炭疽芽胞杆菌致死因子在大肠埃希菌中的表达与纯化

目的在大肠埃希菌中表达炭疽致死因子,获得纯化蛋白,用于炭疽快速诊断方法以及炭疽致病机制研究。方法 PCR方法扩增炭疽致死因子,构建表达质粒pETLF,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导重组蛋白表达,通过Ni离子金属螯合树脂进行纯化,Western blot(WB)试验检查免疫原性,MTT方法检查生物学活性。结果获得重组炭疽致死因子,WB结果显示重组蛋白具有良好的免疫反应性,MTT方法进行的生物学活性测定表明致死因子与保护性抗原联合,细胞毒性与文献报道相比有明显降低。结论所获得的重组炭疽致死因子,对于发展炭疽快速诊断方法,以及研究炭疽毒素的作用机制具有一定的促进作用。     

慢性坏疽型阑尾炎1例

患者，女，24岁，聋哑，因反复发作右下腹疼痛18个月，伴呕吐、发热，于2002年11月5日入院。患者于2001年5月3日始。无明显锈因出现剑突下及右下腹疼痛，呈持续性，阵发性加剧，无放射痛。恶心、继而呕吐胃内容物1次，吐后腹痛未减，轻度腹泻，次日出现低热(38．8℃)，腹痛局限于右下腹，精神睡眠欠佳，食欲差。小便正常，当时在本地卫生院诊治为“急性胃     

鼠疫菌特异基因的克隆表达和抗原性分析

目的 在大肠埃希菌中克隆表达鼠疫菌特异基因(YPO1089.pst、ymt),分析重组蛋白的抗原性.方法 利用PCR技术扩增目的 基因,PCR产物经纯化、双酶切后,与质粒载体pET-30a(+)相连接并转化大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞.经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达目标蛋白,并进行10%的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,蛋白免疫印迹分析其特异性,最后采用亲和层析法纯化诱导表达的融合蛋白.结果 成功构建了pET-YPO1089、pET-pst和pET-ymt 3个重组表达质粒,经优化诱导表达条件,重组的rYP01089、rPst和rYmt在大肠埃希菌中均得到了稳定高效地表达;免疫印迹结果表明重组的rPst可与鼠疫阳性血清发生特异性的免疫反应;目标蛋白经纯化后纯度可达95%以上.结论 鼠疫菌的特异性抗原能够在原核蛋白表达系统中获得高效表达,rPst具有敏感且特异的免疫学特性,实验结果为开发新型鼠疫诊断试剂奠定了基础.     

我国新发现的鼠疫自然疫源地鼠疫菌基因组序列测定及分析

目的 测定和分析我国新发现的鼠疫自然疫源地鼠疫菌株（耶尔森菌）的全基因组序列,探讨玉龙疫情菌株(D106004)与邻近两个疫源地剑川菌株(D182038)和西藏菌株(Z176003)的亲缘关系。方法 采用全基因鸟枪法及Solexa方法对3株鼠疫菌株进行全基因组测序,并进行比较基因组学分析。基因组间编码序列比较分析采用BLAST软件进行,基因组间重排分析采用MAUVE软件进行。结果 鼠疫菌株D106004、D 182038、Z176003均具有1个染色体和3个质粒,菌株间染色体、质粒特征基本相似;3株菌株间编码序列的蛋白相邻类的聚簇(COG)功能分类及插入序列数目比较差异无统计学意义(x2值分别为3.03、0.257,P均＞0.05)。菌株间编码序列、单核苷酸多态性(SNPs)和基因组重排结果显示,在3株菌株中,有2882个基因具有100％的同源性。其中D106004菌株预测的3636个基因中与D182038菌株一致的基因有2994个,90％以上相似的基因有240个;与Z176003菌株一致的基因有3113个,90％以上相似的基因有200个;D106004菌株与Z176003、D182038菌株的同义SNPs数为59、68个,非同义SNPs数为104、203个;D106004与Z176003菌株之间可分为11个重排片段,较之D106004与D182038菌株之间的16个重排片段数目明显减少。结论 3株鼠疫菌株基因之间具有高度同源性,D106004与Z176003菌株之间的亲缘关系较之与D182038菌株更为接近,玉龙疫源地菌株可能是由西藏疫源地菌株进化而来。     

中国鼠疫菌种资源遗传特征分析

目的 建立《中国甲类传染病菌种资源库》，选择适当的指标，以反映中国鼠疫菌种的遗传背景。方法 使用传统的和分子生物学方法，测定中国鼠疫菌种代表菌株的遗传特征。并对遗传特征的分布及其意义进行分析。结果 利用6项指标，将中国的鼠疫菌划分成15种遗传型，每一型占据一片相对独立的而又自相延续的地理空间。分析遗传型之间的亲缘关系，并根据菌株间的差异，追溯鼠疫耶尔森菌作为一个生物种形成后的进化过程。结论 中国各鼠疫自然疫源地存在着不同特征的鼠疫菌株，但为达到对菌株认同的目标，还需要确定更多的遗传指征。     

