饮水氯化消毒副产物MX对人胚肝细胞(L-02)的DNA损伤及凋亡作用

目的　研究饮水氯化消毒副产物 3 氯 4 二氯甲基 5 羟基 2 (5氢 ) 呋喃酮 (MX)致人胚肝细胞 (L 0 2 )DNA损伤及凋亡作用。方法　以L 0 2为靶细胞 ,采用单细胞凝胶电泳技术 (SCGE)和流式细胞术 (FCM)分别检测MX致L 0 2细胞DNA损伤及凋亡作用。结果　随着MX浓度的增加 ,L 0 2细胞DNA链断裂逐渐增加 ,且 10 0和 30 0 μmol L剂量组与溶剂对照组相比具有统计学显著性差异 (P <0 0 5 ,P <0 0 1) ;MX各剂量组均引起L 0 2细胞凋亡率明显增加 ,与溶剂对照组相比具有统计学显著性差异 (P <0 0 0 1)。结论　饮水氯化消毒副产物MX可致L 0 2细胞DNA单链断裂和凋亡     

肺癌化疗前后p53表达和细胞凋亡的变化

目的　探讨化疗对肺癌细胞凋亡、p5 3蛋白表达的影响。方法　收集实验组 14例肺癌病人化疗前后标本和对照组术前未作化疗肺癌标本 2 8例 ,采用免疫组化法检测p5 3蛋白表达 ,采用TUNEL法检测细胞凋亡 ,并作化疗前后的比较。结果　对照组和实验组在化疗前后p5 3阳性表达无显著差异 (P >0 0 5 ) ,而化疗后凋亡指数明显升高 (P <0 0 1)。结论　化疗可诱发肺癌细胞凋亡 ,但对p5 3蛋白表达没有影响     

氟化钠对人成骨肉瘤Saos-2细胞PI3K/Akt信号表达及凋亡的影响

目的观察氟化钠(NaF)对人成骨肉瘤Saos-2细胞磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号表达及凋亡的影响。方法采用成组设计,按NaF剂量将Saos-2细胞分为0(对照)、5、10、20、40 mg/L染氟组(n=3)。体外培养24、48 h后收集细胞,采用蛋白免疫印迹(Western blot)法检测PI3K、Akt和线粒体凋亡途径相关分子Forkhead转录因子(FoxO)1的蛋白表达,采用流式细胞仪检测Saos-2细胞的凋亡水平。结果体外培养24、48 h时,各组Saos-2细胞PI3K、Akt蛋白表达比较,差异均无统计学意义(P均>0.05)。24 h时,5、10、20、40 mg/L染氟组磷酸化PI3K(p-PI3K)蛋白表达(0.40±0.06、0.45±0.02、0.37±0.06、0.32±0.06)均高于对照组(0.28±0.04,P均<0.05);48 h时,5、10 mg/L染氟组p-PI3K蛋白表达(0.46±0.06、0.58±0.03)均高于对照组(0.29±0.04,P均<0.05),而40 mg/L染氟组(0.21±0.03)低于对照组(P<0.05)。24 h时,5、10、20 mg/L染氟组磷酸化Akt(p-Akt)蛋白表达(0.27±0.01、0.30±0.03、0.27±0.03)均高于对照组(0.20±0.02,P均<0.05);48 h时,5、10 mg/L染氟组p-Akt蛋白表达(0.42±0.04、0.60±0.02)均高于对照组(0.27±0.01,P均<0.05),而40 mg/L组(0.18±0.02)低于对照组(P<0.05)。24 h时,10、20、40 mg/L染氟组FoxO1蛋白表达(0.38±0.07、0.41±0.06、0.47±0.08)均高于对照组(0.34±0.04,P均<0.05);48 h时,5、10、20、40 mg/L染氟组FoxO1蛋白表达(0.36±0.08、0.37±0.10、0.54±0.04、0.73±0.04)均高于对照组(0.28±0.04,P均<0.05)。24、48 h时,对照组和5、10、20、40 mg/L染氟组细胞凋亡率分别为(2.867±0.583)%、(3.647±0.035)%、(3.773±0.095)%、(5.440±0.325)%、(7.203±0.476)%,(3.707±0.286)%、(4.023±0.241)%、(4.970±0.368)%、(12.473±0.949)%、(19.387±1.892)%。24 h时,40 mg/L染氟组凋亡水平高于对照组(P<0.05);48 h时,20、40 mg/L染氟组凋亡水平均高于对照组(P均<0.05)。结论氟可以直接激活成骨细胞内的PI3K/Akt信号通路,进而产生抗凋亡作用。     

