兽残留蛋白芯片检测系统的研制和应用

本研究根据抗原和抗体特异性结合的免疫学原理,采用荧光标记竞争免疫法,构建蛋白芯片测定样品中的兽药残留含量.同时设计了一种简便快速的样品制备方法,能够从多种组织样品同时提取多种残留兽药.结合博奥生物有限公司研发的样品分子提取仪、芯片扫描仪以及配套的自动化数据分析软件,开发了晶芯(R)兽药残留蛋白芯片检测系统.该系统可用于猪肉、猪肝、鸡肉、鸡肝、牛奶中磺胺二甲基嘧啶、磺胺喹噁啉、磺胺甲噁唑、磺胺异噁唑、磺胺间甲氧嘧啶、链霉素、双氢链霉素、恩诺沙星以及氯霉素的定量检测.     

动物性食品中11种兽药残留量的高效液相色谱(HPLC)法测定

[目的]建立动物性食品中磺胺、喹乙醇、磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺甲嘧啶、甲氧苄啶、磺胺二甲嘧啶、呋喃唑酮、磺胺甲基异噁唑、磺胺(二甲)异噁唑、磺胺喹噁啉残留量的高效液相色谱(HPLC）测定方法。[方法]碎肉分两次用乙腈提取，正己烷洗涤净化，将乙腈层过无水硫酸钠后挥干乙腈，用pH2．5 KH2PO4 CH3CN(1 1)洗脱、溶解后测定。[结果]平均回收率磺胺82．1％、喹乙醇76．5％、磺胺嘧啶77．0％、磺胺噻唑75．9％、磺胺甲嘧啶80．5％、甲氧苄啶89．6％、磺胺二甲嘧啶78．2％、呋喃唑酮76．0％、磺胺甲基异嗯唑76．5％、磺胺(二甲)异嗯唑69．9％、磺胺喹嗯啉64．1％。检出限：磺胺0．023mg／kg、喹乙醇0．050mg／kg、磺胺嘧啶0．030mg／kg、磺胺噻唑0．052mg／kg、磺胺甲嘧啶0．046mg／kg、甲氧苄啶0．11mg／kg、磺胺二甲嘧啶0．075mg／kg、呋喃唑酮0．068mg／kg、磺胺甲基异口恶唑0．022mg／kg、磺胺(二甲)异噁唑0．037mg／kg、磺胺喹噁啉0．043mg／kg。【结论]高效液相色谱(HPLC)测定动物性食品中磺胺、喹乙醇、磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺甲嘧啶、甲氧苄啶、磺胺二甲嘧啶、呋喃唑酮、磺胺甲基异噁唑、磺胺(二甲)异噁唑、磺胺喹噁啉的多残留是一种灵敏度高、简便的方法。     

霍乱弧菌多重耐药及SXT耐药相关基因初步研究

目的研究福建省霍乱弧菌多重耐药情况,分析耐药基因SXT、sulⅡ、dfr18、dfrA1与复方磺胺甲噁唑耐药表型的相关性。方法选取100株1994-2005年福建省保留的霍乱弧菌菌株,采用WHO推荐的改良K-B纸片法进行21种抗生素的敏感性试验。PCR方法检测耐药基因SXT、sulⅡ、dfr18、dfrA1。使用SPSS软件分析耐药基因与耐药表型的相关性,采用χ2检验,P0.05为差异有统计学意义。结果福建省霍乱弧菌试验菌株对呋喃妥因、痢特灵、链霉素、多黏菌素B、磺胺甲噁唑、复方磺胺甲噁唑耐药严重,多重耐药率为63%。耐药基因SXT、sulⅡ、dfr18、dfrA1与复方磺胺甲噁唑耐药表型相关。结论福建省霍乱弧菌的多重耐药率高,初步研究发现了复方磺胺甲噁唑相关的耐药基因,进一步需要研究更多的耐药分子机制。     

