福氏痢疾杆菌2b血清型菌株基因组中SfII和SfX前噬菌体整合位点及排列方式研究

目的 研究福氏痢疾杆菌2b血清型菌株中SfII和SfX前噬菌体整合位点及排列方式.方法 根据2b血清型菌株基因组中SFII和SfX前噬菌体可能的整合位点及排列方式,设计引物,对50株2b血清型菌株进行PCR扩增,并对扩增产物测序,根据扩增和测序结果判断噬菌体的整合位点和排列方式.结果 在2b血清型菌株中,SfII和SfX前噬菌体前后相连,整合于宿主菌染色体proA和yaiC基因间的thrW tRNA基因上;以SfII在前,SfX在后,或SfX在前,SfII在后两种方式排列;而以后一种方式为主,在共50株检测菌株中,有49株为此方式.结论 福氏痢疾杆菌血清型相关噬菌体的整合位点及排列方式,对研究福氏痢疾杆菌血清型转换及血清型相关噬菌体的整合机制具有重要意义.     

福氏痢疾杆菌2b血清型菌株基因组中SfII和SfX前噬菌体整合位点及排列方式研究

目的 研究福氏痢疾杆菌2b血清型菌株中SfII和SfX前噬菌体整合位点及排列方式.方法 根据2b血清型菌株基因组中SFII和SfX前噬菌体可能的整合位点及排列方式,设计引物,对50株2b血清型菌株进行PCR扩增,并对扩增产物测序,根据扩增和测序结果判断噬菌体的整合位点和排列方式.结果 在2b血清型菌株中,SfII和SfX前噬菌体前后相连,整合于宿主菌染色体proA和yaiC基因间的thrW tRNA基因上;以SfII在前,SfX在后,或SfX在前,SfII在后两种方式排列;而以后一种方式为主,在共50株检测菌株中,有49株为此方式.结论 福氏痢疾杆菌血清型相关噬菌体的整合位点及排列方式,对研究福氏痢疾杆菌血清型转换及血清型相关噬菌体的整合机制具有重要意义.     

福氏志贺菌血清型单重PCR鉴定方法的建立及应用

目的 建立基于O抗修饰基因的福氏志贺菌血清型PCR鉴定方法.方法 根据福氏志贺菌O抗原合成及修饰特异基因设计引物,以常见的14种福氏志贺菌血清型(包括1a、1b、1c、2a、2b、3a、3b、4a、4b、5a、Y、X、Xv和F6)为标准菌株,建立福氏志贺菌血清型单重PCR鉴定方法;并以痢疾志贺菌、宋内志贺菌、鲍氏志贺菌和腹泻相关的其他菌属菌株验证特异性;应用该方法对106株福氏志贺菌临床分离株进行PCR血清分型.结果 建立一种福氏志贺菌血清型单重PCR鉴定方法,通过8个PCR反应,能够鉴定目前已知的15种血清型中的14种(Xv除外).检测灵敏度在10 pg至1 ng DNA(20μl反应体系).对106株福氏志贺菌临床分离株的检测结果提示,PCR分型方法与玻片凝集法具有很高的一致性.结论 本研究建立的福氏志贺菌血清型单重PCR鉴定方法具有特异性、灵敏性,可用于临床检测.     

福氏志贺菌血清型单重PCR鉴定方法的建立及应用

目的 建立基于O抗修饰基因的福氏志贺菌血清型PCR鉴定方法.方法 根据福氏志贺菌O抗原合成及修饰特异基因设计引物,以常见的14种福氏志贺菌血清型(包括1a、1b、1c、2a、2b、3a、3b、4a、4b、5a、Y、X、Xv和F6)为标准菌株,建立福氏志贺菌血清型单重PCR鉴定方法;并以痢疾志贺菌、宋内志贺菌、鲍氏志贺菌和腹泻相关的其他菌属菌株验证特异性;应用该方法对106株福氏志贺菌临床分离株进行PCR血清分型.结果 建立一种福氏志贺菌血清型单重PCR鉴定方法,通过8个PCR反应,能够鉴定目前已知的15种血清型中的14种(Xv除外).检测灵敏度在10 pg至1 ng DNA(20μl反应体系).对106株福氏志贺菌临床分离株的检测结果提示,PCR分型方法与玻片凝集法具有很高的一致性.结论 本研究建立的福氏志贺菌血清型单重PCR鉴定方法具有特异性、灵敏性,可用于临床检测.     