肝细胞癌化疗栓塞后p53蛋白表达及意义

目的　评价肝细胞癌p5 3蛋白表达在经导管动脉化疗栓塞 (transcatheterarterialchemoembolization ,TACE)中的作用。方法　经手术病理证实的肝细胞癌 13 6例 ,其中行 1～ 5次TACE后Ⅱ期手术切除 79例 (TACE组 ) ,按治疗方式不同分 4组 ,A组 ,仅灌注化疗药物 11例 ,治疗 1～ 4次 ;B组 ,化疗药加碘化油栓塞 3 3例 ,治疗 1～ 5次 ;C组 ,化疗药加碘化油加明胶海绵颗粒栓塞 2 3例 ,治疗 1～ 3次 ;D组 ,化疗药加碘化油、无水乙醇、明胶海绵颗粒栓塞 12例 ,治疗 1～ 3次。单纯手术 5 7例 (非TACE组 )。用TUNEL法检测AI ,用免疫组化检测各标本Bcl -2 ,Bax ,p5 3 ,Ki-67和PCNA蛋白表达。结果　梁索型、透明细胞型p5 3蛋白表达显著低于假腺样型、实体型、低分化或未分化型、硬化型 ( P <0 0 5 ) ;随着病理分级的增高 ,p5 3蛋白表达也逐渐增多 ( P <0 0 5 ) ;p5 3蛋白表达与PCNA和Ki-67蛋白表达显著正相关 (P <0 0 5 ) ,与AI ,Bcl-2 /Bax蛋白表达率显著负相关 (P <0 0 5 )。p5 3蛋白表达A组显著高于B、C、D组和单纯手术组 ;B组显著高于C和D组 ;D组显著低于单纯手术组 (P <0 0 5 )。结论　在肝细胞癌化疗栓塞中p5 3蛋白表达起增强癌细胞增殖、抑制细胞凋亡的作用     

氟对大鼠脑细胞DNA的损伤及诱导凋亡的作用

目的　探讨氟对大鼠脑细胞DNA的损伤作用及诱导凋亡的作用。方法　体内试验中 ,对照组大鼠腹腔注射蒸馏水 ,氟组大鼠注射氟化钠 ,染毒剂量为 2 0mg·kg- 1 ·d- 1 ;体外试验中 ,采用 5mmol/L氟化钠对急性分离的大脑神经细胞染毒 2h后用单细胞凝胶电泳技术 (SCGE)研究氟对细胞DNA的损伤 (单链断裂 )。采用TUNEL法和流式细胞术 (FCM)检测细胞凋亡。结果　体内试验氟组大鼠大脑皮层神经细胞DNA损伤情况明显比对照组严重 ,Ridit值分别为 0 351和 0 639,体外试验对照组与氟组Ridit值分别为 0 650 1和 0 3844。TUNEL阳性细胞在氟组大鼠大脑皮层、海马及小脑颗粒细胞层均可见到 ,在对照组大鼠则很罕见。流式细胞术检测结果表明大脑皮层及海马神经细胞凋亡百分率氟组 (2 7 1 2± 3 0 8,34 97± 5 46)均高于对照组 (4 63± 0 98,5 35± 0 79) ,差异有极显著性意义。结论　氟化钠可引起大鼠脑细胞DNA损伤和细胞凋亡发生     