肇庆星湖抗生素污染特征分析及风险评价研究

目的分析肇庆市星湖水体中抗生素的污染特征,评价其生态与健康风险。方法分别于2018年7月(丰水期)、12月(枯水期),用超高压液相色谱-三重四级杆串联质谱法对星湖地区仙女湖、青莲湖、中心湖、波海湖、里湖水中磺胺嘧啶、磺胺甲基异噁唑、磺胺二甲嘧啶、红霉素、罗红霉素、氧氟沙星、环丙沙星、林可霉素4类8种抗生素浓度进行检测,应用风险熵法评价其生态风险,采用日均可接受摄入量风险熵计算模型评价其健康风险。结果星湖各采样点位抗生素的浓度为11.64～192.98 ng/L,丰水期抗生素的累积浓度高于枯水期,丰水期青莲湖点位的抗生素浓度最高,里湖点位的抗生素浓度最低。星湖水体中共检出了7种抗生素(磺胺嘧啶、磺胺甲基异噁唑、磺胺二甲嘧啶、红霉素、罗红霉素、氧氟沙星、林可霉素),浓度为0.04～149.52 ng/L,环丙沙星在所有采样点均未被检出。磺胺甲基异噁唑和磺胺二甲嘧啶为星湖水体中的主要抗生素污染物。生态和健康风险评价结果表明,磺胺甲基异噁唑为星湖主要的生态风险因子,同时,星湖水域抗生素联合生态风险较高,总体风险熵属于高风险范畴;氧氟沙星和磺胺甲基异噁唑是主要的健康风险因子,但抗生素的健康风险指数远低于1。结论肇庆星湖水域抗生素联合生态风险较高,但是健康风险指数较低,不会对人体产生明显的健康危害。     

深圳市畜、禽肉中部分兽药残留水平的调查

目的:了解深圳市售畜、禽肉中部分兽药残留水平,进一步采取预防、控制和减少畜、禽肉兽药残留的措施,保证消费者的健康.方法:2007年对深圳市6个行政区域的摊档、市场、餐厅、酒楼及超市出售的畜、禽肉类食品进行现场采集样品180份,按国标等检测方法进行8种兽药残留检测,测定结果依据GB16869-2005及<动物性食品中兽药最高残留限量>评价.结果:畜、禽肉中检出有4种兽药残留;有7.22%的畜、禽肉中兽药残留超过国家标准;畜、禽肉内脏中兽药残留较高;鸡、鸭肉样品中氯霉素残留检出率与超标率均有统计学差异(P＜0.05).结论:兽药污染问题不容忽视,需要采取多种措施来预防和控制畜、禽肉,特别是高毒性兽药在畜、禽肉中的残留.     

超高效液相色谱-串联质谱联用法同时测定鸡肉中磺胺和喹诺酮类兽药残留

目的建立超高效液相色谱-串联质谱联用仪同时检测鸡肉中16种磺胺类和15种喹诺酮类兽药残留。方法称取5.0 g样品加入酸化乙腈均质3 min后,超声提取5 min,正己烷去除油脂,0℃、10 000 r/min高速离心5 min,取中间提取液10.0 ml,氮气吹干,初始流动相定容到1.0 ml,过0.20μm滤膜,供超高效液相色谱-串联质谱仪分析,内标法定量。结果当浓度为10.0μg/L~500μg/L时,31种兽药的线性关系良好,相关系数(r)均≥0.999 0,当加标量为50.0μg/kg时,31种兽药的加标回收率为84.0%~94.7%,相对标准偏差(RSD)均2.5%。31种兽药的检出限均为0.10μg/kg,定量限为0.30μg/kg。结论通过均质提取的办法,大大提高提取的效率。本方法专属性强,灵敏度高,操作简单,快捷,可作为鸡肉中磺胺和喹诺酮类兽药残留的检测。     

多药耐药肺炎克雷伯菌对利福平及磺胺甲噁唑/甲氧苄啶耐药机制的研究

目的 研究多药耐药肺炎克雷伯菌对利福平及磺胺甲噁唑/甲氧苄啶的耐药机制.方法 收集2008年8月-2010年5月浙江省杭州市和湖州市6所医院共47株肺炎克雷伯菌,采用聚合酶链反应(PCR)的方法分析1种利福平耐药相关基因和5种磺胺甲噁唑/甲氧苄啶耐药相关基因.结果 该组肺炎克雷伯菌共检出1种利福平耐药相关基因和3种磺胺甲噁唑/甲氧苄啶耐药相关基因.结论 携带1种利福平耐药相关基因和3种磺胺甲噁唑/甲氧苄啶耐药相关基因是该组菌对利福平和磺胺甲噁唑/甲氧苄啶耐药的一个重要原因.     

