 在ROP小鼠模型的视网膜组织中,VEGF、MMP-2的表达同步升高,二者的高表达可能与视网膜新生血管形成密切相关。     

高渗透压对人角膜上皮细胞MMP-9的上调作用

目的 评价人上皮细胞中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)对高渗透压反应的表达特性。方法 在正常渗透压的培养液中培养人角膜上皮细胞，然后在4组细胞培养液中分别加入40、60、80和100 mmol／L的NaCl，使培养液渗透压达到400～500 mOsm，运用酶图法和ELISA法测定加入高渗剂24 h后的培养液中MMP-9的质量浓度。结果 不同渗透压组MMP-9的质量浓度有显著差异，培养液渗透压越高，MMP-9的质量浓度也就越高。结论 高渗透压反应性刺激人角膜上皮细胞MMP-9的表达和产物。证实了眼表高渗透压是干眼症导致眼表面炎症的发病机制。