姜黄素增强紫杉醇诱导HeLa细胞凋亡的作用及机制研究

目的探讨姜黄素对紫杉醇诱导He La细胞凋亡的影响及其相关机制。方法将He La细胞分为对照组(未加任何药物刺激)、紫杉醇组(10μM)、姜黄素(5μM)+紫杉醇(10μM)组,噻唑蓝(MTT)法检测He La细胞活力,Annexin VFITC/PI法检测细胞凋亡,Western blot检测p53、Cleaved caspase-3及NF-κB信号通路激活情况。结果与对照组比较,紫杉醇组细胞活力降低(P0. 01),细胞凋亡率提高(P0. 01),p53和Cleaved caspase-3蛋白表达显著增加(P0. 01),IκB-α蛋白和NF-κB p65磷酸化水平显著降低(P0. 01);与紫杉醇组比较,姜黄素+紫杉醇组细胞活力降低(P0. 01),细胞凋亡率提高(P0. 01),p53和Cleaved caspase-3蛋白表达显著增加(P0. 01),IκB-α蛋白和NF-κB p65磷酸化水平显著降低(P0. 01)。结论黄素增强紫杉醇诱导宫颈癌He La细胞凋亡的作用,该过程可能通过NF-κB信号通路的进一步抑制,并增强其下游蛋白Cleaved caspase-3及p53的表达实现。     

硒拮抗氟对人肝细胞DNA损伤及凋亡的影响

目的　研究氟、硒对离体人肝细胞DNA损伤及凋亡的作用。方法　体外培养的人肝细胞分别接触一定剂量的氟和 /或硒 12h后 ,检测肝细胞DNA的损伤率、凋亡率和细胞周期构成比。结果　氟组肝细胞DNA损伤率、凋亡率和S期细胞数均明显高于对照组和氟 硒组 (P <0 0 5) ,硒组DNA损伤率和凋亡小体育分率均高于对照组 ,但无显著性差异 (P >0 0 5)。结论　一定剂量的硒可拮抗氟对离体人肝细胞DNA损伤及诱导的肝细胞凋亡作用     

镉诱导LLC-PK_1细胞凋亡与bcl-2、p53蛋白表达关系的研究

目的　探讨镉诱导LLC PK1 细胞凋亡及与bcl 2、p5 3(mtp5 3)蛋白表达的相互关系。方法　采用透射电镜观察凋亡小体、流式细胞仪分析凋亡率、琼脂糖凝胶DNA电泳方法确定镉对LLC PK1 细胞诱导的凋亡作用 ,以及流式细胞仪分别测定bcl 2和p5 3基因表达产物bcl 2蛋白、mtp5 3蛋白。结果　透射电镜观察发现 4 0 μmol LCdCl2 作用LLC PK1 细胞 12h后 ,出现典型的凋亡小体 ;流式细胞仪分析其凋亡率为 32 6 1% ,并高于对照组 (1 0 8% ) (P <0 0 1) ;琼脂糖凝胶DNA电泳呈明显梯形条带。 0、10、2 0、4 0 μmol LCdCl2 作用LLC PK1 细胞 4h、8h ,8h后 ,bcl 2基因表达逐渐下降 ,并呈良好的剂量 -反应关系 (r=- 0 910 ,P <0 0 5 ) ;作用 4h、8h后mtp5 3蛋白表达均明显下降 ,并有剂量 -反应关系 (r值分别为 - 0 716、- 0 972 ,P值均 <0 0 5 )。结论　镉诱导LLC PK1 细胞凋亡可能与镉抑制bcl 2、mtp5 3蛋白表达有关     