霍乱弧菌多重耐药及ＳＸＴ 耐药相关基因初步研究

摘要：目的　研究福建省霍乱弧菌多重耐药情况,分析耐药基因ＳＸＴ、sulⅡ、dfr１８、dfrＡ１与复方磺胺甲唑耐药表型的相关性。方法　选取１００株１９９４－２００５年福建省保留的霍乱弧菌菌株,采用ＷＨＯ 推荐的改良Ｋ Ｂ 纸片法进行２１ 种抗生素的敏感性试验。ＰＣＲ 方法检测耐药基因ＳＸＴ、sulⅡ、dfr１８、dfrＡ１。使用ＳＰＳＳ软件分析耐药基因与耐药表型的相关性,采用χ^２ 检验,P＜０．０５为差异有统计学意义。结果　福建省霍乱弧菌试验菌株对呋喃妥因、痢特灵、链霉素、多黏菌素Ｂ、磺胺甲噁唑、复方磺胺甲噁唑耐药严重,多重耐药率为６３％。耐药基因ＳＸＴ、sulⅡ、dfr１８、dfrＡ１与复方磺胺甲噁唑耐药表型相关。结论 福建省霍乱弧菌的多重耐药率高,初步研究发现了复方磺胺甲噁唑相关的耐药基因,进一步需要研究更多的耐药分子机制。     

复方磺胺甲噁唑致阴茎水肿1例

复方磺胺甲噁唑是一种临床应用比较广泛的广谱抗菌药物，不良反应较多。在临床上曾遇到1例服用复方磺胺甲噁唑致阴茎水肿的病例，现报告如下。     

QuEChERS-高效液相色谱法同时检测动物组织中的克球酚,地克珠利和磺胺类药物残留量

目的：建立一种动物组织中兽药残留量的QuEChERS-HPLC检测方法。方法：样品以乙腈提取,混合型分散固相萃取净化,乙腈-水为流动相,梯度洗脱,270 nm检测,流速1.0 ml/min。结果：检测限分别为：克球酚、磺胺类：0.05 mg/kg、地克珠利：0.10 mg/kg。在添加浓度为0.10-1.0 mg/kg范围内,回收率均可在65%-100%,相对标准偏差1%-10%。结论：将改良后的农药多残留检测QuEChERS样品处理技术成功应用于兽药残留的检测,对动物组织中的克球酚、地克珠利和磺胺类药物残留量进行同时分析,满意结果。     

液相蛋白芯片法与BAS-ELISA法检测病原抗体的方法比较

〔目的〕分别建立流感病毒、禽流感病毒、鼠疫耶尔森菌、SARS病毒、结核分支杆菌等发热病原抗体的液相蛋白芯片定量检测方法,比较液相蛋白芯片方法与生物素—亲和素系统（BAS-ELISA）方法的检测能力。〔方法〕用诊断抗原包被编码微球,应用间接法检测模式,建立液相蛋白芯片定量检测病原抗体的方法,用液相蛋白芯片和BAS-ELISA方法检测相当样品并进行比较分析。〔结果〕建立的液相蛋白芯片分别检测流感、禽流感、鼠疫、SARS、结核特异性抗体,最低检测限分别为5.68ng/ml、1.50ng/ml、50.30pg/ml、105.57pg/ml、14.06pg/ml。液相蛋白芯片方法和BSA-ELISA方法的检测性能,在一定浓度范围内,对于相同样品2种方法有很好的相关性。〔结论〕与BAS-ELISA方法相比,液相蛋白芯片检测灵敏度高,动态范围宽,为同时检测多种病原抗体、任意组合检测目标物提供了平台。     

鲜牛乳中磺胺类兽药残留监测调查

目的 了解和掌握兰州地区鲜牛乳中磺胺类兽药残留水平及其分布规律。方法 采用高效液相色谱法同时测定4种磺胺类兽药的残留量。结果 鲜(生)乳中磺胺的残留检出率为7．41％，磺胺嘧啶为4．44％，甲氧苄基嘧啶为12．59％，磺胺甲恶唑为21．48％。结论 鲜牛乳中磺胺类兽药残留问题突出，应强化监管。     