炭疽高发地区土壤样本中常见芽胞杆菌的分离及鉴定

目的 通过分离鉴定炭疽可疑污染土壤样本的芽胞杆菌,评价消毒效果和了解监测地区土壤中的芽胞杆菌分布情况。 方法 采集炭疽监测点土壤样本60份,对炭疽芽胞杆菌和其他芽胞杆菌进行分离培养和聚合酶链反应扩增鉴定。 结果 在可疑污染土壤样本中未分离到炭疽芽胞杆菌;从分离到的48个单克隆菌落中扩增到33个目的片段,经测序和blast比对,确定得到地衣芽胞杆菌13株,枯草芽胞杆菌8株,短小芽胞杆菌扩增11株,蜡样芽胞杆菌扩增到1株,巨大芽胞杆菌引物和环状芽胞杆菌引物特异性不好。 结论 本研究提示该监测点炭疽疫情消毒效果可信,但需要进一步研究验证;几种芽胞杆菌在土壤中广泛存在,在炭疽监测工作中进行病原体分离时需要加以鉴别,可通过特异基因扩增来辅助检验。     

检测肝硬化患者血清癌抗原19-9和甲胎蛋白水平的临床意义

目的:研究肝硬化患者血清癌抗原(CA)19-9、甲胎蛋白(AFP)水平与肝功能指标的相关性,探讨栓测肝硬化患者上述两项指标的临床意义.方法:选择49例肝硬化患者为病例组,其中乙型病毒性肝炎后肝硬化26例,酒精性肝硬化19例,丙型病毒性肝炎后肝硬化3例,原发性胆汁淤积性肝硬化1例;选择同期健康体检者25例为对照组.两组均抽取静脉血做肝功能指标、CA19-9、AFP检测并进行对照.结果:病例组血清CA19-9和AFP水平均高于对照组;病例组血清CA19-9与丙氨酸转氨酶(ALT)、γ-谷氨酰转移酶、胆汁酸、天冬氨酸转移酶(AST)、直接胆红素(DBIL)存在正相关性(P<0.05).与血清白蛋白存在负相关性(P<0.05),与碱性磷酸酶(ALP)、总胆红素及Child-pugh评分无相关性(P>0.05);病例组血清AFP水平与ALT、AST、ALP以及DBII存在正相关性(P<0.05).与其他指标无相关性(P>0.05).结论:在除外恶性肿瘤和肝外胆道梗阻的前提下,胆汁淤积及肝细胞受损可能是造成肝硬化患者血清CA19-9和AFP水平升高的主要原因之一,而低蛋白血症可能是肝硬化肝内胆汁淤积的主要原因.     

应用rLF检测人群血清抗炭疽抗体水平的初步评价

目的对重组炭疽致死因子(rLF)在人群血清抗体水平检测中的初步应用进行评价。方法间接ELISA方法检测人群血清特异抗体,检测结果按照抗体相对含量进行分类比较、t检验、S/N比值大于等于2.1的阳性判断标准等多种方法进行统计分析。结果rLF的检测结果能区别大部分的病人和健康人,实验结果还显示出在我国部分地区的健康人尤其是健康从业人员中也有相当一部分人抗体水平较高,有的甚至达到了感染病人的抗体水平,提示炭疽在我国部分地区有较强隐性感染。结论致死因子显示出一定的应用潜力,可能用在炭疽的临床诊断、疾病监测、以及用来评估某地区的炭疽流行强度。     

鼠疫菌基因组与脉冲场电泳图型

目的利用PFGE图形来了解鼠疫菌基因组重排现象。方法PFGE分析并与全基因组序列进行比较。结杲计算PFGE各条带大小可初步判断鼠疫菌基因组序列重排结构。结论利用PFGE图型来判断鼠疫菌基因组序列重排结构,可以大大节约测序所需花费的成本。     

基因预测方法的研究进展

基因预测一般指预测DNA序列中编码蛋白质的部分。其方法主要有两大类：一类是基于相似性的预测方法,即利用已知的mRNA或蛋白质序列为线索在DNA序列中搜寻所对应的片段,达到基因预测的目的;另一类是基于统计学模型的从头预测方法,即利用统计学模型训练出相应参数,再对基因进行预测,这种方法可不依赖已知的DNA序列进行预测。现就基因预测的方法、基因预测中存在的一些问题等做一概述。