膜型Fas和p53在丝裂霉素C诱导表浅性膀胱癌细胞凋亡中的作用

目的　探讨膜型Fas(mFas)和p53在丝裂霉素C(MMC)诱导膀胱癌细胞凋亡中的作用。方法　采用免疫组化SP法、Westernblot、末端脱氧核苷酸转移酶介导生物素标记法 (TUNEL)分别检测MMC(0 .5mg/ml)灌注组和非灌注组各 30例表浅性膀胱癌组织中Fas和 p53蛋白表达、凋亡率、凋亡指数 (AI)。结果　灌注组和非灌注组癌组织中mFas蛋白表达分别为 53 .3 %、2 0 0 % (P <0 .0 5) ;p53蛋白表达分别 40 0 %、36 .7%。在mFas+ / p53- 情况下 ,凋亡率、AI分别为 53 .3 %、(1 1 .2 3± 1 .35) % ;1 3 .3 %、(6 .52± 0 .93) % ,两组凋亡率、AI比较差别有显著性意义(P均 <0 .0 5)。T1 高分级癌组织以mFas- / p53+ 表达为主 ,表现为对MMC耐药。结论　mFas和 p53正常表达在MMC诱导表浅性膀胱癌细胞凋亡中具有重要作用     

PBDE-47对人神经母细胞瘤细胞凋亡和线粒体膜电位及细胞色素C蛋白表达的影响

目的探讨PBDE-47对人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞线粒体膜电位和细胞色素C(Cyt C)蛋白表达的影响及其与细胞凋亡的关系。方法将处于对数生长期的SH-SY5Y细胞分别加入终浓度为0(溶剂对照组)、1、5、10μmol/L的PBDE-47暴露24 h。采用流式细胞术检测细胞凋亡率和线粒体膜电位变化,采用Western blot技术检测胞浆与线粒体细胞色素C蛋白表达的水平。结果与溶剂对照组相比,10μmol/L PBDE-47染毒组SH-SY5Y细胞凋亡率和5、10μmol/L PBDE-47染毒组胞浆内细胞色素C蛋白表达水平均明显升高,10μmol/L PBDE-47染毒组线粒体膜电位和各浓度PBDE-47染毒组线粒体内细胞色素C蛋白表达水平均明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。且随着PBDE-47染毒浓度的升高,SH-SY5Y细胞凋亡率和胞浆内细胞色素C蛋白表达水平呈升高趋势,线粒体内细胞色素C蛋白表达水平呈下降趋势。结论 PBDE-47可通过引起线粒体膜通透性转运孔开放和细胞色素C的释放介导SH-SY5Y细胞凋亡,从而对SH-SY5Y细胞产生损伤。     

氟对原代培养大鼠海马细胞NCAM mRNA和蛋白表达的影响

目的 探讨氟对原代大鼠海马细胞生长发育、神经细胞黏附分子（NCAM）mRNA及蛋白表达的影响。方法 原代培养大鼠海马细胞暴露于20、40和80μg/ml氟化钠24h后,观察染氟前后海马细胞生长情况,采用噻唑蓝比色试验、逆转录-聚合酶链反应和蛋白印迹技术分别检测大鼠海马细胞存活情况、NCAMmRNA和蛋白表达水平。结果与对照组相比,80μg/ml剂量组海马细胞数量减少,突起减少、变短,细胞存活率下降。40、80μg/ml剂量组NCAM mRNA水平均显著低于对照组,20μg/ml剂量组NCAM mRNA水平虽与对照组之间差异无统计学意义,但存在下降的趋势,NCAM mRNA水平与氟浓度呈现一定的剂量效应关系,且随染氟浓度升高而降低。40、80μg/ml剂量组细胞NCAM-180蛋白表达水平显著低于对照组,各染氟组细胞NCAM-140蛋白表达水平显著低于对照组,80μg/ml剂量组细胞NCAM-120蛋白表达水平显著低于对照组。结论 氟可抑制海马细胞生长和存活,并使NCAMmRNA和蛋白表达水平下降,氟对发育中海马损伤可能是其神经毒性的作用位点之一。     