106株痢疾杆菌分型与药敏结果分析

1996年5～10月,我院从就诊痢疾病人粪便中分离到痢疾杆菌106株.进行了菌株分型及常用抗菌药物的敏感性测定,结果报告如下:1 材料与方法对临床诊断为急性菌痢的患者,以无菌棉拭子采取大便,接种SS平板,常规方法分离培养和血清分型.药敏试验用K—B法,以质控菌株作对照,药敏纸片由浙江省军区后勤部卫生防疫检验所提供.2 结果6个月中收集粪便标本127份,检出痢疾杆菌106株,检出率为83.46%.106株痢疾杆菌中,福氏菌99株,占93.39%;宋内氏菌5株,鲍氏菌2株.福氏菌中,2a83株,占83.83%;1b9株,3a5株,其它型2株.将106株菌用15种抗菌药物进行敏感性测定,先     

中国炭疽芽胞杆菌荚膜质粒基因单核昔酸多态性研究

目的 研究中国炭疽芽胞杆菌(炭疽杆菌)荚膜质粒基因单核苷酸多态性(SNP)特征.方法 选择中国不同分离年代、地点和来源的95株炭疽杆菌,采用PCR方法扩增荚膜质粒基因上的23个SNP位点,然后进行测序并进行聚类分析.结果 通过聚类分析,95株炭疽杆菌可分为5个群,23个SNP位点中17个位点相同,6个位点存在多态性,其中17.89％(17/95)的菌株与参考菌株Pastuer同源,38.95％(37/95)的菌株与参考菌株Ames Ancestor同源,其余菌株则不同于目前已知的全基因组测序菌株;3株菌在PS-34位点扩增基因片段中缺失长度约80bp的序列,待测的SNP位点包括在该缺失片段中;9株菌株在所有SNP位点扩增阴性,经炭疽杆菌荚膜质粒基因特异引物扩增证实这些菌株缺失荚膜质粒基因.结论 中国炭疽杆菌荚膜质粒SNP位点具有遗传稳定性和自身的特异性,6个SNP位点可作为基因分型的指标.     

肠炎沙门菌多位点序列分型技术的研究

目的研究肠炎沙门菌菌株间的分子特征,建立了分子流行病学研究方法——多位点基因序列分型技术(MLST),并对食品中的肠炎沙门菌分离株进行分型研究。方法选择肠炎沙门菌的6个管家基因thrA、purE、sucA、aroC、hemD、dnaN及一个特异性的DNA标记SdfΙ作为目标基因。对上述基因分别进行PCR扩增及产物测序,用sequencer2.0软件对测序结果进行分析、比对核苷酸的差异。同时,将肠炎沙门菌株与GenBank中鼠伤寒沙门菌LT2相应的基因序列进行比较。结果在肠炎沙门菌标准菌株50041和18株食品分离株之间,6个基因PCR产物范围内的近60000个核苷酸序列完全相同,未观察到同一血清型内的基因突变。而与LT2相比,基因产物发生了1到6个点突变。在对SdfΙ的核苷酸序列比较研究中发现,肠炎沙门菌标准菌株与食品中分离株SdfΙ的核苷酸序列与GenBank中该序列的碱基对比,发生了C182T的点突变。即MLST技术揭示了在同一血清型内各菌株管家基因碱基序列的高度保守。结论MLST方法适用于不同血清型沙门菌株间的分型研究,而不适于同一血清型的菌株分型。     