武汉市市售351件动物源性食品中磺胺类抗生素残留检测

目的监测武汉市市售动物源性食品中磺胺类抗生素残留水平,为其潜在健康风险的评估与控制提供参考依据。方法在武汉市12个区大型超市和农贸市场模拟购买动物源性食品样品351件后进行前处理,超高效液相色谱-质谱法同步检测磺胺类抗生素残留水平,以SPSS18.0对检测结果进行分析。结果不同磺胺类抗生素组分检出率高低顺位为磺胺甲恶唑(80/351)磺胺甲噻二唑(59/351)磺胺氯哒嗪(39/351)磺胺异恶唑(36/351)磺胺二甲基嘧啶(35/351)磺胺吡啶(18/351)磺胺甲基嘧啶(1/351),差异有统计学意义(P0.05)。肉类和水产类除STZ外其他组分均有检出,蛋类和奶类却只有STZ检出。不同磺胺类组分在食品中残留量存在关联的同时,各组分在不同食品类别中的残留存在倾向性。结论动物源性食品中磺胺类抗生素残留现状不容忽视,食品安全监管部门在加强中抗生素残留监管的同时,应协调农业及畜牧业管理部门尽快规范饲料生产及养殖领域的兽药使用。     

磺胺甲噁唑薄层色谱法鉴别研究

目的:建立磺胺甲噁唑原料药薄层色谱鉴别方法.方法:磺胺甲噁唑原料药经甲醇溶解后,采用硅胶GF254板,以乙酸乙酯-95%乙醇-浓氨(40:20:1)为展开剂,展开后取出晾干,在紫外灯下(254nm)下检视.结果:供试品在该方法下显稳定的斑点,灵敏度、专属性较好.结论:该方法具有简便快捷、灵敏度高的特点,适用磺胺甲噁唑原料药的鉴别.     

HA-CHIT纳米复合物修饰电极的研制及检测磺胺甲噁唑的方法研究

目的以羟基磷灰石-壳聚糖(HA-CHIT)纳米复合物修饰玻碳电极,磺胺甲噁唑抗体为探针,探讨一种新型的电化学免疫传感器检测磺胺甲噁唑(SMX)。方法用滴涂法将HA-CHIT纳米复合物修饰在玻碳电极表面制成特异的电化学免疫传感器。用循环伏安法对修饰电极的性能进行表征。在电极上固定SMX抗体作为探针,依据免疫竞争法,样品SMX与辣根过氧化物酶标记SMX竞争电极上的抗SMX多克隆抗体,采用差分脉冲伏安法对SMX进行检测。结果免疫反应时间为20 min、孵育温度37℃、检测底液pH5.5时,电流响应最灵敏。线性范围为1.0×10-7～5.0×10-4mg/ml,线性方程为△I=9 695.2c+0.6511,相关系数为0.9909;最低检出限为8.54×10-8mg/ml;相对标准偏差(RSD)<5%。结论基于HA-CHIT纳米复合物修饰玻碳电极制得的电化学免疫传感器具有线性范围宽、检出限低、快速灵敏等优势,可实现对磺胺甲噁唑的快速测定,具有良好的应用前景。     

重症监护室内洋葱伯克霍尔德菌的流行病学与药敏特点

目的分析研究洋葱伯克霍尔德菌在重症监护室（ICU）内检出的特点及细菌的耐药性,提高临床医师对感染的预防意识和指导合理选用抗生素.方法对ICU内的86例机械辅助呼吸患者检测洋葱伯克霍尔德菌的回顾性分析.结果所有患者都有严重的基础疾病,检测部位主要分布在呼吸道（77.0%）和血液（12.5%）,连续3年观察86例104株菌株,菌株数呈逐年增加.药敏试验结果显示：对复方磺胺甲噁唑、头孢哌酮/舒巴坦（舒普深）、哌拉西林/他唑巴坦、环丙沙星的敏感性超过50.0%.结论洋葱伯克霍尔德菌在ICU内的耐药现象非常严重,作者强调应防治结合、综合治疗,药物选择方面可选用复方磺胺甲噁唑、头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦和环丙沙星等抗菌药物.     