莲房原花青素对乙醇诱导肝细胞损伤的拮抗作用

目的:研究莲房原花青素(LSPC)对乙醇诱导的人胚肝细胞株L-02损伤的拮抗作用。方法:观察5、10、25mg/L的LSPC与200mmol/L乙醇共同作用于肝细胞L-0224h后,对细胞的生存率,超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)含量、凋亡率以及DNA损伤等指标的影响。结果:与乙醇组相比,5mg/L和10mg/LLSPC使细胞的生存率由73.14%上升到84.79%和90.52%,提高了细胞SOD、CAT、GSH的含量(P<0.01),降低MDA的生成;有效降低细胞的凋亡率,降低细胞p53和生长抑制DNA损伤基因(GADD)34、45β、153的表达,但高剂量组(25mg/L)对乙醇的拮抗作用不明显。结论:适量浓度的莲房原花青素对乙醇诱导的肝细胞L-02的损伤有拮抗作用。     

丙烯酰胺致大鼠睾丸生殖细胞DNA损伤与P53蛋白的表达

目的：研究丙烯酰胺慢性染毒后睾丸生殖细胞DNA损伤与p53蛋白表达的关系,为丙烯酰胺生殖毒性及其修复机制研究提供基础数据.方法：昆明种小鼠经丙烯酰胺（20、40、60 mg/kg体重）慢性染毒8周后,单细胞凝胶电泳研究睾丸生殖细胞的DNA损伤;免疫组化采用SABC法.结果：丙烯酰胺染毒8周后的各组受损细胞增加,形似彗星;40、60mg/kg组的细胞拖尾率及尾长显著高于阴性对照（P＜0.05）;60mg/kg组的细胞中呈现较多棕黄色颗粒,p53表达在20、40、60mg/kg各组的阳性率分别为18.1%、21.2%和29.8%,与阴性对照比较60 mg/kg组阳性率有显著差异（P＜0.05）.结论：丙烯酰胺有明确的DNA损伤作用,p53蛋白参与了损伤细胞的修复或凋亡途径.     

IFN-γ诱导小鼠颗粒细胞DNA损伤及凋亡的体外研究

目的初步探讨IFN-γ诱导小鼠卵泡颗粒细胞DNA损伤及凋亡的机制。方法体外分离培养小鼠原代颗粒细胞,分为正常对照组、IFN-γ(1 000 U/ml)处理组及NAC(20 mM)+IFN-γ(1 000 U/ml)联合处理组,处理5d后,采用免疫荧光染色、Western blot和流式细胞术检测颗粒细胞的ATM/ATR信号通路中DNA损伤相关蛋白,ROS水平及凋亡相关蛋白的变化。结果 IFN-γ组颗粒细胞表达γ-H2AX,而NAC组未见明显γ-H2AX表达;Western blot发现IFN-γ组颗粒细胞γ-H2AX、Chk2和p-Chk2蛋白以及p53和p-p53、Caspase-3等凋亡相关蛋白水平均明显上调,NAC组中以上蛋白均被抑制;流式细胞术检测发现IFN-γ可诱导颗粒细胞活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)水平上调,而NAC组颗粒细胞的ROS下降至对照组水平。结论 IFN-γ可通过DNA氧化损伤信号引起颗粒细胞凋亡。     