耐喹诺酮类福氏志贺菌基因突变分析

目的研究福氏志贺菌DNA旋转酶gyrA基因、拓扑异构酶ⅣparC基因突变与其喹诺酮类药物耐药的关系.方法对临床收集的1株喹诺酮类药物敏感福氏志贺菌、2株喹诺酮类药物耐药程度不同的福氏志贺菌,对上述2个靶基因进行聚合酶链反应(PCR)扩增及核酸序列分析.结果首次发现临床分离喹诺酮类耐药福氏志贺菌parC基因突变,导致121,129,131,134,141,L51位5个位点氨基酸编码改变;耐药程度较高的菌株共发现gyrA、parC基因上6个突变位点,耐药程度较低的菌株发现gyrA基因1个突变位点.结论福氏志贺菌DNA旋转酶gyrA基因和拓扑异构酶ⅣparC基因突变均与其喹诺酮类药物耐药有关,靶基因突变位点数量可能与喹诺酮类药物耐药程度有关,临床耐药株靶基因突变存在多态性.     

上海市闵行区2003～2006年痢疾病原菌菌型分布及变迁分析

[目的]了解本地区志贺菌的菌型分布及优势菌型,为痢疾防治工作提供科学依据.[方法]收集本地区2003～2006年送检样品中分离到的志贺菌进行流行病学分型.[结果]在4年中共检出1058株志贺菌,分为14个血清型,福氏志贺菌737株,宋内氏志贺菌321株.其中福氏4c 219株,福氏2b 193株,福氏1a 120株,福氏2a 93株,福氏X变种71株,还包括福氏1b、福氏3a、福氏4a、福氏4b、福氏5a、福氏5b、福氏6a、福氏Y变种共41株.2003年,优势菌种为福氏2b, 2003年后福氏4c和宋内氏成为优势菌种.[结论]本地区流行的志贺菌为福氏志贺菌和宋内氏志贺菌,其中优势菌型为福氏2b型、福氏4c型和宋内氏志贺菌,优势菌型出现了变迁.     

广州市58株单增李斯特菌菌株特征分析

目的 了解广州市动物源性食品中单增李斯特菌菌株优势血清型、携带毒力基因和分子分型情况。方法 对广州地区365份动物源性食品中的单增李斯特菌分离鉴定,并进行血清分型,毒力基因鉴定和肠道细菌基因间重复序列扩增(ERIC-PCR)。结果 单增李斯特菌阳性率为15.89%(58/365),其中生畜肉类检出率最高,为25.38%(33/130);血清型分析将58株单增李斯特菌分为4种血清型,分别为1/2b、1/2a、1/2c和4b,优势的血清型为1/2b(44.80%)和 1/2a(32.80%);10株缺失毒力基因actA;ERIC-PCR扩增出9~18条100~8000bp之间的条带,将58株单增李斯特菌在相似系数为0.8处分为6个群19个类型。结论 广州市动物源性食品中单增李斯特菌菌株污染严重,优势血清型是与人或动物感染有关的致病血清型(1/2b和1/2a),大部分毒力基因均存在,ERIC-PCR结果显示分子型别呈多样性,应加强防控。     