烧伤患者创面感染病原菌分布及药敏分析

目的分析烧伤患者创面感染病原菌分布及药物敏感性,以更好地指导烧伤患者安全的使用抗菌药物。方法选取2012年10月-2013年3月医院收治的100例烧伤患者为研究对象,使用无菌棉拭子采集患者创面分泌物或者手术中取痂下坏死组织,采用GPI生化鉴定卡以及全自动微生物分析仪鉴定病原菌,体外的药物敏感试验采用K-B法进行,结果判断按照美国临床实验室标准化研究所制定的标准。结果 100例患者中共检出病原菌520株,其中金黄色葡萄球菌300株、铜绿假单胞菌200株、鲍氏不动杆菌及表皮葡萄球菌各10株,分别占57.7%、38.5%、1.9%、1.9%;铜绿假单胞菌对亚胺培南、磺胺嘧啶银、磺胺甲噁唑/甲氧苄啶、头孢他啶敏感率分别为78.5%、96.0%、83.0%、78.5%,鲍氏不动杆菌对磺胺甲噁唑/甲氧苄啶、亚胺培南、阿米卡星的敏感率分别为70.0%、60.0%、50.0%;金黄色葡萄球菌对万古霉素、磺胺甲噁唑/甲氧苄啶、磺胺嘧啶银的敏感率分别为95.7%、85.0%、71.3%,表皮葡萄球菌则对万古霉素和头孢他啶的敏感率分别为90.0%、80.0%。结论烧伤患者存在多种感染,病原菌对常用抗菌药物的敏感性较低,因此,应当加强烧伤患者的病原菌耐药检测,指导烧伤患者安全使用抗菌药物,使患者早日恢复健康。     

应用QuEChERS技术与气相色谱-串联质谱法同时检测南果梨中16种农药残留

目的建立南果梨中霜霉威、氧乐果、特丁硫磷、西玛津、抗蚜威、噻节因、氟虫腈、二甲戊灵、氟菌唑、嘧菌环胺、虫螨腈、吡草醚、噁霜灵、溴螨酯、三氯杀螨砜及精噁唑禾草灵等16种农药残留同时检测的QuEChERS-气相色谱-串联质谱分析方法。方法使用乙腈提取样品中的农药,经N-丙基乙二胺(PSA)分散固相萃取净化,再经气相色谱-三重四级杆串联质谱分析。结果 16种农药在线性范围内相关系数均大于0.994。方法检出限范围(S/N=3)为0.01～1.62μg/kg,方法定量限范围为0.02～5.40μg/kg。当加标水平为62.5μg/kg时,其回收率在78.5%～98.6%之间,相对标准偏差(RSD)在3.8%～11.4%之间。结论该方法具有操作简单、快速、灵敏的特点,适用于南果梨中农药多残留的检测。     

高效液相色谱法测定猪肌肉组织中磺胺类药物的研究

目的:为了解动物性食品中兽药残留水平,探讨其污染来源,评价其膳食安全性,因此建立猪肌肉组织中磺胺嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺喹恶啉残留量的高效液相色谱(HPLC)测定方法。方法:经处理过的样品用乙腈提取两次,将乙腈过无水硫酸钠层后挥干乙腈,正己烷洗涤净化,经过净化后进行高效液相色谱仪测定(C18柱),本方法以甲醇、水为流动相梯度洗脱,柱温35℃,在波长275 nm处测定。结果:在3个加标水平进行加标回收实验,回收率磺胺嘧啶(SD)为81.7%～94.1%,磺胺甲恶唑(SMZ)为80.0%～94.5%,磺胺对甲氧嘧啶(SMD)为80.7%～102.9%,磺胺喹恶啉(SQX)为80.3%～93.6%。线性范围均在1～200μg/m l,检出限为0.01 mg/kg,定量限为0.05 mg/kg。结论:高效液相色谱(HPLC)测定猪肉中磺胺嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺喹恶啉的残留是一种灵敏度较高、检测限较低、简单易行的方法,易于在基层推广应用。     

HPLC法检测硝基咪唑类药物残留及其有效化学测量的研究

目的建立检测硝基咪唑类药物残留的高效液相色谱法(HPLC),并且对该方法进行有效化学测量研究。方法以猪肝组织为样品,以甲硝咪唑、洛硝哒唑、二甲硝咪唑3种兽药为目标分析物,Spherisorb C18柱分离,以醋酸缓冲液+乙腈=85+15为流动相,320nm紫外检测。结果3种目标分析物甲硝咪唑、洛硝哒唑、二甲硝咪唑在50~750ng/ml范围有直性线性相关,相关系数分别为r=0.9997,r=0.9998,r=0.9996。组织中添加6ng/g水平时,回收率分别为甲硝咪唑90.6%,洛硝哒唑84.7%,二甲硝咪唑为86.6%。结论本方法具有合理、准确等特点,满足了化学溯源性的要求,实现了兽药残留监测的有效化学测量。