2,2’,4,4’-四溴联苯醚对SH-SY5Y细胞氧化应激与DNA损伤的影响

目的探讨2,2’,4,4’-四溴联苯醚(PBDE-47)对人神经母细胞瘤细胞株(SH-SY5Y)氧化应激的影响和DNA损伤作用。方法用含10%胎牛血清的DMEM培养基在37℃、5%CO2条件下培养SH-SY5Y细胞。当培养细胞处于对数生长期时,用1、2、4、6、8和10μg/mlPBDE-47进行染毒,24h后检测细胞存活率、细胞外乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、超氧化物歧化酶(SOD)活性、还原型谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)含量,以及DNA损伤情况。结果与对照组相比,1μg/ml和2μg/ml剂量组细胞存活率略有上升(P<0.05),4、6、8和10μg/ml剂量组细胞存活率显著降低(P<0.05);各染毒剂量组GSH含量显著下降(P<0.05)、尾矩显著上升(P<0.05);4、8和10μg/ml剂量组MDA含量明显高于对照组(P<0.05);4、6、8和10μg/ml剂量组LDH漏出率显著高于对照组(P<0.05)、SOD活力明显低于对照组(P<0.05);6、8和10μg/ml剂量组尾部DNA百分率与对照组比较存在差异的显著性(P<0.05)。结论PBDE-47可引起SH-SY5Y细胞氧化应激和DNA损伤,氧化应激可能在PBDE-47致DNA损伤中起重要作用。     

丙戊酸钠联合顺铂对HO-8910细胞增殖的影响及机制

目的:探讨丙戊酸钠(VPA)联合顺铂(DDP)对体外培养的人卵巢癌细胞HO-8910细胞增殖抑制和凋亡作用及机制。方法:3 mM浓度的VPA、1μg/m l的DDP及VPA联合DDP分别处理人卵巢癌细胞株HO-8910不同时间(24、48、72 h)后,采用MTT法检测细胞的增殖活性;Hoechst 33258荧光染色观察细胞凋亡形态学改变;RT-PCR检测p53基因mRNA水平表达变化;W estern b lot法检测p53及Stat3蛋白表达变化。结果:VPA对卵巢癌HO-8910细胞株有生长抑制作用,且VPA联合DDP优于单独用药(P<0.05);Hochest 33258荧光染色结果显示,用药后细胞呈现明显的核碎裂、核固缩等典型凋亡改变,VPA联合DDP组细胞凋亡改变较单独用药组明显(P<0.05);RT-PCR检测显示VPA单独用药及联合DDP用药均能提高p53基因的mRNA表达水平;W estern b lot结果显示VPA联合DDP显著增强卵巢癌HO-8910细胞中p53蛋白表达,降低Stat3蛋白的表达,联合用药组效果更明显。结论:VPA单独用药在体外可有效杀伤卵巢癌HO-8910细胞株,与DDP联合应用具有明显的协同作用,推测其可能的作用机制是诱导p53表达水平上调及Stat3表达水平下调。     

硒对氟所致细胞凋亡及p53基因的影响

目的 研究硒对慢性氟中毒大鼠肝肾细胞凋亡及相关基因的影响。方法 对饮高氟水(100mg／L)及高氟加不同浓度硒饲料(2．3mg／kg)大鼠饲喂4个月后，取其肝肾组织进行透射电镜形态学观察、DNA凝胶电泳及流式细胞术观察各组细胞凋亡情况，同时检测肝肾细胞凋亡的相关基因p53。结果 与对照组相比，高氟及氟加硒组．肝肾细胞凋亡率及p53显著增加，氟加硒组肝肾细胞凋亡率明显低于单纯加氟组。结论 高氟可诱导细胞凋亡，硒可拮抗氟引起的细胞凋亡，且p53参与了细胞凋亡的调控。     

松花江四方台水源地水体有机提取物致癌活性的实验研究

目的 研究松花江有机提取物对体外细胞的致癌活性,探讨水体有机污染物的致癌机制。方法 采用松花江水样120L的乙醚提取物进行体外细胞转化实验和单细胞凝胶电泳（SCGE）实验,同时用免疫组化检测和抑癌基因p53、p16和p21的表达情况及用TUNEL方法检测细胞凋亡。结果 江水有机提取物可以诱发BALB/C胚胎成纤维细胞恶性转化和细胞DNA损伤;诱发转化之后的细胞中p53、p21和p16的表达缺失,转化细胞凋亡率降低。结论 松花江水有机提取物具有潜在致癌性。