山东省2011-2014年志贺氏菌分子分型及耐药性分析

  目的  通过对山东省2011-2014年分离的志贺氏菌（Shigella）进行血清、毒力基因、分子分型和药敏等分析,了解山东省志贺氏菌的特性及流行趋势。  方法  用玻片凝集法进行血清分型,PCR方法扩增相关毒力基因,用脉冲场凝胶电泳技术进行分子分型,采用微量肉汤稀释法测定菌株抗生素敏感性。  结果  44株志贺氏菌主要为福氏志贺氏菌（Shigella flexneri）（54.55%）和宋内志贺氏菌（Shigella sonnei）（43.18%）。ipaH、set1、sen、ial毒力基因携带率分别为100%、43.18%、56.82%、50.00%。经脉冲场凝胶电泳分型（pulsed field gel electrophoresis,PFGE）,福氏志贺氏菌被分为18种带型,且总体相似度偏低;宋内志贺氏菌被分为14种带型,且89.47%的菌株相似度在90%以上。44株志贺氏菌对15种抗生素中的14种均存在不同程度的耐药。93.18%的菌株为多重耐药菌株。  结论  山东省志贺氏菌以福氏和宋内血清群为主,毒力基因携带率高,有聚类分布出现,耐药严重,应加强对志贺氏菌菌型、溯源和耐药性的监测。     

Electropherotyping of plasmid DNA of different serotypes of Shigella flexneri isolated in Bangladesh

One hundred and twenty-five Shigella flexneri strains, isolated during January-December 1984, at the Dhaka treatment centre of the International Centre for Diarrhoeal Disease Research, Bangladesh, were serotyped using absorbed rabbit antisera specific for all type- and group-factor antigens, as well as a group of ten mouse and rat monoclonal antibodies. Electropherotypes of the plasmid deoxyribonucleic acid (DNA) were also determined. S. flexneri 2a was the predominant serotype followed by 3b, 1a, and 2b. The recently described E1037 antigen was also found in three strains of S. flexneri serotype 6. Electropherotyping of the plasmid DNA showed that three plasmids of approximately 140, 2.7, and 2 megadalton (MDa) were present, respectively, in 97, 97 and 94% of the 125 strains. Additional plasmids of various other sizes were also present in different serotypes except in serotype 2a. The additional plasmids again appeared to be specific for that particular serotype. For example, all 12 strains of S. flexneri 2b harboured an additional plasmid of approximately 1 MDa. Thus, electropherotyping of plasmid DNA of different serotypes of S. flexneri might be useful to differentiate S. flexneri from other species of Shigella and in identifying different serotypes of S. flexneri. Therefore, the common plasmids, plus the additional plasmids, could be used to identify epidemic, as well as sporadic, subclones of S. flexneri strains.     

Variability of Shigella flexneri serotypes in Israel during a period of two years: 2000 and 2001

During a period of 2 years (2000 and 2001) 996 Shigella flexneri strains from sporadic cases in Israel were sent to the National Shigella Reference Centre (NSRC) by hospital and outpatient clinics. The most common serotypes were 2a, 6 and 1b, accounting for 88.4% of all isolates. They were investigated according to the monthly distribution of the strains, and the age and sex of the patients. The severity of the disease was assessed by a hospital/outpatient distribution (H/Od) of the isolates, based on the location of the sending laboratory. The most affected age groups were 0-11 months and 1-4 years, and the prevalent serotype was 2a, while serotype 6 was dominant in the 5-14 years age group. More cases were registered during the hot season, and there were some serotype-related variations. Overall, 62.1% of the samples were from male patients. Serotype 1b was dominant in the male/female ratio, although it was third in general prevalence. According to the H/Od serotype 2a was more common in hospitalized males and serotype 6 in outpatients, both male and female. These variations, as well as changes in serotype prevalence in the past, underscore the importance of serotype monitoring as part of the public health strategies for reducing the burden of Shigella flexneri infections.     

济源市福氏志贺菌毒力基因分型与分析

目的：对河南省济源市2002—2005年分离之福氏志贺菌株进行基因分型和分析。方法：应用多重PCR方法检测志贺菌肠毒素1基因（ShET-1B）、志贺菌肠毒素2基因（ShET-2）、侵袭性质粒抗原H基因（ipaH）和侵袭相关基因（ial），根据产物分子量定性判断结果。结果：90株福氏志贺菌具有2种毒力基因型，ShET-1阳性率达到98．9％。结论：济源市福氏志贺菌毒力基因型具有高度的一致性。     

志贺菌毒力相关基因的PCR检测分析

目的：利用PCR方法对武汉地区近年来收集的17株志贺菌进行毒力相关基因检测并分析其分布情况。方法：采用8对引物set1A、set1B、shet2A、shet2B、ial、ipaH、stx1与virA分别对志贺菌中毒力相关基因进行检测,结合常规鉴定方法对PCR扩增结果进行分析。结果：SHET1仅在福氏志贺菌（福氏Ⅱ型、福氏Ⅳ型）分离株（包括其标准株）中存在;SH-ET2存在于各型志贺菌（包括其标准株）;ipaH基因存在于各种类型志贺菌（包括其标准株）;17株志贺菌中,引物shet2A和引物shet2B用于检测sen基因分别检出16株和13株;ial、virA在反复复苏的菌株中检出率有所下降,stx1基因只在痢疾志贺菌中检出。结论：志贺菌快速诊断方法（PCR）中应首选检测志贺菌相关毒力基因ipaH基因。     

志贺菌毒力基因的多重PCR鉴定

目的：建立志贺菌肠毒素1基因（ShET-1B）、志贺菌肠毒素2基因（ShET-2）、侵袭性质粒抗原H基因（ipaH）和侵袭相关基因（捌）的多重PCR鉴定方法，实现志贺菌多基因同时检测。方法：选择志贺菌的4种毒力基因作为靶基因，应用Touchdown PCR方法，在一个反应管中同时进行扩增，根据产物分子量定性判断结果。结果：多重PCR同时检测与单基因PCR分别检测4种毒力基因两种方法具有相同的灵敏度与特异性。624株志贺菌具有6种毒力基因型，571株福氏志贺菌（包括11个血清型）中556株ShET-1B阳性。结论：多重PCR鉴定志贺菌毒力基因具有简便、快速的特点，适用于毒力基因鉴定和流行病学调查研究。ShET-1B基因可能广泛存在于福氏志贺菌之中。     

上海嘉定区志贺菌新菌型的出现及菌型的变迁

目的：了解本地区志贺菌的菌型分布及菌型变迁的情况。方法：收集本地区1995年-2005年送检样品中分离到的志贺菌，进行血清学分型。结果：在11年中共检出志贺菌825株，其中B群占91．03％，为优势菌群。本地区出现了3种新的志贺菌血清型福氏4c、福氏1c和福氏2未定型。在11年中福氏2a型检出最多，占38．79％，其次是福氏4c型、福氏1a型、福氏2b型，分别占15．15％、11．03％、9．70％。在2003年之前福氏2a型一直是引起本地区菌痢的优势菌型，2003年优势菌型变迁为福氏2b型，2004年和2005年新菌型福氏4c型成为优势菌型。结论：本地区有新的志贺菌血清型出现，优势菌型也出现了变迁，应加强对志贺菌病的监测工作。     

北京市2010年细菌性痢疾病原学分析

目的掌握北京市2010年细菌性痢疾的血清学分布以及脉冲场凝胶电泳技术(PFGE)分子分型特征,为流行病学研究提供合理依据。方法从形态特征、生化反应、血清分型、PFGE分子分型方面对北京市6个区的肠道多病原监测点分离到的195株志贺菌进行了系统鉴定和病原学分析。结果 195株志贺菌包括福氏志贺菌33株(16.92%)、宋内志贺菌162株(83.08%);福氏志贺菌血清型以F2a为主。7、8、9三个月志贺菌的发病率最高。选择其中55株宋内志贺菌进行脉冲场凝胶电泳分析,结果显示55株菌可以分为27个带型,其中以J16X01.BJ0016带型(11株)和J16X01.BJ0011(7株)为主。结论北京市2010年6个监测区县分离到的志贺菌包括福氏和宋内2种血清群,以宋内志贺菌为优势血清群,福氏志贺菌以F2a血清型为主。8月份为志贺菌高发季节。J16X01.BJ0016为宋内志贺菌PFGE优势型别。